新生胶囊对肿瘤模型动物扶正祛邪论文

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【摘要】目的验证新生胶囊扶正祛邪的主要药理作用。方法试验选用ICR小鼠、BALB/C品系裸鼠,建立S180肉瘤肿瘤模型和MGC-803肿瘤模型,观察口服灌胃新生胶囊对肿瘤小鼠肿瘤的抑制作用,选用S180腹水肿瘤模型小鼠观察新生胶囊对小鼠生命存活时间的影响。结果新生胶囊能显着抑制S180荷瘤小鼠和BALB/C裸鼠MGC-803移植瘤的生长,与肿瘤模型组比较差异有显着性(P<0.05)。小鼠灌胃新生胶囊,对S180腹水肿瘤小鼠生命存活时间与模型组比较差异无显着性(P>0.05)。但与环磷酰胺合用,可以延长S180腹水肿瘤小鼠存活时间,生命延长率为33.2%~38.86%,提示新生胶囊与环磷酰胺合用对S180腹水小鼠存活时间有协同增效作用的趋势。新生胶囊还具有一定的扶正作用,对注射环磷酰胺引起的小鼠免疫功能降低有一定的改善,对血流中碳粒的吞噬廓清能力有一定的增强作用。提高吞噬指数(K),增加血清溶血素含量,与模型组比较差异有显着性(P<0.05)。结论新生胶囊具有一定的扶正祛邪、增强机体免疫功能的作用。

【关键词】新生胶囊;S180肉瘤肿瘤模型;MGC-803肿瘤模型;扶正祛邪

新生胶囊是由黄芪、乳香、没药等多味中药组成的中药复方制剂,具有清热解毒、活血消症、散结止痛的功效,临床上用于食管癌、胃癌及恶疮肿毒等症的辅助用药。为验证其主要药理作用,我们选用ICR小鼠、BALB/C品系裸鼠,建立S180肉瘤肿瘤模型和MGC-803肿瘤模型,观察新生胶囊扶正祛邪的药理作用,并以参芪颗粒、注射用环磷酰胺为阳性对照,试验结果如下。

1材料

1.1动物小鼠:ICR品系,等级:SPF(清洁级);裸鼠:BALB/C品系,等级:SPF。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。供给源许可证号:SCXK(京)2002-0003。

1.2药物新生胶囊批号:20040118,含量:每克原药提取物相当3.68g生药。提供单位:北京中医药大学。注射用环磷酰胺生产单位:江苏恒瑞医药股份有限公司,产品批号:0208211。临用时用生理盐水配成所需浓度。参芪颗粒生产单位:江西山高制药有限公司,临用时用0.5%羧甲基纤维素钠配成所需浓度。

1.3瘤株小鼠S180瘤株由中医研究院中药研究所提供;小鼠MGC-803瘤株由中国医学科学院肿瘤研究所动物室提供。

1.4仪器与试剂TU-1901双光束紫外可见分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司制造。

2试验方法

2.1祛邪作用的研究

2.1.1对小鼠S180肉瘤瘤体生长的影响[2]肿瘤模型建立于超净工作台中,取S180肉瘤瘤液,以生理盐水稀释,显微镜下计算1ml瘤液中活体瘤细胞数,用生理盐水稀释成所需浓度(1.6×107个/ml),按每只小鼠0.2ml接种于右腋皮下。

取上述健康ICR品系小鼠75只(每次同性别),体重19~21g,无菌条件下,于右侧腋下接种上述配置的S180肿瘤瘤液0.2ml,24h后随机分成5组,模型组,新生胶囊大、中、小剂量组,环磷酰胺阳性对照组,每组15只(分组和给药剂量见表1)。每天各组小鼠灌胃相应药物0.5ml/20g,连续给药8天。阳性对照组小鼠隔日腹腔注射环磷酰胺20mg/kg。共4次,模型组灌胃同体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液。于末次给药24h后处死小鼠,称体重并剥离皮下瘤块,称瘤重,计算各组瘤体重量,并按下列公式计算抑瘤率,以抑瘤率>30%为有效。

抑瘤率=(1-T/C)×100%(T为给药组瘤重,C为对照组瘤重)

以上实验重复3批。表1新生胶囊对S180肉瘤瘤体生长的影响注:与模型组比较,**P<0.01,*P<0.05

2.1.2对BALB/C小鼠MGC-803肉瘤瘤体生长的影响[2]取上述健康BALB/C品系雌性裸鼠50只,体重13~16g,无菌条件下,于右侧肩后接种MGC-803肉瘤瘤块3mm×3mm±2mm,24h后随机分成5组:模型组,新生胶囊大、中、小剂量组,环磷酰胺阳性对照组,每组10只(分组和给药剂量见表2)。每天各组小鼠灌胃相应药物0.1ml/20g,连续给药25天。阳性对照组小鼠每隔6天腹腔注射环磷酰胺20mg/kg,共连续4次,模型组小鼠灌胃同体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液。于末次给药24h后处死小鼠,称体重并剥离皮下瘤块,称瘤重,计算各组瘤体重量,并按下列公式计算抑瘤率,以抑瘤率>30%为有效。

