医学毕业论文:糖原合成酶激酶

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【关键词】胃癌；,,GSK

摘要：目的：探讨糖原合成酶激酶3β(Glycogensynthasekinase3β，GSK3β)与胃癌细胞中PCNA表达之间的关系及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测75例人胃癌组织和10例正常胃粘膜组织中GSK3β和PCNA的蛋白表达。结果：GSK3β蛋白在胃癌中的阳性率为48.00%。GSK3β的蛋白表达与胃癌患者的分化程度、TNM分期以及淋巴结转移均密切相关（P＜0.05）。在75例人胃癌组织中，COX2、EGFR蛋白表达之间呈显著负相关（P=0.000,r=0.422）。结论：GSK3β的低表达促进了胃癌细胞的增殖，有一定的预后意义。

关键词：胃癌；GSK3β；PCNA；免疫组织化学

糖原合成酶激酶3β(Glycogensynthasekinase3β，GSK3β)作为一种丝/苏氨酸蛋白激酶，其生物学作用已远远超过了最初认为的糖代谢调节酶的功能。新近研究发现，GSK3β能磷酸化多种底物，包括代谢与信号蛋白、细胞结构蛋白和转录因子等，因而在细胞的生长、发育、肿瘤发生等过程中发挥着重要的作用［1,2］。近几年来的研究发现GSK3β的活性能抑制某些肿瘤细胞的增殖和生存［3］，关于GSK3β参与胃癌细胞增殖的确切机制目前尚不清楚。因此，本研究探讨了GSK3β与胃癌细胞中PCNA表达之间的关系及其临床意义。

1材料与方法

11标本来源

随机收集本院2003年9月～2005年10月手术切除后的胃癌标本75例，其中男性48例，女性27例；年龄35～73岁，平均年龄56岁。临床TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期33例，Ⅲ期28例，Ⅳ期4例。伴有淋巴结转移的胃癌组织49例，不伴有淋巴结转移的肺癌组织26例。癌细胞分化程度：高分化21例，中分化31例，低分化23例。正常胃组织10例，为非肿瘤患者手术标本。胃癌手术切除标本取材后经4%中性缓冲福尔马林固定。以4μm厚连续切片3张，1张进行苏木素伊红染色，由两名高级病理医师复查切片并重新诊断，另2张进行GSK3β、PCNA的蛋白检测。

12试剂

兔抗人GSK3β多克隆抗体（SC9166）、鼠抗人PCNA单克隆抗体（ZM0213）、通用型SP试剂盒（SP9000）和DAB底物试剂盒（ZLI9018）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

13免疫组织化学染色及结果判断

采用免疫组织化学SP法。DAB显色，苏木素复染，并镜检分析结果。空白对照用PBS取代一抗，其余步骤不变。GSK3β阳性信号主要定位在细胞胞质，而PCNA则定位在细胞胞核。每例标本在400倍高倍显微镜下选择染色最强的4个视野，计数阳性细胞数。参照文献方法来分析GSK3β、PCNA的表达水平，即“－”为不表达或<30%细胞表达；“+”为视野中阳性细胞数在30%～50%之间；“++”为阳性细胞数51%～70%；“+++”为阳性细胞数＞70%。

14统计处理

根据SPSS11.0统计软件进行处理。用χ2检验和Fisher精确概率法比较GSK3β与胃癌患者临床病理特征以及PCNA表达的关系，P<0.05时被认为有统计学意义。

2结果

21GSK3β蛋白在不同胃组织中的表达

GSK3β蛋白在正常胃组织中呈阳性表达，在肿瘤组织中表达明显减弱，其阳性率分别为：100.00%（10/10）、48.00%（36/75），两者之间的差异有显著性（P=0.002）。

22GSK3β蛋白表达与胃癌临床病理特征及PCNA表达的关系

表1GSK3β蛋白表达与胃癌临床病理特征及PCNA表达的关系（略）

结果见表1所示，GSK3β的蛋白表达与胃癌的分化程度、TNM分期以及淋巴结转移均密切相关（P＜0.05）。而在75例人胃癌患者中，PCNA蛋白阳性表达的56例中，GSK3β有36例呈阴性；PCNA蛋白阴性表达的19例中，GSK3β却16例呈阳性。两者呈显著负相关（P=0.000,r=0.422）。

3讨论

糖原合成酶激酶3(GSK3)是一个多功能的丝氨酸/苏氨酸类激酶，在真核生物中普遍存在。在哺乳动物中包括两个亚型，即GSK3α和GSK3β，分子量分别为51kD和47kD。GSK3最初认为该酶的功能仅仅是磷酸化肝糖原合成酶（glycogensynthase,GS）并使之失活，后来研究表明它有多种生物学功能如参与了胚胎发育、细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡和胰岛素反应等诸多方面［4,5］。GSK3与许多疾病包括肿瘤的发生有关，可以作为一个潜在的药物靶点［6］。但不同细胞和实验体系所得出的实验结果并不一致，显示多种因子参与了GSK3β所调节的增殖信号传递路径。

本研究显示，GSK3β蛋白在正常胃组织中呈阳性表达，在肿瘤组织中表达明显减弱，其阳性率分别为：100.00%（10/10）、48.00%（36/75），两者之间的差异有显著性（P=0.002），表明GSK3β的低表达可能促进胃癌细胞的增殖。Farago等［7］研究表明，在乳腺上皮中GSK3β活性的拮抗作用是有致癌性的，GSK3β的突变或药理学上的下调能够促进乳腺肿瘤的发生。同时在本研究中，GSK3β的蛋白表达与胃癌的分化程度、TNM分期以及淋巴结转移均密切相关（P＜0.05），提示GSK3β可能与胃癌的预后有密切的关系，值得进一步研究。PCNA已经公认可以作为反映恶性肿瘤细胞增殖能力的标志物。在本研究的75例人胃癌患者中，GSK3β与PCNA蛋白表达之间呈显著负相关（P=0.000,r=0.422），进一步表明GSK3β的表达降低能显著促进胃癌细胞的增殖。

参考文献

1EtienneMannevilleS，HallA.Cdc42regulatesGSK3betaandadenomatouspolyposiscolitocontrolcellpolarity．Nature,2003,421:753~756．

2GrimesCA,JopeRS.Themultifacetedrolesofglycogensynthasekinase3betaincellularsignaling．ProgNeurobiol,2001,65(4):391~426．

3MazorM,KawanoY,ZhuH,etal.Inhibitionofglycogensynthasekinase3repressesandrogenreceptoractivityandprostatecancercellgrowth.Oncogene,2004,23:7882~7892.

4FrameS,CohenP.GSK3takescentrestagemorethan20yearsafteritsdiscovery.BiochemJ,2001,359:1~16.

5JopeRS,JohnsonGV.Theglamourandgloomofglycogensynthasekinase3.TrendsBiochemSci,2004,29:95~102.

6OugolkovAV,BilladeauDD.TargetingGSK3:apromisingapproachforcancertherapy?FutureOncol,2006,2:91~100.

7FaragoM,DominguezI,LandesmanBollagE,etal.Kinaseinactiveglycogensynthasekinase3betapromotesWntsignalingandmammarytumorigenesis.CancerRes,2005,65:5792~5801.