北五味子多糖提取论文

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【摘要】目的建立提取和测定北五味子中多糖含量的方法。方法采用比色法测定北五味子中多糖含量。结果测得北五味子中多糖含量为6.57%，平均回收率为99.78%，RSD=1.54%。结论该方法简便、精密度及重现性均较好，结果令人满意。

【关键词】北五味子多糖提取含量测定

ExtractionandDeterminationofPolysaccharidefromSchisandrachinensis(Turcz)BaillFruit

Abstract：ObjectiveToestablishamethodfortheextractionanddeteminationofpolysaccharidefromSchisandrachinensis(Turcz)BaillFruit.MethodsPolysaccharideinSchisandrachinensis(Turcz)BaillFruitwasdeterminedbythemethodofSpectrophotometry.ResultsThepolysacharidesinSchisandrachinenisis(Turcz)BaillFruitwas6.57%,theaveragerecoverywas99.78%,RSDwas1.54%.ConclusionThismethodissimple，theresultisstable，reproducible,andsatisfactory.

Keywords：Schisandrachinensis(Turcz)Baill；Polysaccharide;Extraction;Determination

北五味子Schisandrachinensis(Turcz）BaillFruit是木兰科植物五味子的干燥成熟果实，是著名的滋补性中药，因其果实甘、酸、辛、苦、咸五味俱全，故名五味子，具有敛肺、滋肾、生津、收汗、涩精之功效。现代药理研究证实五味子对中枢神经系统、呼吸系统均有兴奋作用，亦能促进肝糖原异生，加快肝糖原分解，在治疗神经衰弱、肝炎等的药物中应用十分广泛。五味子有南北之分，据《本草纲目》记载“五味子南产者红，北产者黑，入滋补药，必用北者为良”，北五味子的化学成分主要为五味子木脂素、挥发油、五味子醇、多糖等［1］。近年来对多糖提取工艺的研究方法很多，如热水浸提法、稀碱液浸提法、稀酸液浸提法。但多糖是由单糖基通过糖苷键连接而成的化合物，在稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，因此本文采用热水浸提法，用苯酚-硫酸法测定北五味子多糖的含量，得到满意的结果。

1仪器与药品

北五味子购于张家口市药材公司经鉴定为北五味子，其它试剂均为国产分析纯；UV752分光光度计（上海第三仪器厂）；GOA型电热真空干燥箱（天津东郊机械加工厂）；RE52A型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。

2方法与结果

2.1葡萄糖储备液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，用蒸馏水溶解并定容到100ml。

2.2苯酚溶液的配制取苯酚100g，加铝片0.1g和NaHCO30.05g，蒸馏，收集182℃馏份，称取7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。

2.3测定条件选择

2.3.1反应温度选择精密吸取葡萄糖储备液1.0ml于100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，作为对照品溶液。分别吸取葡萄糖对照品液1.0ml于两个具塞试管中，各加苯酚液1.0ml，并分别迅速滴加浓硫酸5.0ml。另取两份1.0ml水同上操作，为空白液。一份于水浴中煮沸15min，另一份于40℃水浴中恒温30min取出，冷却至室温，15min后于490nm处测其吸光度值，分别为0.112和0.126。因此，本实验采用40℃恒温30min的方法。

2.3.2苯酚及硫酸用量选择吸取葡萄糖对照品液1.0ml5份，分别加入苯酚液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别加水至2.0ml，再各滴加浓硫酸5.0ml，40℃恒温30min后，测其吸光度值，分别为0.095，0.112，0.125，0.127，0.126，可见加入苯酚液0.6ml以上时，反应都能完成；另取葡萄糖对照品液1.0ml5份，分别加苯酚液1.0ml，再分别滴加浓硫酸2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml，并均用水稀释至8.0ml，加入硫酸体积占总体积的62.5%以上时的结果较满意。

2.3.3反应时间选择及稳定性取葡萄糖对照品溶液1.0ml3份，各加苯酚液1.0ml，浓硫酸5.0ml，于40℃分别恒温20，30，40min。测得吸光度值分别为0.16，0.125，0.126，可见加热30min即可使反应完全。另测反应完成后样品在不同时间内的吸光度值，结果3h内稳定。

