金花茶组植物化学成分研究论文

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【摘要】目的测定金花茶、毛瓣金花茶、凹脉金花茶、四季金花茶、薄叶金花茶不同植物部位中总皂苷、总多酚（鞣质）、总黄酮的含量。方法采用紫外分光光度法。结果其总皂苷、总多酚（鞣质）、总黄酮的含量依次为：①金花茶花蕾醇提物：21.30%、6.56%（0.34%）、21.76%；叶子醇提物：43.24%、3.95%（1.57%）、0.93%；叶子水提物：9.91%、6.69%（1.34%）、5.19%；种子醇提物：13.53%、5.88%（0.83%）、6.85%。②毛瓣金花茶叶子醇提物：43.49%、6.79%（1.65%）、1.54%。③凹脉金花茶叶子醇提物：36.29%、13.19%（5.33%）、1.12%；种子醇提物：20.58%、5.29%（0.14%）、0.33%。④四季金花茶叶子醇提物：35.90%、7.01%（0.47%）、0.78%。⑤薄叶金花茶叶子醇提物：30.08%、7.57%（0.19%），0.82%。结论紫外分光光度法测定以上3种物质简便易行，准确可靠，重复性和回收率都较理想。

【关键词】金花茶组植物总皂苷总多酚（鞣质）总黄酮

Abstract:ObjectiveTodeterminethechemicalconstituentsoftotalsaponin,totalpolyphenol(tannin)andtotalflavonoidsinSectionChrysanthaChang.MethodsTheircontentsweredeterminedbyspectrophotometry.ResultsThecontentsoftotalsaponin,totalpolyphenol(tannin)andtotalflavonoidswere：①21.30%,6.56%（0.34%）,21.76%；43.24%,3.95%（1.57%）,0.93%；9.91%,6.69%（1.34%）,5.19%；13.53%,5.88%（0.83%）,6.85%；②43.49%,6.79%（1.65%）,1.54%；③36.29%,13.19%（5.33%）,1.12%；20.58%,5.29%（0.14%）,0.33%；④35.90%,7.01%（0.47%）,0.78%；⑤30.08%,7.57%（0.19%）,0.82%respectively.ConclusionThemethodisconvenientandreliabletodeterminethethreesubstances,andthereproducibilityandtherecoveryarefairlygood.

Keywords:SectionChrysanthaChang;Totalsaponin;Totalpolyphenol（tannin）;Totalflavonoids

20世纪60年代初，在我国广西首次发现黄色山茶属植物——金花茶Camelliachrysantha(Hu)Tuyama,震惊世界。到目前为止，已发现并命名的黄花山茶属植物已达32种5变种，1998年张宏光教授将其归类为金花茶组。其中除越南与广西接壤的北部有3种，云南、贵州、四川各有1种外，其余26种、5变种均产于我国广西南部和西南部的亚热带南缘和热带北缘地区。90%分布于中国，80%分布于广西，说明中国是金花茶组植物的特产国，而广西是金花茶组的特产区。

但因为金花茶组植物发现较晚，加之分类上争议时间较长，所以尽管在园林、花卉界轰动较大，亦被国家列为珍稀保护植物，但对它的现代研究甚少。本文以皂苷、多酚、黄酮类成分为指标，对其中产量大、资源较丰富的5种金花茶组植物化学成分进行了分析测定。现报道如下。

1仪器与试药

1.1仪器Unico7200可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司);Laborata4000型旋转蒸发仪(Heidolph公司);BP210S十万分之一电子天平(Sartorius公司);Jascov﹣2560紫外可见分光光度计(JASCO日本分光株式会社)。

1.2试药5种金华茶组植物均采集于广西(由广西林科院梁盛业鉴定，标本现存于大连大学药物研究所）;对照品由本实验室提供；芦丁(东京化成工业株式会社,纯度98%);齐墩果酸(中国药品生物制品检定所,批号:1107092200304,纯度98%以上);没食子酸(中国药品生物制品检定所,批号:1205632200412,纯度99.1%);所用试剂均为分析纯;实验用水为蒸馏水。

2方法与结果

2.1总皂苷的含量测定［1］

2.1.1对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品25mg,置50ml容量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得0.5mg·ml-1的对照品溶液,备用。

2.1.2供试品溶液的制备精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏A(g),置100ml容量瓶中加入甲醇,溶解并稀释到刻度,摇匀,得B(mg·ml-1)的溶液,备用。

