蜚蠊药材质量控制论文

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1仪器与试剂

岛津UV2550紫外-可见分光光度计，梅特勒电子天平AE240（瑞士），索氏提取器，DZKW-4水浴锅（上海科析实验仪器厂），超声波清洗器（上海科导超声仪器公司），ZY紫外分析仪（上海安亭），硅胶G254(青岛海洋化工厂)。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸、a-氨基丙酸、甘氨酸对照品（中国药品生物制品检定所生产，批号:0856-200507，0833-200534，0832-200511，0853-200508，0815-200523），其它试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备

精密称取80℃减压干燥至恒重的酪氨酸对照品10.0mg，置100ml容量瓶中，加0.02mol/L的NaOH溶液10ml，水浴加热至完全溶解，加水至刻度，摇匀，即得浓度为100.0μg/ml的酪氨酸对照品溶液（含量测定用）。

精密称取80℃干燥至恒重的亮氨酸、丙氨酸、氨基丙酸、甘氨酸各2.0mg，用50%甲醇稀释10ml，得浓度为200.0μg/ml的对照品溶液（薄层鉴别用）。

2.2供试品溶液的制备

取粉碎后的供试品10g，精密称定，置烧瓶中加95%的乙醇100ml水浴回流提取3次，1h/次，过滤，合并滤液，残渣加约30～40ml水，水浴加热，充分溶解，放冷后过滤，除去脂肪，用少量水洗涤烧瓶及漏斗两次，滤液于比色管中定容至50ml，加活性炭0.5g，振摇，过滤，滤液即为供试品溶液。

2.3药材的薄层色谱鉴别

取“2.2”项制备的供试品溶液,另取“2.1”项制备的亮氨酸、丙氨酸、氨基丙酸、甘氨酸对照品溶液，吸取上述溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇∶醋酸∶水(5∶1∶1)的溶液为展开剂,展开约10～15cm,取出,晾干,用0.5%的茚三酮溶液喷雾显色，检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。样品与对照品的薄层色谱图见图1。

2.4药材中脂肪含量的控制测定

蜚蠊药材中脂肪的含量参考国家标准标GB9695.1-1988《肉与肉制品-游离脂肪含量的测定》，使用索氏抽提法，用石油醚抽提样品中的脂肪。然后于水浴上回收溶剂，蒸干后95～105℃干燥2h称量,计算样品中脂肪含量，结果见表1。表1蜚蠊药材脂肪含量测定结果（略）

从表1可得，人工饲养的蜚蠊药材中脂肪的含量明显高于自然生长的药材，这给药厂的生产增加了处理成本，因此，有必要控制药材中脂肪的含量。根据大量的实验及药厂生产的经验，本文将蜚蠊药材中脂肪的含量控制在7.0%以内。

2.5药材中水分含量的控制取人工饲养的蜚蠊药材适量，60℃真空减压干燥至恒重，按表2取干燥后的药材，并按比例加入一定量的水，混合均匀后于250ml广口试剂瓶中密封保存，25℃恒温放置，每隔15d取样观测，以考察水分含量与药材稳定性之间的关系，实验结果见表2。表2蜚蠊药材中水分与存放时间的关系（略）

从表2可知，蜚蠊药材中水分的含量不得超过12.0%，否则药材很容易发生腐败变质，故药材中水分应控制在12%以内。

2.6药材中总氨基酸的含量测定

2.6.1测定波长的选择

取“2.1”项下配制的酪氨酸对照品溶液，加入1mlpH=5.0的柠檬酸缓冲液和1ml茚三酮显色剂，摇匀，水浴加热15min，取出，冷却至室温，加入60%乙醇3ml，摇匀，在紫外-可见分光光度计上于400～700nm范围内进行全波长扫描，酪氨酸在570nm处有最大吸收。故选择570nm为蜚蠊药材中总氨基酸含量测定波长。

2.6.2线性关系考察

精密吸取“2.1”项中制备好的酪氨酸溶液0，0.1，0.3，0.5，0.7，0.9，1.0ml于10ml容量瓶中，分别加入1mlpH=5.0的柠檬酸缓冲液和1ml0.5%的茚三酮溶液，摇匀，水浴加热15min，取出，冷却至室温，分别加入60%乙醇3ml，定容，摇匀，照分光光度法于570nm处测定吸光度A［6］。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：A=0.067943C+0.009143，r=0.9999，结果表明酪氨酸含量在1.0～10.0μg范围之间呈良好的线性关系。

