石荠苧总黄酮抗炎作用分析论文

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1器材

1．1动物ICR小鼠，体重18～22g；健康Wistar大鼠，清洁级，体重180～200g。均由中国科学院上海实验动物中心／上海斯莱克实验动物有限公司提供，动物合格证号：XYXK（浙）－2003－0003。

1．2药品与试剂石荠苧总黄酮（TFS），由资源鉴定教研室提供。地塞米松片（批号：061218），浙江仙居制药厂。阿司匹林肠溶片（批号：061102），南京白敬宇制药有限责任公司。氢化可的松（批号：061210），山东新华制药股份有限公司。角叉菜胶（批号：45F－0427），Sigma公司。伊文思蓝（批号：F20040213，进口分装），国药集团化学试剂有限公司。SOD检测试剂盒（批号：20070331），NO检测试剂盒（批号：20070331），MDA测定试剂盒（批号：20070402），总蛋白液体试剂盒（批号：20070403），均购自南京建成生物工程研究所。其他试剂均为分析纯。

1．3仪器TU－1900双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。BS110S电子天平，北京赛多利斯公司。微量移液器，ThermoLabsystemsFinnPipette。

2方法与结果

2．1对冰醋酸致小鼠毛细血管通透性的影响［6］取小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，分组及给药剂量见表1（模型组给予同体积生理盐水）。每日灌胃给药，1次／d，连续5d，末次给药后1h，尾静脉注射0．5％伊文思蓝生理盐水溶液0．1ml／10g，并同时腹腔注射0．6％醋酸溶液0．1ml／10g，20min后处死，用6ml生理盐水冲洗腹腔，洗液离心5min（1500r／min），取上清液在分光光度计590nm处，测定值。

表1TFS对小鼠毛细血管通透性的影响（略）

与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；n=10

由表1结果可知，TFS能显著抑制冰醋酸致小鼠毛细血管通透性，其中TFS25，50，100mg／kg剂量组与模型组相比较有显著意义。

2．2对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响［6］取小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，分组及给药剂量见表2（模型组给予同体积生理盐水）。每日灌胃给药，1次／d，连续5d，末次给药30min后，于小鼠右耳两面涂二甲苯0．05ml致炎，左耳不涂为正常耳；1h后处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用直径6mm打孔器在同一部位取下耳片，称重，以左右耳片重量差值表示炎性肿胀程度。由表2结果可知，TFS能显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，其中50，100mg／kg剂量组与模型组相比较有显著意义。

由表2结果可知，TFS能显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，其中50，100mg／kg剂量组与模型组相比较有显著意义。

表2TFS对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响（略）

与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；n=10

2．3对角叉菜胶引起足跖肿胀及炎症组织中PGE2的影响［7］取小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，分组及给药剂量见表3（模型组给予同体积生理盐水）。每日灌胃给药，1次／d，连续5d，末次给药后30min，于每只小鼠左后肢足跖注射1％角叉菜胶50μl，4h后颈椎脱臼处死小鼠，于踝关节处剪下左右后肢，称重，以左右后肢重量之差作为炎症肿胀程度。将剪下上述致炎足，剥皮，剪碎放入2ml生理盐水中浸泡24h，离心，取上清液0．1ml，加0．5mol／LKOH－甲醇溶液2ml，在50℃下异构化20min，用甲醇稀释至4ml，于278nm处测定OD值，以每克炎症组织相当的OD值表示PGE2的含量。

表3TFS对小鼠足跖肿胀及炎症组织PGE2含量的影响（略）

与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；n=10

由表3结果可知，TFS能显著抑制角叉菜胶致小鼠足趾肿胀及降低炎症组织PGE2含量，其中TFS50，100mg／kg剂量组与模型组相比较具有显著意义。

2．4对角叉菜胶致大鼠气囊炎的影响［6］取大鼠60只，按体重随机分为6组：空白组、模型组、阳性对照组及石荠苧总黄酮高、中、低剂量组。除空白组和模型组给予同等生理盐水外，每组动物均连续灌胃给药。于给药当天在大鼠背部肩胛区皮下注入空气10ml，第3天及第6天再次注入空气各5ml，维持气囊的膨胀度，并在末次给药后在大鼠背部气囊内注入2％角叉菜胶2ml诱发炎症，空白组注入相应体积生理盐水，3h后再给药1次，于致炎6h后麻醉，心脏取血，－20℃保存待测NO，MDA含量及SOD活性。处死动物，气囊内注入冰生理盐水（含肝素50U／ml）进行灌洗，收集灌洗液，测定总蛋白含量。结果见表4～5。

