香连素片质量标准研究论文

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摘要：目的建立香连素片的质量控制标准。方法采用薄层色谱法鉴别香连素片中的木香；采用高效液相色谱法测定香连素片中盐酸小檗碱的含量。结果在薄层色谱中检出了木香；盐酸小檗碱的进样量在0.0378～0.378μg范围内呈良好的线性关系（r＝0.9997），平均回收率为101.49%，RSD为1.97％（n＝6）。结论本方法专属性强、准确、重现性好，可作为香连素片的质量控制标准。

关键词：香连素片；木香；薄层色谱法；盐酸小檗碱；高效液相色谱法

Abstract:ObjectiveToestablishamethodforqualitycontrolofXiangliansutablets.MethodsRadixAuckiandiaeinthetabletswasidentifiedbyTLC.ThecontentofberberinehydrochlorideinthetabletswasdeterminedbyHPLC.ResultsRadixAuckiandiaecouldbeidentifiedbyTLC.Berberinehydrochlorideshowedagoodlinearcorrelationovertherangeof0.0378-0.378μg(r=0.9997).Theaveragerecoveryofberberinehydrochloridewas101.49%withRSD1.97%(n=6).ConclutionsThemethodisspecific,accurateandreproduciblefortheequalitycontrolofXiangliansutablets.

Keywords:Xiangliansutablets；berberinehydrochloride；HPLC；Radixauckiandiae；TLC

香连素片是广东万年青制药有限公司的产品，具有清热燥湿、行气止痛的功效，临床用于湿热型痢疾、里急后重、腹痛泄泻。其处方为木香500g、盐酸小檗碱75g。原药品标准［1］鉴别木香用试管反应，盐酸小檗碱的含量用紫外分光光度法测定，方法专属性较低且影响因素多。本文采用薄层色谱法鉴别木香、高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，结果表明操作简便、准确、重复性好，为该品种的质量标准进一步修订提供了依据。

1仪器与试药

1.1试药

香连素片（批号：030801、030802、030803、040701、041002、050601、050802、060601、060602、060603）均为广东万年青制药有限公司产品；木香对照药材（批号：921-9201）及盐酸小檗碱对照品（批号：110713-200609）均购自中国药品生物制品检验所；硅胶G预制板及硅胶G均由青岛海洋化工厂生产;乙腈为色谱纯;其他试剂与试药均为分析纯。

1.2仪器

LC2010A高效液相色谱仪(日本岛津),UV2501PC紫外分光光度仪（日本岛津）,CQ15A超声波清洗器（上海跃进医用光学器材厂）。

2薄层鉴别［2］

取本品2片，研成细粉，加三氯甲烷10mL，超声（功率120W，频率50Hz）处理30min，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液。另取木香对照药材0.2g、不含木香的阴性样品，同法分别制成对照药材溶液及阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各3μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷环己烷（体积比5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点清晰。置可见光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰，见图1。

3含量测定

3．1色谱条件

色谱柱：phenomenexC18（150mm×4.6mm，5μm）流动相：以磷酸盐缓冲溶液［0.05mol/L磷酸二氢钾和0.01mol/L十二烷基磺酸钠（体积比1∶1），含0.2%三乙胺］乙腈（体积比60∶40），用磷酸调节pH值至3.0为流动相；流速：1.2mL/min，检测波长：266nm，柱温：室温，进样量：10μL，理论塔板数不低于1500。

3．2溶液的制备

3.2.1对照品溶液的制备

取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1mL含120μg的溶液，作为对照品溶液。

3.2．2供试品溶液的制备

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸小檗碱60mg），置索氏提取器中，加盐酸甲醇（体积比1∶100）适量，加热回流提取至提取液无色，将提取液（必要时浓缩）移至50mL量瓶中，用少量盐酸甲醇（1体积比∶100）的混合液洗涤容器，洗液并入提取液中，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。

3.2.3阴性对照溶液的制备

按照本品的处方、制法制备缺少盐酸小檗碱的模拟样品，按“3.2.2”项方法制成阴性对照溶液。

3.3专属性试验

分别取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果阴性对照对盐酸小檗碱测定无干扰，说明方法专属性强。结果见图2。

3.4线性关系的考察

精密称取盐酸小檗碱对照品适量，用乙醇溶解制成质量浓度为37.8μg/mL的溶液，分别精密吸取1、2、4、6、8、10μL注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以进样量（m）为横坐标，色谱峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，得线性回归方程为Y=2.88725×106m-5586.84，r=0.9997，表明盐酸小檗碱进样量在0.0378～0.378μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。3.5稳定性试验