2.1.3测定波长的选择齐墩果酸对照品溶液和供试品溶液香草醛-冰醋酸-高氯酸显色后,在紫外可见分光光度计上,波长400～800nm区间扫描。均在551nm处有最大吸收,因此选择551nm为测定波长,测得的结果以齐墩果酸为基准计算总皂苷的含量。

2.1.4线性关系考察精确吸取齐墩果酸标准溶液0.0，0.05，0.10，0.15，0.20和0.25ml分置于具塞试管中,挥去甲醇,精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液(新鲜配制)0.2ml,高氯酸0.8ml,摇匀,于60℃水浴中加热15min后,置冰浴中冷却。加冰醋酸5ml,摇匀,立即在551nm波长下测定吸光度A,同时以试剂空白作参照。以吸光度A为纵坐标,体积V(ml)为横坐标,绘制标准曲线。得回归方程A=2.252V-0.0066（R2=0.9994）。

2.1.5重复性实验精确吸取C（ml）的供试品溶液,置于具塞试管中,挥去甲醇,照标准曲线项下的方法操作,平行做5次实验,测定吸光度A,代入回归方程,计算总皂苷的含量。A，B，C的数据见表1。结果见表2。表1金花茶总皂苷的实验数据表2总皂苷含量测定结果%

2.2多元酚及鞣质的含量测定［2,3］

2.2.1对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的没食子酸对照品10mg,置100ml棕色容量瓶中,加水溶解并稀释到刻度,摇匀,精密量取25ml,置100ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.025mg·ml-1的对照品溶液,备用。

2.2.2供试品溶液的制备精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏D(g),置250ml容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀。过滤,弃去初滤液50ml,精密量取100ml,置500ml棕色容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,得E(mg·ml-1)的供试品溶液Ⅰ;精密吸取供试品溶液Ⅰ100ml,加至已盛有2.4g干酪素的500ml具塞锥形瓶中,密塞,置30℃水浴中保温1h,时时振摇,取出,放冷,摇匀,滤过,弃去初滤液,续滤液作为供试品溶液Ⅱ,备用。

2.2.3测定波长的选择没食子酸对照品溶液和供试品溶液经磷钼钨酸-碳酸钠显色后,在紫外可见分光光度计上,波长400～1000nm区间扫描。均在754nm处有最大吸收,因此选择754nm为测定波长,测得的结果以没食子酸为基准计算总酚和鞣质的含量。

2.2.4线性关系考察精确吸取没食子酸标准溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0和2.5ml分别置10ml棕色容量瓶中,各加水至5ml,再分别加入磷钼钨酸试液1ml,用29%Na2CO3溶液稀释至刻度,摇匀,以相应的试剂为空白,30min后,在754nm波长下测定吸光度A。以吸光度A为纵坐标,体积V(ml)为横坐标,绘制标准曲线。得到回归方程A=0.3532V-0.0292（R2=0.9991）。

2.2.5重复性实验精确吸取F（ml）的供试品溶液Ⅰ和Ⅱ,分别置于10ml的棕色容量瓶中,照标准曲线项下的方法操作,同法测定吸收值,各平行测定5次,在754nm处测定吸光度A,代入回归方程,计算总酚和鞣质的含量。D，E，F的数据见表3。结果见表4。

2.3总黄酮的含量测定［4,5］

2.3.1方法一对照品溶液和供试品溶液经NaNO2-AlCl3显色后在紫外可见分光光度计上以400nm为测定波长进行测定。

对照品溶液的制备：精确称取干燥至恒重的对照品20mg，置100ml容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，得浓度为0.2mg/ml的对照品溶液，备用。

供试品溶液的制备：精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏G(g),置100ml容量瓶中加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得H(mg·ml-1)的溶液,备用。表3金花茶总酚和鞣质的实验数据表4总酚和鞣质含量测定结果测定波长的选择：对照品溶液和供试品溶液NaNO2-AlCl3显色后,在紫外可见分光光度上,波长200～600nm区间扫描。均在400nm处有最大吸收,因此选择400nm为测定波长。测得的结果以对照品为基准计算总黄酮的含量。

