关于PCR技术与细菌学的关联透析

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摘要：在临床微生物检验中，医学论文常规分离方法是最基础的，也是最广泛的，并不是所有的病原菌的检测都能用pcr技术代替，因此，应用PCR技术时，必须有所选择。

关键词：PCR技术感染衣原体

一、PCR检测结核分支杆菌

结核杆菌不产生内外毒素，其毒性物质主要为索状因子和硫脂，人类对其有较高的易感性，最易受损害的器官是肺，内消化道和接处感染者很少，绝大多数是由呼吸道人侵导致感染和发病。结核和其他分支杆菌感染疾病的诊断时间长，且非常复杂。临床医生根据临床表现、X线检查、直接镜检、皮肤实验和抗结核疗效进行初步诊断。涂片镜检虽然简单，经济和应用广泛，但阳性率低，而且只能提示有分支杆菌，无法鉴别是结核分支杆菌还是其他分支杆。因此，确诊病原只能依赖分支杆菌的培养和菌型鉴定分支杆菌的培养，不仅阳性率低，而且花费的时间也长，而且经常会因为被污染而失败。PCR技术为解决这一问题开创了新的前景。微量DNA扩增1护~106倍绩以上，可直接检测临床标本中的病原菌。标本的留取及送检:痰、肺及气管灌洗液、胸腹水、脑脊液、尿液、血液留取后送检。按试剂盒说明步骤处理标本。PCR扩增和检测。结果判断:痰标本以外的体液标本，若阳性，可作为结核病诊断依据，若痰标本阳性结果还应结合X线检查及临床症状等，作出诊断。

二、PCR检测衣原体

沙眼衣原体是常见的引起人类沙眼、结膜炎和性传播疾病的病原体。包括尿道炎、宫颈炎、输卵管炎、流产、性病性淋巴肉芽肿、直肠炎、肺炎、新生儿结膜炎等。近年来报道，1月一4月婴儿由其引起肺炎的比例较高，患儿主要表现为痉挛性咳嗽，同时伴有临床症状。因为衣原体的细胞内寄生性，临床诊断必须通过细胞培养，其方法费时，而且难度也高，如果用免疫法测定，其结果的可靠性又低。这时，PCR的诊断就非常关键，应用PCR体外扩增DNA有效检测特异性序列的方法，适合沙眼衣原体的检测，其检测出的阳性率比细胞培养及其它方法都高.标本采集：男性取尿道拭子或前列腺液立即送检，女性取阴道拭子送检。标本处理及扩增方法，按试剂盒说明进行。

三、PCR检测支原体

1、解尿支原体

解脉支原体是非淋菌性尿道炎中重要的病原菌，可引起尿道炎、产褥热、宫颈炎、盆腔炎、不育症、羊膜绒膜炎等。临床诊断使用PCR方法比较方便快捷。标本的采集:支原体实是包内寄生，因此在取材时要注意，对男性患者要求3小时内不排尿用较细的灭菌拭子插人尿道，用力刮尿道壁，尽量取上皮细胞，以免因取材不当造成假阴性。按试剂盒说明进行处理。阳性结果可诊断支原体感染。因大部分非淋菌性尿道炎的病原菌，主要是解脉支原体，人型支原体也是性传播疾病的病原菌。如试剂盒只是检测解脉支原体的，阴性结果也不能排除其它支原体感染。

2、肺炎支原体

肺炎支原体以青少年发病为多见，临床中约有80%慢性气管炎患者合并肺炎支原体感染。临床表现为非典型肺炎，以发热、头痛、咽喉痛、肌肉酸痛为主。支原体肺炎占肺炎的20%，在人群密集处可达50%。感染过程中可从胸水、血液、脑脊液等分离到病原菌。如作培养，菌落5天~14天后才出现，也可用血清方法检测，其它方法的敏感性不高，PCR法扩增特异基因序列快捷敏感。标本采集:痰、痰咽拭子、肺及支气管盗洗液等标本送检。标本的处理及扩增按试剂盒说明操作。阳性结果可作为诊断依据。

四、PCR检测嗜肺军团

菌嗜肺军团菌是一种具有高度爆发性流行性呼吸道疾病，通过空气传播进人肺脏。临床表现多种多样，高发于夏秋季节。肺炎是军团军感染的最常见疾病，起病突然，伴高热不适，干咳无痰。有痰后，伴有炎症，革兰氏染色不能说明是什么菌感染。肺部以外的症状通常是意识模糊及腹泻。军团菌易感人群是免疫力低下的人。易感因素有吸烟、慢性心血管症、肾衰竭、免疫性疾病或治疗引起的，因器官移植，使用了大剂量类固醇治疗的患者。标本采集:痰、气管分泌物、胸水和血液。按说明操作处理标本。阳性结果可作为诊断依据。