细胞形态学在急性白血病的诊断符合率

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【摘要】目的探究细胞形态学对急性白血病诊断符合率的影响。方法选取2017年2月至2020年2月我院急性白血病患者132例，分析细胞形态学分型、免疫学分型、细胞遗传学分型、分子生物学分型及联合分型诊断符合率。结果细胞形态学分型：M13例，M225例，M328例，M46例，M516例，急性髓细胞白血病（AML）未分型12例，急性淋巴细胞白血病（ALL）36例，急性白血病（AL）6例，诊断符合率分别为80.3%（106/132）；免疫学分型：M01例，M13例，M233例，M328例，M44例，M55例，AML未分型14例，ALL37例，AL6例，急性混合细胞白血病（MAL）1例，诊断符合率82.6%（109/132）；细胞遗传学分型：M327例，M42例，AML未分型4例，AL7例，其他异常染色体核型17例，正常核型75例（56.8%），诊断符合率24.2%（32/132）；分子生物学分型：M328例，M43例，AML未分型5例，AL9例，其他相关融合基因10例，融合基因阴性77例，诊断符合率25.8%（34/132）；MICM（形态学、免疫学、细胞遗传学和分子学）综合诊断符合率97.7%（129/132），高于各分型单纯诊断（P＜0.05）；形态学分型诊断符合率高于细胞遗传学分型、分子生物学分型（P＜0.05）；形态学、免疫学分型诊断符合率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论细胞形态学是急性白血病诊断基础，与免疫学分型诊断价值相当，应给予充分重视，而MICM综合诊断可提高最终诊断率。

【关键词】细胞形态学；细胞遗传学；免疫学；分子生物学；诊断

急性白血病（acuteleukemia，AL）是最常见血液系统恶性疾病，发病迅速，且病程通常较短，平均生存期仅3个月左右[1，2]。AL准确分型对指导临床治疗和预后预测具有重大意义。随流式细胞术发展及世界卫生组织（WHO）白血病分型的提出，免疫分型临床应用日益广泛[3]。现阶段，细胞形态学（morphology）、免疫学（immunology）、细胞遗传学（cytogenetics）和分子生物学（molecularbiology）分型即MICM分型已得到临床高度认可，但很多基层医院及部分三级医院受仪器、试剂等的限制而应用受阻，尤其分子生物学、细胞遗传学分型[4，5]。基于形态学的法、美、英分型系统（French-American-Britishclassificationsystems，FAB分型法）是传统分型方法，操作简便，在急性白血病的诊断中仍具有较高诊断价值及不可替代作用[6]。近年来，关于形态学、免疫学分型的对比研究主要探讨免疫学的诊断价值，对形态学诊断价值的研究较少。基于此，本研究选取我院AL患者132例，探究细胞形态学对AL诊断符合率的影响，现报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料：选取2017年2月至2020年2月我院AL患者132例，均符合白血病诊断标准[7]，其中急性髓细胞白血病（AML）：M01例（0.8%），M14例（3.0%），M241例（31.1%），M328例（21.2%），M46例（4.6%），M511例（8.3%），未分型3例（2.3%），急性淋巴细胞白血病（ALL）37例（28.0%），急性混合细胞白血病（MAL）1例（0.8%）。男性73例，女性59例，年龄18～78岁，平均（47±10）岁。1.2方法：仪器与试剂：珠海贝索生物技术有限公司瑞氏-姬姆萨染色液试剂盒；广东西陇化工股份有限公司醋酸萘酚酯酶（NAE）、过碘酸-雪夫反应（PAS）、过氧化物酶（POX）染色试剂；美国BectonDickinson公司FACSCantoⅡ型流式细胞仪、溶血素、破膜剂及单克隆抗体；天津瑞爱金生物科技有限公司秋水仙胺、细胞染色体培养液；美国Life公司ABI7500型聚合酶链反应（PCR）仪；法国Lourmat公司Vilber凝胶分析系统；金砂广播仪器厂DY-600型中压电泳仪；上海博迅实业有限公司医疗设备厂SSW-420-2S型电热恒温水浴箱；华美生物工程公司淋巴细胞分离液；上海源奇生物医药科技有限公司白血病相关融合基因检测试剂盒。①细胞形态学：取骨髓涂片进行瑞氏-姬姆萨染色（骨髓小粒多、涂片好），油镜下分类计数200个有核细胞并行细胞化学染色，包括PAS、POX、NAE+氟化钠抑制（NaF），计数阳性率并观察酶型，按FAB标准分型。②免疫学分型：取肝素抗凝骨髓液1～2mL，用流式细胞仪测定，分出幼稚与成熟细胞群（CD45/SSC设门），进行免疫表型及抗原表达分析，阳性：膜抗原＞20%，CD34和胞质内抗原＞10%，类型判断依据欧洲白血病免疫学分类协作组（EGIL）积分标准。③染色体核型：取肝素抗凝骨髓液2～5mL，接种于细胞染色体培养液（2×106/mL细胞），终止培养前1h加入秋水仙胺（0.05μL/mL），离心收获细胞，固定液固定，滴片，行核型分析（R显带法）。④分子生物学：取2～3mL抗凝骨髓液，0.9%氯化钠注射液稀释（等体积），分离单个核细胞并裂解，提取总RNA，逆转录得到cDNA，行多重巢式PCR反应，反应产物电泳（1.5%琼脂糖凝胶），观察分析结果。1.3观察指标：①细胞形态学分型；②免疫学分型；③细胞遗传学分型；④分子生物学分型；⑤4种分型与联合分型诊断符合率。1.4统计学处理：运用SPSS21.0分析，计数资料以例数和百分比（%）表示，行χ2检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1细胞形态学分型：132例AL中，M13例（2.3%），M225例（18.9%），M328例（21.2%），M46例（4.6%），M516例（12.1%），AML未分型12例（9.1%），ALL36例（27.3%），AL6例（4.6%）。2.2免疫学分型：132例AL经流式细胞仪诊断为M01例（0.8%），M13例（2.3%），M233例（25.0%），M328例（21.2%），M44例（3.0%），M55例（3.8%），AML未分型14例（10.6%），ALL37例（28.0%），AL6例（4.6%），MAL1例（0.8%）。2.3细胞遗传学分型：M327例（20.4%），t（15；17）（q22；q21）；M42例（1.5%），inv（16）（q13；q22）；AML未分型4例（3.0%），t（8；21）（q22；q22）；AL7例（5.3%），t（9；22）（q34；q11）；其他异常染色体核型17例（12.9%）；正常核型75例（56.8%）。2.4分子生物学分型：M328例（21.2%），PMLRARa融合基因；M43例（2.3%），AML未分型5例（3.8%），AL9例（6.8%），其他相关融合基因10例（7.6%），融合基因阴性77例（58.3%）。2.54种分型与联合分型诊断符合率：形态学分型80.3%（106/132）、免疫学分型82.6%（109/132）、细胞遗传学分型24.2%（32/132）、分子生物学分型25.8%（34/132）、联合分型诊断符合率97.7%（129/132）。联合分型与形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学分分型诊断符合率差异有统计学意义（χ2=267.799，P＜0.01）；形态学分型诊断符合率高于细胞遗传学分型、分子生物学分型（χ21=83.142，P1＜0.01；χ2=78.835，P2＜0.01）；形态学、免疫学分型诊断符合率差异无统计学意义（χ2=0.226，P=0.635），见表1。

