养血调经膏质量标准研究论文

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【摘要】目的建立养血调经膏的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中的丹参、人参、甘草进行定性，采用高效液相色谱法对制剂中的芍药苷进行定量。结果薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰；芍药苷在0.1872～0.9360μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率为98.24%，RSD为0.85%。结论此法操作简单，可靠，可用于养血调经膏的质量控制。

【关键词】养血调经膏；质量标准；高效液相色谱法；薄层色谱法

StudyontheQualityStandardofYangxueTiaojingElectuary

Abstract：ObjectiveToestablishthequalitycontrolmethodofYangxueTiaojingElectuary.MethodsTLCmethodwasusedtoidentifyRadixetRhizomaSalviaeMiltiorrhizae,RadixetRhizomaGinseng,RadixetRhizomaGlycyrrhizaeinYangxueTiaojingElectuary.ThecontentofPaeoniflorinwasdeterminedintheprescriptionbyHPLC.ResultsTheTLCspotsdevelopedwerefairlyclear,andtheblankshowednointerference.HPLCmethodshowedagoodlinearitybetween0.1872～0.9360μgwithanaveragerecoveryof98.24%,RSDwas0.85%.ConclusionThismethodisdependableandeasytooperate.ItcanbeusedtocontrolthequalityofYangxueTiaojingElectuary.

Keywords：YangxueYiaojingElectuary;Qualitystandard;HPLC;TLC

养血调经膏是由白芍、丹参、地黄、人参、银柴胡、甘草、黄芪等12味药制成的中药复方膏剂，具有补气养血、调经止带功效。用于气血两虚，身体瘦弱，腰膝酸软，月经不调，崩漏带下等症。方中丹参采用乙醇回流提取，其它药味采用水提。本实验采用薄层色谱法对方中丹参、人参、甘草进行了定性研究，采用高效液相色谱法对君药中的芍药苷进行了定量研究，建立了养血调经膏的质量控制方法。现将结果报道如下。

1仪器与试药

养血调经膏（自制）；人参皂苷Rg1，Re，Rb1对照品，甘草对照药材，丹参酮ⅡA对照品，芍药苷对照品（均来自中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂）；岛津LC10ATvp高效液相色谱仪，岛津SPDATvp检测器。

2方法与结果

2.1薄层鉴别

2.1.1丹参取本品70g，加甲醇140ml，振摇使混匀，超声30min，再离心20min，取上清液水浴蒸至稠膏状，加水20ml搅拌稀释，加氯仿振摇提取4次（30，30，20，20ml），合并氯仿液，水液备用（人参鉴别用），氯仿液挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取缺丹参阴性样品70g，同法制得缺丹参的阴性对照溶液。取丹参酮ⅡA对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取对照品溶液10μl，供试品溶液与缺丹参阴性对照溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结果见图1。

2.1.2人参取上述丹参鉴别项下的水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次（40，40，30ml），合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤3次，30ml/次。弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水20ml使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱（10g，内径1.5cm），用水50ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取缺人参阴性样品70g，同法制得缺人参的阴性对照溶液。另取人参皂苷Rg1，Re，Rb1对照品，加甲醇制成每毫升各含1mg的混合溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法［1］试验，吸取对照品溶液10μl，供试品溶液及阴性对照溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂正丁醇-醋酸乙酯-稀氨水（550）（4∶1∶5）10℃以下放置过夜的上层溶液，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结果见图2。

2.1.3甘草取本品100g，加甲醇200ml，振摇使混匀，超声30min，再离心20min，取上清液水浴蒸至无醇味，加水30ml搅拌稀释，用乙醚振摇提取2次，30ml/次。弃乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，50ml/次。合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，30ml/次。弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解，上聚酰胺柱（3g，内径1.5cm），用水洗至无色，用50%乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取缺甘草阴性样品100g，同法制得缺甘草的阴性对照溶液。另取甘草对照药材1.3g，加水100ml煎煮30min，水煎液离心20min后，用脱脂棉滤取上清液，滤液用乙醚振摇提取2次，按上述供试品溶液的制备方法制得对照药材溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取上述供试品溶液及阴性样品溶液各20μl，对照药材溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲苯-丙酮-甲酸（50∶25∶10∶1）溶液，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上显相同的一个黄色主斑点，阴性无干扰。结果见图3。

