周氏回生丸的质量标准分析论文

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1仪器与试药

Dionex高效液相色谱仪，UVD170U，Chromeleon色谱工作站；电子天平（METTLERTOLEDO）；超声仪（AutoscienceAS3120，功率120W，频率40kHz）。硅胶G板、GF254板(青岛海洋化工厂)；甲醇为色谱纯；甲醇、三氯甲烷、乙醚、醋酸乙酯等试剂均为分析纯。

麝香酮对照品(批号110719-200409)、甘草苷对照品(批号111610-200604)、没食子酸对照品(批号110831-200302)均由中国药品生物制品检定所提供；周氏回生丸，购自天津安舜大药房（批号为070201，070202，070203）；丁香、木香、檀香、麝香、甘草、山慈姑等药材购自天津安舜大药房，经天津药物研究院张铁军研究员鉴定为正品。

2方法与结果

2.1薄层鉴别研究

2.1.1丁香的薄层鉴别取本品细粉5g，加乙醚30ml，水浴回流提取1h，过滤，滤液蒸干，加1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液；取丁香对照药材0.1g，按供试品溶液的制备方法制得对照药材溶液；取缺丁香的其它药材制成的阴性样品5g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液液、阴性对照溶液各5μl，点于同一块硅胶GF254板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(9∶4∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，于紫外254nm下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图1。

2.1.2木香的鉴别取本品细粉3g，加乙醚30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，加乙醚1ml使溶解，作为供试品溶液；取木香药材细粉0.5g，按供试品溶液的制备方法进行制备，作为对照药材溶液；取缺木香的其它药材制成的阴性样品3g，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述供试品溶液、阴性样品溶液、木香对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-环己烷(5∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液显色，吹干，吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图1。

2.1.3檀香的鉴别取本品细粉40g，加200ml蒸馏水，置挥发油提取器中，回流提取3h，收集挥发油，挥发油加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取檀香细粉1g，按供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液；取缺檀香的其它药材制成的阴性样品10g，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述供试品溶液、阴性样品溶液、对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚-二氯甲烷-醋酸乙酯(6∶1∶0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲醛溶液，热风吹至斑点清晰。在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图1。

图1周氏回生丸中丁香、木香、檀香的TLC图谱（略）

2.1.4麝香的鉴别取本品细粉10g，加乙醚50ml，水浴回流提取1h，过滤，滤液蒸干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取麝香酮对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；取麝香药材细粉0.1g，按供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液；取麝香阴性样品20g，按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-环己烷(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，热风吹至斑点清晰。在供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。见图2。

2.1.5甘草的鉴别取本品细粉5g，加甲醇50ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，加乙醚萃取3次，20ml/次，弃去乙醚层，水层用水饱和正丁醇萃取3次，20ml/次，合并正丁醇层，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取甘草苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.6mg的溶液，作为甘草苷对照品溶液；取甘草对照药材0.5g，按供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液；取缺甘草的其它药材制成的阴性样品5g，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述供试品溶液、阴性样品溶液、对照品溶液、对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至显色清晰。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图2。

2.1.6山慈姑的鉴别取本品细粉（过50目筛）20g，加pH=2的盐酸30ml，超声30min，过滤，滤液用10%的氢氧化钠调节到pH=10，再用醋酸乙酯进行萃取3次，30ml/次，将醋酸乙酯层蒸干，加1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液；取山慈姑对照药材0.5g，按照供试品溶液的制备方法制得对照药材溶液；取缺山慈姑的其它药材制成的阴性样品10g，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸（20∶5∶8∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液显色，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与山慈姑对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。

图2周氏回生丸中麝香、甘草、山慈姑的TLC图谱（略）

2.2含量测定研究

2.2.1色谱条件色谱柱为DiomandTMC18(200mm×4.6mm，10μm)，流动相为甲醇-0.1％磷酸(5∶95)，流速1.0ml/min，检测波长273nm，柱温30℃，理论塔板数按没食子酸峰不低于3000。色谱图见图3。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品适量，用甲醇溶解制成91.6μg/ml的对照品溶液，0.45μm滤过，即得。

