栀子苷镇痛分析论文

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1材料与方法

1.1材料

1.1.1药品与试剂杜冷丁，宜昌人福药业有限公司产品；栀子苷，本实验室提取纯化［2］；氢化可的松注射液，天津药业集团新郑股份有限公司产品；伊文思蓝，上海化学试剂采购供应站分装厂产品；角叉菜胶，Sigma公司。

1.1.2动物昆明种小鼠，18～22g，湖北省动物防疫中心提供。

1.2方法［3，4］

1.2.1栀子苷对小鼠镇痛作用的实验研究昆明种雌性小鼠40只，随机分为5组：生理盐水阴性对照组、栀子苷大剂量组（50mg/kg）、栀子苷中剂量组（25mg/kg）、栀子苷小剂量组（12.5mg/kg）、杜冷丁阳性对照组。分组前进行筛选，调节小鼠热板测痛仪，使温度保持在（55.0±0.2）℃，每次取1只小鼠，放入测痛仪内，记录自放入到出现舔后足所需的时间(s)作为该鼠的痛阈值。凡小于5s或大于30s出现舔后足者，以及喜跳跃者，一律弃去不用。取合格者进行分组，标记，重新测量两次，取平均值作为该鼠给药前的基础痛阈值。

栀子苷大、中、小剂量组连续3d按时按量皮下注射给药，给药1次/d，给药时间间隔24h/次。每天给药前，先称小鼠体重，按小鼠的体重计算给药量后再给药，阴性对照组给予等量体积的生理盐水。第4天时，给药组称重后按小鼠体重皮下注射给药，5组按顺序给药。每组给药后30，60，90，120min分别测定小鼠痛阈值。若小鼠在热板上停留60s后仍无痛反应，则取出，按60s计算。比较给药组和对照组的差异情况，作组间t检验。

1.2.2栀子苷对醋酸诱发小鼠扭体反应的影响

取昆明种小鼠40只，雌雄各半，按性别体重随机分为5组，每组8只，打点标记后送入动物房饲养。5组对应的分别是：生理盐水阴性对照组、栀子苷大剂量组（50mg/kg）、栀子苷中剂量组（25mg/kg）、栀子苷小剂量组（12.5mg/kg）、杜冷丁阳性对照组。前3d给药同“1.2.1”项。第4天时，称完小鼠体重后，空白对照组和给药组仍然按时按量皮下注射给药，并且与前次给药时间间隔24h，杜冷丁阳性对照组最后给药。依每只小鼠给药时间为准，杜冷丁阳性组小鼠给药300min后即阴性组及给药组给药1h后，腹腔注射0.6%的醋酸溶液0.1ml/10g。观察扭体反应并计算20min内小鼠扭体数。比较给药组和对照组的差异情况，作t检验。

1.2.3栀子苷对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

取昆明种小鼠40只，雄性，体重18～22g，按体重随机分为5组：生理盐水阴性对照组、栀子苷大剂量组（50mg/kg）、栀子苷中剂量组（25mg/kg）、栀子苷小剂量组（12.5mg/kg）、氢化可的松阳性对照组。每组8只，打点标记后送入动物房饲养。前3d给药同“1.2.1”项。第4天时，称完小鼠体重后，前4组仍然按时按量皮下注射给药，并且与前次给药时间间隔24h，氢化可的松阳性对照组最后给药。以每只小鼠给完药的时间为基准，氢化可的松阳性对照组给药30min后，给药组给药1h后，各组小鼠右耳前后两面涂抹二甲苯（0.02ml/只）；以每只小鼠致炎时间为准，15min后将小鼠脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下两耳，用8mm直径打孔器于左右耳廓相应部位各打一耳片，电子天平称重。以左右耳片的重量之差作为肿胀度。算出肿胀度和肿胀抑制率（%），并与对照组比较（t检验）。

