消痛灵搽剂质量标准分析论文

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【摘要】目的建立消痛灵搽剂的质量标准。方法采用薄层色谱法（TLC）对处方中的栀子、姜黄、乳香、没药进行定性鉴别；采用反相高效液相色谱法（RPHPLC）定量分析消痛灵搽剂中大黄素和大黄酚的含量。结果TLC分离效果好，斑点清晰；大黄素在0.248～1.984μg，大黄酚在0.292～2.336μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率大黄素为99.7%，RSD﹦0.64%；大黄酚为99.2%，RSD﹦0.89%。结论该方法简便、准确、重复性好、能有效控制该复方制剂的质量。

【关键词】消痛灵搽剂；大黄素；大黄酚；薄层色谱；反相高效液相色谱

Abstract：ObjectiveToestablishthequalitystandardofXiaotonglingliniment．MethodsFructusGardeniae,RhizomaCurcumaelongae,Olibanum,MyrrhawereidentifiedbyTLC.ThecontentofemodinandchrysophanolinXiaotonglinglinimentwasdeterminedbyRPHPLC．ResultsTheidentifiedcharacteristicsofchromatographyweredistinctandthespotswereclear.Thestandardcurvewaslinearwithintherangeof0.248～1.984μgforemodinand0.292～2.336μgforchrysophanol．Theaveragerecoveryofemodinwas99.7%withRSDof0.64%,withthatofchrysophanolwas99.2%withRSDof0.89%．ConclusionThemethodisconvenient,accurateandhasagoodreappearance．Thepreparation''''squalitycanbecontrolledeffectively．

Keywords：Xiaotonglingliniment；Emodin；Chrysophanol；TLC；HPLC

消痛灵搽剂是由我院文绍敦教授根据中医药理论和多年临床经验，筛选有效药物研制而成的中药复方外用制剂，全方以大黄为君药，栀子为臣药，佐以姜黄、乳香、没药，具有清热止痛、化淤散结的功效，主要用于治疗急性痛风性关节炎、跌打损伤、局部淤肿疼痛等病症，临床疗效显著。为了有效控制该制剂的质量，本文建立了TLC法对栀子、姜黄、乳香、没药等4味药材进行定性鉴别；并采用RPHPLC法测定君药大黄中的大黄素和大黄酚的含量。研究结果表明，该方法具有简便、准确、重复性好、专属性强等特点，能有效控制消痛灵搽剂的质量。

1仪器与试药

高效液相色谱仪（LC10AT泵，SPD10A紫外检测器，日本岛津公司）；N2000型色谱数据工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；KQ100超声波清洗器（浙江昆山市超声仪器有限公司）；硅胶G板（自制，规格：12cm×24cm)；大黄素、大黄酚、栀子苷、姜黄素对照品（中国药品生物制品检定所）；乳香、没药对照药材由青海大学医学院中药教研室魏全嘉教授鉴定；消痛灵搽剂及阴性对照样品（自制）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2薄层色谱鉴别

2.1栀子的TLC法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺栀子的阴性样品作为阴性对照溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各3μl，分别点样于同一块硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇（5∶2）为展开剂，展开，取出，晾干。用10%的硫酸乙醇液显色，110℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显浅黄色斑点，阴性对照溶液在相应的位置上无此斑点。结果见图1。

2.2姜黄的TLC法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺姜黄的阴性样品作为阴性对照溶液。另取姜黄素对照品，加甲醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各3μl，分别点样于同一块硅胶G薄层板上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸（5.5∶1.2∶0.6）为展开剂，展开，取出，晾干。用浓氨水显色，110℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显黄色斑点，阴性对照溶液在相应的位置上无此斑点。结果见图2。

图1栀子的TLC图谱（略）

图2姜黄的TLC图谱（略）

2.3乳香的TLC法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺乳香的阴性样品作为阴性对照溶液。另取乳香对照药材0.5g，加乙醚10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为对照药材溶液。吸取上述溶液各3μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上,以石油醚（30～60℃）-醋酸乙酯（34∶6）为展开剂，展开，取出，晾干。用5%香草醛硫酸溶液显色，110℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显紫色斑点，而阴性对照溶液在相应的位置上无斑点。结果见图3。

2.4没药的TLC法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺没药的阴性样品作为阴性对照溶液。另取没药对照药材0.5g，加乙醚10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为对照药材溶液。吸取上述溶液各3μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-丙酮（17∶2）为展开剂，展开，取出，晾干。用5%香草醛硫酸溶液显色，110℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显紫色斑点，而阴性对照溶液在相应的位置上无斑点。结果见图4。

