测定蔬菜有机磷农药干扰因素

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随着我国农业的快速发展，有机合成农药被广泛使用于蔬菜种植业，其中有机磷农药用量占65%［1］。我国非常重视有机磷农药的用量限值与检测方法，制定了多项有机磷农药的检测标准［2～4］。卫生系统最常用的有机磷检测方法是GB/T5009．20－2003《食品中有机磷农药残留量的测定》［3］，该法适用范围广，简单有效，但在实际的检测工作中，有些看似简单的操作步骤，会影响测定结果，出现测定误差。本文针对国标中第二法的测定进行了实验和方法改进的研究，对一些影响测定结果的因素进行探讨，以期提高蔬菜中有机磷农药的检测水平和工作效率。

1材料与方法

1．1仪器与试剂

HP－6890A气相色谱仪，火焰光度检测器(FPD)，1701毛细管柱(30m×0．32mm×0．25μm)，安谱氮吹仪(DC－12，上海安谱科学仪器有限公司)。

1．2试剂

敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧化乐果、久效磷、甲基毒死蜱、乐果、毒死蜱、甲基对硫磷、马拉硫磷、对硫磷标准溶液(农业部环境保护科研监测所研制，均为100μg/ml);丙酮、乙腈、甲苯、二氯甲烷(色谱纯，Fisher公司)、无水硫酸钠、活性炭(广州化学试剂厂)。

1．3色谱条件

进样口温度:230℃，检测器:250℃，柱流量:3．0ml/min，进样量:1μl，升温程序:80℃保持1min，以8ml/min的速率升至220℃，保持4min，以20ml/min的速率升至230℃，保持5min。

1．4样品处理

1．4．1国标第二法(GB/T5009．20－2003)将蔬菜切碎混匀，称取10．0g样品于具塞锥形瓶中，加入30g～100g无水硫酸钠(视样品水分含量)，剧烈振荡后有固体无水硫酸钠存在，说明所加无水硫酸钠已足量，加入0．2g～0．8g活性炭，充分搅匀，加入70．0ml二氯甲烷，振荡30min，经滤纸过滤。取35ml滤液于室温下自然挥发至近干，用二氯甲烷多次研洗残渣，定容至2．0ml，供气相色谱测定。

1．4．2实验改进方法将蔬菜置通风处晾2h，切碎混匀，称取10．0g样品于具塞锥形瓶中，加入30g～100g无水硫酸钠(视样品水分含量)，剧烈振荡后，移入玻璃研钵中，将结块的样品研磨，并同时补加无水硫酸钠至有固体无水硫酸钠存在粉末状，说明所加无水硫酸钠已足量。将研磨均匀的样品转入具塞锥形瓶中，加入0．2g～0．8g活性炭，充分摇匀，加入70．0ml二氯甲烷，振荡30min，经滤纸过滤。取35ml滤液在氮吹仪中挥发至近干，用二氯甲烷多次研洗残渣，定容至2．0ml，供气相色谱测定。

2结果与讨论

2．1提取与净化方法的影响

2．1．1不同阶段加标对回收率的影响在工作中，经常发现采用纸片法定性为阳性的蔬菜样品，应用5009．20第二法进行有机磷农药的测定，结果为阴性。对样品进行加标回收实验，发现前处理方法的回收率很低，为了查找影响回收率的具体实验步骤，本文在前处理不同阶段进行加标，测定回收率，以期找到提高回收率的解决方法。实验分别以敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧化乐果、久效磷、甲基毒死蜱、乐果、毒死蜱、甲基对硫磷、马拉硫磷、对硫磷12种有机磷农药混合标准进行加标。以敌敌畏加标测定结果为例，加标结果如表1所示。表1结果显示:直接在蔬菜上加入标准品，回收率最低;蔬菜切碎后，加标回收率大概在70%左右;在加入无水硫酸钠及活性炭后加标，回收率在85%左右;样品震荡后加标，回收率在100%左右;而将样品过滤后，浓缩前加标，回收率仅为25%。由以上结果可见，直接加标于蔬菜上，回收率较低，蔬菜切碎后加标，可明显提高回收率，但提取效率也低于80%。其原因可能是加入无水硫酸钠后，硫酸钠吸水后易凝结成块，包裹在样品表面，致使待测的敌敌畏不易被二氯甲烷提取，而且加入作为脱色剂的活性炭，也会吸附少量的被测物质。所以在加入无水硫酸钠及活性炭后加标，敌敌畏损耗少，易于被二氯甲烷提取，回收率可达85%左右;样品在震荡后加标，回收率可达100%。但较为奇怪的实验结果是在过滤完毕，浓缩前加标，回收率仅为25%，这一原因有待继续研究。其它十一种有机磷农药的加标回收率情况与敌敌畏相似。由实验结果可见，加入无水硫酸钠是影响提取效率的关键因素，减少样品表面水分，防止无水硫酸钠和样品结块，可有效提高样品提取效率。实验采用了以下方法，获得较为满意的结果:①在取样前，将蔬菜样品晾晒一段时间，尽量减少菜叶表面的水分，但晾晒时间不能太久，过量失水将影响检测结果;②样品加入无水硫酸钠剧烈震荡后，将样品转移至研钵，在研钵中将结块的样品研磨，并补加无水硫酸钠至样品呈均匀状，再用二氯甲烷进行提取，可使有机磷农药的回收率达到95%左右。

