加拿大一枝黄花药理作用

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1器材

1.1动物清洁级昆明种小鼠，体重（20±2）g，雌雄兼用，由中科院上海实验动物中心提供（动物合格证号：SCXK沪2003-0003）。

1.2药物加拿大一枝黄花，200409采于上海，由上海交通大学药学院李晓波教授鉴定。干燥全草粉碎过40目筛，95%乙醇渗漉提取，回收乙醇后得提取物，干燥备用。

1.3试剂吲哚美辛片，上海辛帕斯制药有限公司，批号050601；阿司匹林片，上海信谊百路达药业有限公司，批号0554010；盐酸依普拉酮片，上海衡山制药有限公司，批号040201；氨水，分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号050120；其他试剂均为国产分析纯。

1.4仪器YLS-6A智能热板仪，山东省医学科学研究院设备站；754型紫外分光光度计，上海精密科学仪器有限公司。

1.5统计软件SPSS11.5，进行One-WayANOVA检验。

2方法

2.1镇痛作用研究［6］

2.1.1对热刺激小鼠痛阈值的影响将健康雌性小鼠置于(55±0.5)℃热板仪上,以小鼠舔后足反应的潜伏期为痛阈指标,记录小鼠痛阈值，剔除痛阈值小于5s或大于30s或跳跃的小鼠,取预选合格的小鼠间隔5min再重新测定痛阈值一次，取两次痛阈值的平均值作为该鼠给药前的平均痛阈值。将符合标准的40只小鼠随机分为蒸馏水组、吲哚美辛组（50mg/kg）、加拿大一枝黄花低剂量组（相当于生药2g/kg）、加拿大一枝黄花高剂量组（相当于生药6g/kg）4组。灌胃给药，观察并记录给药后30，60，90，120min的痛阈值，痛阈值大于60s的以60s计。

2.1.2对醋酸致小鼠扭体反应的影响健康小鼠40只，雌雄各半，随机分为蒸馏水组、阿司匹林组（200mg/kg）、加拿大一枝黄花低剂量组（相当于生药2g/kg）、加拿大一枝黄花高剂量组（相当于生药6g/kg）4组。灌胃给药30min后，腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/只，观察并记录小鼠首次扭体时间和15min内小鼠的扭体次数。按下式计算镇痛率：

镇痛率（%）=蒸馏水组扭体次数-试药组扭体次数蒸馏水组扭体次数×100%

2.2镇咳作用研究［6］40只健康小鼠，雌雄各半。随机分为蒸馏水组、盐酸依普拉酮组（20mg/kg）、加拿大一枝黄花低剂量组（相当于生药2g/kg）、加拿大一枝黄花高剂量组（相当于生药6g/kg）4组。灌胃给药30min后，将每只小鼠置于自制的引咳装置中，使小鼠接受饱和氨水的喷雾刺激5s，从喷雾氨水开始计时，以腹肌收缩，张大嘴为准，观察和记录小鼠的咳嗽潜伏期和2min内咳嗽次数。

2.3祛痰作用研究［7］健康小鼠40只，雌雄各半。随机分为蒸馏水组、氯化铵组（2g/kg）、加拿大一枝黄花低剂量组（相当于生药2g/kg）、加拿大一枝黄花高剂量组（相当于生药6g/kg）4组。。每只小鼠灌胃给药30min后，腹腔注射5%酚红生理盐水溶液10ml/kg，30min后脱臼处死，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨至气管分支处的一段气管，放入盛有1ml蒸馏水的试管中，再加入1mol/L氢氧化钠溶液0.1ml，以1ml蒸馏水/0.1ml氢氧化钠溶液为空白，546nm处测量溶液的吸光度，以吸光度A作为评价指标。

2.4急性毒性实验［6］LD50的测定：健康小鼠30只，雌雄各半，按体重随机分为5组，每组6只，实验前禁食12h，可自由饮水；灌胃给药，剂量分别为：0.1，0.5，2.5，12.5，62.5g/kg，连续观察7d，每天记录小鼠体重及死亡数目，并观察小鼠反应情况。最大耐受量实验：健康小鼠20只，雌雄各半，按体重随机分为蒸馏水组、加拿大一枝黄花组（81.0g/kg），实验前禁食12h，可自由饮水；灌胃给药，连续观察7d，每天记录小鼠体重及死亡数目，并观察小鼠反应情况。7d后处死全部小鼠，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等脏器的变化。

3结果

3.1镇痛作用

3.1.1对热刺激小鼠痛阈值的影响

结果见表1。与蒸馏水组比较，加拿大一枝黄花高、低剂量组小鼠的痛阈值均无明显提高。表1加拿大一枝黄花对热刺激小鼠痛阈值的影响(略)

