中药制首乌质量评价论文

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1仪器与试药

1．1仪器

Waters515高效液相仪，Waters2487双波长检测器，WatersN3000色谱工作站，色谱柱ThermoHypersilC18（250×4．6mm，5μm）；BP211DSartoriu电子分析天平；DXF－10A粉碎机（广州市大祥电子机械设备有限公司）；GSY－Ⅱ恒温水浴锅（北京市医疗设备厂）。

1．2试药

制首乌样品分别购自于陕西渭南、广西玉林、宁夏银川、河南新乡、贵州安顺、安徽六安、云南大理、云南玉溪、云南曲靖，经广州中医药大学中药鉴定教研室主任黄海波老师鉴定均为蓼科植物何首乌的炮制加工品。对照品2，3，5，4’－四羟基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷（批号：82373－94－2）购自成都瑞芬思生物科技有限公司，大黄素（批号：110756－200110）、大黄素甲醚（批号：110758－201114）均购于中国药品生物制品检定所。甲醇、乙腈为色谱纯（美国Fisher公司）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2．1性状质量比较

2010版《中国药典》对制首乌的性状质量要求为：呈不规则皱缩状的块片，厚约1cm；表面黑褐色或棕褐色，凹凸不平；质坚硬，断面角质样，棕褐色或黑色；气微，味微甘而苦涩。收集到来自全国各地的制首乌九批，其外观特征，见图1；从内外部颜色、粉末颜色以及气味上对各制首乌分别进行比较，并根据各制品的粉末颜色深浅程度进行分级（表1）。从图1和表1可以看出，市售制首乌饮片的外观颜色与其粉末颜色均存在一定的差异。根据各市售的粉末颜色深浅程度进行分级的结果可知，安徽六安的样品粉末颜色为棕黑色，颜色等级最高“＋＋＋＋”；其次为颜色等级“＋＋＋”的粉末，包括陕西渭南深棕褐色、贵州安顺褐色、云南大理棕色、云南曲靖棕褐色；广西玉林、云南玉溪及宁夏银川的粉末颜色分别为淡棕褐色、淡棕色与棕绿色，颜色等级“＋＋”；粉末颜色最浅的为河南新乡，棕红色，颜色等级“＋”。造成市售制首乌饮片粉末颜色的差异可能主要受炮制程度因素影响的原因。

