高效液相色谱法测定论文

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DeterminationofMatrineOxgmatrinecontentinKangfulingcapsulesbyHPLC

【Abstractobjective】TosetupamethodforqualitycontrolofFuyankangtablets.METHOD：HPLCmethodwasdevelopedtoquantitativedetermination.TheseparationwasperformedonAgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm,5μm.Themobilephasewasacetonitrile-methanol-phosphatebuffer(pH=6.8)(16：16：68).Theflowratewas1.0ml·min-1.TheUVdetectionwavelengthwas220nm.Thecolumntemperaturewas30℃.RESULTS：ThelinearrangeofMatrineandOxgmatrinewereat0.02～0.40mg·ml-1(r=0.9995)and0.01～0.20mg·ml-1(r=0.9997)respectively,theaveragerecoveries(n=6)were98.2%and97.6%withRSD1.4%and2.2%.CONCLUSIONThemethodissimpleandaccurate,itcanbeusedforqualitycontrolofKangfulingcapsules.

【Keywords】HPLC；Kangfulingcapsules；Matrine；Oxgmatrine；Determination

康妇灵胶囊为《国家药品监督管理局标准（试行）》收载的品种，由苦参、杠板归、黄柏、益母草、鸡血藤、红花龙胆、土茯苓、当归等8种中药组成。具有清热燥湿、活血化瘀、调经止带的功效，为妇科常用中药[1]。苦参含有苦参碱、氧化苦参碱等成分，我们采用高效液相色谱法测定制剂中苦参碱、氧化苦参碱的含量，该项方法操作简便、快速、准确可靠，可用于康妇灵胶囊的质量控制论文。

1仪器与试药

1.1仪器LC-2010A高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站。

1.2试药苦参碱对照品（批号：100078-200414），氧化苦参碱对照品（批号：110780-200004），由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；康妇灵胶囊为市售样品（贵州和仁堂药业有限公司，规格：0.4g·粒－1，批号：20061108，20061202，20061216）。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm，5μm，流动相：乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液（PH6.8）（16:16:68），检测波长：220nm，流速：1.0ml/min，柱温：30℃。

2.2溶液配制

2.2.1对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的苦参碱对照品和氧化苦参碱对照品各适量，分别加甲醇制成每1ml各含0.4mg的对照品贮备液；再精密量取苦参碱对照品贮备液和氧化苦参碱对照品贮备液各适量，加甲醇制成每1ml含苦参碱0.2mg、氧化苦参碱0.1mg的混合溶液，作为对照品溶液。

2.2.2样品溶液的制备取康妇灵胶囊10粒内容物，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨溶液2ml使湿润，再加三氯甲烷（CHCl3）30ml，超声处理（功率250W，频率33KH2）20分钟，滤过，取滤液，再用三氯甲烷洗涤残渣、容器及滤器4次，每次5ml，滤过，滤液合并，置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性对照溶液的制备取除苦参以外的处方中其余药材的十分之一量，按法制成片，再按样品制备方法，制成阴性对照溶液。

2.3专属性试验

分别精密吸取样品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间（1氧化苦参碱：6.866min；2苦参碱：15.422min）的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。

2.4线性范围考察

精密吸取对照品贮备液各适量，分别加甲醇配成浓度分别为苦参碱：0.02、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40mg·ml－1，氧化苦参碱：0.01、0.03、0.05、0.10、0.15、0.20mg·ml－1的溶液，摇匀，滤过，精密吸取续滤液各10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，其浓度（C）为横坐标，线性回归，苦参碱回归方程为：A=4.34×105C＋3.87×102，r=0.9995；氧化苦参碱回归方程为：A=1.21×104C＋8.07×102，r=0.9997。结果表明，苦参碱在0.02～0.04mg·ml－1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系；氧化苦参碱在0.01～0.20mg·ml－1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。

2.5精密度

取样品（贵州和仁堂药业有限公司，批号：20061108）按“2.2样品溶液的制备”方法制备样品溶液，重复进样5次，进样量10μl，在上述色谱条件下求得苦参碱峰面积RSD为0.9%，氧化苦参碱峰面积RSD为1.2%，表明精密度较好。

2.6稳定性试验

取样品（贵州和仁堂药业有限公司，批号：20061108）溶液，在0、2、4、8、24h分别进行测定。结果表明样品溶液在24h内基本稳定，苦参碱峰面积

的RSD为1.1%，氧化苦参碱峰面积的RSD为0.8%。

2.7重复性试验

取样品（批号：20061108）共6份，分别按“2.2样品溶液的制备”方法制备样品溶液，进行测定，求得苦参碱含量的RSD为0.7%，氧化苦参碱含量的RSD为1.6%，表明重复性较好。

2.8加样回收率试验

精密称取已知含量的样品（贵州和仁堂药业有限公司，批号：20061108，苦参碱含量3.01mg·g－1，氧化苦参碱含量2.42mg·g－1，平均装量0.3916g·粒－1）适量，共6份，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入苦参碱对照品溶液（0.2001mg·ml－1）、氧化苦参碱对照品贮备液（0.1000mg·ml－1）各适量，挥去甲醇，按“2.2样品溶液的制备“方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，结果见表1。

2.9样品含量测定

分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定三批样品中苦参碱、氧化苦参碱峰面积，按外标法计算其含量（n=5），结果见表2。根据三批样品所测结果，暂定每粒康妇灵胶囊的苦参碱含量质控定量限为1.8mg，氧化苦参碱含量质控定量限为0.5mg。表1苦参碱、氧化苦参碱加样回收率试验表2三批样品含量测定结果

3讨论

3.1流动相的选择笔者选择了三种流动相：①乙腈-0.1%磷酸溶液（20:80）（三乙胺调节PH值至8.0）[2]；②乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液（PH6.8）-三乙胺（18:18:70:0.1）[2]；③乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液（PH6.8）（16:16:68）。经多次测试结果表明，前两种流动相所得峰形较宽，含杂质多，而采用③乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液（PH6.8）为流动相所得样品峰形好，干扰成分少，故选此做为含量测定的流动相。

3.2溶剂的确定笔者比较了用甲醇溶解供试品及用流动相溶解供试品，结果以甲醇为溶剂分离效果好，且保留时间短。

3.3通过对3批样品中苦参碱、氧化苦参碱的测定，结果表明苦参碱最高含量为1.38mg·粒－1，最低为1.18mg·粒－1；氧化苦参碱最高含量为1.08mg·粒－1，最低为0.94mg·粒－1。综合考虑确定限量，每粒含苦参碱不得低于1.8mg，含氧化苦参碱不得低于0.5mg。

本方法结果准确，方法简便，重现性及回收率均理想，可以有效地控制产品质量。

【参考文献】

[1]《国家药品监督管理局标准（试行）》[S]．2002．

[2]中国药典[S]．2005，497～498．