染料木素抗肿瘤作用分析论文

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1材料与方法

1.1MTT检测法

1.1.1肿瘤细胞的传代培养子宫内膜腺癌（JEC，遵义医学院微生物学教研室吴中明教授提供）、人肝癌SMMC7721（中科院上海生命研究院）用含10%小牛血清的RPMI－1640(Lot#1165062,GIBCO)培养液稀释成1×105·ml－1的细胞悬液，每个培养瓶2ml，置37℃、5％的CO2环境中进行体外培养，待瘤细胞在培养瓶底长至约80％细胞融合时，分瓶传代培养。

1.1.2分组实验分为空白对照组（NS）、阳性对照组（5-fliorouracil，5Fu，10-4mol·L-1。上海旭东海普药业有限公司，批号：031001），5个10倍梯度的试药组（10-4～10-8mol·L-1的染料木素，﹥95%，陕西赛德高科生物股份有限公司）和与10-4mol·L-1的染料木素相对应的溶媒对照组（含0.5%乙醇的NS）。

1.1.3操作用RPMI-1640完全培养液分别将肿瘤细胞稀释配制成5×104·ml－1的细胞悬液，接种于96孔培养板，每孔100μl，置37℃,5%的CO2环境中，进行体外培养，24h后加药，每孔10μl，设5个平行孔，空白对照组加入等量生理盐水；结束培养（24，48，72，96h）前4h，每孔加入5mg·ml－1的MTT溶液10μl，结束培养后小心吸弃上清液，每孔加入DMSO150μl，待甲臢完全溶解后于酶标仪（Sunrise,Australia）570nm处读出各孔的OD值。实验重复3次。

1.1.4评价指标评价指标为平均细胞抑制率(IR)。细胞抑制率（%）=(1一实验孔OD值/对照孔OD值)×100％。IR>50％为敏感，在30％～50％为低度敏感，小于30％为不敏感。

1.2台盼蓝排染法及生长曲线的绘制将对数生长期细胞制成浓度为5×104·ml－1细胞悬液，接种于24孔板，每孔1ml。置37℃,5%的CO2环境中培养24h，再行无血清培养48h。更换完全培养基，每孔加入药物100μl（空白对照组加等体积的生理盐水），每组各时间点均设2个平行孔。分别于药物作用1～7d，消化收集细胞，按台盼蓝排染法，用血细胞计数板在光镜下计数活细胞数。以时间为横坐标，活细胞数为纵坐标，绘制细胞生长曲线。

1.3统计学处理实验所得数据用±s表示，采用t检验进行各组间比较。

2结果

2.1MTT检测

2.1.1染料木素对JEC细胞体外增殖的影响MTT检测结果显示，随染料木素浓度的增加和时间的延长，染料木素对JEC细胞生长的抑制作用逐渐增强。结果见表1。其中，10-4mol·L-1的染料木素作用JEC细胞24，48，72和96h的抑制百分率分别为36.10%，55.00%，58.73%和62.21%，与5Fu间无显著差异（P>0.05）。表1染料木素对JEC细胞体外增殖的影响(略)

2.1.2染料木素对SMMC-7721细胞体外增殖的影响MTT检测结果显示，随着染料木素浓度的增加和时间的延长，染料木素对SMMC-7721的抑制作用逐渐增强。结果见表2。表2染料木素对SMMC7721细胞体外增殖的影响(±略)

2.2染料木素对JEC和SMMC-7721细胞生长的影响

2.2.1染料木素对JEC细胞生长的影响染料木素对JEC细胞的生长曲线显示，随着染料木素浓度的增加，生长曲线逐渐下移，10-4mol·L-1染料木素的生长曲线呈现与5Fu相似的下降趋势。见图1。

2.2.2染料木素对SMMC-7721细胞生长的影响染料木素对SMMC-7721细胞的生长曲线显示，随着染料木素浓度的增加，生长曲线逐渐下移。见图2。

3讨论

MTT检测结果显示，染料木素对JEC和SMMC-7721细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用，呈现剂量和时间依赖性。其中，在96h10-4mol·L-1的染料木素对JEC细胞的抑制百分率达62.21%，对SMMC-7721细胞的抑制百分率为31.87%。表明染料木素对JEC细胞敏感，对SMMC-7721低度敏感。该结果与染料木素对胃癌HGC227细胞系［6］、人肺癌细胞A549和人低分化胃腺癌细胞BGC-823［7］等的抑制作用相似。随着染料木素浓度的增加，JEC和SMMC-7721细胞的生长曲线均逐渐下移。其中，在10-4mol·L-1的染料木素作用下，JEC细胞的生长曲线呈现与5Fu相似的下降趋势，进一步表明染料木素具有一定的抗肿瘤作用。

染料木素是一种很有潜力的癌症化学预防剂，来源丰富，作用复杂，受到广泛关注。研究表明，染料木素具有雌激素作用、抗氧化作用以及抑制拓朴异构酶活性、抑制酪氨酸蛋白激酶活性、诱发细胞程序性死亡、抑制血管生成［2］等作用，但仍不能完全阐明其作用机制。染料木素抗肿瘤的机制有待深入研究。

【参考文献】

［1］WisemanH.RoleofDietaryPhyto-oestrogensintheProtectionAgainestCancerandHeartDisease［J］.BiochemSocTrans.1996,24(3):795.

［2］郑杰.金雀异黄素［J］.国外医学·卫生学手册,1998,25(5):260.

［3］PollardM，etal.InfluenceofIsoflavonesinSoyProteinIsolatesonDevelopmentofInducedProstate-relatedCancersinL-WRats［J］.Nutr-Cancer.1997,28(1):41.

［4］张义,赵春燕,孙亚芹，等.大豆异黄酮的抗肿瘤研究［J］.长春中医学院学报，2006，24（1）：60.

［5］AnnRKennedy:TheEvidenceforSoybeanProductsasCancerPreventiveAgents［J］.J.Nutr.1995,125:733.

［6］MatsukawaY,MaruiN,SakaiT,etal.GenisteinarrestscellcycleprogressionatG2-M［J］.CancerRes,1993,53(6):1328.

［7］马磊,楼凤昌.槐角中的抗癌活性成分［J］.中国天然药物，2006，4（2）：151.

【摘要】目的观察染料木素的体外抗肿瘤作用。方法采用溴化3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑(3-［4,5-dimethylthiazol-2-yl］-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT)检测法测定染料木素对子宫内膜腺癌细胞系（JEC）、人肝癌SMMC-7721细胞系体外增殖的影响，按台盼蓝排染法计数活细胞，绘制细胞生长曲线。结果MTT法检测显示，染料木素对JEC细胞和SMMC-7721细胞增殖的抑制作用呈现剂量和时间依赖性；随染料木素浓度的升高，JEC和SMMC-7721细胞的生长曲线逐渐下移，10-4mol·L-1的染料木素作用下的JEC细胞生长曲线呈现与5Fu相似的下降趋势。结论染料木素具有一定的抗肿瘤作用。

【关键词】染料木素肿瘤细胞生长