亳菊生产技术论文

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1亳菊脱毒生产技术

1.1培养基准备

基本培养基为PP，添加6-BA0.05mg/L、白砂糖20g/L、琼脂粉4.5g/L，将各种物质混合后定容，pH调节至6.0，分装到350mL广口瓶中，每瓶装50mL，在压力0.1MPa、温度121℃下灭菌15min，冷却后备用。

1.2材料采集和消毒

本试验取尚未木质化的亳菊茎尖作外植体。选取长2cm左右的嫩芽，去掉外边叶片后，用洗衣粉水浸洗1～2min，然后用流水冲洗30min。在超净工作台上用75%酒精消毒30s，再用0.05%升汞溶液消毒10min，无菌水冲洗6次，用无菌纱布把材料表面水吸干后，置于已消毒的烧杯中备用。

1.3茎尖剥取和培养

在解剖显微镜下，左手拿镊子将芽夹住，右手用解剖针逐层剥取外层叶片，直至留1～2个叶原基。将茎尖迅速切下，接种到茎尖生长培养基PP+6-BA0.05mg/L+2%糖上，每瓶接种1个茎尖。为确保茎尖的成活率，整个剥取过程应在较短时间内完成。茎尖培养分2个过程，先置于温度23～25℃下暗培养3d，再在光照强度2200～2500lux的培养室中培养，光照时间12h/d。培养10d后，茎尖开始长大，并逐渐转绿，30d后长成小植株，每个成活的茎尖单独建系。

2增殖培养

亳菊组培苗增殖采用2种方式。第1种方式是采用芽繁芽的方式进行增殖，将启动培养中获得的小芽接种到培养基PP+6-BA0.1～0.5mg/L+2%糖中，在温度23～25℃、光照强度2200～2500lux、光照时间12h/d的条件下培养30d，增殖比例达1∶4以上。这种增殖方法使培养基中的细胞分裂素含量相对较高，极易出现弱苗，且玻璃苗的比例较高。第2种增殖方式是通过单株切段的方式进行微扦插，将培养的单株切割成1cm左右的顶芽和茎段，茎段带1～2片叶，接种到培养基PP+6-BA0.02mg/L+2%糖中，顶芽和茎段分开接种。顶芽接种7d后开始生长，30d后芽生长至5～6cm；茎段接种后10d左右，侧芽开始生长，培养30～35d后，侧芽生长至4～5cm，然后进行重复微扦插，平均继代增殖比例可达1∶3.5以上。在实际生产中一般采取第2种增殖方式。

3生根培养

将顶芽或茎段接种到生根培养基PP+IBA0.05mg/L+2%糖中，接种后10d开始陆续长根，同时芽开始生长，培养30d后，长至高度4～5cm、根3～5条、根长2～3cm，生根率可达100%。

4脱毒组培苗移栽

将长好根的试管苗取出，洗掉根部的培养基，再移栽到装好基质（泥炭和珍珠岩以体积比3∶1拌匀）的50孔穴盘中。组培苗移栽至穴盘后浇透水，苗床应搭小管棚覆膜，保持80%～90%的空气湿度，并覆盖防虫网。7d后逐渐掀开薄膜放风，然后浇1次透水，15d后完全除去薄膜，并视基质的干湿程度浇水。30d左右完成组培苗的驯化过程，使成活率达90%以上。

5病毒检测

亳菊病毒病的检测采用田间观察法和指示作物法。田间观察法具有一定的缺陷，这是因为大多数病毒病症状为花叶、黄化、畸形，在症状上容易与非侵染性病害（如缺素症、空气污染所引起的病害等）相混淆。指示植物法是亳菊病毒检测的基本手段，亳菊体内的一些病毒可采用汁液接种法接种到其他草本植物（指示植物）上，然后根据指示植物的感病表现，研究病毒的生物属性特征并进行种类鉴定，常见的指示植物为黄瓜、中国构祀、千日红等。采用本研究的脱毒种苗获得技术生产的各株系种苗，均未检测出带病毒。

作者:陈权肖建梅孙建单位:上海孙桥现代温室种子种苗有限公司上海市农业科学院