表4对大鼠气囊炎模型中渗出液总蛋白含量的影响（略）

与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；n=8

由表4～5结果可知，角叉菜胶致炎后，TFS能显著降低炎症介质渗出，其中50，75mg／kg剂量组均能降低大鼠气囊渗出液中总蛋白含量，降低血浆中NO，MDA含量，增强SOD活性，与模型组相比具有显著性差异，提示TFS具有显著的抗炎作用。

表5对大鼠气囊炎模型中血浆SOD活性，NO，MDA含量的影响（略）

与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；n=8

3讨论

炎症是在致炎因素作用下，由炎症细胞及其释放的炎症介质参与引起的一系列病理生理过程。在炎症反应中，致炎因素引起毛细血管扩张，通透性增加，中性粒细胞趋化、游走至炎症反应灶，释放炎症介质参与炎症反应［8，9］，并发生呼吸暴发，产生O2．－等活性氧自由基。这些氧自由基不仅能增加血管通透性，而且攻击生物膜磷脂中的多聚不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化，造成生物膜损伤，尤其脂质过氧化产物MDA毒性更强，能进一步加重炎症反应，而体内自由基清除剂如SOD可通过清除自由基，抑制脂质过氧化反应。PGE2作为一种炎症因子，存在于炎症组织中，可与缓激肽、白三烯等炎症介质起协同作用，引起血管扩张，加强组胺和缓激肽升高血管通透性的作用。通过抑制PGE2的合成，可以减轻炎症反应［10，11］。NO是一种重要的信使物质，同时也是一种重要的炎症介质，在炎症反应的许多环节发挥复杂的调节作用，其促炎症反应包括促进血管扩张，增强血管通透性，激活前列腺素合成酶等，研究认为急慢性炎症的发生均与NO有关系［12］。本实验结果显示，石荠苧总黄酮可明显抑制二甲苯致小鼠耳肿胀和角叉菜胶致小鼠足趾肿胀，降低炎症组织PGE2含量，降低冰醋酸致小鼠毛细血管通透性，减少角叉菜胶致大鼠气囊炎模型中渗出液总蛋白质含量，降低血浆NO，MDA含量，增强血浆SOD活性。提示石荠苧总黄酮具有显著的抗炎作用，其抗炎作用可能与其降低血管通透性，抑制PGE2，NO等炎症介质生成及增强清除氧自由基、抗脂质过氧化能力有关。

【参考文献】

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［10］阳洁，刘华钢．中药抗炎作用分子机制研究进展［J］．广西科学，2005，12（3）：208．

【摘要】目的观察石荠苧总黄酮抗炎作用并对其机制进行初步研究。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀，冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加，角叉菜胶致小鼠足跖肿胀及大鼠气囊炎等炎症模型，观察石荠苧总黄酮对不同炎症模型的抗炎作用，并测定蛋白质、前列腺素E2（PGE2），一氧化氮（NO），丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果石荠苧总黄酮能显著降低小鼠毛细血管通透性，抑制小鼠二甲苯致耳肿胀，减轻小鼠足跖肿胀，降低炎症组织PGE2含量，抑制角叉菜胶致大鼠气囊炎模型中渗出液总蛋白质含量，降低血浆NO，MDA含量，增强血浆SOD活性。结论石荠苧总黄酮具有明显的抗炎作用，其抗炎作用可能与其降低血管通透性、抑制PGE2，NO等炎症介质生成及增强清除氧自由基、抗脂质过氧化能力有关。

【关键词】石荠苧总黄酮抗炎作用机制