化学成分及质量控制方法研究

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1密蒙花的化学成分

密蒙花化学成分丰富，研究者采用HPLC、UV、TLC、GC-MS等分析出密蒙花中主要含有黄酮类、挥发油类、苯乙醇苷类、三萜类、生物碱类等化学成分[3-6]。其中，蒙花苷和苯乙醇苷类成分常被认为是密蒙花的主要有效成分，现分述如下。1.1黄酮类成分。黄酮类物质属于低分子天然植物成分，是自然界中存在的酚类物质，具有抗炎、抗菌、调节机体免疫力的作用。蒋红芝[7]、熊勇等[8]采用乙醇溶液提取密蒙花中的总黄酮成分，通过正交试验对乙醇浓度、浸提时间、浸提温度等因素进行考察，总黄酮提取率为13%~15%。潘乔丹等[9]对总黄酮提取方法进一步优化，通过静态试验和动态试验比较了不同型号树脂的纯化作用，得干膏中总黄酮纯度为71.31%。李教社等[10]用色谱等方法从密蒙花花蕾中分离得到了8种黄酮类化合物，并通过波谱解析确定它们的结构依次为刺槐素、芹菜素、木犀草素、密蒙花新苷、蒙花苷、木犀草素-7-O-芸香糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷以及秋英苷。郑畅[11]等又从中分离出芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-芸香糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-4’-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-(2’-α-L-鼠李糖基)芸香糖苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷等黄酮类成分。Xie等[12]研究表明，密蒙花中还具有松果菊苷、刺槐黄素等黄酮类成分。陈兰英[13]等对不同生境、不同部位密蒙花黄酮类化合物进行测定，结果表明在林缘环境下密蒙花黄酮类化合物质量分数最高，且密蒙花不同部位的蒙花苷、木犀草素和芹菜素质量分数均表现为盛开花要显著高于花蕾、茎和叶。自中国药典2005年版以来，密蒙花中蒙花苷的含量就被当做质量检测指标来评价密蒙花药材及制剂的质量，一般其含量不得<0.5%[1,14-15]。1.2挥发油类成分。密蒙花中含有大量的挥发油类成分。张兰胜等[16]采用水蒸气蒸馏法从密蒙花中提取挥发油，用GC-MS对其挥发油成分进行分析，鉴别出密蒙花挥发油中27种化学成分，占挥发油总量的72.41%。其中棕榈酸(14.7%)、6,10,14三甲基-2-十五烷酮(12.92%)、二十一烷(6.15%)、二十七烷(3.28%)，紫丁香醇D(1.18%)等。结果表明烷烃类化合物含量最高，其次是酯类，还有一些醇类化合物等。刘和等[17]以密蒙花为原料，并应用气相色谱-质谱-数据系统(GC/MS/DS)技术，分析密蒙花不同部位挥发油主要成分，得到干叶精油中主要成分为醇、酸、烷等3类化合物，而干花精油中主要成分包括醇、醚、酮、酸、醛、烷等6类化合物。龙春焯等[18]也采用GC-MS/MS技术来分析密蒙花精油中的化学成分，得到其主要成分为芳樟醇(9.01%)、橙花叔醇(1.39%)等，它们是密蒙花具有清香气味的主要成分，多用来配置日用的花香香精。1.3苯乙醇等苷类成分。苯乙醇苷类化合物具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用，其中以抗菌活性最为显著[19]。李教社等[20]从密蒙花中提取到4个苯乙醇苷类化合物，利用光谱法等鉴定分别为毛柳苷、毛蕊花苷、异毛蕊花苷和仙人球苷。李秀兰等[21]也从密蒙花中分离出毛蕊花糖苷和仙人球苷。朱露等[22]对10个不同场地的22批密蒙花药材进行分析，均从中分离得到了毛蕊花苷，且研究表明各地市售密蒙花药材中毛蕊花苷的含量较高，平均质量分数为1.89%。目前，已从密蒙花中分离得到种苯乙醇苷类化合物[23]，分别是毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、肉苁蓉苷F、紫葳新苷Ⅱ、荷包花苷、仙人球苷、连翘酯苷B、安哥罗苷A、毛柳苷、6β羟基毛蕊花苷、金石蚕苷和地黄苷等。除此之外，Xie等[12]从密蒙花中还提取出西红花苷III。1.4萜类成分。萜类成分主要包括三萜及其皂苷、单萜和环烯醚萜。萜类成分具有广泛的生物活性，如抗炎、抗菌、抗病毒等。余东蕾等[24]从密蒙花中分离得到3个萜类化合物分别为羽扇豆醇乙酸醋(lupeolacetate)、cycloeucalenol、chondrillasterol。王邠等[25]就密蒙花中抗菌消炎成分，用色谱法对花蕾的亲脂性化学成分就行研究，得到了3个三萜类化合物，分别为齐墩果-13(18)-烯-3-酮、δ-香树脂醇、大戟烷-8,24-二烯-3-醇乙酸酯。1.5其他成分。除了上述成分外，密蒙花中还有许多其他化学成分。邹澄等[26]从密蒙花中分离鉴定出了其色素成分藏红花苷、甘露醇等化学成分。穆俊等[27]对密蒙花多糖中的单糖组分进行了GC分析，密蒙花多糖主要由肌醇、鼠李糖、阿洛糖、核糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖和木糖8种单糖构成，同时分离鉴别出香草酸、半乳糖醇、α菠甾醇等化合物。Xie等[12]从密蒙花中分离得到生物碱类成分N1,N5,N10-三(对香豆酰)亚精胺，是密蒙花中除黄酮、苯乙醇苷类、三萜及其皂苷类等化合物外发现的又一类化合物。