2．1．2自然挥干的影响在实验中，取35ml过滤的二氯甲烷，在室温下自然挥干，二氯甲烷在挥发过程中，有降温效果，蒸发皿的外层凝结大量的水珠，在浓缩后的样品中也会有少量水分，定容后，水层明显。实验采用以下方法，可有效防止水分的凝结，减低对有机磷农药测定的干扰:①采用氮吹或旋转真空蒸发法，防止水分的凝结，但该法较为繁琐、耗时长;②采用离心法，当样品自然蒸干后，定容于5ml的玻璃离心管中，采用3000r/min在高速离心机上进行离心，使水层和二氯甲烷分层，吸取二氯甲烷层进行分析。

2．1．3活性炭用量对脱色效果的影响在样品前处理过程中，加入活性炭进行脱色。试验考察活性炭用量对蔬菜样品脱色效果的影响，结果显示:菜叶颜色越深(如油麦菜、芥蓝、菜心、地瓜叶等)，需要加入较大量的活性炭，脱色效果随着活性炭量增加而增强，但用量超过1．0g，脱色效果无明显变化，且过量的活性炭也会降低有机磷农药的回收率。菜叶颜色较浅绿色的蔬菜(如生菜、空心菜等)，加入0．5g活性炭即可达到脱色的效果;菜叶颜色浅的蔬菜(如白菜)只需加入0．3g活性炭即可获得较好的脱色效果。

2．2标准溶液的有效性

有机磷农药的物理化学性质不稳定，易挥发，配制的标准溶液稳定性受温度、光照、溶剂种类和存储时间的影响较大。陆继伟［5］等研究了50种农药的稳定性，杨丽莉［6］等研究了敌敌畏、马拉硫磷、对硫磷和甲基对硫磷四种有机磷农药的稳定性，但都不完全包含本实验中12种有机磷农药。本实验考察了敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧化乐果、久效磷、甲基毒死蜱、乐果、毒死蜱、甲基对硫磷、马拉硫磷、对硫磷的稳定性及其影响因素。

2．2．1溶剂的影响实验考察了丙酮、二氯甲烷、甲苯和乙腈对12种有机磷农药混合标准使用液的影响．标准储备液均为100μg/ml，溶剂为丙酮;混合标准使用液的浓度为1．0μg/ml，不同溶剂对12种有机磷农药稳定结果的影响由稳定至不稳定的顺序为:甲苯＞乙腈＞二氯甲烷＞丙酮。根据溶剂的理化性质推测其原因:甲苯沸点较高，不易挥发，极性小，对有机磷农药溶解性好，较为稳定;乙腈稳定性好，但极性强，对农药的稳定性有影响。二氯甲烷和丙酮的沸点较低，20℃时蒸汽压较大，易挥发，导致标准溶液稳定性降低，但二氯甲烷较丙酮的稳定性好。

2．2．2存储时间和存储条件的影响实验分别考察了存储时间和光照对不同浓度有机磷混合标准溶液的影响。高浓度混合标准溶液为50μg/ml，中等浓度混标浓度为5μg/ml，低浓度混标浓度为0．5μg/ml。结果表明:高浓度混标液一个月内反复测定的峰面积无明显变化，一个月后，浓度增高，并有部分物质分解，放置两个月后，12种有机磷农药已经无法分离;对中等浓度的混合标准溶液，在5日内可保持稳定;低浓度的混合标准溶液，第二日浓度就发生明显变化，须临用前配制。放置于密闭、冷藏(－4℃)、避光条件下，能有效延长中等浓度混合标准溶液的有效期，可达10日;但对低浓度标准混合液无明显影响。

3小结

根据上述实验结果，在实际工作中，我们对样品前处理方法进行改进和调整，采用研钵研磨、减少样品表面水分、选择适量的活性炭脱色等方法，可有效提高有机磷农药检测方法的准确度;对有机磷农药混合标准溶液稳定性的研究，确定标准溶液的有效期，对提高工作效率有较大的帮助，可为检测蔬菜中有机磷农药的日常工作提供参考。