肾石通颗粒质量标准论文

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1仪器与试药

1.1仪器WatersTM2695-2996（美国）高效液相色谱仪：包括2695型泵，2996型二极管阵列检测器，自动进样器，EmpowerTM数据处理软件；岛津AEG-45SM电子天平（日本）。

1.2试药原儿茶醛对照品（中国药品生物制品鉴定所提供，供含量测定用，批号0810-00004）；肾石通颗粒（重庆太极集团桐君阁药厂提供）；甲醇为色谱纯试剂，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1定性鉴别

2.1.1延胡索薄层鉴别［2］取本品30g，研细，加乙醇140ml超声提取两次，滤过，合并滤液并蒸干，残渣加水溶解，用氯仿80ml提取两次，合并氯仿液，氯仿层蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为延胡索供试品溶液；取缺延胡索的阴性样品同法制成缺延胡索的阴性对照液；取延胡索对照药材3g同法制成延胡索药材对照液；另称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液10μl，阴性对照液10μl，药材对照液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿-甲醇（7.5∶4∶1）为展开剂，预先饱和30min，在室温下展开，取出，晾干。用碘熏20min，取出，挥尽板上附着的碘，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。见图1。

2.1.2丹参的薄层鉴别取“2.1.1”中氯仿萃取后的水层再用醋酸乙酯80ml提取2次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为丹参供试品溶液；取缺丹参的阴性样品同法制成缺丹参的阴性对照液；取丹参对照药材0.5g同法制成丹参药材对照液；另称取原儿茶醛对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇-甲酸（10∶2∶1∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。见图2。

2.1.3王不留行的薄层鉴别［2］取“2.1.2”中醋酸乙酯萃取后的水层再用水饱和的正丁醇80ml提取2次，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加水适量使溶解，上D101大孔树脂柱（D101型，柱长8cm，内径1cm），用水洗至洗脱液无色，再用30%乙醇60ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为王不留行供试品溶液；取缺王不留行的阴性样品同法制成缺王不留行的阴性对照液；另称取王不留行对照药材粉末0.5g，加乙醇30ml超声提取两次，20min/次，滤过，合并滤液并蒸干，残渣加水15ml使溶解，用醋酸乙酯30ml提取2次，弃去醋酸乙酯层，水层再以水饱和的正丁醇40ml提取2次，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为王不留行对照药材溶液；同法制成王不留行药材溶液。吸取上述4种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和正丁醇-醋酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛的乙醇制硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。见图3。

2.1.4牛膝的薄层鉴别［2］取本品30g，研细，加乙醇140ml超声提取两次，20min/次，滤过，合并滤液并浓缩至约20ml，加盐酸2ml，沸水浴中回流1h，浓缩至约8ml，加水15ml，用石油醚（60～90℃）共50ml提取2次，合并石油醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取牛膝对照药材同法制成药材对照液；缺牛膝的阴性对照液同法制成缺牛膝的阴性对照液；另称取齐墩果酸对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇（30∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的斑点。阴性对照无干扰。见图4。

2.2含量测定

2.2.1色谱条件与系统适应性色谱柱为DikmaDiamonsilC18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相为甲醇-0.05%磷酸溶液（15∶85）；流速为1.0ml/min；检测波长280nm；柱温30℃。理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于3000。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取原儿茶醛对照品适量，加甲醇制成每毫升含4μg的溶液，摇匀，即得。

2.2.3供试品溶液的制备取本品颗粒约3.0g，精密称定，置锥形瓶中，加入70%乙醇超声提取3次，30ml/次，30min，离心，合并上清液，水浴浓缩，残渣用甲醇-水（15∶85）溶解并定容于25ml量瓶，摇匀，取上清液，用0.45μm滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.2.4系统适用性实验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μl注入高效液相色谱仪，色谱图见图5～7。原儿茶醛保留时间约为17.5min，与其他组分分离良好(R>1.5)，阴性对照色谱图在原儿茶醛峰位置无干扰。

