双黄连粉针剂研究论文

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【摘要】目的研究双黄连粉针剂的化学成分，为明确双黄连粉针剂药效、毒效的物质基础提供依据。方法应用各种色谱方法对其化学成分进行分离，并利用各种色谱和光谱技术鉴定所分离得到的化学成分。结果从双黄连粉针剂中分离得到6个化合物，经鉴定分别为：黄芩苷（baicalin，Ⅰ）、大黄酚（chrysophenol，Ⅱ）、绿原酸（chlorogenicacid，Ⅲ）、芦丁（rutin，Ⅳ）、异虎耳草素（isopimpinellin，Ⅴ）和槲皮素（quercetin，Ⅵ）。结论除黄芩苷（baicalin，Ⅰ）、绿原酸（chlorogenicacid，Ⅲ）外，其它4种化合物均系从该制剂中首次分得。

【关键词】双黄连粉针剂；化学成分；分离鉴定

Abstract：ObjectiveTostudythechemicalconstituentsfromShuanglhuanglianinjection.MethodsShuanghuanglianinjectionwasmanufacturedaccordingtoChinesePharmacopoeia(2005),andseparatedwithcolumnchromatography.Structuresofthecompoundswereidentifiedbytheirphysical-chemicalcharacterandspectralanalysis.ResultsSixcompoundswereisolatedfromShuanghuanglianInjection.Theywerebaicalin(Ⅰ),chrysophenol(Ⅱ),chlorogenicacid(Ⅲ),rutin(Ⅳ),isopimpinellin(Ⅴ)andquercetin(Ⅵ).ConclusionCompoundsⅡ,Ⅳ,ⅤandⅥwereisolatedfromShuanghuanglianinjectionforthefirsttime.

Keywords：Shuanghuanglianinjection;Chemicalconstituents;Isolationandidentification

双黄连粉针剂是由金银花、黄芩、连翘3味中药经提取精制而成的纯中药复方制剂，具有清热解毒、清凉解表的功能，主要用于外感风热引起的发热、咳嗽以及多种上呼吸道感染病症，已成为中医药治疗呼吸道感染性疾病的首选药物之一，该药是具有抗病毒及抗细菌双重治疗作用的药物，199212被国家中医药管理局指定为全国中医医院急诊首批急诊必备中成药［1］。但随着用药人群的增加，其不良反应报道也日益增多，主要表现在过敏反应（包括皮肤反应、过敏性休克、血管神经性水肿等）；消化系统反应和静脉炎及其它等［2］。导致其不良反应产生的原因有个体、制剂、用法与用量等诸多因素，本研究从制剂本身入手，对其化学成分进行分离、鉴定，探索其药效、毒效的物质基础。本文报道了其中6个化合物的分离和结构鉴定，其中化合物Ⅱ，Ⅳ，Ⅴ和Ⅵ为首次在该制剂中分得。

1仪器和材料

XT-4型显微熔点测定仪(温度计未校正)；JASCOFI/IR-480PlusFourierTransform红外光谱仪；BRUKERDRX400型核磁共振仪；FinniganLCQAdvantageMAX质谱仪；制备型高效液相色谱仪（Gilson公司），柱层析硅胶为青岛海洋化工厂产品；硅胶GF254薄层预制板、制备薄层为烟台化学工业研究所产品；所用化学试剂均为分析纯。连翘来源于河南，金银花来源于山东，黄芩来源于河北，购于广州市健禾药材公司，由本室鉴定。

2方法与结果

2.1制备与分离按2005年版《中国药典》注射用双黄连（冻干粉）项下制法，取一定比例金银花、连翘和黄芩共15kg。将黄芩水提，然后采用酸沉碱溶法处理，所得沉淀乙醇洗涤后干燥，备用；再将金银花和连翘混和水提，然后采用水提醇沉法处理，滤取上清液，回收乙醇并浓缩得稠浸膏，备用。将两部分原料混和，溶解于水，冷冻干燥，即得注射用双黄连制剂。取自制注射用双黄连甲醇溶液，浓缩，经反复聚酰胺（乙醇-水梯度洗脱）、硅胶柱层析（氯仿-甲醇梯度洗脱），结合制备薄层和制备液相分离得到化合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ和Ⅵ。