2.6.3样品中总氨基酸的测定

精密吸取供试品溶液1.0ml于10ml容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法自“分别加入1ml柠檬酸缓冲液”起，依法测定吸收度，用标准曲线法计算出供试品溶液中氨基酸的含量（μg），并照下列公式换算为蜚蠊中总氨基酸的含量：

总氨基酸（mg/g）=（C×2.5×0.662）÷（W-W×水分含量%）

W为供试品含量（g）；C为氨基酸含量（μg）；2.5为样品在配制过程中的稀释倍数；转换系数0.662是氨基酸的平均分子量120除以酪氨酸的的分子量181.2所得。

2.6.4精密度实验

精密吸取同一供试品溶液,重复测定5次,总氨基酸含量的RSD为2.36%。

2.6.5稳定性实验

精密吸取同一供试品溶液,分别在放置0,1,2,3,4,5,6h后测定,总氨基酸含量的RSD为1.97%,表明供试品溶液在6h内稳定。

2.6.6重复性实验

取同一批样品,按“2.2”项下的方法制备5份供试品溶液,依法测定，蜚蠊药材中总氨基酸含量的RSD为1.64%,表明方法重复性较好。

2.6.7加样回收率实验

取已知含量的蜚蠊药材样品5份,1.0g/份，分别加入对照品酪氨酸8.0mg,依法进行样品处理和测定,计算加样回收率,结果总氨基酸的加样回收率为100.36%，RSD为1.85%,方法的回收率较好。结果见表3。表3回收率实验（略）

2.6.8样品测定

按上述供试品溶液的制备方法和测定条件,测定了5批不同产地人工饲养的蜚蠊药材中总氨基酸含量，结果见4。表4蜚蠊药材中总氨基酸的含量测定（略）

3讨论

从本研究建立的薄层色谱测定方法来看，薄层色谱展开系统分离效果好，斑点清晰，不拖尾，药材供试品与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点。

由于蜚蠊药材中主要有效成分为氨基酸、蛋白质和多肽等富营养物质，水分含量过高易引起腐败变质，故药材中水分含量控制在12%以下有利于药材的保存。

含量测定方法操作简单,重复性好,可用于药品生产企业及生产基地对蜚蠊药材的质量控制。

从对不同产地、不同采集时间的药材中总氨基酸含量的测定结果来看,药材中有效成分总氨基酸的含量有一定的地域性差异,同一地区的药材不同批次间也有差异,这可能与生长环境、喂养饲料及采集时间不同有关系。

【参考文献】

［1］孙星衍.神农本草经［M］.上海：商务印书馆，1955：90.

［2］蒋述均，陈利铭，安一明.顺铂肝动脉灌注联合扶正抗癌治疗中、晚期原发性肝癌的临床治疗［J］.福建医药杂志，1992，14（3）：26.

［3］张军.虫类药的抗肿瘤实验及应用［J］.中医信息，1992，9（3）：39.

［4］廖剑英.康复新治疗恶性纤维组织细胞瘤1例［J］.大理学院学报，2003，2（3）：92.

［5］戴云，曾茗，项朋志.蜚蠊的药用价值［J］.中药材，2005，28（9）：848.

［6］国家药典委员会.中国药典，Ⅱ部［S］.北京：化学工业出版社,2005：22.

【摘要】目的建立蜚蠊药材的质量控制方法。方法采用薄层色谱法定性鉴别，色谱条件为正丁醇-醋酸-水（5∶1∶1），0.5%茚三酮显色剂；采用索氏提取法测定脂肪含量；水分测定法检查水分的最低控制限；分光光度法测定总氨基酸的含量，茚三酮显色后检测波长为570nm。结果蜚蠊药材与对照品薄层色谱斑点清晰,易于识别，药材中脂肪的含量不得超过7.0%，水分含量不得超过12.0%，分光光度法测定总氨基酸含量，回归方程：A=0.067943C+0.009143，r=0.9999,酪氨酸含量在1.0～10.0μg范围内呈良好的线性关系。结论该方法简便易行,重复性好,可用于蜚蠊药材的质量控制。

【关键词】蜚蠊药材薄层色谱法索氏提取法水分测定法分光光度法