急性淋巴细胞白血病与免疫分型的关系

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摘要：目的探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）患者的细胞核增殖相关抗原Ki-67表达情况及其与临床特征、临床分期、免疫分型的关系。方法将2015年1月至2019年12月于我院就诊的100例ALL患者纳入研究。采用免疫组化染色测定ALL患者的Ki-67表达情况，并根据Ki-67阳性表达情况将患者分为Ki-67阳性组与Ki-67阴性组。比较两组的临床特征，比较不同临床分期、免疫分型ALL患者的Ki-67阳性表达率，并分析Ki-67阳性表达与ALL患者临床特征、临床分期、免疫分型的相关性。结果Ki-67阳性组与Ki-67阴性组的淋巴结肿大、纵膈肿块发生率无显著差异（P>0.05）；Ki-67阳性组的骨髓受累、外周血受累、肝脾肿大发生率均高于Ki-67阴性组，差异具有统计学意义（P<0.05）。未缓解期患者的Ki-67阳性表达率为79.03%，高于缓解期患者的52.63%，差异具有统计学意义（P<0.05）。伴髓系抗原表达的ALL型、T型、B型患者的Ki-67阳性表达率分别为95.65%、73.33%、43.75%，差异具有统计学意义（P<0.05）。Ki-67阳性表达与淋巴结肿大、纵膈肿块之间无显著相关性（P>0.05）；Ki-67阳性表达与骨髓受累、外周血受累、肝脾肿大、临床分期及免疫分型均呈正相关（P<0.05）。结论ALL患者的Ki-67存在异常表达，其表达与患者临床特征、临床分期、免疫分型均密切相关。

关键词：急性淋巴细胞白血病；Ki-67；临床特征；临床分期；免疫分型；相关性

白血病是指造血干细胞恶性克隆后在骨髓和外周血中大量增殖的一类恶性疾病，急性淋巴细胞白血病（acutelymphoblasticleukemia,ALL）是其中的常见类型，严重影响患者的生命安全，预后较差[1-2]。以往，临床上将ALL与淋巴母细胞瘤视为两种疾病，随着对其研究的不断深入，从免疫学角度来看，这两种疾病实际是同一疾病的不同时期，但两种疾病的受累范围不同，治疗方法及预后也存在差异，因此，临床需做好ALL的诊断工作，避免延误患者治疗[3]。细胞核增殖相关抗原Ki-67是临床上常用的恶性肿瘤标志物，在白血病诊治中得到应用，但临床上关于Ki-67是否与ALL患者的临床特征、临床分期、免疫分型相关尚无共识，还需进一步研究。针对这一问题，本研究对2015年1月至2019年12月于我院就诊的100例ALL患者进行研究，检测其Ki-67表达情况，分析Ki-67表达情况在ALL诊断中的意义及其与临床特征、临床分期、免疫分型的关系。

1资料与方法

1.1一般资料

将2015年1月至2019年12月于我院就诊的100例ALL患者纳入研究，其中男54例，女46例；年龄20～64岁，平均（41.89±10.29）岁；临床特征：淋巴结肿大85例，纵膈肿块69例，骨髓受累38例，外周血受累35例，肝脾肿大26例；临床分期：未缓解期62例，缓解期38例；免疫分型：伴髓系抗原表达的ALL型23例，T型45例，B型32例。本研究获得医院伦理委员会审批；所有患者均知情同意，自愿参与本研究。纳入标准：经病理诊断确诊为ALL；年龄18~<65岁；神志清醒。排除标准：合并其他恶性肿瘤；合并其他骨髓或血液系统病变；合并急症；存在精神障碍或抑郁。

1.2方法

在超声引导下确定穿刺点，对穿刺点进行常规消毒，采用细针于穿刺点进行穿刺，针尖抵达病灶后旋转3圈进行取材，采集两组患者的病变组织标本，采用10%甲醛溶液固定组织标本，石蜡包埋处理，切成4μm厚的薄片，采用PBS缓冲液冲洗，用柠檬酸缓冲液修复组织标本，滴加过氧化氢溶液，在室温下孵育10min后滴加Ki-67抗体，在室温下持续孵育30min后采用PBS缓冲液冲洗，采用DAB显色液对其进行显色处理，采用苏木精-伊红染色，在电子光镜下观察细胞核，如细胞核内出现棕黄色颗粒物，即可判断为Ki-67阳性。

1.3观察指标

根据Ki-67阳性表达情况将ALL患者分为Ki-67阳性组与Ki-67阴性组，比较Ki-67阳性组与Ki-67阴性组的临床特征（淋巴结肿大、纵膈肿块、骨髓受累、外周血受累、肝脾肿大）。比较不同临床分期（包括缓解期与未缓解期；无贫血、出血、感染等白血病表现，血象检查可见血红蛋白>90g/L、白细胞计数正常或减少、血小板计数>100×109/L，骨髓象检查可见原始细胞与幼稚细胞的占比<5%、红细胞与巨核细胞正常，临床症状、血象、骨髓象3项中至少1项符合，即可判断为缓解期，反之则为未缓解期[4]）、不同免疫分型（包括伴髓系抗原表达的ALL型、T型、B型；伴髓系抗原表达的ALL型即由1～2个髓系标志、但不满足杂合性急性白血病诊断标准[5]；T型即细胞质、细胞膜CD3+阳性表达；B型即CD19、CD79a、CD22中至少2个阳性表达）患者的Ki-67阳性表达率。分析Ki-67阳性表达与ALL患者临床特征、临床分期、免疫分型的相关性。