1.2.4栀子苷对醋酸诱发小鼠毛细血管通透性的影响

小鼠分组同“1.2.3”项。前3d给药同“1.2.1”项。第4天时，称完小鼠体重后，3个给药组及阴性对照组仍然按时按量皮下注射给药，并且与前次给药时间间隔24h。氢化可的松阳性对照组最后给药，皮下注射氢化可的松。以每只小鼠给完药的时间为基准，氢化可的松阳性对照组给药30min后，空白及给药组给药1h后，尾静脉注射0.5%的伊文思蓝溶液0.1ml/10g体重，后立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1ml/10g体重，以注射完醋酸溶液的时间为基准，20min后脱颈椎处死小鼠，剪开腹腔，用8ml生理盐水分4次清洗腹腔，合并洗涤液，3000r/min离心15min，取上清液，于590nm处测定其吸光值。

1.2.5栀子苷对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响

小鼠分组同“1.2.3”项。前3d给药同“1.2.1”项。第4天时，称完小鼠体重后，空白对照组和3个给药组仍然按时按量皮下注射给药，并且与前次给药时间间隔24h，氢化可的松阳性对照组最后给药。依每只小鼠给药时间为准，氢化可的松阳性组小鼠给药30min后,阴性及给药组给药1h后致炎，即在每只动物右后足注射1%角叉菜胶50μl致炎；以每组小鼠致炎时间为准，致炎后3h处死小鼠，称左、右后足重量，以左、右后足重量的差值作为肿胀厚度。比较给药组和对照组的差异情况，作t检验。

1.2.6栀子苷对炎症组织渗出液中炎症介质含量PGE2的OD值的影响

将第“1.2.5”项实验中小鼠的致炎足剪碎后放入相应的标记瓶中，各瓶中加入3ml生理盐水，将致炎足浸泡24h。浸泡完毕以后将浸出液离心3000r/min，5min。再取上清液0.1ml，加入到装有2ml氢氧化钾-甲醇溶液的试管中，混匀后，取其中的5%混合液于50℃恒温水浴锅中异构化20min，再用甲醇稀释到10ml，于278nm波长处测定其OD值。比较给药组和对照组PGE2含量的差异，并进行组间t检验。

2结果

2.1栀子苷对小鼠的镇痛作用给药后不同时间痛阈见表1。表1栀子苷对小鼠痛阈值的影响(略)

由表1可知，栀子苷中剂量（25mg/kg）能延长热刺激所致小鼠在无痛觉反应时间，具有一定的镇痛作用（P＜0.01）。

2.2栀子苷对醋酸诱发小鼠扭体反应的影响

扭体反应的抑制率（%）=对照组扭体次数-实验组扭体次数对照组扭体次数×100%

腹腔注射醋酸溶液后，除阳性组外其它各组均出现腹部收缩，躯体扭曲，后肢伸展及蠕行等扭体反应，见表2。杜冷丁对醋酸诱发小鼠扭体反应有十分明显的抑制作用，P＜0.001；栀子苷50mg/kg剂量组和12.5mg/kg剂量组对醋酸诱发小鼠扭体反应有明显的抑制作用(P＜0.05)，最大扭体次数减少百分率可达55%，说明栀子苷对醋酸诱发小鼠扭体反应具有明显的抑制作用。

表2栀子苷醋酸诱发小鼠扭体反应的影响(略)

2.3栀子苷对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响结果见表3。表3栀子苷对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(略)

肿胀度（mg）=右耳廓重－左耳廓重

抑制率（%）=阴性对照组小鼠平均耳廓肿胀度-给药组小鼠平均耳廓肿胀度阴性对照组小鼠平均耳廓肿胀度×100%

用二甲苯致炎后，各组小鼠右耳均可见高度红肿。结果表明，氢化可的松组（P＜0.01）和栀子苷12.5mg/kg剂量组(p＜0.05),25mg/kg剂量组(P＜0.01)对二甲苯致小鼠耳廓肿胀均有明显的抑制作用，且栀子苷对小鼠耳廓肿胀的抑制作用表现出良好的量、效关系，其抑制作用随剂量的减小而有所增强。

2.4栀子苷对醋酸诱发小鼠毛细血管通透性的影响结果见表4。表4栀子苷对醋酸诱发小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(略)

