肿瘤分化程度及淋巴结转移关联综述

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细胞癌变及恶性肿瘤的形成是多因素、多阶段、多基因变异所致的结果。在食管癌的发生和发展过程中也有许多癌基因和抑癌基因发生结构和功能的变化，出现失活和异常表达n0]。目前在肿瘤发生、发展过程中已广泛开展应用分子生物学技术研究癌基因的突变状况。本实验应用聚合酶链反应一单链构象多态性分析(PCR—SSCP)法检测食管鳞状细胞癌组织中P53抑癌基因的突变，旨在研究1：''''53基因突变与肿瘤的分化程度及淋巴结转移情况的关系。

1资料与方法

1．1一般资料

选取我院2009—2010年食管鳞状细胞癌患者36例，男25例，女11例；年龄39-75岁，中位年龄59岁；其中有淋巴结转移21例。

1．2方法

1．2．1提取DNA：取手术切除标本，取组织蜡块切片10片，厚度为1O一20m，放入试管中，用酚氯仿法提取DNA。试剂由达柯公司提供。

1．2．2PCR．SSCP：正常对照采用人外周血白细胞DNA；P53基因第5、6、7和8外显子，片段长度分别为21lbp、185bp、139bp、200bp。PCR反应条件：94℃保温lmin、55℃40s、72℃30s共32个循环后72℃延伸5min，反应完成后，取5l产物行2％琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物。然后取1OPCR产物加等量变性上样指示剂，沸水中变性8min，立即冰浴5min，取6上样于8％非变性聚丙烯酰胺凝胶行垂直电泳。

1．3统计学方法

计数资料以率(％)表示，组间比较采用检验，P<0．05为差异有统计学意义。

2结果

2．1P53基因的突变与人外周血白细胞DNA谱带对照，突变的标本显示异常泳动带，表现在增多、减少或变位。在36例食管鳞状细胞癌组织中出现P53基因突变l4例，突变率为38．89％，其中第5外显子4例、第6外显子3例、第7外显子2例、第8外显子5例。作者单位：450052郑州市，郑州大学第五附属医院病理科

2．2肿瘤分化程度与P53基因突变的关系依据常规病理，将食管鳞状细胞癌的分化程度分为高分化、中分化、低分化癌。36例食管鳞状细胞癌患者中，高分化癌9例，P53基因突变2例(22．22％)；中分化癌l6例，P53基因突变5例(31．25％)；低分化癌11例，P53基因突变7例(6364％)。低分化癌的P53基因突变率明显高于中分化、高分化癌的突变率(P<0．05)。

2．3淋巴结转移与P53基因突变的关系36例食管鳞状细胞癌患者中，有淋巴结转移者2l例，P53基因突变l2例(57．14)％；无淋巴结转移者15例，P53基因突变2例(13．33％)。有淋巴结转移者P53基因突变率高于无淋巴结转移者突变率(P<0．05)。

3讨论

本文36例食管鳞癌患者中发生P53基因突变l4例，突变率为38．89％，表明在食管鳞癌发生时，有较高P53基因突变率。P53基因在正常细胞生长分化过程中起着负调控作用，而突变的P53基因则失去了正常P53基因的功能，引起细胞恶性增殖，导致肿瘤的发生。P53基因位于染色体17P13，是人类肿瘤中突变率较高的抑癌基因，突变点多在5—8外显子。大量研究证实P53基因突变参与了食管鳞癌的发生与进展，在食管鳞癌中有较高P53基因突变率。本结果表明：(1)低分化癌的P53基因突变率明显高于中分化、高分化癌的突变率(P<0．05)；(2)有淋巴结转移者P53基因突变率高于无淋巴结转移者突变率(P<0．05)。综上所述，肿瘤分化程度及淋巴结转移情况与P53基因突变有相关性。