全自动加样仪阳性污染现象

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1材料与方法

1.1标本来源

均为无偿献血者的血清标本。

1.2试剂

梅毒试剂为上海科华生物工程有限公司和北京华大吉比爱生物技术有限公司生产。

1.3仪器TECANRSP加样器。

1.4方法

严格按照试剂说明书要求编辑加样程序，RSP加样仪自动形成各项实验的前后加样顺序，不可人工改动，每板检测88份标本。初检加样顺序为HBsAg、抗-HCV、ALT、抗-HIV、TP（上海科华ELISA），复检加样顺序为抗-HIV、抗-HCV、HBsAg、TP（北京吉比爱ELISA）、ALT，八根加样针先吸入第一排足量标本血清，依次加入五项实验酶标板中，加样针内外冲洗两遍后，再加第二排标本，依次类推。加完样品后，酶标板放入FAME全自动分析系统进行检测。出现阳性后，对阳性标本再用手工复查小辫和试管。

收集出院污染23份标本，共10组，把这些标本按组混入正常标本中组成一板88份，每组内各标本在酶标板中的前后顺序不变，用TECANRSP加样器每次只加一项梅毒实验，分别做科华TP和吉比爱TP实验。

2结果

2.110组出现阳性污染现象标本的位置号及OD值

见表1。从表1中可看出，每组标本都是两个或三个阳性前后相邻，而且大部分是前排阳性标本OD值要强于后面的，手工复查试管和小辫，位置在前的阳性标本均为阳性，位置在后的标本试管和小辫均为阴性。表110组出现阳性污染现象标本的位置号及OD值（略）

2.210组污染标本的试管结果

把10组出现污染的标本按每组原来各标本的先后顺序排列，放在一块酶标板中做梅毒实验，用RSP加样仪单独只加一项梅毒实验酶标板，其位置号及结果见表2。从表中可看出，每组中第一个标本仍为阳性，第二个标本为阴性。表210组污染标本的试管结果（略）

3讨论

在四项常规实验中仅有梅毒实验出现前排孔阳性污染后排孔现象，而敏感度较高的HBsAg实验很少出现这种情况，而且新仪器出现污染现象的次数少，当仪器使用时间长后出现的次数逐渐增多。由于加样仪设有系统气隙［1］，可排除通过蒸馏水污染的情况。我们分析原因发现这与加样针保护膜被腐蚀有关。RSP全自动加样仪采用的是永久性金属加样器，仪器自动冲洗，针可长期使用，但仪器保养要求定期酸洗，使用时间久了会对加样针表面的保护膜造成腐蚀，导致加样针内壁不光滑。当遇到标本抗凝不好时，血浆中的纤维蛋白就会黏附在加样针内壁，不易冲洗干净，当加样针吸完阳性标本后再吸第二个标本，由于梅毒实验在加样顺序中被排在最后一个或倒数第二个，血清在加样针中停留的时间和在下降过程中经过的加样针长度相对其他三项ELISA实验都要长，因此被污染的机会就要大。当单独只加一块梅毒实验板时，没有出现污染情况，证明了这一点。由此可见污染现象与实验在加样程序中的先后顺序有关。在刚发现污染现象时，我们加大了酸洗的次数和浸泡时间，发现污染的次数反而有所增加，分析原因，可能为酸对已被破坏的保护膜腐蚀加重，从而导致污染现象的加重。通过长期的工作，我们认为各单位应根据自己的工作量定期更换RSP加样仪的加样针，酸洗时酸的浓度不能太大，每周酸洗一次即可。

【参考文献】

1刘玉振，方建华，温涛，等.用RSP全自动加样器加高粘稠度稀释液参数的优选.中国输血杂志，2004，17（1）：24.