1.4统计学方法

应用SPSS22.0软件处理数据，计数资料用n/%表示，用χ2检验，计量资料用x軃±s表示，用t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。开展Spearman相关性分析，以P<0.05为检验水准，r值为正数即呈正相关，r值为负数即呈负相关。

2结果

2.1Ki-67阳性组与Ki-67阴性组患者的临床特征比较

100例ALL患者中，有69例Ki-67阳性表达，Ki-67阳性表达率为69.00%。Ki-67阳性组与Ki-67阴性组的淋巴结肿大、纵膈肿块发生率无显著差异（P>0.05）；Ki-67阳性组的骨髓受累、外周血受累、肝脾肿大发生率均高于Ki-67阴性组（P<0.05）。

2.2不同临床分期患者的Ki-67阳性表达率比较

100例ALL患者中，有62例属于未缓解期、38例属于缓解期，未缓解期患者的Ki-67阳性表达率为79.03%（49/62），高于缓解期患者的52.63%（20/38），差异具有统计学意义（χ2=7.677，P<0.05）。

2.3不同免疫分型患者的Ki-67阳性表达率比较

100例ALL患者中，有伴髓系抗原表达的ALL型23例、T型45例、B型32例，伴髓系抗原表达的ALL型、T型、B型患者的Ki-67阳性表达率分别为95.65%（22/23）、73.33%（33/45）、43.75%（14/32），差异具有统计学意义（χ2=4.869，P=0.027）。

2.4Ki-67阳性表达与ALL患者临床特征、临床分期、免疫分型的相关性分析

Ki-67阳性表达与淋巴结肿大、纵膈肿块之间无显著相关性（P>0.05）；Ki-67阳性表达与骨髓受累、外周血受累、肝脾肿大均呈正相关（P<0.05）；Ki-67阳性表达与临床分期、免疫分型呈正相关（P<0.05）。见表2。

3讨论

ALL是一种呈克隆性增殖的常见急性白血病类型[6]，起源于B系、T系淋巴细胞，患者机体内淋巴细胞聚集于骨髓、淋巴结中，严重影响患者的造血功能，会导致其造血功能障碍，对其生命健康构成威胁[7-8]。ALL多发生于儿童人群中，但在成人中的发病风险也不容忽视，尤其是成人患者的病情在得到控制后易复发，不利于预后[9-11]。临床上需做好ALL的早期诊断工作，以便给予患者及时有效的治疗，但由于ALL的临床症状、影像学表现缺乏典型性，临床诊断时易与其他疾病症状混淆，诊断难度较大，且预后预测也较困难。有研究报道指出，在ALL患者中，应用Ki-67可对其预后进行准确预测[12]。Ki-67属于细胞核增殖相关抗原，在细胞周期G0和G1早期通常不表达，待细胞出现增殖后才开始表达，Ki-67的表达主要分布于细胞周期中的分裂期、增殖期，充分反映了细胞的增殖活性[13]，近年来，Ki-67检测在恶性肿瘤诊断和治疗中均有所应用，其阳性表达往往会随着恶性肿瘤组织的恶性程度增高而增高[14]。本研究对ALL患者的Ki-67表达情况及其与临床特征、临床分期、免疫分型的关系进行了分析，结果发现，Ki-67阳性组的骨髓受累、外周血受累、肝脾肿大发生率均高于Ki-67阴性组（P<0.05）；未缓解期患者的Ki-67阳性表达率高于缓解期患者（P<0.05）；伴髓系抗原表达的ALL型、T型、B型患者的Ki-67阳性表达率分别为95.65%、73.33%、43.75%，差异具有统计学意义（χ2=4.869，P=0.027）；Ki-67阳性表达与ALL患者的骨髓受累、外周血受累、肝脾肿大、临床分期、免疫分型均呈正相关（P<0.05）。这说明Ki-67表达水平在ALL患者中出现增高，会随着其病情恶化而继续增高，可用于该疾病临床诊断、病情评估及预后预测中。这主要是因为Ki-67在细胞分裂期会发生一系列的磷酸化、去磷酸化反应，其表达调控受到细胞周期素B/cdc2的严格控制，具有细胞周期依赖性，在细胞周期G0期、G1早期通常不表达，G1中期至晚期出现表达，G2期表达增加，M期表达到达峰值，并迅速降解，Ki-67在细胞周期中的表达特点反映了细胞增殖周期时相，表明Ki-67在细胞增殖过程中发挥了重要的作用，尤其是在恶性肿瘤细胞增殖过程中[15]，因此，当ALL患者病情恶化后，Ki-67的表达会随着患者癌细胞的增殖而上调。综上所述，ALL患者的Ki-67存在异常表达，其表达与患者临床特征、临床分期、免疫分型均密切相关，临床上可将Ki-67作为ALL的肿瘤标记物，推广应用于该疾病的临床诊治中。

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作者：谷蕊 王丹 单位：宝鸡第三医院检验科