柴胡有效成分提取分析论文

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1仪器与试药

1.1仪器

岛津LC-20A高效液相分析仪（SPD-20A紫外检测器）；752紫外分光光度计（上海精密仪器科技有限公司）；RE52-86A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；METTLERAE240电子分析天平（瑞士）。

1.2试药柴胡药材购于河南省药材公司，经本院陈随清教授鉴定为伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.的干燥根；柴胡皂苷a对照品自制，经峰面积归一化法测定含量为：99.91%；乙腈为色谱纯；水为双重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

2方法

2.1单因素实验

分别以药材浸渍温度、浸渍时间、料液体积比、蒸馏液收集量等为因素，在不同水平下进行单因素实验，筛选出影响柴胡挥发油提取的主要因素和水平，同样分别以乙醇浓度、pH值、柴胡皂苷提取时间、料液体积比等为因素，在不同水平下进行单因素实验，筛选出影响柴胡皂苷提取的主要因素和水平。从而为正交实验设计提供依据。

2.2挥发油的提取和测定方法随机称取50g柴胡干燥粗粉，置于500ml圆底烧瓶中，采用水蒸气蒸馏法在不同条件下提取柴胡挥发油，收集蒸馏液，加3%丙二醇摇匀，精密量取上述蒸馏液2ml两份，一份置5ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，作为样品液，另一份置蒸发皿中，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，转移至5ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，作为空白。用752紫外分光光度计在277nm波长处测定蒸馏液中挥发油的吸收度。

2.3柴胡皂苷的提取取提取挥发油后的药渣，滤干，置于500ml圆底烧瓶中，在不同条件下回流提取柴胡皂苷，过滤得滤液，减压低温浓缩成每毫升含0.5g柴胡的浓缩液，备用。

2.4柴胡皂苷a含量测定

2.4.1色谱条件大连伊利特C18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为乙腈-水37∶63；流速1ml/min；检测波长208nm；柱温35℃；进样量20μl。

2.4.2对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a对照品5.09mg，加甲醇溶解并定容至10ml，摇匀，配成0.509mg/ml对照品溶液，冷藏备用。

2.4.3供试品溶液的制备取上述浓缩液10ml减压蒸干，加20ml甲醇溶解残渣，过滤得滤液。再取2ml滤液至10ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，冷藏备用。

2.4.4线性范围考察精密吸取对照品储备液2.0，6.0，10.0，14.0，18.0μl，在“2.4.1”项下色谱条件下进样测定，记录峰面积，以峰面积积分值Y为纵坐标，对照品溶液进样量X（μl）为横坐标，进行线性回归（n=5），得线性回归方程为Y=209413.7X－162379.4，线性范围为0.9720～9.635μg，相关系数为r=0.9997，线性关系良好。

2.4.5精密度实验

精密吸取对照品20μl，在“2.4.1”项下色谱条件下重复进样5次测定，记录峰面积，RSD为1.5%（n=5），表明精密度良好。

2.4.6稳定性实验

将供试品溶液在室温下贮存，在“2.4.1”项下色谱条件下，分别于0，2，4，6，8h进样测定，记录峰面积，RSD为2.0%，表明样品在8h内稳定。

2.4.7重复性实验

精密称取同一批样品5份，按供试品溶液处理方法制备样品溶液，在“2.4.1”项下色谱条件下重复进样测定5次，记录峰面积，RSD为2.1%（n=5）。

2.4.8样品测定精密吸取20μl样品溶液，在“2.4.1”项下色谱条件下进样测定，记录峰面积，计算各样品中柴胡皂苷a的含量。

2.5正交实验以柴胡蒸馏液中挥发油的吸收度和柴胡皂苷a的含量为检测指标，参照单因素实验结果，分别以药材浸渍温度、挥发油收集量、柴胡皂苷提取时间、柴胡皂苷提取溶剂料液比等主要因素及不同水平进行L9(34)正交设计，筛选最佳工艺。正交实验因素和水平见表1。表1正交实验因素及水平（略）

3结果

3.1浸渍温度对挥发油提取效果的影响分别在30，40，60，80℃温度下浸渍6h，料液比1∶6，提取1次，考察浸渍温度对挥发油提取效果的影响。测得吸收度依次为：0.303，0.984，0.758，0.587。由测定结果可知，在40℃下浸渍吸收度达到最大。且变化显著，所以浸渍温度应选在40℃左右。

3.2浸渍时间对挥发油提取效果的影响在40℃下，分别浸渍0，2，4，6，8h，料液比1∶6，提取1次，考察浸渍时间对挥发油提取效果的影响。测得吸收度依次为：0.470，0.559，0.650，0.940，0.722。由测定结果可知，浸渍6h吸收度最大，浸渍4h和8h吸收度相当。

3.3料液比对挥发油提取效果的影响料液比分别为1∶5，1∶6，1∶8，1∶10，提取1次，考察料液比对挥发油提取效果的影响，测得吸收度依次为：0.316，0.443，0.337，0.258。由测定结果可见，料液比1∶6吸收度最大。且变化显著。

3.4挥发油收集量对挥发油提取效果的影响分别收集100，200，300ml蒸馏液，考察挥发油收集量对挥发油提取效果的影响，测得吸收度依次为：0.454，0.507，0.596。由测定结果可知。随着收集量的增多，吸收度逐渐增大，但增加趋势不显著。

