益母草药效成分及其人工种植研究论文

导语：益母草药效成分及其人工种植研究论文一文来源于网友上传，不代表本站观点，若需要原创文章可咨询客服老师，欢迎参考。

【摘要】目的考察益母草野生品和栽培品中主要有效成分水苏碱和多糖的含量，为人工种植益母草的必要性提供依据。方法分别采用薄层扫描法测定水苏碱，分光光度法测定多糖。结果栽培品中水苏碱和多糖含量普遍比野生品含量高，且含量变化有一定规律性。结论为保证益母草药材质量，应该采用人工种植为好。

【关键词】益母草；水苏碱；多糖

益母草来源于唇形科植物益母草(LeonurusjaponicusHoutt.)的新鲜或干燥的地上部分，为妇科经产要药。本实验为考察黔产益母草野生品和栽培品的质量，通过测定益母草中主要有效成分水苏碱和多糖的含量[3，4]，对益母草野生品和栽培品的质量进行比较，为人工种植益母草提供依据，达到提高益母草药材质量的目的。

一、仪器、试剂与药材

1仪器与试剂CS-9301PC双波长飞点层析扫描仪(日本岛津公司)；CAMAGLINOMATV半自动点样仪(瑞士卡马公司)；定量毛细管(美国MICROCAPS公司)；XS205双量程电子分析天平，量程：万分之一和十万分之一两档(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；硅胶G板(青岛海洋化工厂)；DU-70紫外-可见分光光度计(美国BACKMAN公司)；盐酸水苏碱对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：110712-200407；苯酚、浓硫酸和葡萄糖等其他化学试剂均为分析纯；水为蒸馏水。

2药材分别采自贵州省惠水县和贵阳市郊乌当，药材样品均经贵阳中医学院魏升华讲师鉴定为红花益母草LeonurusjaponicusHoutt.，本实验均用益母草地上部分。

二、方法与结果

2.1水苏碱的分析

2.1.1供试品溶液和对照品溶液的制备精密称取干燥益母草样品粉末约1g，置圆底烧瓶中，加入乙醇约50ml，加热回流1.5h，放冷，滤过，滤渣及回流容器用乙醇50ml分次洗涤，合并滤液和洗液，蒸干，残渣用乙醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，离心(5000转/min，5min)，取上清液作为供试品溶液。精密称取在105℃干燥3h的水苏碱对照品适量，加乙醇制成每1ml含2.030mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.2薄层色谱分析条件用硅胶G薄层板，点状点样，点样量10μl。以正丁醇-盐酸-乙酸乙酯(8：3：1)为展开剂，展开，取出晾干后，在105℃加热15min，放冷，喷以稀碘化铋钾试液-1%三氯化铁乙醇溶液(10：1)混合溶液至斑点显色清晰，晾干，立即在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布密封。反射法单波长锯齿形扫描。波长λS=510nm，狭缝0.4mm×0.4mm。在上述分析条件下对薄层色谱进行扫描分析。

2.1.3线性关系的考察用半自动点样仪在同一硅胶G薄层板上点盐苏碱对照溶液2、4、6、8、10、12、14μl，用上述条件展开显色后进行薄层扫描测定，以点样量(μg)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，求出回归方程为：Y=185.75X-411.09，r=0.996，表明水苏碱在4.06～28.42μg范围内线性关系良好。由于直线不通过原点，因此用外标两点法计算含量。

2.1.4稳定性考察在同一块薄层板上分别点8μl样品溶液和10μl对照品溶液，依上述色谱条件和扫描条件操作，分别在0、0.5、1、1.5、2h扫描测定盐酸水苏碱峰面积，结果峰面积的RSD为0.38%，表明盐酸水苏碱在本实验条件下2h内稳定。

2.1.5同板精密度和异板精密度试验分别在同一薄层板上和在另外5块薄层板上点同一供试品溶液五个点，每个点10μl，并以水苏碱对照品溶液3、8μl作为随行标准，分别扫描测定其峰面积，按上述分析条件测定，以峰面积计算，同板精密度RSD为1.00%，异板精密度RSD为1.90%。

2.1.6重复性试验和回收率试验分别称取同一益母草药材5份，按2.1.1“供试品溶液的制备”和2.1.2“薄层色谱分析条件”操作，测得水苏碱平均含量为1.09%，RSD为2.52%。精密称取盐酸水苏碱平均含量为1.09%的益母草药材5份，每份约0.5g，精密加入水苏碱对照品5.00mg，同时加入约50ml乙醇回流提取，按上述“供试品溶液的制备”方法和“薄层色谱分析条件”进行溶液制备和测定，结果5次回收率平均值：99.76%，RSD=1.34%。

