半乳糖致衰老小鼠学习记忆论文

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【摘要目的观察枸杞对D-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响。方法建立D-半乳糖致衰老小鼠模型，跳台实验检测其学习记忆能力，同时测定其大脑乙酰胆碱酯酶(AchE)活性，用黄嘌呤氧化酶法测定大脑超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥法测定大脑丙二醛(MDA)含量，观察小鼠服用枸杞汁后上述指标变化。结果和D-半乳糖模型组比较，各实验组均可提高小鼠的学习记忆能力(P＜0.05或P＜0.01)，显著增加D-半乳糖所致衰老小鼠大脑SOD活性、降低MDA含量(P＜0.05或P＜0.01)，可显著升高大脑AchE活性(P＜0.05，或P＜0.01)。结论枸杞能改善D-半乳糖所致衰老小鼠的学习记忆功能，其机制可能和枸杞的抗氧化自由基功能有关。

【枸杞

阿尔茨海默病(AD)是一种渐进性神经退行性疾病，其发病有增加的趋向〔1〕。枸杞(Fructuslycii)是我国传统的药材，它含有丰富的营养成分和药理活性成分。现代医学已证实，枸杞可调节免疫、延缓衰老和清除自由基等功能。本实验采用D半乳糖所致衰老小鼠模型，探究AD小鼠学习记忆能力、脑组织乙酰胆碱酯酶(AchE)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的变化及枸杞对这些指标的影响，并分析其功能机制，为临床应用提供理论依据。

1材料和方法

11试验动物及分组昆明小鼠雄性75只，体重(24g±2)g(包头医学院动物室)。随机分为5组，每组15只，即对照组，D-半乳糖模型组，低、中、高3个枸杞汁剂量组。饲养过程中对照组和模型组各死亡3只，枸杞汁剂量组各死亡2只。

12药物和仪器枸杞(包头市奇力康医药公司)。D-半乳糖(上海源聚生物科技有限公司，批号030406)。AchE试剂盒、SOD试剂盒、MDA试剂盒(南京建成生物工程探究所)。752C紫外-可见分光光度计、721型分光光度计(上海第三分析仪器厂)。STT-2型跳台仪(中国医科院药研所)；德国来卡2135型切片机、加样器(上海伟业有限公司)。离心机(北京医用离心机厂)；混匀器(上海伟业有限公司)。

13D-半乳糖模型及给药方法除对照组给予生理盐水外，其他组每日均腹腔注射012g/(kgbw)的D半乳糖，给药体积10ml/(kgbw)。枸杞组同时灌胃给予高剂量(15g/ml)、中剂量(075g/ml)、低剂量(0375g/ml)，对照组和模型组灌胃给予等容积的生理盐水，连续6周。枸杞汁制备摘要：以枸杞子总体积的5倍量自来水冷浸3h，微沸1h×2次，合并滤液，文火浓缩制成，无菌条件下装瓶，置4℃冰箱备用。

14方法

141跳台实验造模后灌胃至4周后1h开始跳台实验［2］。

142AchE、SOD、MDA的测定小鼠脑组织AchE活性用试剂盒方法；SOD活力采用黄嘌呤氧化酶法；MDA含量采用(TBA)法；脑组织蛋白质定量采用考马斯亮蓝(CBB-SDS)法。

15统计分析采用SPSS100软件进行t检验。

2结果

21枸杞对小鼠跳台成绩的影响(表1)D半乳糖所致模型组，无论学习成绩和记忆成绩，和对照组比较，模型组小鼠的错误次数明显增多(P＜001)，学习成绩的反应期明显延长(P＜001)，记忆成绩的潜伏期明显缩短(P＜001)；和模型组比较各给药组小鼠学习记忆障碍有明显的改善(P＜005或P＜001)；各用药组间比较以枸杞汁中剂量功能最为明显，但枸杞汁低、中、高剂量组间差异无统计学意义(P＞005)。

22枸杞对小鼠大脑AchE、SOD、MDA各项指标的影响(表2)对实验组D半乳糖致小鼠脑组织AchE活性测定结果表明，模型组小鼠大脑中AchE减少，和对照组比较，差异有统计学意义(P＜001)，表明D半乳糖所致模型组，可以损伤胆碱能神经元，引起小鼠学习记忆障碍。和模型组比较，各给药组可显著升高D半乳糖所致的AchE活性下降(P＜005或P＜001)并基本达到对照组水平；模型组小鼠大脑中SOD活力明显降低，MDA含量明显增多，给予枸杞汁后可明显提高SOD活性、降低MDA含量。

表1枸杞对小鼠学习记忆的影响（略）

注摘要：和对照组比较，aP＜001；和模型组比较，bP＜005,cP＜001

表2枸杞对小鼠脑组织AchE、SOD、MDA的影响（略）

注摘要：和对照组比较,aP＜001；和模型组比较,bP＜005,cP＜001

3讨论

胆碱能系统是正常认知功能中最为重要的神经递质系统，引起AD的生理生化机制目前还不清楚，和衰老致痴呆相关的因素很多〔3〕，AchE的异常可能是引起AD的一个重要因素。D半乳糖致小鼠脑组织AchE活性明显下降〔4〕，单胺氧化酶活性明显升高。AD患者大脑皮层内胆碱乙酰基转移酶、AchE活性均下降〔5，6〕。已知胆碱能系统和学习记忆关系密切，Ach为促学习记忆的神经递质，而AchE是降解Ach的酶，AchE活性降低，间接说明胆碱能功能衰退，故D-半乳糖致小鼠脑组织AchE活性下降，提示其中中枢胆碱能功能发生障碍，从而使学习记忆能力下降。本探究结果支持此结论。本探究结果显示，枸杞能减轻由D半乳糖对小鼠脑的脂质过氧化损伤，枸杞可以明显提高小鼠脑SOD活力，降低MDA含量。其功能机制可能是，机体自由基防御体系包括酶促体系和非酶促体系，酶促体系如SOD，可有效清除机体自由基；非酶体系是具有抗氧化活性的物质，如维生素E、维生素C、黄酮类、β-胡萝卜素等。枸杞子每百克含维生素E2646mg，维生素C214mg，β-胡萝卜素196mg，黄酮类物质500mg，复合枸杞多糖721mg〔7〕。探究结果表明，枸杞能增强D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆功能，可能和枸杞具有调节中枢胆碱能神经系统和抗脂质过氧化功能有关。

【参考文献

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