野菊花中绿原酸提取工艺分析论文

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1仪器与材料

1.1仪器

UV/VIS916型分光光度计(澳大利亚GBC)，ZK-82A型真空干燥箱(上海实验仪器总厂)，FZ102型微型植物试样粉碎机(河北省黄骅市振兴机电仪器厂)，SX8200H型台式超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，HH-S2系列恒温水浴锅(江苏省金坛市环宇科学仪器厂)。

1.2材料

绿原酸标准品购自中国药品生物制定检定所，野菊花购自邦健药房（50℃下烘干3h，粉碎后备用），其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备准确称取绿原酸对照品5.2mg置于250ml量瓶中，用70%的乙醇溶液溶解，定容即得。

2.2测定波长的选择取对照品溶液1ml，置于10ml量瓶中，用70%的乙醇定容。以70%乙醇溶液为参比液，于紫外分光光度计上在200～400nm范围内进行扫描最大吸收波长，结果在329.6nm处有最大吸收峰，由此选择329.6nm作为测定波长。

2.3方法学考察

2.3.1标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0ml于10只10ml量瓶，以70%乙醇定容。于紫外分光光度计上在λ=329.6nm处测定其吸光度。以吸光度A为纵坐标，绿原酸浓度C为横坐标，绘制标准曲线。经线性回归得回归方程为：A＝51.133C－0.0058，r=0.9997，结果显示绿原酸在0.416～4.576g·L-1范围内具有良好的线性关系。

2.3.2精密度实验精确称取野菊花约1g，加入10ml在70℃水浴提取60min，准确吸取提取液1ml，置于10ml量瓶中，以70%乙醇定容。以70%乙醇作空白，测定其吸光度。连续测定6次，RSD=0.72%，表明仪器精密度较好。

2.3.3稳定性实验准确吸取“2.3.2”项所得提取液1ml，置于10ml量瓶中，以70%乙醇定容。以70%乙醇作空白，分别于0，10，20，30，40，50min测定其吸光度，连续测定6次，RSD=0.38%，表明提取液在1h内较稳定。

2.3.4重复性实验精密称取野菊花粉末约1g，按“2.3.2”项法平行制备3份提取液，按“2.3.2”项方法实验，RSD=0.25%，说明方法重复性较好。

2.3.5加样回收率实验

向已知含量的野菊花中加入不同量的绿原酸对照品进行实验，用紫外分光光度计测定其吸光度，得出绿原酸含量。平均回收率为100.89%，RSD为1.45%，表明方法回收率较好。

2.4正交实验设计［3，4］

2.4.1水浴提取法

在粒度、提取工艺相同的条件下，考察水浴温度、乙醇浓度、液固比、提取时间等因素，选用L9(34)正交表安排实验。见表1。表1水浴提取因素水平（略）

2.4.2超声波提取法在粒度、提取工艺相同条件下，考察浸渍时间、乙醇浓度、液固比、超声时间等因素，选用L9(34)正交表安排实验。见表2。表2超声波法因素水平（略）

2.5野菊花的测定［5］精密称取野菊花约1g，置于100ml圆底烧瓶中，按“2.4”项进行正交实验，提取液抽滤，滤液定量转移至100ml量瓶中，70%乙醇定容。精密吸取滤液1ml于10ml量瓶中，按标准曲线制备方法测定其吸光度，由标准吸收曲线计算出绿原酸含量。结果见表3。表3正交实验方案及结果分析（略）

2.6方差分析

由表3可知，水浴提取法的最佳提取条件为：A3B2C2D1，即液固比为12∶1的70%乙醇于80℃水浴提取40min。在此条件下，绿原酸含量达到0.35%。从极差分析知各因素对绿原酸提取的影响大小顺序分别是提取温度>液固比>乙醇浓度>提取时间。

超声提取法的最佳提取条件为：A2B2C2D3，即液固比为15∶1的60%乙醇预浸渍40min，超声提取45min。在此条件下，绿原酸的质量分数达到0.36%。从极差分析知各因素对绿原酸提取的影响大小顺序分别是乙醇浓度>浸渍时间>超声时间>液固比。

3结论

通过正交实验，确定了水浴提取法的最佳提取条件为：液固比为12∶1的70%乙醇于80℃水浴提取40min。在此条件下，绿原酸含量达到0.35%。超声提取法的最佳提取条件为：液固比为15∶1的60%乙醇预浸渍40min，超声提取45min。在此条件下，绿原酸的质量分数达到0.36%。

水浴法与超声法中，影响绿原酸的提取的主要因素基本相同，所不同的是超声条件下提取效果优于水浴。其原因可为：①超声的空化作用对细胞膜的破坏有助于绿原酸的释放与溶出；②超声波使浸提剂和提取物不断振荡，有助于溶质的扩散；③超声的热效应使水介质温度基本维持在60℃，对样品有水浴的效果。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社,2005:219.

［2］高锦明,张鞍灵,张康健.绿原酸分布、提取生物活性研究综述［J］.西北林学院学报,1999,14(2):73.

［3］郑用熙.分析化学中的数理统计方法［M］.北京：科学出版社,1986.

［4］克洛福德.杜连耀,应崇福（译）.超声工程［M］.北京:科学出版社,1996.

［5］陈国平,洪立策.黄山野菊花中绿原酸含量的测定［J］.化工时刊,2006,20(4):50.

【摘要】目的优选野菊花中绿原酸的提取工艺。方法设计正交实验，以绿原酸含量为考察指标对提取工艺进行优化。结果水浴提取法最优工艺为：液固比为12：1的70%乙醇于80℃水浴提取40min。在此条件下，绿原酸的质量分数达到0.35%。超声的最佳提取条件为：液固比为15：1的60%乙醇预浸渍40min，超声提取45min。在此条件下，绿原酸的质量分数达到0.36%。超声法优于水浴法。结论以该工艺提取绿原酸，保证了较高的绿原酸质量分数，优化了野菊花中绿原酸的提取工艺。

【关键词】野菊花；绿原酸；正交实验；分光光度法；提取工艺