2.1.7含量测定与结果按上述“供试品溶液制备方法”和“薄层色谱分析条件”对各样品进行溶液制备和测定，结果见表1。表1益母草样品中水苏碱和多糖含量测定结果

2.2多糖的分析

2.2.1供试品溶液和对照品溶液的制备精密称取干燥益母草粉末约0.3g，置圆底烧瓶中，精密加入50ml蒸馏水后称重，加热回流提取3h，冷却后称重，用水补足损失量，摇匀，过滤，弃去初滤液，取续滤液4ml于50ml容量瓶中，用水定容至刻度，作样品液。从样品液中精密量取2ml于25ml比色管中，分别精密加入5%的苯酚1ml、浓硫酸5ml，摇匀，置沸水浴中保持15min后取出，冷至室温，即为供试品溶液。精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖适量，用水制成每1ml含56.17μg的溶液，作对照品溶液。

2.2.2标准曲线的制作精密吸取56.17μg/ml葡萄糖对照品溶液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.0ml，分别置于25ml比色管中，体积不足2ml者用水补足至2ml，以下按2.2.1“供试品溶液的制备”项下“分别精密加入5%的苯酚1ml”起，同法操作即得。以相应试剂为空白，于491nm波长处测定吸光度。以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=0.0592C-0.00113；r=0.9997

结果表明葡萄糖在2.1064～14.0425μg/ml范围内，线性关系良好。

2.2.3精密度和稳定性实验用同一供试品溶液连续5次测定其吸光度和每隔1h测定一次吸光度，共测定4次，计算出精密度实验的RSD%为0.22；稳定性试验的RSD%为0.55。表明仪器精密度良好，显色后的溶液3h内稳定。

2.2.4重复性试验和回收率试验精密称取2005年6月采收的惠水野生益母草样品5份，每份约0.3g，按2.2.1“供试品溶液的制备”方法制备供试溶液，按2.2.2“标准曲线的制作”项下的相同测试条件进行测定。样品含量平均值为4.46%，RSD%为0.79。精密称取已知多糖平均含量为4.46%的益母草供试品5份，每份约0.16g，分别精密加入浓度为0.142g/ml的葡萄糖对照品溶液50ml，以下按2.2.1“供试品溶液的制备”方法制备供试溶液，按2.2.2“标准曲线的制作”项下的相同测试条件进行测定，结果平均回收率为98.87%，RSD%为0.71。

2.2.5样品含量测定按“2.2.1”项供试品溶液制备方法制备供试品溶液，用“2.2.2”“标准曲线的制作”项下的相同测试条件对各样品进行多糖含量测定(含量按葡萄糖计)结果。

三、讨论

水苏碱是益母草的主要药用成分之一，而多糖虽不是益母草的主要药用成分，但对许多疾病的辅助治疗作用却不可忽视。由实验数据看出，人工种植益母草中水苏碱含量在开花前随生长年限变化呈递增趋势，此时益母草中的多糖含量也相对较高。而到果期水苏碱含量明显下降的同时，多糖含量也明显下降。多糖类化合物广泛存在于植物细胞壁中，也就是说多糖的存在是水苏碱在植物体内合成的一种保障，果期由于植物体内大量消耗糖分，水苏碱的合成也相应降低，含量也随之降低。人工种植益母草与野生益母草相比，由于注意管理，人工种植益母草中水苏碱和多糖含量较高，而野生益母草中却相对较低。公务员之家

从人工种植益母草中水苏碱和多糖含量变化有一定规律来看，中药制剂的质量首先是原料药材的质量要得到保证，其质量才可控，而野生益母草生长年限难以确定，水苏碱和多糖含量变化也不易掌握，因此用其作为原料生产的复方制剂质量也难以保证。人工种植益母草是中药制剂质量控制的一个发展方向，掌握其最佳采收时间，控制原料药材的质量，也就保证了中药制剂质量的稳定。所以，益母草由野生转为人工种植势在必行。

【参考文献】

1范美华，王健鑫，李鹏，等.益母草的研究进展.中药药物与临床，2006，6(7)：528.

2张娴，彭国平.益母草属化学成分研究进展.天然产物研究与开发，2003，15(2)：162-166.

3刘吉成，牛英才.多糖药物学.北京：人民卫生出版社，2008，1.

4吴华振.植物多糖的药理作用及应用进展.实用医技杂志，2005，12(7)：1803-1804.

5国家药典委员会.中国药典(一部).北京：化学工业出版社，2005，203.

6高言明，陈海云，龚飞.中药金樱子不同采收期多糖的含量分析.贵阳中医学院学报，2005，27(1)：57-58.