2.2含量测定

2.2.1色谱条件与系统适应性色谱柱为C18柱（4.6mm×250mm，5μm）（迪马公司）；流动相为乙腈-1%醋酸（14∶86）；流速1.0ml/min；检测波长230nm；进样10μl；理论板数为按芍药苷峰计不低于2500。

图1丹参TLC（略）

图2人参TLC（略）

图3甘草TLC（略）

2.2.2对照品溶液的制备取芍药苷对照品约10mg，精密称定，置20ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，即得（每毫升含芍药苷0.05mg）。

2.2.3供试品溶液的制备取本品3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率33kHz）40min，取出放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4线性关系的考察精密称取芍药苷对照品9.36mg，置20ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密移取1，2，3，4，5ml置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。各精密吸取10μl进样，按上述色谱条件测定，记录峰面积，并以峰面积为纵坐标，芍药苷进样量为横坐标作图，得一直线，以峰面积（Y）对芍药苷进样量（X）进行回归，得回归方程：Y=1130494.658X+13721,r=0.9991。实验结果表明，芍药苷在0.1872～0.9360μg范围内呈良好线性关系。

2.2.5精密度实验精密吸取同一芍药苷对照品溶液10μl，重复进样5次，记录芍药苷峰面积值，其RSD值为1.40%，表明本法精密度良好。

2.2.6稳定性实验取同一批样品制备的供试品溶液，每隔一定时间进样10μl，记录芍药苷峰面积值，其RSD值为1.15%，结果表明供试品溶液在8h内稳定。

2.2.7重复性实验取同一批样品，制备5份供试品溶液，按上述色谱条件测定，记录芍药苷峰面积值，计算芍药苷含量，其RSD值为1.98%，表明本法重复性良好。

2.2.8回收率实验采用加样回收法，取含量为0.383mg/g的养血调经膏约1.5g，精密称定，分别精密添加浓度为0.46，0.58,0.75mg/ml的芍药苷对照品溶液1ml再精密加入甲醇24ml，密塞，按上述2.2.3方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率；平均回收率为98.24%，其RSD值为0.85%，结果表明本法具有良好的回收率。见表1。

表1回收率测定结果（略）

2.2.9样品测定取10批样品，分别制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，以上述色谱条件测定，记录芍药苷峰面积值，按外标法计算芍药苷含量。根据10批样品含量测定结果，暂定成品中含白芍以芍药苷（C23H28O11）计，每克不得少于0.2mg。

图4缺白芍阴性样品色谱图（略）

图5芍药苷对照品色谱图（略）

图6养血调经膏样品色谱图（略）

3讨论

在人参的鉴别实验中，曾采用：（1）氯仿醋酸乙酯甲醇水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下层溶液［1］（2）正丁醇醋酸乙酯水（4∶1∶5）［2］的上层溶液为展开剂，均为斑点不够清晰，故采用本法中的展开剂。

在甘草的鉴别实验中，由于甘草中含有黄酮类成分，具有酚羟基，故在供试液制备时采用了上聚酰胺柱，使其与不含酚羟基的成分分离［3］；用水洗脱，去除部分亲水性杂质，减少TLC斑点，有利于甘草有效成分的分离；曾采用：（1）氯仿甲醇水（13∶7∶2）10℃以下放置分层的下层溶液；（2）氯仿甲醇溶液（9∶1）为展开剂，均不如本法中的展开剂分离效果好，斑点清晰，故采用本法中的展开剂。

芍药苷流动相的选择，曾选用甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶1）和乙腈水冰醋酸（10∶90∶1）为流动相，出峰时间较晚，效果均不理想，最后选用乙腈1%醋酸（14∶86）为流动相，其保留时间合适且峰型较好，达到基线分离，且阴性对照无干扰（图4～6），故选用乙腈1%醋酸（14∶86）为流动相。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：69，479，527，附录VIB.

［2］吕开清，龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别［M］.北京：人民卫生出版社，1997：20，167.

［3］肖崇厚.中药化学［M］.上海：上海科学技术出版社，1996：271，280.