内酯含量测定研究管理论文

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【摘要】目的探讨外标四点法的可行性。方法HPLC法，色谱柱：ALLTECHC18(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：正丙醇-四氢呋喃-水(1：15：85)，流速1.0ml/min，ELSD参数：漂移管温度108.0℃；载气(压缩空气)流速3.10L/min。结果外标四点法得出回归方程，经统计学方法证明成立，且相关系数r显著。结论外标四点法可以用于银杏萜类内酯的含量测定。

【关键词】银杏叶萜类内酯；含量测定；HPLC-ELSD；外标四点法

StudyonreliabilityofESMoffourpointstodeterminetheassayforGinkgoTerpeneLactones

【Abstract】ObjectiveStudyonthereliabilityofESMoffourpoints.MethodsHPLCsystemconsistingofanAlltechC18column(4.6mm×250mm，5μm)，andthemobilephasewasn-Propylalchol，tetrahydrofuranandwater(1:15:84)atflowrateof1.0ml/min.Thedetectortemperaturewas108.0℃andthedrygasflowratewas3.10L/min.ResultsTheESMoffourpointshasbeenestablished.ConclusionTheESMoffourpointscanbeusedondeterminetheassayforGinkgoTerpeneLactones.

【Keywords】ginkgoterpenelactones；assay；HPLC-ELSD；ESMoffourpoints

有关银杏叶中萜类内酯的含量测定方法的报道较多，目前银杏叶制剂的萜类内酯含量测定方法采用的多为HPLC法［1～3］。我们亦采用2005版中国药典收录的HPLC法［4］，蒸发光散射检测器进行测定。HPLC-ELSD使用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏叶内酯A、银杏叶内酯B和银杏叶内酯C的含量，四种银杏内酯的含量之和为萜类内酯含量。我们在实际工作中使用外标两点法时，直接从数值上难以判断对照溶液的配制是否准确，及其外标两点法对应的工作曲线(n＝2)是否可靠。因此，同时配制两份对照溶液各自分别测定5μl、10μl两点，将四个浓度和相应峰面积一条标准曲线（n＝4），得出回归方程及相关系数r，通过统计学方法考察曲线和回归方程是否成立［5］。

1仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪：SHIMADZU-10A；蒸发光散射检测器ALLTECHELSD2000。

1.2试药白果内酯，银杏叶内酯B、银杏叶内酯C对照品购于中国药品生物制品检定所；银杏叶内酯A对照品购于SIGMA。甲醇为色谱纯；水为自制超纯水；其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适应性试验色谱柱：ALLTECHC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：正丙醇-四氢呋喃-水(1：15：84)；流速1.0ml/min；ELSD参数：漂移管温度108.0℃；载气(压缩空气)流速3.10L/min；柱温35℃；进样量5、15μl。理论塔板数按白果内酯峰计算应不低于2500，相邻峰的分离度应＞1.5。

2.2对照品溶液的制备分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏叶内酯A、银杏叶内酯B和银杏叶内酯C对照品适量，置同一10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，混匀，即得。

2.2.1对照品溶液一白果内酯22.73mg、银杏内酯A13.42mg、银杏内酯B11.13mg和银杏内酯C9.05mg。

2.2.2对照品溶液二白果内酯14.71mg、银杏内酯A11.34mg、银杏内酯B12.24mg和银杏内酯C18.99mg。

以对照品浓度的自然对数InC(x)为横坐标，峰面积的自然对数InA(y)为纵坐标作图，见图2～5。

图中四点有成一条直线的趋势，在直线方程y＝ax+b中，通过统计计算按公式1、2、3分别求出两个常数a，b及直线的相关系数r，见表2。

2.3外标四点法直线回归方程的确定分别精密吸取对照品溶液一和二5μl、15μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图。结果：对照溶液中白果内酯(tR＝8.375)、银杏叶内酯A(tR＝9.811)、银杏叶内酯B(tR=12.040)和银杏叶内酯C(tR＝7.194)，相邻组分分离效果良好(见图1)。浓度与峰面积的数据及处理见表1。

(出峰顺序为银杏内酯C，白果内酯，银杏内酯A，银杏内酯B)

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2.4直线回归方程的统计学检验

2.4.1相关系数检验法相关系数表示两变量间关系的密切程度。使用相关系数检验法来进行相关系数的显著性测验。见表2。

检验rn＝4，显著性水平α为0.01时，查相关系数临界值表得r0.01，4＝0.990，表2中r＞r0.01，4，说明确立的回归方程是有意义的。

2.4.2t检验法进行相关系数r的显著性测验t检验法进行相关系数的显著性测验，公式4如下：

t＞t(n-2)，0.01时，x(InC)与y(InA)间的相关关系有非常显著意义。查表得t（2）0．01＝9．93。表2中t均＞t(2)0.01，所以认为x(InC)与y(InA)之间存在线性相关关系。外标四点对数方程法的直线可确立。

2.4.3外标四点法的重复性考察取对照一与对照二，按照标准曲线的制备进行六次实验，分别得到六组标准曲线及相关系数r，见表3。

3结论

实验数据中外标四点法对应的标准曲线相关系数均大于r0.01，4＝0.990，线性相关且回归方程是有意义的。在实验得到的回归方程当相关系数＞0.990时可用计算内酯的含量，该方法增加了标准曲线的可靠性，可有效控制制剂的质量。

【参考文献】

1MarkBlumenthal.GermangovernmentlimitsGinkgolivlactonelevelsinginkgoleaf.HerralGram，1997，(41):29.

2ZhangL，ChenXP，DongXP，etal.DeterminationofGinkgolactoneinGinkgocapsulesbyHPLC(HPLC法测定银杏叶胶囊的含量).JiangsuPharmacyandClinicalResearch(江苏药学与临床研究)，2004，12(1)：29-32.

3TangJW.DeterminationofGinkgolactoneinKangmailingcapsulesbyHPLC(HPLC法测定康脉灵胶囊中银杏萜内酯的含量).TianjinPharmacy(天津药学)，2005，17(1)：11-13.

4ChP.(中国药典).VolI.2005.

5蒋子刚，顾学梅.分析检验的质量保证和计量认证.上海：华东理工大学出版社，1998，50-210.