3.1.2对醋酸致小鼠扭体反应的影响

结果见表2。由表2可见，加拿大一枝黄花明显延长了醋酸致小鼠扭体的出现时间，抑制其扭体次数，高剂量组的镇痛率与阳性药效果相近，说明加拿大一枝黄花具有明显的镇痛作用。表2加拿大一枝黄花对醋酸致小鼠扭体反应的影响(略)

3.2镇咳作用

结果见表3。与对照组相比，高、低剂量的加拿大一枝黄花均能显著抑制氨水诱发小鼠的咳嗽潜伏期和咳嗽次数，提示其具有镇咳作用。表3加拿大一枝黄花对氨水致小鼠咳嗽反应的影响(略)

3.3祛痰作用

结果见表4。由表4可见高、低剂量的加拿大一枝黄花均能显著增加小鼠气管的酚红排泌量，效果优于氯化铵，且呈量-效依赖关系，提示本品能提高小鼠的气管分泌功能，具有祛痰作用。表4加拿大一枝黄花的祛痰作用(略)

急性毒性实验在较大剂量（62.5g/kg）下小鼠无死亡，未能得出LD50，故改做最大给药量实验评价其急性毒性，结果实验给药至81.0g/kg也未引起小鼠死亡；除自发活动轻度减少外，未观察到其他急性毒性反应，即最大耐受量可达81.0g/kg（相当于人体常用药量的324倍）。同时与蒸馏水组相比对小鼠体重增加无明显影响（见表5），说明不影响小鼠的正常生长，可认为加拿大一枝黄花无明显急性毒性。表5加拿大一枝黄花对小鼠体重的影响(略)

4讨论

一枝黄花属植物广泛分布于北半球，我国原产4种，其中一枝黄花SolidagodecurrensL.和毛果一枝黄花SolidagovirgaureaL.在我国均以全草入药，有退热行血、疏风解毒、消肿止痛的功效。加拿大一枝黄花为生物入侵种，近年在我国部分地区迅速蔓延，我国规定其为林业上的检疫性有害植物，国内未见有药用报道。但本种也是欧美著名植物药，已被欧洲药典收录，国外对其化学成分和药理作用方面的研究较多，而国内有关加拿大一枝黄花的研究相对较少，体内药理作用研究尚未见报道，因此对其进行药理作用研究具有重要意义。本文从多个方面对其进行了药理作用研究，首次发现国产加拿大一枝黄花具有明显的镇痛、镇咳和祛痰作用，且无明显毒性，与国产同属植物一枝黄花SolidagodecurrensL.具有相类似的功效，为合理对待这一入侵物种提供了一定的依据。

加拿大一枝黄花原产于北美，作为一种庭院装饰植物于18世纪首次从美洲东北部引入欧洲。在1850年左右从中欧开始传播,在19世纪50年代遍布欧洲。据报道，欧美产加拿大一枝黄花具有广泛的药用前景，地上部分具有杀菌消炎,增强肾脏功能的作用，用于治疗外伤、慢性肾炎、膀胱炎、尿结石、风湿等疾病,并可用于糖尿病的辅助治疗［8］；其挥发油具有促进循环，消除疲劳的作用。近年的研究还发现在其提取物中具有多种能抑制DNA聚合酶和蛋白质合成酶活性的物质［9］。国产加拿大一枝黄花是否具有相同功效，值得深入研究。国产加拿大一枝黄花如能在我国药用，一方面可以变废为宝，另一方面还可有效控制其蔓延，因此加强国产加拿大一枝黄花的药理作用研究，具有非常重要的意义。

【参考文献】

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［2］ApátiPál,Houghton,PeterJ,etal.HPLCinvestigationofantioxidantcomponentsinSolidagoherba［J］.ActaPharmHung,2004,74（4)：223.

［3］李振宇，解炎.中国外来入侵种［M］.北京：中国林业出版社，2002：170.

［4］张劲松，李博，陈家宽，等.加拿大一枝黄花挥发油成分及其抗菌活性［J］.复旦学报(自然科学版)，2006，45（3）：412.

［5］王开金，陈列忠，李宁，等.加拿大一枝黄花黄酮类成分及抗氧化与自由基消除活性的研究［J］.中国药学杂志，2006，41（7）：493.

［6］徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学,第3版［M］.北京：人民卫生出版社,2002：882，1362，227.

［7］陈奇，沈映君，孙学蕙，等.中药药理实验［M］.贵阳：贵州人民出版社，1988：158.

［8］McCuneLM,JohnsT.AntioxidantactivityinmedicinalplantsassociatedwiththesymptomsofdiabetesmellitususedbytheindigenouspeoplesoftheNorthAmericanborealforest［J］.JEthnopharmacol，2002，82（23)：197-205.

［9］ChaturvedulaVS,ZhouBN，GaoZ，etal.NewlupanetriterpenoidsfromSolidagocanadensisthatinhibitthelyaseactivityofDNApolymerasebeta［J］.BioorgMedChem，2004，12（23)：6271.