2.2鉴定

2.2.1化合物Ⅰm.p.260～261℃。盐酸-镁粉反应阳性。IR（KBr）γcm-1：3380，3260，1660，1600，1572，1551，1495，1451，1407，1253，1201，1146，912。ESI-MS（m/z）：446（M）+，445（M-H）—。1H-NMR（DMSO-d6）δppm：12.58（1H，s，5-OH），8.63（1H，s，6-OH），8.07（2H，dd，J=1.8Hz，J=8.0Hz，2′、6′-H），7.60（3H，m，3′、4′、5′-H），7.05（1H，s，3-H），7.00（1H，s，8-H），5.48（1H，s，1″-H）。13C-NMR（DMSO-d6）δppm：163.5（C-2），106.1（C-3），182.5（C-4），146.8（C-5），129.1（C-6），151.3（C-7），93.8（C-8），149.2（C-9），104.7（C-10），130.8（C-1′），126.3（C-2′），129.1（C-3′），132.0（C-4′），129.1（C-5′），126.3（C-6′），100.0（C-1″），72.8（C-2″），75.3（C-3″），71.3（C-4″），75.5（C-5″），170.0（C-6″）。以上ESI-MS、1H谱和13C谱数据与文献［3］基本一致，故确定化合物Ⅰ为黄芩苷（baicalein）。

2.2.2化合物Ⅱ黄色片状结晶（氯仿），mp.190～192℃。IR（KBr）γcm-1：3432，1677，1606，1569，903，868，839。EI-MS（m/z）：254，226，197。1H-NMR（CDCl3）δppm：12.07（1H，s，8-OH），11.95（1H，s，1-OH），7.78（1H，d，J=7.5Hz，5-H），7.64（1H，t，J=8.2Hz，6-H），7.60（1H，brs，4-H），7.26（1H，d，J=8.6Hz，7-H），7.06(1H，s，2-H)，2.45（3H，s，-CH3）。13C-NMR（CDCl3）δppm：162.7（C-1），124.5（C-2），149.3（C-3），121.3（C-4），119.9（C-5），136.9（C-6），124.3（C-7），162.5（C-8），192.4（C-9），181.8（C-10），133.3（C-4a），133.7（C-10a），115.9（C-8a），113.8（C-9a），22.2（-CH3）。以上数据与文献［4］数据基本一致，故鉴定化合物Ⅱ为大黄酚（chrysophenol）。

2.2.3化合物Ⅲ无色针状结晶（甲醇）,mp.207～209℃。IR（KBr）γcm-1：3342，3500～2500，2924，1680，1633，1596，1524。EI-MS（m/z）：354，336，180，163，136。1H-NMR（CD3OD）δppm：7.55（1H，d，J=16Hz，7′-H），7.04（1H，d，J=2.0Hz，2′-H），6.95（1H，dd，J=8.4、2.0Hz，6′-H），6.77（1H，d，J=8.4Hz，5′-H），6.25（1H，d，J=16Hz，8′-H），2.12（4H，m，2，6-H），3.75（1H，dd，J=8.4、3.2Hz，4-H），4.17（1H，m，5-H），5.32（1H，m，3-H）。13C-NMR（CD3OD）δppm：177.8（COOH），169.4（C-9′），150.3（C-4′），147.8（C-7′），147.6（C-3′），128.6（C-1′），123.7（C-6′），117.2（C-5′,8′），116.0（C-2′），76.9（C-1），74.2（C-4），72.7（C-5），72.0（C-3），39.5（C-2），39.0（C-6）。上述数据经与文献［5，6］对照，基本一致，故确定化合物Ⅲ为绿原酸（chlorogenicacid）。