线性关系考察：精密吸取对照品溶液0.00，0.30，0.60，0.90，1.20，1.50ml，各加甲醇至4.0ml，再分别加入质量分数为5%的NaNO2溶液0.3ml,摇匀，室温放置6min，再加10%AlCl3溶液0.3ml,摇匀，室温放置10min，在400nm波长下测定吸光度A，同时以试剂空白做参比。以吸光度A为纵坐标，浓度C（mg/ml）为横坐标，绘制标准曲线。得到回归方程A=15.065C+0.0026,R2=0.9999线性范围：0.013～0.0652mg/ml。

重复性实验：精确吸取I（ml）的供试品溶液,置于试管中,加入甲醇至4.0ml,按照标准曲线项下的方法操作,测定吸光度,平行做5次实验,代入回归方程,计算总黄酮的含量。G、H、I的数据见表5。结果见表6。表5金花茶总黄酮的实验数据表6总黄酮含量测定结果

2.3.2方法二芦丁对照品溶液和供试品溶液经NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色后，在紫外可见分光光度计上，以500nm为测定波长进行测定。

对照品溶液的制备：精确称取干燥至恒重的芦丁对照品20mg,置100ml容量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.2mg·ml-1的对照品溶液,备用。

供试品溶液的制备：精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏J(g),置100ml容量瓶中加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得K(mg·ml-1)的溶液,备用。

测定波长的选择：芦丁对照品溶液和供试品溶液NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色后,在紫外可见分光光度上,波长200～600nm区间扫描。均在500nm处有最大吸收,因此选择500nm为测定波长。测得的结果以芦丁为基准计算总黄酮的含量。

线性关系考察：精确吸取芦丁对照品溶液0，0.3，0.6，0.9，1.2和1.5ml分置于试管中,各加甲醇至2.0ml,再分别加入质量分数为5%的NaNO2溶液0.25,摇匀,室温放置5min再加10%Al(NO3)3溶液0.25ml,摇匀,室温放置5min,再加质量分数为4%的NaOH2.0ml,摇匀,室温放置15min,在500nm波长下测定吸光度A,同时以试剂空白做参比。以吸光度A为纵坐标,体积V(ml)为横坐标,绘制标准曲线。得到回归方程A=0.5527V-0.0108（R2=0.9999）。

重复性实验：精确吸取1.0ml的供试品溶液,置于试管中,加入甲醇至2.0ml,按照标准曲线项下的方法操作,测定吸光度,平行做5次实验,代入回归方程,计算总黄酮的含量。J，K，L的数据见表7。结果见表8。表7金花茶总黄酮的实验数据表8总黄酮含量测定结果%

3讨论

3.1总黄酮含量测定方法的选择经大量的文献调研表明，采用可见分光光度法测定总黄酮的含量是比较成熟的方法，此方法稳定性好，准确度高，且简便快捷，易于操作，结果可靠，故选择了采用分光光度法测定金花茶提取物中总黄酮的含量。

3.2皂苷含量测定方法的选择皂苷的分析测定有多种方法，如沉淀法、溶血指数法、层析法等，沉淀法测定往往易带进杂质或导致皂苷变质；层析法一般可以分离出总皂苷，但对总含量测定不适，误差大，成本高，而分光光度法操作简便、灵敏，属于经典、成熟的方法，我们选择了与金花茶皂苷类成分基本母核结构接近的齐墩果酸为对照品，采用分光光度法测定其总皂苷的含量。

3.3鞣质测定方法的选择鞣质的经典含量测定方法有很多种，如重量法、容量法、比色法等。以前最常用的有皮粉法、高锰酸钾法、络合定量法。2005年版以前的《中国药典》Ⅰ部［2］鞣质含量测定法一直沿用皮粉法。但是其缺点是耗用样品多，测定时间长，且没有选择性，测定结果偏高，而且皮粉用量很大，而2005年版《中国药典》Ⅰ部鞣质测定法，以没食子酸为对照品稳定性好，干酪素的吸附作用具有专属性，其方法操作简便，用时短，且重复性和回收率都较理想。

【参考文献】

［1］高声传，郭涛，夏维杰，等．比色法测定酸枣仁提取物中总皂苷的含量［J］.实用药物与临床，2005,8（1）：15.

［2］国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005:附录57，附录63.

［3］王坤，鲁静.中药材中鞣质含量测定方法的研究［J］.中国药事，2004,18(6)：361.

［4］欧敏锐,许小平,邓燚杰，等.福建产白花蛇舌草活性成分提取与含量测定［J］.海峡药学，2004,16(2):44.

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