全自动生化试剂分析论文

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【关键词】试剂排序

【摘要】目的探讨全自动生化分析仪的试剂的合理排序，以提高检测的准确度。方法终点法、酶法在不同条件下测定结果的比较。结果试剂排序不合理影响结果准确度。结论全自动生化分析仪的应用，应注意试剂的合理排列，以提高检测结果的准确性。

【关键词】试剂排序；误差；准确度

全自动生化分析仪的自净率是有限的，随着仪器使用周期延长及多种主客观因素的影响，增加了试剂探针污染携带率，检测试剂排序不当，就可能出现不可逆转的误差，直接影响检测结果的可靠性，很容易给临床造成无效数据，直接影响临床诊疗水平。通过长期临床检测实践并参考相关文献内容，归纳出临床生化检测试剂的排列顺序，使同一份标本在进行多项目检测时，尽量减小因试剂间相互干扰引起的误差，提高了批检测结果的准确性。

1材料与方法

1.1检测标本

（1）待检血清：门诊、住院病人静脉血清；（2）质控血清：Roche公司提供；（3）标准液：Roche公司、北京利德曼生化技术有限公司提供。

1.2检测试剂

Roche原装及北京利德曼生化技术有限公司成品试剂盒。

1.3检测仪器

RocheMODULAR2p生化分析仪。

1.4检测方法

各检测项目参数通过电脑输入，操作严格按照仪器使用手册及试剂说明进行。

2结果与原则

2.1试剂的排列顺序与方法学

见表1。表1试剂的排列顺序与方法学（略）

2.2试剂排序原则

2.2.1按反应所需pH

（1）pH＜5放在前。如DBI、TBI、ALB；（2）pH≈7。如ALT、AST、HBDH、BUN、CK-MB、CK、Cho、TG、HDL、Glu、UA；（3）pH＞8。如：γ-GT、ALP、LDH、Ca、GSP、Cr、TP。

2.2.2按试剂所含成分

（1）缓冲液成分。如磷酸盐缓冲液，Tris缓冲液；（2）辅酶种类。如NADH、NADPH。

2.2.3按检测反应的性质

（1）终点法，速率法，免疫比浊法；（2）双缩脲法测TP放于末位，利用双缩脲试剂去蛋白去污的作用；（3）苦味酸试剂污染较重，且不易清除，尽量往后面放。

2.3实验结果

2.3.1终点法

见表2、表3。表2pH值的影响（略）表3反应物干扰（略）

2.3.2速率法

见表4、表5。表4pH值的影响（略）表5反应物的影响（略）

3结论与分析

3.1结论

检测试剂合理有序排列，能减少探针携带误差，提高检测结果的准确度。

3.2分析

3.2.1终点反应

（1）pH值改变：反应物之间，反应物缓冲液之间因携带误差而使pH值改变，反应达不到终点。如双缩脲法测血清总蛋白，若其他条件相同，反应在碱性(pH值8～9)条件时，蛋白肽键（―CONH）才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应，完全测出血清蛋白的总量。若pH＜8时，总蛋白测定结果偏低，直接影响球蛋白、白蛋白/球蛋白的结果。（2）缓冲液混入反应物：磷酸盐缓冲液混入无机磷试剂，会使检测结果偏高。应将含有磷酸盐缓冲液的检测项目放于无机磷后检测。如GOD-POP法测Glu。

3.2.2速率法反应

（1）辅酶结构：辅酶参与反应时，其还原型、氧化型在340nm处曲线变化是相悖的，由携带误差使上升反应或下降反应不彻底，导致无效值出现。（2）最适pH值：酶活力测定在最适pH值时，反应最快，灵敏度最高，但是因为缓冲能力有限，可因携带误差使酶促反应出现无效值。大多数酶反应pH值在6.0～7.5之间；ALP、γ-GT、LDH须在碱性条件下最适宜。

3.2.3反应物间的作用

（1）CK检测不应在ALP、Ca检测之间，因CK反应液中加入EDTA-Na，能抑制ALP活性，结合Ca而使结果偏低。（2）ALT、AST反应液中均含有LDH，可干扰LDH检测结果。（3）Cho,Glu,UA,HBDH用PBS缓冲液，干扰无机磷测定。（4）BUN酶法测定因谷氨酸脱氢酶（GLDH）消耗NADH，不易放在底物NADH如ALT、AST项目前检测。（5）同时测定一个项目的不同标本（血、尿、脑脊液等）：应将不同标本放入不同通道测定。临床生化检测应注重试剂的合理排序，严格按规程操作，及时清除试剂瓶口处结晶，以免导致试剂水平检测错误；对于稳定性差的试剂尽量减少与空气接触面积；有沉淀、变浑浊及颜色异常改变的试剂及时更换，尽量清除无效值，提高生化检测的实效性；为临床诊断发挥其应有的作用。