巴洛沙星有关物质管理论文

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【摘要】目的采用RP-HPLC法测定巴洛沙星的有关物质。方法使用SMTC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.4%十二烷基硫酸钠溶液(47：53)［用枸橼酸（1.5mol/L）调pH值至3.0］，检测波长为295nm，流速为1.0ml/min。结果巴洛沙星与各有关物质在上述色谱条件下能有效地分离。结论该方法结果准确、操作简单、灵敏度高、专属性强，适用于巴洛沙星的有关物质测定。

【关键词】巴洛沙星；反相高效液相色谱法

StudyondeterminationofrelatedsubstancesinbalofloxacinbyRP-HPLC

【Abstract】ObjectiveThereversedphasehighperformanceliquidchromatographymethodwasestablishedtodeterminetherelatedsubstancesinbalofloxacin.MethodsThecolumnisSMTC18(250mm×4.6mm×5μm).Themobilephaseiscompoundsolutionofacetonitrileand0.4%laurylsodiumsulfate(47：53)［adjustedpHto3.0bycitricacid(1.5mol/L)］，thedetectionwavelengthis295nm，theflowrateis1.0ml/min.Balofloxacianandalloftherelatedsubstancescanbeseparatedefficientlywiththisdetermineationoftherelatedsubstancesinbalofloxacin.ThecolumnisSMTC18(250mm×4.6mm，5μm).Themobilephaseiscompoundsolutionofacetonitrileand0.4%laurylsodiumsulfate(47：53)［adjustedpHto3.0bycitricacid(1.5mol/L)］，thedetectionwavelengthis295nm，theflowrateis1.0ml/min.ResultsBalofloxacianandalloftherelatedsubstancescanbeseparatedefficientlywiththiscondition.Themethodisaccurate，simple，rapidandexclusive.ConclusionItcouldbeusedfordeterminationofrelatedsubstancesinbalofloxacin.

【Keywords】balofloxacin；reversedphasehighperformanceliquidchromatography

巴洛沙星(balofloxacin)系由日本中外制药株式会社与韩国Choongwae公司共同开发的氟喹诺酮类抗菌药，于2002年首次在韩国上市［1～2］。对革兰阳性菌、革兰阴性菌及厌氧菌具有广谱抗菌活性，对细菌具有选择性抑制作用，体外抗菌活性是环丙沙星、氧氟沙星和洛美沙星的4～16倍［3］；与托氟沙星和司帕沙星类似［4］。由于巴洛沙星在其母核的8位引入了一甲氧基，使其不仅增加了对革兰阳性菌的抗菌活性，而且避免或减少光过敏或光毒性及细胞毒性［5］。巴洛沙星是以羧酸乙酯为起始原料，先和三乙酸硼反应生成螯合物Ⅰ，再和3-甲胺基哌啶二盐酸盐缩合反应得螯合物Ⅱ，然后水解制得。该路线是目前制备巴洛沙星的最优路线［6］。测定巴洛沙星的有关物质常用液相色谱法，俞红等［7］报道，用流动相为0.05mol/L柠檬酸-乙腈（60：40）［三乙胺调pH=4］的反相液相色谱法测定主要中间体羧酸乙酯在巴洛沙星中的含量。本实验通过摸索新的色谱条件，采用乙腈-0.4%十二烷基硫酸钠溶液为流动相的高效液相色谱法，能同时测定了巴洛沙星的合成中间体羧酸乙酯、螯合物Ⅰ及螯合物Ⅱ。该方法简单准确、分离效果好，对巴洛沙星的质量控制具有明显的实用价值。巴洛沙星及各中间体的结构式如图1所示。

1实验部分

1.1仪器与试剂高效液相色谱仪—Waters515泵；2487紫外检测器。巴洛沙星样品自制，样品批号：20041015、20041020、20041024；对照品自制，含量：99.7%；羧酸乙酯（江阴市永达化工有限公司），螯合物Ⅰ、螯合物Ⅱ均自制；乙腈为色谱纯试剂，其他试剂均为分析纯试剂。

1.2实验溶液的制备供试品溶液：取巴洛沙星（批号：20041024）约10.2mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；中间体溶液：取羧酸乙酯14.0mg、螯合物Ⅰ11.3mg、螯合物Ⅱ10.3mg，分别置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；混合溶液：取供试品溶液及各中间体溶液各1份，混合，即得。

1-巴洛沙星；2-羧酸乙酯；3-螯合物Ⅰ；4-螯合物Ⅱ1.3色谱条件色谱柱：SMTC18柱（5μm，4.6mm×250mm）；流动相：乙腈-0.4%十二烷基硫酸钠溶液(47：53)［用枸橼酸（1.5mol/L）调pH值至3.0］；检测波长：295nm；流速：1.0ml/min；柱温：室温；进样量：20μl。