2密蒙花的分析方法

2.1密蒙花的鉴别。毕焕新等[28]对密蒙花进行理化鉴别实验，采用密蒙花乙醇提取液与三氯化铁试液反应显污绿色或墨绿色，与盐酸和镁粉反应得到淡黄棕色泡沫，研究者进一步对密蒙花乙醇提取液进行处理后置于紫外灯下观察得到密蒙花显黄绿色荧光。蒲宇红等[29]通过观察多批次密蒙花药材总结出了密蒙花性状包括形状、表面、花蕾、花萼、花冠、雄蕊、质地、气味等8个方面的特征，随后又对其分别进行TLC和光谱鉴别。结果表明，TLC中密蒙花在Rf值为0.80与0.64处有2个蓝色斑点，光谱鉴别中密蒙花在(326±3)，(275±2)，(266±2)，(218±3)nm处有最大吸收峰。朱露[30]收集了22批密蒙花药材以毛蕊花苷、蒙花苷为对照品建立密蒙花TLC定性鉴别法，结果表明所测样品与对照品相应位置上斑点清晰，分离效果好，展开后Rf值适中。2.2密蒙花的检查。朱露[30]对密蒙花药材进行“水分”“灰分”限量研究，结果表明密蒙花水分含量<10%，灰分<8%有利于药材的保存和疗效。范麦妮[31]研究密蒙花对Pb的吸收能力，结果表明密蒙花对铅有一定的耐性和较强的吸收能力。随着Pb处理浓度的增加，植物体内的Pb含量呈线性增加,且在植物体内的分布规律是叶子<茎<根系。2.3含量测定。王军宪等[3]采用HPLC对11批次密蒙花中的蒙花苷进行含量测定，得到蒙花苷平均回收率为97.02%(RSD为1.5%，n=4)。刘进怀等[32]采用HPLC测定降糖明目颗粒中蒙花苷的含量，得到蒙花苷平均回收率和RSD分别为99.40%，1.59%。韩澎等[33]采用RP-HPLC测定密蒙花中毛蕊花苷的含量，得到平均回收率为100.71%(RSD=1.41%，相关系数为0.999)。研究者又用同样方法测定了10个不同产地的密蒙花药材中毛蕊花苷的含量，结果在0.79%~2.30%。王晓静等[34]建立HPLC多波长法测定密蒙花中4个化合物(毛蕊花糖苷、蒙花苷、木犀草素、芹菜素)的含量，证实了HPLC可在同一色谱条件下利用不同检测窗口实现多类组分及多个成分的同时测定。许龙等[4]建立HPLC测定8个不同产地密蒙花药材中蒙花苷、木犀草素、芹菜素的含量，且四川简阳产密蒙花总黄酮含量最高。李玉美等[6]采用水蒸气蒸馏法提取，用GC/MS进行分析，按峰面积归一化法计算得到了密蒙花中多个挥发性化学成分的相对含量。潘乔丹等[35]采用超声波提取密蒙花多糖，并用苯酚硫酸比色法测定密蒙花多糖含量为190.8mg•g1。张小曼等[36]以水为介质，对密蒙花进行微波处理，能够得到黄色素类成分。2.4浸出物。由于中药有效成分并不明确，难以进行精确定量，因而采用浸出物来反映中药材的质量情况。然而，自中国药典1963年版首次收录密蒙花药材以来，历版中国药典及地方标准未见“浸出物”项。仅有《香港中药材标准第六期》(简称“香港标准”)收载了该项，可能由于密蒙花种化学成分溶解性比较复杂，因而同时规定了水溶性浸出物和醇溶性浸出物。同时，有关于密蒙花浸出物的研究报道较少。2.5指纹图谱(特征图谱)。中药指纹图谱的建立有助于补充和提高中药质量标准以及控制原料与成品的一致性，减少批间差异。韩澎等[37]运用RP-HPLC测定了10个不同产地密蒙花商品药材，建立中药密蒙花指纹图谱。经过分析，密蒙花的HPLC指纹图谱可以有效控制其内在质量。杨胜远等[5]对密蒙花中黄色素进行了分析，发现密蒙花黄色素在pH3~9.18范围内随着pH值升高，328nm和435nm处的2个峰逐渐向371nm处移动汇集形成新的特征峰，预期这一特性可作为密蒙花的指纹图谱用于对密蒙花植物或密蒙花黄色素的鉴别。