精密吸取同一批供试品溶液各10μL，按上述色谱条件，每隔1h测1次峰面积，结果表明盐酸小檗碱在24h内稳定，RSD为0.66%。

3.6重复性试验

取同一批样品共6份，分别按“3.2.2”项下方法进行制备溶液，并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，结果RSD=0.90%,表明方法重现性良好。

3.7回收率试验

精密称取已知含量的样品（批号：030802）共6份，分别精密加入对照品适量，按“3.2.2”项下方法制备溶液并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，计算加入量的回收率。结果见表1。表1盐酸小檗碱加样回收率试验（略）

3.8准确度考察

以含量限度下限的50%为范围低限、以含量限度上限的150%为范围高限，考察测定范围的准确度。

精密称取已知含量的样品（批号：030802），按含量范围高、低限折算取样量，各6份，分别精密加入对照品适量，按“3.2.2”项下方法制备溶液并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，计算加入量的回收率。结果见表2。表2准确度试验结果（略）

3.9样品的测定

取10批样品，分别按“3.2.2”项下方法制备溶液，分别精密量取供试品溶液及对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，并按上述色谱条件，测定盐酸小檗碱的含量，结果见表3。表3样品中盐酸小檗碱的含量（略）

4讨论

4.1采用薄层色谱法鉴别木香时,分别采用自制板及预制板同时展开、预平衡与未平衡的条件展开，层析结果表明：自制板与预制板的层析结果无差别，两种展开条件均可检出木香特征斑点，但以未平衡的条件展开，结果容易产生边缘效应，故展开时预平衡10min较好。

4.2薄层层析的环境影响

分别在冰箱、室温、相对湿度45%和75%的环境条件下展开，结果表明：在上述环境条件展开，均可检出木香特征斑点，差异不大，故选用以室温、相对湿度45%～75%为展开环境条件，操作简便。

4.3提取方法的选择

参照国家药品标准［1］，供试品溶液的制备是经索氏提取后上氧化铝柱洗脱，操作较繁琐。我们对提取方法进行了优化，只经索氏提取后直接测定，并与原提取方法的HPLC测定结果作对比。结果表明：只经索氏提取与原提取方法的测定结果一致，因此样品的提取采用索氏提取法。

4.4测定波长的选择

取对照品溶液，在200～500nm波长范围内进行扫描，在349、266、231nm均有最大吸收，经HPLC试验比较，盐酸小檗碱在266nm波长的峰面积值最大，故选择检测波长为266nm。

4.5流动相的选择

参考文献［3,4］，采用磷酸盐缓冲溶液［0.05mol/L磷酸二氢钾和0.01mol/L十二烷基磺酸钠（1∶1），含0.2%三乙胺］乙腈（60∶40）,分别用磷酸调节pH值至3.0、3.2、3.5为流动相，经试验，当流动相的pH值为3.0时对照品及样品的峰形对称，重复性好，阴性对照无干扰，故确定流动相为磷酸盐缓冲溶液［0.05mol/L磷酸二氢钾和0.01mol/L十二烷基磺酸钠（1∶1），含0.2%三乙胺］乙腈（60∶40），用磷酸调节pH值至3.0。

4.6耐用性考察

4.6.1柱温的考察

柱温分别为室温、40℃时，色谱峰的分离度、峰形及峰面积基本一致，故以室温作为柱温，操作较简便。

4.6.2流速的考察

分别设定流速为1.0、1.2及1.5mL/min进行测定，结果表明：当流速为1.0mL/min时保留时间太长，当流速分别为1.2及1.5mL/min时色谱峰的峰形及峰面积无甚差别，且前者的保留时间短一些，故选择流速为1.2mL/min。

4.6.3色谱柱的考察

选用3种不同厂牌的色谱柱：phenomenexC18(150mm×4.60mm,5μm)、DiamonsilTMC18(250mm×4.60mm,5μm)和SpherisorbC18(250mm×4.60mm,5μm)，测定同一批样品（批号：060602）的含量，结果3种色谱柱测得含量的RSD=0.61%（n=2），表明换用不同厂牌的色谱柱，均可得到满意的色谱图，故本法的耐用性好。

【参考文献】

［1］WS3—B—2572—97.国家药品标准:卫生部药品标准第十三册［S］.1997:140.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版一部［S］.北京：化学工业出版社，2005：41.

［3］庞小雄，宋粉云，钟兆健，等.HPLC法测定拈痛丸中盐酸小檗碱的含量［J］.广东药学院学报，2007,23(3):240-242.

［4］张宇烽，马安霓，陈小玲，等.HPLC法测定芩连葛根片盐酸小檗碱的含量［J］.广东药学，2004，14（7）：83.