2.2.3供试品溶液的制备取本品粉末0.15g，精密称定，加入4mol/L的盐酸50ml，加热回流提取3.5h，冷却，过滤，精密移取1ml置5ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4线性关系考察实验将上述对照品溶液稀释成不同的浓度，依次进样10μl，以色谱峰面积对没食子酸溶液的浓度作图，并进行回归统计，得到没食子酸的回归方程为Y=25.853X-4.5553,r=0.9999，线性范围为9.16～91.6μg/ml。

2.2.5精密度实验精密量取上述对照品溶液10μl，连续进样6次，测得没食子酸的峰面积RSD为0.16％，表明进样精密度良好。

2.2.6重复性实验取070201批样品，按供试品溶液的制备方法制得6份供试品溶液，精密量取10μl，进样，测得没食子酸的峰面积RSD为0.81%，表明该方法的重复性良好。

2.2.7稳定性实验取070201批样品，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，室温放置，在0，2，4，8，12，24h进样测定，测得没食子酸的峰面积RSD为0.84%，表明样品溶液在24h内稳定。

图3没食子酸HPLC色谱图（略）

2.2.8回收率实验取已知含量的周氏回生丸（每克含76.02mg的没食子酸）6份，每份0.075g，分别置于具塞锥形瓶中，准确加入2.81mg·ml-1的没食子酸对照品溶液各1ml，按“2.2.3”项下方法制得各供试品溶液。在上述色谱条件下测定，测得没食子酸的平均回收率(n=6)为99.3%，RSD值为1.81%。

2.2.9样品含量测定取周氏回生丸样品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，按外标法计算含量，测得3批（批号070201，070202，070203）中没食子酸的含量分别为7.57％，7.52％和7.51％（n＝3）。

3讨论

本制剂由14味中药组成，成分比较复杂。为了更好地控制成品的质量，我们采用薄层色谱鉴别法对其中的6味主要药材进行了鉴别。通过对色谱条件进行优化，并经3批样品实验证明，该方法简便易行，斑点分离清晰，重现性好，阴性对照无干扰可作为该制剂的质量控制的方法。

本品为中药复方制剂，五倍子为本品的君药，没食子酸为其主要活性成分，故选择没食子酸作为评价本品质量的指标成分。《中国药典》2005版给出了五倍子中的没食子酸含量测定方法，用于本制剂中，色谱分离度不好，且取样量太大，不利于样品回收率的测定。本研究优化了流动相比例、柱温等色谱条件，并确定了合适的供试品溶液制备方法。该色谱条件下，色谱峰分离度良好，阴性无干扰，且方法简单易行，结果可靠，重复性好。

【参考文献】

［1］李泽友，潘扬，丁岗.木香药材中木香羟内酯和去氢木香内酯的定性和定量研究［J］.时珍国医医药，2004，15(11)：745.

［2］闻绍春，徐华，高钢.冠心七味滴丸中檀香与降香的薄层色谱鉴别研究［J］.内蒙古医学杂志，2005，37(12):1152.

［3］冯国庆，党晓菊，邹恩济，等.薄层扫描法测定蒙药扎冲注射液中麝香酮含量［J］.中国民族医药杂志，1999，5(4):39.

［4］蒋艳玲，袁卫梅，李宇翠.薄层扫描法测定麝香保心丸中麝香酮的含量［J］.河南中医药学刊，2002，17(4)：21.

【摘要】目的建立周氏回生丸的质量标准，包括定性鉴别和定量含测两部分。方法采用TLC法对丁香、木香、檀香、麝香、甘草、山慈姑进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对制剂中没食子酸的含量进行定量测定。结果在TLC色谱中能检测出丁香、木香、檀香、麝香、甘草、山慈姑6味药材；建立的含量测定方法中，没食子酸的线性范围为9.16～91.6μg/ml，平均回收率分别为99.3％。结论所建立的定性、定量方法准确可行，重复性好，可作为周氏回生丸的质量标准。

【关键词】周氏回生丸质量标准薄层色谱高效液相色谱没食子酸