妇科养坤丸质量标准探究论文

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1器材

1.1仪器

DionexSummit高效液相色谱仪(P680HPLCPump,ASI-100AutomatedSampledInjector,PDA-100PhtodiodeArrayDetecter，STH585ColumnOven)Chromeleon数据处理系统；赛多利斯万分之一电子天平（德国）；电子数控式恒温水浴锅（江苏昆山医用设备厂）；硅胶G，硅胶GF254（青岛海洋化工厂生产）。

1.2样品与试药

妇科养坤丸：自制(批号050825，050903，050920)；去氢木香内酯对照品（供薄层鉴别用，批号111525-200404）；延胡索乙素对照品（供薄层鉴别用，批号110726-200409）；甘草次酸对照品（供薄层鉴别用，批号110723-200411），黄芩苷对照品（供含量测定用，批号110715-200514）均由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯；水为超纯水，其他化学试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1薄层鉴别

2.1.1黄芩的薄层鉴别取本品11g，研细，加醋酸乙酯-甲醇（3∶1）30ml，回流30min，滤过，蒸干，加5ml甲醇，取上清液作为供试品溶液。取去黄芩的模拟处方，按供试品溶液的制备方法，依法制备阴性对照品溶液。取黄芩苷对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水-甲醇（5∶3∶0.6∶1.5∶0.8）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁试液，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。结果见图1。

2.1.2木香的薄层鉴别取本品6g，研细，加氯仿10ml，超声处理30min，滤过，滤液作为供试品溶液。取去木香的模拟处方，按供试品溶液的制备方法，依法制备阴性对照品溶液。取去氢木香内酯对照品，分别加氯仿制成每毫升含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一羧甲基纤维钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚-乙醚（5∶3.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。结果见图2。

2.1.3延胡索的薄层鉴别取本品11g，研细，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，加浓氨试液调至碱性（pH9～10），用乙醚提取3次，10ml/次，合并乙醚液，用稀硫酸溶液提取3次，10ml/次，合并稀硫酸液，加氢氧化钠试液调至碱性（pH11～12），再用乙醚提取3次，10ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取去延胡索的模拟处方，按供试品溶液的制备方法，依法制备阴性对照品溶液。取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液与阴性对照溶液各10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-正丁醇-浓氨水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.8）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗黄色荧光斑点。阴性对照无干扰。结果见图3。

2.1.4甘草的薄层鉴别取本品水蜜丸11g，研细，或大蜜丸18g，剪碎，加硅藻土12g，研匀，加乙醚60ml，加热回流1h，滤过，药渣加甲醇40ml，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，用水洗涤3次，蒸干，残渣加入盐酸5ml，再加氯仿50ml超声提取30min，滤过，取氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。取甘草次酸对照品，加甲醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液。取缺甘草的其它药材制成的蜜丸18g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法［1］试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一羧甲基纤维钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯-冰醋酸（25∶9∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。结果见图4。

2.2黄芩苷的含量测定

2.2.1色谱条件与系统适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为AgillentC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇－0.1%磷酸溶液(47：53)；检测波长为280nm；流速1.0ml·min-1；柱温25℃。理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含60μg的溶液，即得。

2.2.3供试品溶液的制备取本品10g，研碎，取约0.5g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加70％乙醇50ml，精密称定，超声提取（150W，35kHz）30min，放冷，精密称定，以70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4专属性实验按处方比例和工艺，同法制成全方缺黄芩的的阴性对照液，按样品供试液的制备方法制备，测定。表明:在与黄芩苷对照品色谱的相应位置上无干扰峰出现，说明方中其它成分对测定结果无影响。黄芩苷对照品、供试品和阴性对照品的HPLC图谱见图5。

2.2.5线性关系考察取黄芩苷对照品溶液（0.060mg/ml）自动进样1，5，10，15，20，25μl，按上述色谱条件设定峰面积，以峰面积（Y,mAu*sec）对进样量（X，μg）进行线性回归，得回归方程为Y=2220.2X-0.6294，r=0.9999；表明黄芩苷在0.0576～1.44μg内线性关系良好。

2.2.6精密度实验取黄芩苷对照品溶液（0.060mg/ml），重复进样6次，10μl/次，按上述条件测得峰面积，RSD＝0.36%，表明精密度符合要求。

2.2.7稳定性实验取对照品溶液和供试品溶液分别于0，2，4，8及12h，各自动进样6μl，按上述色谱条件测定峰面积，对照品溶液和供试品溶液的RSD分别为0.87%，1.14%。表明12h内对照品和供试品均稳定。

2.2.8重复性实验按上述的含量测定方法，对同一批样品（批号：050825）制备供试液，平行做5份，测得峰面积，计算含量，结果RSD＝1.18%，表明重复性良好。

2.2.9加样回收率实验精密称取已知含量的同一批样品(批号050825)6份，精密加入对照品适量，挥干溶剂，按供试品溶液制备项下操作。按色谱条件测定峰面积，计算回收率。结果见表1。表1加样回收率实验结果（略）

2.2.10样品的测定取3批样品按含量测定项下的方法提取、测定并计算含量，每份样品测定3次取均值。结果见表2。表2样品测定结果（略）

3讨论［2,3］

黄芩苷为多酚羟基黄酮苷类化合物，采用70％回流提取转移率较高，但杂质较多，经比较，结果表明采用醋酸乙酯－甲醇（3∶1）回流提取，可显著减少水溶性杂质的溶出；提取样品含有较多脂溶性成分，在薄层上容易过载形成拖尾，影响鉴别，经实验，蒸干提取溶剂后的残渣采用乙醚振摇提取可很好的去除大部分杂质，黄芩苷基本无损失，乙醚不溶部分采用甲醇溶解，可获得较好的重复性。甘草中甘草酸的稳定性较差，研究采用将甘草酸水解成甘草次酸进行鉴别，可获得较好的重复性。

本品中黄芩仅占全方药材不足10%，因此理论溶媒用量较《中国药典》为大；采用甲醇或乙醇提取可显著降低杂质提取量，有利于保护色谱柱，故本次实验分别对70％乙醇、无水乙醇、甲醇等提取溶媒的超声提取30min，1，2h和回流提取2，3，4h进行了考察，结果显示采用70％乙醇超声30min提取效果最好，操作简单、快速。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：附录VIB.

［2］陈锦容.妇科十味片的薄层色谱鉴别［J］.中华临床医药，2003，4（23）：115.

［3］白志川，于杰，刘圆.中药复方中的甘草和红花的薄层色谱定性鉴别［J］.西南农业大学学报（自然科学版），2004，26（5）：629.

【摘要】目的建立妇科养坤丸的质量标准，以更好控制产品质量。方法采用薄层色谱（TLC）法鉴别黄芩、木香、延胡索、甘草，以HPLC法测定黄芩苷的含量。结果TLC法可检出黄芩、木香、延胡索、甘草，斑点清晰，阴性对照无干扰，专属性强。黄芩苷在0.0576～1.44μg范围内线性良好(r=0.9999)，平均加样回收率为97.85%，RSD为0.86%。结论实验方法定性、定量方法简便、可靠、准确，可用于妇科养坤丸的质量控制。

【关键词】妇科养坤丸黄芩苷薄层色谱高效液相色谱