金银花中绿原酸含量研究论文

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【摘要】目的以绿原酸含量为指标，比较不同产地加工的金银花品质。方法采用高效液相色谱法，使用DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱；以乙腈-0.4%磷酸溶液（15∶85）为流动相；检测波长为327nm；柱温30℃；流速1.0ml/min。结果蒸制后干燥的产地加工法优于直接干燥的加工方法。结论不同产地加工方法的金银花中绿原酸含量有较大差异。

【关键词】金银花；绿原酸；产地加工；高效液相色谱法

ComparisonontheChlorogenicAcidContentinFlosLoniceraeProcessedinDifferentProducingAreas

Abstract：ObjectiveTocomparethequalityofFlosLoniceraeprocessedindifferentproducingareas.MethodsThecontentofchlorogenicacidinFlosLoniceraewasdeterminedbyHPLC.DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm,5μm)wasusedandthemobilephasewasAcetonitrile-0.4%Phosphoricacid(15∶85).Thewavelengthofdetectorwas327nm,thecolumntemperaturewas30℃andtheflowratewas1.0ml/min.ResultsSteamingandovendryingwerebetterthandirectdrying.ConclusionThecontentofchlorogenicacidisdifferentintheFlosLoniceraeprocessedbydifferentprocessinginproducingareas.

Keywords：FlosLonicerae;Chlorogenicacid;Processinginproducingareas;HPLC

金银花具有广泛的药用价值，可以清热解毒、凉血化淤，主治外感风热、瘟病初起、疮疡疔毒、红肿热痛、便脓血、增强免疫功能等。金银花的常见药用制品有银翘解毒丸、栀子金花丸、银翘解毒片、银翘散、五味消毒饮、祛感灵胶囊、咽炎冲剂、外阴洗剂等［1，2］，另外金银花也能够起到防风固沙、保持水土、改良土壤、改善生态、绿化环境的多重效用。金银花其药用价值主要由其所含化学成分来体现。通过研究得知，金银花化学成分复杂，已鉴别出的就有60多种，其中具有生物活性，并已搞清楚结构的化合物主要有：绿原酸、异绿原酸、黄酮类的木犀草素和挥发油类的芳樟醇等［3～5］。

中药的使用注重产地加工及炮制，不同的加工炮制方法对中药的使用有着不同的意义。而金银花在《中国药典》2000年版Ⅰ部及《浙江省中药炮制规范1994年版》中均未提及产地加工中应蒸制后再干燥［1，2］，翻阅以往文献也未有所获；但在民间采收过程中常有蒸制后再干燥的加工习惯。由于在金银花各化学成分中绿原酸具有抗菌、抗病毒、止血、抗肝炎等特殊作用，因此普遍把绿原酸含量的高低作为衡量金银花质量的标准［5］。本论文的主要内容就是以金银花中绿原酸的含量为指标，以HPLC法为手段，比较两种不同产地加工的金银花的品质。

1材料

1.1仪器Waters510色谱系统，490E紫外检测器。HS色谱数据工作站V4.0+（杭州英谱科技开发有限公司）。

1.2试药对照品：绿原酸（chlorogenicacid）购自中国药品生物制品检定所，批号为753-200111；高纯水，其他试剂均为色谱纯。

1.3样品取自金华琅琊，经鉴定为忍冬科植物金银花LoniceraconfusaDC.的干燥花蕾或带初开的花。1号样品采收后直接干燥，2号样品采收后经蒸制再干燥。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性实验色谱柱为DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液（15∶85），流速1.0ml·min-1，检测波长327nm，柱温30℃，AUFS0.3；进样量20μl；理论板数按绿原酸峰计算不低于5000。

2.2供试品溶液的制备分别取1号和2号样品研成细粉，精密称取细粉各约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得。

2.3对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品0.0106g，置棕色容量瓶中加50%甲醇溶解并稀释至50.0ml，即为对照品溶液。

2.4线性关系考察精密吸取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀释至10.0ml，摇匀，按上述色谱条件测定绿原酸的峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝2.19×108X－1.52×105，r=0.9996，绿原酸进样浓度在21.20～106.0μg·ml-1内峰面积积分值与浓度呈线性关系。

2.5进样精密度实验精密吸取对照品溶液2.0ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀释至10.0ml，摇匀，作为对照液，连续进样5次，测定峰面积，RSD=0.71%。

2.6稳定性实验精密吸取2．4项下对照液，每隔1h进样1次，测定绿原酸峰面积积分值，RSD=0.77%，结果表明在5h内稳定性较好。

2.7加样回收实验分别取样品适量，精密加入对照品溶液2.0ml(0.212mg·ml-1)，按2．2项下方法制备供试品溶液，测定并计算回收率。结果见表1。

表1样品中绿原酸回收率测定结果（略）

2.8样品测定分别精密吸取2．2项下对照液与1号和2号供试品溶液各20μl分别进样测定。用外标法计算样品中绿原酸的百分含量。结果见图1及表2。

A.对照品B.药材a.绿原酸

图1药材和对照品的HPLC（略）

表2不同产地加工金银花中绿原酸的含量测定结果（略）

3讨论

绿原酸的50%甲醇溶液应避光阴凉处保存，否则峰面积会有所改变而影响测定的准确性。

从表2可见，不同产地加工成的金银花样品中绿原酸含量差别较大，产地加工中经蒸制后再干燥的样品含量要比直接干燥的样品高出5倍多。建议产地加工方法写入标准中，以确保绿原酸的含量。

通过对不同产地加工的金银花中绿原酸的含量测定的比较，未经蒸制直接干燥的金银花中绿原酸含量仅为1.0%，而蒸后干燥的则有5.7%，就绿原酸的含量来说，蒸制后干燥的产地加工方法优于直接干燥的加工方法。

本课题还需对不同产地加工的金银花进行指纹图谱研究、谱效关系的研究等，进一步从更全面的角度说明产地加工的优劣。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：177.

［2］浙江省卫生厅.浙江省中药炮制规范［S］.杭州：浙江省科技出版社，1994：278.

［3］徐炳声.中药金银花原植物研究［J］.药学学报，1979，14(1)：23.

［4］徐国钧，徐珞珊，牛燕珍，等.中药金银花的鉴定研究Ⅰ［J］.南京药学院学报，1979，(1)：82.

［5］柯铭清.中草药有效成分理化与药理特性［M］.长沙：湖南省科技出版社，1982：225