2结果与讨论

2.1测定波长的选择分别称取巴洛沙星及各中间体适量，分别加乙腈溶解制成每1ml中约含6μg的溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录ⅣA)，在200～400nm的波长处扫描，结果显示巴洛沙星在295nm处吸收最强，且其他中间体在295nm附近有较大的吸收，故选择295nm为本品有关物质测定的检测波长。

2.2色谱柱及流动相的选择色谱柱：(1)DiamonsilTMC18柱（5μm，4.6mm×200mm）；(2)KromasilC18柱（5μm，4.6mm×200mm）；(3)SMTC18柱（5μm，4.6mm×250mm）。流动相：(1)参照中国药典2000年版二部沙星类药物有关物质测定，采用流动相：乙腈-0.05mol/L枸橼酸溶液(20：80)［用三乙胺调pH值至3.5］；(2)乙腈—0.4%十二烷基硫酸钠溶液（47：53）［用枸橼酸（1.5mol/L）调pH值至3.0］。

采用上述不同的色谱柱和流动相进行实验，结果表明：采用色谱柱(1)或(2)及流动相(1)，虽然主峰出峰时间适中且峰形较好，但各中间体在此流动相中50min都未见出峰；采用色谱柱(1)或(2)及流动相(2)，样品及各中间体出峰时间适中，但峰拖尾严重；采用色谱柱(3)及流动相(2)，样品及各中间体出峰时间适中，且峰形较好。所以选择采用色谱柱(3)及流动相(2)来检测本品的有关物质。

2.3系统适用性试验取1.2项溶液各20μl分别注入液相色谱仪进行测定，并记录色谱图，测定结果见表1及图2。试验结果表明：巴洛沙星与各中间体在上述色谱条件下能有效地分离。

2.4专属性试验取供试品溶液9ml，加1.0mol/L盐酸溶液1ml，置水浴(60℃)中放置12h，加1.0mol/L氢氧化钠溶液调节溶液的pH至中性，再加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为酸破坏溶液；取供试品溶液9ml，加1.0mol/L氢氧化钠溶液1ml，置水浴(60℃)中放置12h，加1.0mol/L盐酸溶液调节溶液的pH值至中性，再加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为碱破坏溶液；取供试品溶液9ml，加30%过氧化氢1ml，置水浴(60℃)中放置12h，再加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为氧化破坏溶液。经强酸、强碱、强氧化破坏试验，结果表明：在此色谱条件下，各降解产物峰与主峰均能达到基线分离。

2.5最低检出量取巴洛沙星对照品及各中间体适量，分别用流动相逐级稀释后进样，当信噪比为3：1时，测得巴洛沙星、羧酸乙酯、螯合物Ⅰ、螯合物Ⅱ的最低检出量分别为1.12×10-2ng、0.272ng、2.016ng、0.208ng。

2.6溶液的稳定性试验取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12h测定，测得溶液在12h内的平均峰面积为99497023.7，RSD为0.35%，说明本品溶液基本稳定。结果见表2。

2.7有关物质的测定各取3批巴洛沙星供试品适量，分别加流动相溶解并稀释制成每1ml中含巴洛沙星约为0.1mg的溶液，按1.3色谱条件检查有关物质，结果见表3及图3。实验结果表明：3批供试品有关物质结果均小于1.0%。

【参考文献】

1AlksneL.BalofloxacinChoongwae.CurrOpinInvestigDrugs，2003，4：224-229.

2廖斌，丛欣，廖清江.2002年世界上市的新药.药学进展，2003，27（3）：190-193.

3ItoT，OtsukiM，NishinoT.InvitroantibacterialactivityofQ-35，anewfluoroquinolone.AntimicrobAgentsChemother，1992，36：1708-1714.

4NakaneT，NakajimaC，MitsuhashiS.Invitroantibacterialactivityofbalofloxacin.NipponKagakuRyohoGakkaiZasshi，1995，43（S-5）：1-9.

5MarutaniK，MatsumotoM，OtableY，etal.Reducedphototoxicityofafluoroquinoloneantibacterialagentwithamethoxygroupatthe8positioninmiceirradiatedwithlong-wavelengthUVlight.AntimicrobAgentsChemother，1993，37（10）：2217-2223.

6刘明亮，刘秉全，孙兰英，等.巴洛沙星的合成.中国医药工业杂志，2004，35(7)：385-388.

7俞红，戴真南，缪玉山，等.用RP-HPLC法测定巴洛沙星中间体含量的方法学研究.现代医学，2004，32（2）：85-87