抑瘤率=(1-T/C)×100%

(T为给药组瘤重,C为对照组瘤重)

以上实验重复2次。表2新生胶囊对MGC-803肉瘤瘤体生长的影响注:与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01

2.1.3对S180腹水肿瘤小鼠生命存活时间的影响[1]取上述健康ICR小鼠75只,按体重随机分为5组,无菌条件下,以生理盐水稀释S180腹水肿瘤细胞(1.2×107个/ml),每只小鼠腹腔注射S180肿瘤腹水液0.2ml,24h后按体重随机分为5组(分组、给药剂量及方法同2.1.1),连续给药14天,观察记录各组小鼠存活的天数,并计算生存率。以上实验重复3次。见表3。表3新生胶囊对S180腹水肿瘤小鼠存活时间的影响注:与模型组比较,**P<0.01

2.2扶正作用的研究(对小鼠免疫功能的影响)

2.2.1对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响取上述健康ICR雌性小鼠60只,体重20~22g,无菌条件下,于右侧腋下接种S180肿瘤细胞(1.6×107个/ml)0.2ml,24h后随机分成5组:模型组,新生胶囊大、中、小剂量组,环磷酰胺阳性对照组,每组12只(分组、给药剂量见表4)。另设一组空白对照组,每天各组小鼠灌胃相应药物0.5ml/20g,连续给药8天。阳性对照组小鼠隔日腹腔注射环磷酰胺20mg/kg。共4次,模型组和空白对照组灌胃同体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液。于末次给药24h后处死小鼠,解剖,称取胸腺、脾脏重量,按下列公式计算器官系数。

胸腺指数=胸腺(mg)/体重(g)

脾指数=脾脏(mg)/体重(g)表4新生胶囊对荷瘤小鼠免疫器官的影响注:与模型组比较,**P<0.01;与空白组比较,△△P<0.01

2.2.2对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响[3](小鼠碳粒廓清法)取健康ICR品系小鼠78只,雌雄各半。按体重随机分为6组(分组及给药剂量见表5),各组小鼠每天分别灌胃相应药物0.5ml/20g体重,连续14天。除空白对照组外,其余各组小鼠分别于给药后第8天、10天小鼠腹腔注射环磷酰胺100mg/kg,造成小鼠免疫功能低下模型,于末次给药后1h,每只小鼠尾静脉注射印度墨汁0.1ml/10g体重,分别于注射后1min、5min从小鼠眼静脉丛取血20μl,溶于2.5ml0.1%Na2CO3溶液中摇匀,照分光光度法,在680nm处测定吸收度(OD)值,最后将小鼠颈椎脱臼处死,分别称取肝脾重量。按下列公式计算廓清指数(K)和校正廓清指数(a)进行统计学计算。

K=logOD1-logOD2T2-T1

ɑ=3K×体重/(肝重+脾重)表5新生胶囊对小鼠RES吞噬功能的影响注:与空白对照组比较,△△P<0.01;与模型组比较,*P<0.05

2.2.3小鼠体液免疫功能的影响(溶血素法)取健康ICR品系小鼠78只,雌雄各半。按体重随机分成6组(分组、给药剂量见表6),每组13只。各组小鼠每天分别灌胃相应药物0.5ml/20g体重,模型组、空白对照组灌胃同体积0.5%CMC-Na溶液,连续给药14天。于给药后第7天,各组按0.2ml/只腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水混悬液进行免疫。第8天、10天除空白对照组小鼠外其他各组小鼠每只腹腔注射环磷酰胺100mg/kg,造成小鼠免疫功能低下模型。并于免疫后第7天,各组动物取血,将血清稀释100倍。取稀释血清,与5%鸡红细胞、10%豚鼠血清(补体)作用后,离心,取上清液于540nm处测定光密度(OD值),各组进行比较,进行统计学计算。表6新生胶囊对小鼠血清溶血素含量的影响注:与空白组比较,△△P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01

2.3增效作用的研究(与环磷酰胺合用对S180腹水小鼠存活时间的影响)取上述健康ICR小鼠90只,按体重随机分为6组,无菌条件下,以生理盐水稀释S180腹水肿瘤细胞(1.2×107个/ml),每只小鼠腹腔注射S180肿瘤腹水液0.2ml,24h后按体重随机分为6组,模型组,新生胶囊大、中、小剂量组,环磷酰胺5mg/kg、20mg/kg剂量组,各组每天灌胃给药(药剂量及方法同2.1.1),同时新生胶囊各组隔日腹腔注射环磷酰胺5mg/kg体重,连续14天,观察记录各组小鼠存活的天数。以上实验重复2次。