3讨论

目前，形态学分型仍是白血病诊断基础，其结合细胞形态学和化学染色特征进行白血病亚型诊断[8，9]。卢兴国[10]指出，基于外周血细胞形态学检验是所有白血病的诊断起点，所得信息具有重要临床价值。本研究显示，M3、M4EO等AL类型有典型形态学特征，可依靠形态学明确诊断，也可依靠分子生物学或细胞遗传学直接诊断，但后者受试剂、仪器等的限制而应用受阻，且检测时间较长。细胞形态学具有免疫分型等不可替代的优势，包括以下几个方面：①外周血检验可立即发现血细胞计数低的白血病，如AML-M3，且具有典型形态学特征，明确诊断，为患者救治争取时间；②操作简便、快捷、分析直观、分型标准明确；③流式细胞术对原始细胞的计数受操作、稀释等因素影响，故原始细胞百分比较免疫表型更为准确；④流式细胞术检测免疫分型时，以形态学为依据选择单克隆抗体；⑤骨髓细胞形态学可直观明确淋巴瘤患者临床分期，利于早期诊断；⑥流式细胞术对粒、单白血病分型存在一定困难，而细胞形态学观察化学染色表现，尤其酯酶染色，具有诊断价值[11]。本研究数据显示，形态学分型诊断符合率80.3%高于细胞遗传学分型24.2%、分子生物学分型25.8%（P＜0.05），且接近免疫学分型诊断符合率82.6%（P＞0.05），提示细胞形态学与免疫学分型诊断价值相当，与既往文献[12]研究一致。MICM综合诊断符合率97.7%（129/132），高于各分型单纯诊断（P＜0.05），提示MICM综合诊断可提高最终诊断率，对AL临床治疗具有一定指导价值。综上可知，细胞形态学是AL诊断基础，与免疫学分型诊断价值相当，应给予充分重视，而MICM综合诊断可提高最终诊断率。

参考文献

[1]ShapiroRM，KimDDH.Next-generationsequencing-basedminimalresidualdiseasemonitoringinpatientsreceivingallo-geneichematopoieticstemcelltransplantationforacutemyeloidleukemiaormyelodysplasticsyndrome[J].CurrOpinHematol，2018，25（6）：425-432.

[2]张斌，蔡艳霞，张素贞，等.颗粒性急性B淋巴细胞白血病形态学及流式散点图特点[J].检验医学，2017，32（2）：118-121.

[3]赵莉，高吉照，李艳，等.50例儿童急性淋巴细胞白血病免疫分型、染色体核型及融合基因与预后分析[J].中国小儿血液与肿瘤杂志，2019，24（2）：95-99.

[4]秦亚溱.白血病诊治中的分子学检测及其临床意义[J].中国生物工程杂志，2019，39（9）：98-102.

[5]刘倩，莫霖，黄先巧，等.某医院810例儿童白血病流行病学特征分析[J].重庆医科大学学报，2020，45（10）：1442-

作者：田霞