3密蒙花质量标准现状

对现行的国内外密蒙花标准进行检索，目前仅有我国具有相关标准。对不同标准的检验项目依据名称、来源、性状、鉴别、检查、浸出物、含量测定等进行梳理，比较不同检测项目的要求，见表1。

4密蒙花质量控制存在的问题

4.1性状描述的不同。性状鉴别属于我国医药学宝库中积累了的丰富传统鉴别方法。地方标准多与中国药典中描述较接近，部分老版标准描述较为简单(如山东省中药炮制规范1990版)。中国药典与香港标准相比，主要区别在于密蒙花的长度、花蕾的长度与直径，香港标准在这方面要求相对宽泛一些。这就涉及到中药规格等级标准的问题，只有构建具有国际水平的质量等级标准才能确保中药产品的质量稳定与安全，进而为建立统一、科学的质量标准提供依据。4.2鉴别项的不足。目前密蒙花的鉴别项较为单薄，多数为显微鉴别或理化鉴别。虽能解决部分日常问题，然而面对伪品等质量问题又显得不足。TLC、UV等色谱、光谱方法可以为密蒙花的真伪鉴别及质量评价提供了技术支持[38]，同时不断更新现有的鉴别项内容(如显微鉴别)[28]，引进新技术、新方法(如微性状鉴别等[39])可以更好地补充鉴别项的不足，提高鉴别项的应用。4.3检查项严重缺乏。检查项是确保中药用药安全的重要内容。随着环境问题的愈演愈烈，重金属污染、农药残留等问题层出不穷。加之，由于运输、贮藏不当等缘故，药材易产生霉菌毒素等问题。从表1中可知，除了香港中药材标准外，其他标准均缺少安全性检查项目(如水分、霉菌毒素、重金属及有害元素、农药残留等)，不能确保密蒙花临床用药安全，因而增加质量标准中检查项迫在眉睫。有必要对这类药材进行安全性抽样评价，找出可能易出的问题，并基于此制定合理的安全检查项。4.4浸出物需补充。密蒙花具有丰富的药理药效作用，其有效成分并不明确，难以进行精确计量。中药多采用汤剂，以浸出成分进行服用，故而可参考香港标准制定的浸出物项进行补充。并通过调研密蒙花的煎药溶剂，制定相应的(醇溶性、水溶性)的浸出物标准。4.5含量测定项需完善。目前，密蒙花的含量测定项基本选用蒙花苷作为指标成分，单一指标成分难以反应中药材的质量，构建“多指标含量”或“有效成分群”的测定方法是完善含量测定项，提高检测方法专属性的可参考途径之一。挥发油是密蒙花的重要组成部分，然而现行标准均未对其进行考察，未来可采用水蒸气蒸馏法等方法对密蒙花的挥发油的测定进行补充。4.6指纹(或特征)图谱的建议。指纹(或特征)图谱具有整体性与模糊性的特征，可以作为中药的鉴别与含量测定方法，已广泛运用于中药制剂提取物的质量评价分析。未来是否可以构建密蒙花指纹(或特征)图谱用以完善质量控制与评价体系值得进一步研究与探索，但指纹(或特征)图谱在中药整体性评价中的运用价值是毋庸置疑的。

5结语

中医药的传承与发展需要质量标准的保障，然而过高、难度大的质量标准又增加了企业单位的检验难度与负担，不利于行业的健康发展。只有对质量控制进行深入研究，找出质量控制的关键点与不足，才能找准质量标准制定的思路。基于这些关键点与不足，通过“替代标准品法”与“整体评价”等新理念[40-41]，制定科学、简便、实用的质量标准(即“浅出标准”)，从而实现中药现代化发展。

作者:杨东方 胡云飞 丁倩倩 周建理 单位:山西药科职业学院