2.2.4化合物Ⅳ淡黄色粉末（甲醇），m.p.176～178℃。盐酸-镁粉反应阳性。IR（KBr）γcm-1：3423，2938，1655，1601，1506，1458，1204，910。ESI-MS（m/z）：610(M)+。1H-NMR（DMSO-d6）δppm：6.20（1H，d，J=2.0Hz，6-H），6.39（1H，d，J=2.0Hz，8-H），6.85（1H，d，J=8.8Hz，5′-H），7.56（1H，d，J=2.1Hz，2′-H）,7.54（1H，dd，J=8.8、2.1Hz，6′-H），5.35（1H，d，J=7.4Hz，1″-H），5.24（1H，s，1′″-H）。13C-NMR（DMSO-d6）δppm：156.6（C-2），133.3（C-3），177.3（C-4），161.2（C-5），98.6（C-6），164.0（C-7），93.5（C-8），156.4（C-9），104.0（C-10），121.5（C-1′），115.2（C-2′），144.7（C-3′），148.4（C-4′），116.3（C-5′），121.2（C-6′），101.2（C-1″），74.1（C-2″），76.4（C-3″），76.4（C-4″），75.9（C-5″），67.0（C-6″），100.7（C-1′″），70.5（C-2″′），70.3（C-3′″），71.8（C-4″′），68.2（C-5′″），17.7（C-6″′）。以上数据经与文献［7，8］对照，确定化合物Ⅳ为芦丁（rutin）。

2.2.5化合物Ⅴ浅黄色针状结晶（丙酮），m.p.145℃～146℃。异羟污酸铁反应阳性。IR（KBr）γcm-1：1719，1593，1483，1350，1204，1145，1072，824，755。ESI-MS（m/z）：246（M）+。1H-NMR（CDCl3）δppm：8.12（1H，d，J=9.6Hz，4-H），7.63（1H，d，J=2.4Hz，2′-H），6.99（1H，d，J=2.4Hz，3′-H），6.28（1H，d，J=9.6Hz，3-H），4.17、4.16（6H，s，5、8-OCH3）。13C-NMR（CDCl3）δppm：160.4（C-2），150.1（C-7），145.2（C-2′），144.3（C-5），143.8（C-9），139.4（C-4），128.3（C-8），114.9（C-6），113.0（C-3），107.8（C-10），105.1（C-3′），61.7、60.9（5、8-OCH3）。以上光谱数据与文献［9，10］报道的异虎耳草素（5，8-二甲氧基补骨脂素）数据对照基本一致，故鉴定化合物Ⅴ为异虎耳草素（isopimpinellin）。

2.2.6化合物Ⅵ黄色粉末结晶（乙醇），温度达310℃以上分解。盐酸-镁粉反应阳性。IR（KBr）γcm-1：3377，3296，1671，1616，1552，1514，1458，1429，1365，1212，1095，810。ESI-MS（m/z）：302（M）+，301（M-H）+。1H-NMR（DMSO-d6）δppm：12.48（1H，s，5-OH），10.73（1H，s，7-OH），9.53（1H，s，3-OH），9.29（1H，s，3′-OH），9.25（1H，s，4′-OH），7.68（1H，d，J=2.0Hz，2′-H），7.53（1H，dd，J=8.4、2.0Hz，6′-H），6.89（1H，d，J=8.4Hz，5′-H），6.40（1H，d，J=2.0Hz，8-H），6.19（1H，d，J=2.0Hz，6-H）。13C-NMR（DMSO-d6）δppm：146.8（C-2），135.7（C-3），175.8（C-4），160.7（C-5），98.1（C-6），163.8（C-7），93.3（C-8），156.1（C-9），103.0（C-10），121.9（C-1′），115.6（C-2′），145.0（C-3′），147.7（C-4′），115.1（C-5′），119.9（C-6′）。以上光谱数据与文献［11，12］报告的槲皮素相一致，故确定化合物Ⅵ为槲皮素（quercetin）。

3讨论

目前对双黄连粉针剂化学成分的分离工作进行得不多，本文报道了其中6种成分的分离与鉴别工作，后续研究尚在进行。结合药理、毒理实验明确双黄连、粉针剂的物质基础，对其“减毒增效”，二次开发应用具有十分重要的作用。

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