内酯含量测定研究管理论文
时间:2022-06-16 05:24:00
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【摘要】目的探讨外标四点法的可行性。方法HPLC法,色谱柱:ALLTECHC18(4.6mm×250mm,5μm),流动相:正丙醇-四氢呋喃-水(1:15:85),流速1.0ml/min,ELSD参数:漂移管温度108.0℃;载气(压缩空气)流速3.10L/min。结果外标四点法得出回归方程,经统计学方法证明成立,且相关系数r显著。结论外标四点法可以用于银杏萜类内酯的含量测定。
【关键词】银杏叶萜类内酯;含量测定;HPLC-ELSD;外标四点法
StudyonreliabilityofESMoffourpointstodeterminetheassayforGinkgoTerpeneLactones
【Abstract】ObjectiveStudyonthereliabilityofESMoffourpoints.MethodsHPLCsystemconsistingofanAlltechC18column(4.6mm×250mm,5μm),andthemobilephasewasn-Propylalchol,tetrahydrofuranandwater(1:15:84)atflowrateof1.0ml/min.Thedetectortemperaturewas108.0℃andthedrygasflowratewas3.10L/min.ResultsTheESMoffourpointshasbeenestablished.ConclusionTheESMoffourpointscanbeusedondeterminetheassayforGinkgoTerpeneLactones.
【Keywords】ginkgoterpenelactones;assay;HPLC-ELSD;ESMoffourpoints
有关银杏叶中萜类内酯的含量测定方法的报道较多,目前银杏叶制剂的萜类内酯含量测定方法采用的多为HPLC法[1~3]。我们亦采用2005版中国药典收录的HPLC法[4],蒸发光散射检测器进行测定。HPLC-ELSD使用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏叶内酯A、银杏叶内酯B和银杏叶内酯C的含量,四种银杏内酯的含量之和为萜类内酯含量。我们在实际工作中使用外标两点法时,直接从数值上难以判断对照溶液的配制是否准确,及其外标两点法对应的工作曲线(n=2)是否可靠。因此,同时配制两份对照溶液各自分别测定5μl、10μl两点,将四个浓度和相应峰面积一条标准曲线(n=4),得出回归方程及相关系数r,通过统计学方法考察曲线和回归方程是否成立[5]。
1仪器与试药
1.1仪器高效液相色谱仪:SHIMADZU-10A;蒸发光散射检测器ALLTECHELSD2000。
1.2试药白果内酯,银杏叶内酯B、银杏叶内酯C对照品购于中国药品生物制品检定所;银杏叶内酯A对照品购于SIGMA。甲醇为色谱纯;水为自制超纯水;其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件与系统适应性试验色谱柱:ALLTECHC18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:正丙醇-四氢呋喃-水(1:15:84);流速1.0ml/min;ELSD参数:漂移管温度108.0℃;载气(压缩空气)流速3.10L/min;柱温35℃;进样量5、15μl。理论塔板数按白果内酯峰计算应不低于2500,相邻峰的分离度应>1.5。
2.2对照品溶液的制备分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏叶内酯A、银杏叶内酯B和银杏叶内酯C对照品适量,置同一10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度,混匀,即得。
2.2.1对照品溶液一白果内酯22.73mg、银杏内酯A13.42mg、银杏内酯B11.13mg和银杏内酯C9.05mg。
2.2.2对照品溶液二白果内酯14.71mg、银杏内酯A11.34mg、银杏内酯B12.24mg和银杏内酯C18.99mg。
以对照品浓度的自然对数InC(x)为横坐标,峰面积的自然对数InA(y)为纵坐标作图,见图2~5。
图中四点有成一条直线的趋势,在直线方程y=ax+b中,通过统计计算按公式1、2、3分别求出两个常数a,b及直线的相关系数r,见表2。
2.3外标四点法直线回归方程的确定分别精密吸取对照品溶液一和二5μl、15μl,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录色谱图。结果:对照溶液中白果内酯(tR=8.375)、银杏叶内酯A(tR=9.811)、银杏叶内酯B(tR=12.040)和银杏叶内酯C(tR=7.194),相邻组分分离效果良好(见图1)。浓度与峰面积的数据及处理见表1。
(出峰顺序为银杏内酯C,白果内酯,银杏内酯A,银杏内酯B)
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2.4直线回归方程的统计学检验
2.4.1相关系数检验法相关系数表示两变量间关系的密切程度。使用相关系数检验法来进行相关系数的显著性测验。见表2。
检验rn=4,显著性水平α为0.01时,查相关系数临界值表得r0.01,4=0.990,表2中r>r0.01,4,说明确立的回归方程是有意义的。
2.4.2t检验法进行相关系数r的显著性测验t检验法进行相关系数的显著性测验,公式4如下:
t>t(n-2),0.01时,x(InC)与y(InA)间的相关关系有非常显著意义。查表得t(2)0.01=9.93。表2中t均>t(2)0.01,所以认为x(InC)与y(InA)之间存在线性相关关系。外标四点对数方程法的直线可确立。
2.4.3外标四点法的重复性考察取对照一与对照二,按照标准曲线的制备进行六次实验,分别得到六组标准曲线及相关系数r,见表3。
3结论
实验数据中外标四点法对应的标准曲线相关系数均大于r0.01,4=0.990,线性相关且回归方程是有意义的。在实验得到的回归方程当相关系数>0.990时可用计算内酯的含量,该方法增加了标准曲线的可靠性,可有效控制制剂的质量。
【参考文献】
1MarkBlumenthal.GermangovernmentlimitsGinkgolivlactonelevelsinginkgoleaf.HerralGram,1997,(41):29.
2ZhangL,ChenXP,DongXP,etal.DeterminationofGinkgolactoneinGinkgocapsulesbyHPLC(HPLC法测定银杏叶胶囊的含量).JiangsuPharmacyandClinicalResearch(江苏药学与临床研究),2004,12(1):29-32.
3TangJW.DeterminationofGinkgolactoneinKangmailingcapsulesbyHPLC(HPLC法测定康脉灵胶囊中银杏萜内酯的含量).TianjinPharmacy(天津药学),2005,17(1):11-13.
4ChP.(中国药典).VolI.2005.
5蒋子刚,顾学梅.分析检验的质量保证和计量认证.上海:华东理工大学出版社,1998,50-210.
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