内酰胺酶检测分析论文

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［摘要］目的：研究呼吸科肺炎克雷伯菌对14种常用抗生素的耐药性及其产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株的检出率。方法：选择从临床呼吸科分离的肺炎克雷伯菌，用KB纸片扩散法、双纸片协同试验和纸片确证试验筛选和确认产ESBLs的菌株。结果：3a中呼吸科肺炎克雷伯菌产ESBLs总检出率为36.7%(94/256)，产ESBLs菌株对亚胺培南高度敏感(100%)，对氨苄西林、头孢唑林、头孢噻肟、头孢曲松、庆大霉素、环丙沙星均有极高的耐药性(耐药率＞80%)，高于不产ESBLs组，差异有显著性(P＜0.005)。结论：呼吸科肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株的临床分离率高，对多种抗生素具有较高耐药性，亚胺培南是治疗产ESBLs肺炎克雷伯菌感染的首选药物。

［关键词］肺炎克雷伯菌；β内酰胺酶；耐药性；呼吸科

质粒介导的超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的产生和传播是革兰阴性杆菌对β内酰胺类抗生素耐药的重要原因之一［1］。肺炎克雷伯菌是最常见的产ESBLs菌株［2］，已成为医院感染的重要病原菌之一，可造成严重的医院感染暴发和院外耐药菌株的传播［3］。特别是质粒介导的ESBLs因其底物谱广、传播速度快而引起广泛关注。我们对2003年1月至2005年12月本院呼吸科分离的肺炎克雷伯菌进行了抗生素敏感度测定及对产ESBLs菌株进行了检测，现报道如下。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1菌株肺炎克雷伯菌来源于2003年1月至2005年12月本院呼吸科患者送检痰标本，10天内分离出相同菌种取第1次分离株。

1.1.2试剂API试条、MH琼脂(法国梅里埃公司产品)，药敏纸片：头孢噻肟、头孢他啶、头孢噻肟/棒酸、头孢他啶/棒酸购于英国Oxoid公司，其他药敏纸片购于杭州天和微生物试剂厂。

1.2方法

1.2.1菌种鉴定根据《全国临床检验操作规程》操作，采用API试条和APILABPLUS细菌鉴定系统进行细菌鉴定。

1.2.2药敏试验采用KB法，结果判读按NCCLS2002年推荐标准。

1.2.3ESBLs检测采用双纸片协同试验法，选取对头孢噻肟耐药或中介耐药的肺炎克雷伯菌株，按常规纸片扩散法在MH琼脂平板上涂布受试菌，先在平板中心贴上20μg/1μg阿莫西林/克拉维酸纸片，尔后在其上下左右贴30μg/片头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶和氨曲南纸片，其纸片中心距复合剂纸片中心30mm或20mm，35℃孵育18h～20h。如周围4个药敏纸片中有任何一个抑菌环在靠近复合纸片一侧的边缘出现扩大或增强，说明该菌产ESBLs。如结果可疑或协同试验阴性，但KB药敏结果提示可能产ESBLs，则用确证试验验证，结果按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)2002年推荐的标准判读。ESBLs阴性质控株为大肠埃希菌ATCC25922，ESBLs阳性质控菌为ATCC700603。

2结果

2.1ESBLs检出率3年中从下呼吸道感染标本中共检出256株肺炎克雷伯菌，其中有94株产ESBLs，检出率为36.7%(94/256)，较卢小军等［4］报道的19.6%要高得多，较朱冬林等［5］报道的43.1%低。3年中呼吸科下呼吸道感染标本中产ESBLs肺炎克雷伯菌分离率，分别为33.3%(20/60)、37.5%(30/80)、37.9%(44/116)。

2.2产ESBLs和非产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药情况(中介归于耐药)产ESBLs的肺炎克雷伯菌对亚胺培南全部敏感，对头孢派酮/舒巴坦等加酶抑制剂的药物耐药率从2003年2.0%上升到2005年的11.8%，对头孢唑林、头孢噻肟、头孢曲松、庆大霉素、环丙沙星耐药突出，均超过80%，有的超过90%，对氨苄西林100%耐药，而非产ESBLs菌株对上述除氨苄西林外的其他抗生素，均表现出较好的敏感率。结果见表1。

表1256株肺炎克雷伯菌耐药表型结果（略）

3讨论

有文献［6］报道，肺炎克雷伯菌在痰培养所得革兰阴性杆菌中占第二位，肺炎克雷伯菌是最常见的产ESBLs菌株。细菌产ESBLs多由于使用了超广谱β内酰胺类抗生素，使它们原有经典酶TEM1、TEM2及SHV1经点的突变而形成，它们可以不同程度的水解β内酰胺类抗生素，如青霉素类、三代头孢菌素等。肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类耐药的一个重要机制为钝化酶的产生。ESBLs抑制剂与β内酰胺类抗生素联合应用是治疗耐药菌的有效途径之一。值得注意的是亚胺培南本身对ESBLs稳定，在临床上能有效治疗产酶细菌的感染，但同时亚胺培南却是一种强有力的ESBLs诱导剂，能诱导产生大量的ESBLs，其作用的两面性值得重视［7］。

参考文献：

［1］王志军，倪语星.超广谱TEMβ内酰胺酶检测及分型［J］.中华医学检验杂志，1999，22(6)：347348.

［2］熊剑辉.Etest用于革兰阴性杆菌超广谱β内酰胺酶测定［J］.临床检验杂志，1998，16(2)：138140.

［3］WienerJ,QuinnJP,BradfordPA,etal.MultipleantibioticresistantKlebsiellaandEscherichiacoliinnursinghomes［J］.JAMA,1999,281:517523.

［4］卢小军，吴升，张丽君，等.产超广谱β内酰胺酶菌在老年患者中的感染［J］.中华医院感染学杂志，2003，13(6)：586587.

［5］朱冬林，张嵘.阴沟肠杆菌等细菌超广谱β内酰胺酶检测的探讨［J］.上海医学检验杂志，2002，17(6)：355357.

［6］陈灏珠.实用内科学［M］.第10版.北京：人民卫生出版社，1998:432433.

［7］蒋燕群，王坚强，陈珊珊，等.用双纸片法检测革兰阴性杆菌的诱导型β内酰胺酶［J］.上海医学检验杂志，1999，14(3)：142144.