图3乳香的TLC图谱（略）

图4没药的TLC图谱（略）

3含量测定

3.1色谱条件色谱柱：HypersilC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（87∶13）；检测波长：254nm；流速：1.0ml·min-1；进样量：10μl。

3.2线性范围的考察精密称取大黄素对照品6.2mg，大黄酚对照品7.3mg，分别置两个50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2，4，6，10，16μl，进样，在上述色谱条件下测定峰面积，以大黄素、大黄酚进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y大黄素=1.26×103X－12.95，r=0.9997；Y大黄酚=2.81×103X－7.52，r=0.9995。结果表明，大黄素、大黄酚进样量在0.248～1.984μg和0.292～2.336μg线性关系良好。

3.3供试品溶液的制备精密量取消痛灵搽剂样品3ml，置水浴上蒸干，残渣加适量甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

3.4阴性对照实验取缺大黄阴性对照样品，按“3.3”项下方法制备阴性对照品溶液，取10μl进样，结果在与大黄素、大黄酚对照品保留时间相同的位置上无色谱峰出现，表明缺大黄的阴性对照品溶液对测定无干扰。

3.5精密度实验精密吸取大黄素、大黄酚对照品溶液各10μl,在上述色谱条件下连续进样5次，大黄素、大黄酚峰面积积分值的RSD分别为0.86%，1.02%，结果表明该方法的精密度良好。

3.6重复性实验取同一批号样品5份，分别按“3.3”项下操作，依法测定，计算得大黄素、大黄酚的平均含量分别为0.136，0.283mg·ml-1，RSD分别为1.53%和0.71%。

3.7稳定性实验取同一供试品溶液放置不同时间(0，2，4，8，12h)后进样，测定峰面积，结果RSD为0.23%，表明溶液在12h内保持稳定。

3.8加样回收实验取已知含量的样品5份，分别精密加入大黄素对照品溶液（0.124mg·ml-1）、大黄酚对照品溶液（0.146mg·ml-1）各2ml，按“3.3”项下制备回收率测定用样品溶液，依法测定，计算回收率，大黄素平均回收率为99.7%，RSD=0.64%；大黄酚平均回收率为99.2%，RSD=0.89%，结果表明本方法的回收率好。

3.9样品测定精密吸取对照品和供试品溶液，依上述条件进行测定，记录峰面积，按外标法以峰面积计算含量。结果见表1。

表1样品含量测定结果（略）

4讨论

薄层色谱法（TLC）鉴别项下选用的展开系统均参照《中国药典》（2005年版）的鉴别方法［1］制定，方中栀子、姜黄选择主要有效成分栀子苷、姜黄素作为对照品，而乳香、没药无对照品，则选用对照药材作对照，样品及阴性对照品采用平行试验,结果表明各检出成分分离效果好，不受其他成分的干扰，操作简便，专属性强，可作为该制剂的定性控制指标。

大黄为消痛灵搽剂的君药，主要含有游离和结合的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚，其中大黄素具有抑菌、抗炎、免疫调节、抑制血小板聚集、改善微循环、降低血液黏度、抗氧化、清除自由基、保护肝肾等作用［2］；大黄酚具有止咳、抗菌、止血、抗氧化、清除自由基等作用［3］，这些药理作用在很大程度上与该复方制剂的功能主治相一致，故选择君药大黄中的大黄素、大黄酚作为质量控制指标成分，结合文献［4］用RP-HPLC进行含量测定，前处理过程简单，阴性无干扰，灵敏度高，准确性及重现性好，可作为本品的定量控制指标。

根据样品测定结果，5批样品中大黄素的平均含量为0.131mg·ml-1，大黄酚的平均含量为0.287mg·ml-1，考虑到药材来源、制剂工艺等因素，建议其限度为本品含大黄以大黄素和大黄酚的总量计,不得少于0.4mg·ml-1。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社,2000：18.

［2］张喜平，李宗芳.大黄素的药理作用研究概况［J］.中国药理学通报，2003，19(8)：851.

［3］谭晓虹，张丹参，张力，等.大黄酚在兔体内药动学的研究［J］.中国医院药学杂志，2005，26(8)：947.

［4］王亚林，索银科，刘学东.HPLC法测定清热消炎片中大黄素和大黄酚的含量［J］.西北药学杂志，2004，19(5)：207.