2.2.5线性关系考察精密称取原儿茶醛对照品4.58mg置25ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容。配制成浓度为0.716，2.863，11.450，45.800，183.200μg/ml的对照品溶液，精密吸取上述各对照品溶液20μl，依选定的色谱条件进行测定，以原儿茶醛的浓度为横坐标，其峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，计算回归方程为：Y＝1.29×108X+6180（r＝0.9999），表明原儿茶醛在0.0143～3.6640μg范围内有良好的线性关系。

图5对照品色谱图图6供试品色谱图图7缺丹参阴性色谱图

2.2.6精密度实验精密吸取同一对照品溶液，重复进样测定6次，20μl/次，测定原儿茶醛峰面积积分值，结果RSD为0.30％(n=6)。

2.2.7稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8h各进样1次，测定原儿茶醛峰面积积分值，结果RSD为0.66％，表明供试品溶液在8h内稳定。

2.2.8重复性实验取同一批号样品（批号040501）粉末5份，精密称定，照“2.2.3”中方法制备，分别测定样品中原儿茶醛的含量，结果RSD为2.80％。表明重现性较好。

2.2.9回收率实验精密称取已知含量的本品（批号040501）粉末5份，分别精密加入浓度为26μg/ml的对照品溶液2.0ml，照“2.2.3”中方法制备5份供试品溶液，测定原儿茶醛含量，计算回收率。回收率测定结果见表1。结果表明本品具有良好的回收率。表1加样回收实验结果

2.3样品含量测定按“2.2.3”项下方法制备3批中试样品，分别注入液相色谱仪，测定样品中原儿茶醛的含量。3批样品结果见表2。表23批样品结果

3讨论

3.1薄层鉴别王不留行的薄层鉴别主要针对其中的生物碱类［3］与皂苷类成分，研究中发现很难鉴别出生物碱类成分，因此采用王不留行对照药材为对照，来鉴别皂苷类成分；延胡索以延胡索乙素为对照品进行鉴别，专属性好；丹参以其中的水溶性成分原儿茶醛为鉴别指标，专属性好；对牛膝的鉴别采用将其中的三萜皂苷水解成齐墩果酸后，以齐墩果酸对照品为指标进行鉴别，专属性好。因此薄层鉴别最终采用对王不留行、延胡索、丹参、牛膝进行鉴别。

3.2含量测定本实验对样品中原儿茶醛的提取方法进行了摸索，分别考察了不同浓度的乙醇和提取次数对原儿茶醛含量的影响。最后确定了提取条件为70%乙醇提取3次。

肾石通颗粒的原标准无薄层鉴别和含量测定，其质量控制无法满足现代药物制剂的要求，本文采用了薄层色谱法对方中王不留行等四味药进行薄层鉴别，HPLC法对丹参中原儿茶醛进行含量测定，结果准确可靠，操作简便，提高了药物制剂的质量标准，增强了药品质量的可控性，符合中药现代化的要求，可用于该制剂的质量控制与评价。

【参考文献】

［1］葛建华，龚旭东，窦志华，等.高效液相色谱法测定丹参口服液中原儿茶醛的含量［J］．时珍国医国药,2004,15（5）:266.

［2］国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005:49.

［3］鲁静.中药王不留行中刺桐碱和肥皂草苷分离鉴定和测定［J］.研究简报，1998,18（3）:163.

【摘要】目的建立肾石通颗粒的质量标准。方法采用TLC法对处方中延胡索、丹参、王不留行、牛膝进行定性鉴别；采用HPLC法测定制剂中原儿茶醛的含量。结果TLC法可检出延胡索、丹参、王不留行、牛膝的特征斑点；原儿茶醛的线性范围为0.0143～3.6640μg（r=0.9999），平均回收率98.27%（RSD=2.6%，n=5）。结论该方法简便可靠，专属性强，重现性好，可用作肾石通颗粒的质量控制。

【关键词】肾石通颗粒；薄层鉴别；原儿茶醛；高效液相色谱法