2．2有效成分含量比较

2．2．1二苯乙烯苷含量测定2．2．1．1色谱条件色谱柱ThermoHypersilC18（250×4．6mm，5μm）；流动相：乙腈－水（25：75）；流速：1．0mL／min；检测波长：320nm；柱温：25℃。图1各市售制首乌性状质量图2．2．1．2线性关系考察精密称取二苯乙烯苷对照品，于棕色量瓶中用稀乙醇配制成每1mL含215μg的对照品溶液。分别吸取1、5、10、15、20μL注入液相色谱仪，以测得的峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线（表2）。表明二苯乙烯苷在0．215～4．30μg之间具有良好的线性关系。2．2．1．3供试品溶液的制备按药典法进行［1］。取各制首乌粉末（过四号筛）约0．2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25mL，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，上清液滤过，取续滤液，即得供试液。2．2．1．4精密度试验精密吸取同一样品溶液重复进样6次，二苯乙烯苷峰面积积分值的RSD为1．53％。2．2．1．5重现性试验精密称取同一样品6份，按供试品溶液制备方法处理，进行含量测定，二苯乙烯苷含量的RSD为2．41％。2．2．1．7二苯乙烯苷含量测定取适量供试品溶液，用0．45μm微孔滤膜滤过，取续滤液10μL进样，测定峰面积，计算样品中二苯乙烯苷含量。9个市售制首乌样品二苯乙烯苷含量测定结果（表3）。根据表3的结果，市售制首乌中二苯乙烯苷与蒽醌类成分含量存在着明显差异。9个市售制首乌中二苯乙烯苷的含量大部分符合现版《药典》对其含量限度的规定（制首乌不得少于0．70％），其中含量最高的为云南大理3．31％；而只有河南新乡的含量为0．24％，低于药典规定。2．2．2游离蒽醌含量测定2．2．2．1色谱条件色谱柱ThermoHypersilC18（250×4．6mm，5μm）；流动相：甲醇－0．1％磷酸溶液（85：15）；流速：1．0mL／min；检测波长：254nm；柱温：25℃。2．2．2．2线性关系考察精密称取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，精密称定，加甲醇分别制成每1mL含大黄素48．0μg、大黄素甲醚21．2μg的溶液。分别吸取1、5、10、15、20μL注入液相色谱仪，以测得的峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线（表2）。表明大黄素在48．0～960ng之间具有良好的线性关系，大黄素甲醚在21．2～424ng之间具有良好的线性关系。2．2．2．3供试品溶液的制备按药典法进行［1］。供试品溶液的制备，取本品粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试液。2．2．2．4精密度试验精密吸取同一样品溶液重复进样6次，大黄素、大黄素甲醚峰面积积分值的RSD分别为1．67％、2．03％。2．2．2．5重现性试验精密称取同一样品6份，按供试品溶液制备方法处理，进行含量测定，大黄素、大黄素甲醚含量的RSD分别为2．18％、2．43％。2．2．2．6回收率试验精密称取同一样品6份，分别精密分别加入大黄素、大黄素甲醚对照品，按供试品溶液处理，进行含量测定，计算回收率分别为98．92％、101．24％，RSD分别为1．79％、2．21％。2．2．2．7游离蒽醌含量测定取适量供试品溶液，用0．45μm微孔滤膜滤过，取续滤液10μL进样，测定峰面积，分别计算样品中大黄素、大黄素甲醚含量。9个市售制首乌样品大黄素、大黄素甲醚含量测定结果（表3）。符合现版《药典》对游离蒽醌含量限度的规定（游离蒽醌类成分不得少于0．10％）的样品，包括陕西渭南0．16％、安徽六安0．15％、云南大理0．48％等3个市售，其他的6个市售制首乌的含量均低于药典规定的样品。造成市售制首乌中成分含量的差异可能是受产地、生长年限、采收季节、炮制程度等因素影响的原因［5］。

3讨论

炮制对何首乌的影响现代文献表明，生首乌经炮制以后，其外表的颜色随炮制时间的延长而加深［6］。对化学成分而言，二苯乙烯苷的含量随着炮制时间的延长而减少［7］；大黄素、大黄素甲醚等游离蒽醌类成分的含量随着炮制时间的延长而增多，但炮制一定时间后，随着炮制时间的增加，其含量反而降低［8～10］。从结果可知，制首乌市售商品质量参差不齐，提示药品监管部门需加强对市场商品制首乌的质量监管，为临床用药安全、有效提供可靠的保障。结合表1与表3可知，河南新乡粉末颜色为棕红色，与药典规定的性状质量要求不符；且其二苯乙烯苷的含量也偏低，分析原因可能是其原药材质量较差。粉末颜色为等级“＋＋＋＋”的安徽六安，以及颜色等级“＋＋＋”的云南大理、陕西渭南、贵州安顺、云南曲靖，符合药典规定的性状质量要求，但贵州安顺与云南曲靖的样品中蒽醌成分含量低于0．10％，分析原因可能也是这2个市售的原药材质量较差；颜色较深的安徽六安，其二苯乙烯苷含量远高于陕西渭南，但蒽醌成分类含量低于陕西渭南，分析原因可能是安徽六安的样品炮制时间过长，从而导致其蒽醌成分类含量降低了。粉末颜色为等级“＋＋”的样品，二苯乙烯苷含量均远高于0．7％，但蒽醌成分类含量均低于药典的规定，分析原因可能是炮制时间不够所致。河南新乡粉末颜色等级为“＋”，与药典规定的性状质量要求不符；且其二苯乙烯苷与蒽醌成分类含量也均低于药典的规定，可能是其原药材质量较差。同时也提示，在炮制原理研究的基础上，应制定统一规范的炮制技术参数和饮片质量评价标准。以上说明制首乌的有效成分含量与其性状有一定的相关性，提示可以通过制首乌的粉末颜色判断其炮制程度深浅，从而初步辨别其质量好坏。但有效成分含量高低还受产地、生长年限、采收季节等因素的影响，仅靠肉眼无法辨别，因此，在对饮片进行质量考察的时候，仅仅从外观性状来看是不全面的，而且要结合成分检测。

作者:莫志敏黄海波陈明权单位:海口市中医医院