2.4标准曲线绘制精密量取葡萄糖标准溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml置具塞试管中，分别加蒸馏水使成1.0ml，再分别加入苯酚溶液1.0ml，摇匀，然后加浓硫酸5.0ml，充分摇匀，于40℃水浴中恒温30min，取出，冷却至室温，另以蒸馏水同上操作为空白对照，在490nm处测定吸光度，绘制标准曲线，建立回归方程：A=0.06781C+0.00620471，r=0.9998。

2.5精密度实验精密吸取对照品溶液1.0ml，6份，同2.4项下操作，结果显示吸光度的RSD=1.45%。

2.6多糖的提取流程北五味子粉碎后，称取500g，用清水洗净，加水4500ml，微沸煎煮1h。过滤，滤渣加水2000ml，煎煮1h，过滤，合并提取液，加热浓缩至300ml。加入乙醇使乙醇含量为80%放置12h，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮反复洗涤，得到棕色粗多糖。将粗多糖溶于水，用seveg法除去蛋白，加入1%活性碳脱色，抽滤，滤液加入乙醇，使溶液含醇达80%，静置过夜，抽滤，残渣用无水乙醇、丙酮反复洗涤，真空干燥，即得精制北五味子多糖。

2.7换算因子测定

精确称取60℃干燥恒重的五味子多糖20mg，加水溶解后定容到100ml容量瓶中，摇匀，作为多糖储备液精确量取多糖储备液0.2ml，加水至1.0ml按测量标准曲线同样的方法测其吸光度值，根据标准曲线计算浓度。按下式计算换算因子：f=W/CD式中：W为多糖重量（μg），C为测试液中据标准曲线方程计算得到的单糖浓度（μg·ml-1）D为多糖的稀释因子，测得f=1.748，（n=6）。

2.8样品含量的测定

准确称取干燥五味子粉末100mg，3份，分别置于索氏提取器中，用80%乙醇回流提取1h，改用水微沸煎煮，3份分别煎煮1，2，3次，各定容至100ml，为样品液。分别精密吸取上述样品液10ml，分别定容至100ml，各取1.0ml，按2.4项下操作，平行做6次，并按下式计算多糖含量（以粗多糖计）。结果见表1。表明提取两次即可。多糖含量（%）=CDf/W×100。式中：C为样品溶液的葡萄糖的浓度（μg·ml-1），D为样品溶液的稀释因子，f为换算因子，W为样品的重量（μg）。表1样品中多糖的含量（略）

2.9回收率测定精密吸取样品液0.5ml（6份）再分别精密加入不同量的标准溶液，依样品测定方法测定吸光度，计算回收率平均值为99.78%，RSD=1.54%。

3讨论

3.1苯酚

硫酸比色法是测定多糖含量较经典有效的方法之一，但各自的报道中，对反应温度的控制、试剂中苯酚及硫酸用量不尽相同。常见的反应温度有煮沸、40℃恒温和室温3种，鉴于冬天和夏天室温相差较大，本实验仅比较于前两种条件，证实本法以40℃恒温30min较好。加入苯酚量0.6ml以上时，反应能完成。对于硫酸的用量，经实验对比认为硫酸占总体积62.5%以上时，在重现性、稳定性及回收率方面都有明显的优越性，并且与文献报道一致［2］。

3.2实验结果表明，北五味子多糖提取两次即可，平均含量为6.57%，比文献报道的稍低［3］，这可能与北五味子的产地、采收季节等因素有关。

3.3五味子粗多糖的初步药理研究表明［4］，五味子粗多糖能明显提高小鼠的耐缺氧能力，具有抗疲劳作用，亦能使正常小鼠胸腺和脾脏的重量的增加。说明五味子粗多糖能够提高机体对环境的适应能力和防御能力。而北五味子多糖含量较高，这可能是北方五味子药效较优的原因之一，但是北五味子多糖的结构组成和生理活性有待进一步研究。

【参考文献】

［1］应国清，俞志明，单剑峰，等.北五味子有效组分的研究进展［J］.河南中医，2005，25（6）：84.

［2］DongQ,ZhengLY.FangJN.Studyonthedeterminationofoligosaccharideandpolysaccharidebymodifiedphenol-sulfuricacidmethod［J］.中国中药杂志，1996，31（9）：550.

［3］韩学君，王发善.北五味子有效成分的高效液相层析测定［J］.黑龙江医药科学，2003，26（4）：104.

［4］苗明三.五味子多糖对衰老模型小鼠的影响［J］.中国医药学报，2002，17（3）：188.