3.5乙醇浓度对柴胡皂苷提取效果的影响分别以95%，75%，60%，45%乙醇，料液比为：1∶6，提取柴胡皂苷。考察不同乙醇浓度对柴胡皂苷提取效果的影响，柴胡皂苷a含量依次为：0.20%，0.15%，0.12%，0.12%。由测定结果可知，柴胡皂苷提取率随乙醇浓度的降低而降低。在95%乙醇浓度时最大。且变化较显著。因此选用95%乙醇提取。

3.6pH值对柴胡皂苷提取效果的影响分别用0，5%，10%，15%的氨水95%乙醇液提取皂苷。考察pH值对柴胡皂苷提取效果的影响，柴胡皂苷a含量依次为：0.20%，0.25%，0.24%，0.24%。由测定结果可知，碱性乙醇提取效果比较好，含5%～10%氨水95%乙醇条件下提取液中柴胡皂苷a变化不显著，因此选用含5%氨水。

3.7提取时间对柴胡皂苷提取效果的影响用95%乙醇分别在0.5，1，2，3h提取皂苷。考察提取时间对皂苷提取效果的影响。柴胡皂苷a含量依次为：0.20%，0.25%，0.20%，0.20%。由测定结果可知，提取1h时提取率最大。提取时间再长提取率就逐渐下降。

3.8料液比对柴胡皂苷提取效果的影响在10，8，6，5，3倍不同料液比条件下回流提取柴胡皂苷。考察料液比对柴胡皂苷提取效果的影响。柴胡皂苷a含量依次为：0.15%，0.15%，0.20%，0.21%，0.14%。由测定结果可知，料液比为在5～6倍时提取率最大。

3.9正交实验结果与分析因柴胡中的挥发油和柴胡皂苷a均为有效成分，权重应相等。则规定吸收度中最大值0.945及柴胡皂苷a含量中最大值0.33%为100，其余值对应比较，两项加和后平均得综合评分值。结果见表2，方差分析见表3。表2正交实验结果与分析（略）表3误差分析（略）

由表2和表3可知，柴胡挥发油收集量的极差最大，其次是料液比和柴胡皂苷提取时间，故对于柴胡提取效果影响的大小顺序为B>D>C>A，由于A和C影响不显著，故综合考虑，选择最佳提取方案为A1B1C1D3，即40℃浸渍，收集100ml挥发油，8倍量含5%氨水的95%乙醇提取1h。

3.10最佳方案的验证实验取50g柴胡粗粉置500ml圆底烧瓶中，在最佳提取条件下提取。重复两次。结果见表4。表4验证实验结果（略）

由表4可见，采用优化最佳工艺提取有效成分柴胡挥发油和皂苷，其挥发油吸收度和柴胡皂苷a的含量都较高，且工艺条件稳定可靠，重复性好。

4讨论

柴胡挥发油和柴胡皂苷为柴胡的主要有效成分，两者的提取是较为矛盾的。据文献资料，柴胡皂苷在6h内稳定，而要完全提取挥发油则要较长时间。这将导致柴胡皂苷的分解、降解等一系列不稳定的反应，使柴胡皂苷的含量降低。因此要同时兼顾挥发油和柴胡皂苷的提取，可考虑采用水蒸气蒸馏法提取柴胡挥发油，采用碱性醇提工艺代替传统的水提工艺提取柴胡皂苷。且在提取过程中发现，柴胡皂苷a受热容易分解，随着加热时间增长，含量逐渐减少，因此在各加热环节，如提取，浓缩，干燥过程中应尽量采用低温，以减少柴胡皂苷a的损失。

中药成分复杂,应综合考虑各有效成分的性质及其在制备过程中的变化,以保证制剂的质量和疗效。据文献资料，柴胡中含柴胡皂苷a大约在0.2%～0.4%，从本实验最佳工艺提取液中测得柴胡中柴胡皂苷a的含量为0.32%，因此本工艺提取效果较好。至于挥发油的含量，各种文献所得结果不尽相同，甚至相差10倍以上，由于药材的原因，如药材部位、采收时间、产地等的影响难以衡量，因此本实验在不影响挥发油提取的前提下还兼顾了柴胡皂苷a的提取，从而为柴胡的提取提供可靠的依据和参照。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社，2005：562.

［2］杨云.天然药物化学成分提取分离手册（修订版）［M］.北京:中国中医药出版社,2002:612.

【摘要】目的确定柴胡有效成分提取的最佳工艺。方法以柴胡中挥发油吸收度和柴胡皂苷a的含量为指标，采用单因素实验筛选主要因素和水平，再以正交实验筛选柴胡有效成分提取最佳工艺。结果最佳工艺参数为40℃温浸，收集相当于药材2倍量蒸馏液，继用8倍量含5%氨水的95%乙醇回流1h提取柴胡皂苷，可使挥发油吸收度达0.941，柴胡皂苷a的含量达0.32%。结论该工艺为柴胡有效成分的提取提供了可靠依据，且工艺条件稳定可靠，重复性好。

【关键词】提取工艺柴胡皂苷a挥发油正交实验