结果显示：与生理盐水组比较，栀子苷和氢化可的松均可降低由醋酸引起的小鼠毛细血管通透性的增加，其中栀子苷大剂量组和氢化可的松能导致腹腔毛细血管渗透液的吸光值显著降低（P＜0.01），即对急性炎症渗出有明显的抑制作用。

2.5栀子苷对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响结果见表5。表5栀子苷对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响(略)

抑制率（%）=对照组平均肿胀厚度-给药组平均肿胀厚度对照组平均肿胀厚度×100%

角叉菜胶诱发小鼠足水肿的急性非感染性炎症模型，肿胀高峰在致炎后3～5h，其模型稳定，重现性好，常用于筛选抗炎药物。小鼠实验结果表明栀子苷对角叉菜胶致小鼠足肿胀没有明显抗炎作用，而氢化可的松对角叉菜胶致小鼠足肿胀有十分明显的抑制作用（P＜0.01）。

2.6栀子苷对小鼠炎症组织渗出液中炎症介质含量PGE2的OD值的影响结果见表6。表6栀子苷对小鼠炎症组织渗出液中介质（PGE2）的影响(略)

由表6可知,氢化可的松炎症渗出液中PGE2的含量明显低于对照组，其抗炎作用与抑制PGE2释放有一定关系，P＜0.01。栀子苷对炎症渗出液中PGE2的含量则与对照组比较无明显差异,其抗炎作用可能与PGE2释放没有关系。

3讨论

通过热板法来研究栀子苷对小鼠镇痛作用的效果，结果表明栀子苷中剂量能延长热刺激所致小鼠痛觉反应时间；并且，栀子苷大剂量组和小剂量组能够显著抑制醋酸引起的小鼠的扭体次数，抑制率可达到55%，表明栀子苷具有一定的镇痛作用。

通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响实验研究，发现栀子苷中剂量和小剂量对小鼠的耳廓肿胀有明显的抑制作用。栀子苷可降低由醋酸引起的小鼠毛细血管通透性的增加，栀子苷大剂量组可显著降低毛细血管的通透性，对急性炎症渗出有明显的抑制作用。

栀子苷对角叉菜胶致小鼠足肿胀却没有明显抗炎作用，对炎症组织渗出液中的炎症介质PGE2的释放也没有明显影响。

【参考文献】

［1］王钢力.大黄栀子果实化学成分的研究［J］.中国中药杂志，1999,24（1）:38.

［2］张庆华.从栀子黄废液中提取栀子甙的工艺研究［J］.化学与生物工程,2005,9:31.

［3］徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学，第2版［M］.北京:人民卫生出版社,1991:659.

［4］陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社,1993.

【摘要】目的研究栀子苷的镇痛和抗炎作用。方法小鼠热板实验，醋酸诱发小鼠扭体反应实验，栀子苷对二甲苯致小鼠耳肿胀实验，栀子苷对醋酸诱发小鼠毛细血管通透性实验，栀子苷对角叉菜胶致小鼠足肿胀实验等。结果栀子苷25mg/kg剂量（P＜0.05）能延长热刺激所致小鼠痛觉反应时间，栀子苷50mg/kg剂量组和12.5mg/kg剂量组对醋酸诱发小鼠扭体反应有明显的抑制作用（P＜0.05），最大扭体次数减少百分率可达55%，具有一定的镇痛作用；栀子苷12.5mg/kg剂量组（P＜0.05）和25mg/kg剂量组（P＜0.01）对二甲苯致小鼠耳肿胀均有明显的抑制作用，栀子苷大剂量（50mg/溶液kg）组能导致腹腔毛细血管渗透液的吸光值显著降低（P＜0.01），即对急性炎症渗出有较明显的抑制作用；栀子苷对角叉菜胶致小鼠足肿胀没有明显抗炎作用，炎症渗出液中PGE2的含量与对照组比较无明显差异，其抗炎作用可能与PGE2释放没有关系。结论栀子苷有一定的镇痛和抗炎作用。

【关键词】栀子苷镇痛作用抗炎作用