2.4统计学方法以SPSS统计软件,进行统计学处理。实验结果用平均值±标准差(x±s)表示,组间差异用t检验。

3试验结果

3.1祛邪作用的研究(抗肿瘤作用研究)

3.1.1对小鼠S180肉瘤瘤体生长的影响试验结果表明:S180肿瘤模型小鼠口服新生胶囊大、中剂量组能显着抑制S180移植瘤的生长,与肿瘤模型组比较差异有显着性(P<0.01)。结果见表1。

3.1.2对BALB/C小鼠MGC-803肉瘤瘤体生长的影响试验结果表明:MGC-803肿瘤模型小鼠口服新生胶囊大、中剂量组能显着抑制BALB/C小鼠MGC-803移植瘤的生长,与肿瘤模型组比较差异有显着性(P<0.05)。结果见表2。

3.1.3对S180腹水肿瘤小鼠生命存活时间的影响试验结果表明:S180腹水肿瘤小鼠口服新生胶囊小鼠的存活时间与模型组比较差异无显着性(P>0.05)。注射环磷酰胺组小鼠与模型组比较差异有显着性(P<0.01),结果见表3。

3.2扶正作用的研究(对免疫功能的影响)

3.2.1对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响试验结果表明:与模型对照组比较,新生胶囊大、中、小剂量对荷瘤小鼠胸腺、脾脏重量,差异无显着性(P>0.05)。结果见表4。

3.2.2对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响(小鼠碳粒廓清法)试验结果表明:小鼠灌胃新生胶囊3.15g生药/kg、1.58g生药/kg14天后,对环磷酰胺引起的免疫功能低下,有提高K值(廓清指数)的作用,与模型组比较差异有显着性(P<0.05),结果见表5。

3.2.3对小鼠体液免疫功能的影响(溶血素法)试验结果表明:小鼠口服新生胶囊3.15g生药/kg、1.58g生药/kg、0.79g生药/kg,可提高血清溶血素含量,与模型组小鼠比较差异有显着性(P<0.05),结果见表6。

3.3增效作用的研究(与环磷酰胺合用对S180腹水小鼠存活时间的影响)结果表明:新生胶囊大剂量组小鼠合用环磷酰胺5mg/kg,生命延长率为33.2%,38.86%提示新生胶囊与环磷酰胺合用对S180腹水小鼠存活时间有协同增效作用的趋势。结果见表7。表7新生胶囊与环磷酰胺合用对S180腹水肿瘤小鼠存活时间的影响注:与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01

4小结

新生胶囊是由黄芪、乳香、没药、重楼、人工麝香等中药组成的复方制剂,具有清热解毒、活血消症、散结止痛的功效,临床上将用于食管癌、胃癌及恶疮肿毒等症的辅助用药。动物试验表明:(1)新生胶囊具有一定的祛邪作用。大、中剂量组能显着抑制S180荷瘤小鼠和BALB/C小鼠MGC-803移植瘤的生长,与肿瘤模型组比较差异有显着性(P<0.05)。(2)小鼠灌胃新生胶囊,对S180腹水肿瘤小鼠生命存活时间与模型组比较差异无显着性(P>0.05)。但小鼠灌胃新生胶囊3.15g/kg同时注射环磷酰胺5mg/kg可以延长S180腹水小鼠存活时间,生命延长率为33.2%~38.86%,提示新生胶囊与环磷酰胺合用对S180腹水小鼠存活时间有一定协同增效作用趋势。(3)新生胶囊具有一定的扶正作用。小鼠灌胃新生胶囊,对注射环磷酰胺引起的免疫功能降低有一定的改善作用,对血流中碳粒的吞噬廓清能力有一定的增强作用。提高吞噬指数(K)、增加血清溶血素含量,与模型组比较差异有显着性(P<0.05)。

5讨论

肿瘤,尤其是恶性肿瘤是危害人民健康的重大疾病之一,临床上对肿瘤的治疗,无论是放疗或是化疗,都有一定的副作用,给患者带来痛苦和肌体免疫力的下降,新生胶囊是中药复方制剂,具有清热解毒、活血消症、散结止痛的功效,动物试验也表明具有一定的扶正祛邪、增强机体免疫功能的作用。这对于临床上治疗肿瘤,减少放化疗带来的痛苦又增加了新的治疗途径。

【参考文献】

1陈奇.中药药理研究方法学,第2版.北京:人民卫生出版社,2006,1019-1021.

2徐淑云,卞如濂,陈修.药理实验方法学,第3版.北京:人民卫生出版社,2002,1757-1773.

3李仪奎.中药药理实验方法学.上海:上海科学技术出版社,1991,155-160.