异丙酚对兔肝缺血再灌注损伤保护作用及部分生化指标的影响

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【关键词】二异丙酚；肝；再灌注损伤；琥珀酸脱氢酶；腺苷三磷酸

Protectiveroleofpropofolagainsthepaticischemiareperfusioninjuryanditseffectonsomebiochemicalindicatorsinrabbits

【Abstract】AIM:Toinvestigatetheprotectiveroleofpropofolagainsthepaticischemiareperfusioninjury(HIRI)andtheeffectofpropofolonsomebiochemicalindicatorsinrabbitsinvivo.METHODS:Fortyrabbitswererandomlydividedinto4groupswith10animalseach.TheywereHIRImodelgroup(groupA),HIRIplus2mL/(kg・h)normalsodiumgroup(groupB),HIRIplus8mg/(kg・h)propofolgroup(groupC),andshamoperationgroup(groupD).Theactivityofsuccinodehydrogenase(SDH),ATPcontentinhepatictissueandserumalanineaminotransferase(ALT),aspartateaminotransferase(AST)contentwereassayedafterreperfusionfor30minand60min.RESULTS:SDHactivityinhepatictissueingroupAandBdecreasedsignificantlycomparedwiththatingroupD(P<0.05)andtherewasnodifferencebetweengroupCandD(P>0.05)afterreperfusionfor30minand60min;ATPcontentinhepatictissuedecreasedingroupA,B,CcomparedwithgroupD(P<0.05),butthedecreaseddegreeofgroupCwasmuchsmallerthangroupAandBatthesametime(P<0.05);serumALT,ASTlevelsincreasedingroupA,B,CcomparedwithgroupD(P<0.01,P<0.05).CONCLUSION:PropofolcanenhancetheactivityofSDHinmitochondriaduringischemiareperfusionandincreasetheATPcontentinhepatictissue,thusshowingtheprotectiveeffectagainstHIRI.

【Keywords】propofol;liver;reperfusioninjury;succinatedehydrogenase;adenosinetriphosphate

【摘要】目的：探讨麻醉药异丙酚对兔在体肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)保护作用及部分生化指标的影响.方法：40只家兔随机分为四组,每组10只,分别为缺血再灌注组（A组），缺血再灌注加生理盐水2mL/（kg・h）组（B组）,缺血再灌注加异丙酚8mg/（kg・h）组（C组）和假手术对照组（D组）.各组于再灌注后30min及60min时测定肝组织中琥珀酸脱氢酶（SDH）活性、ATP含量以及血清谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST)的含量.结果：再灌注后30min及60min时,A,B两组肝组织中SDH活性与D组比较明显降低(P<0.05),C组与D组比较无统计学差异(P>0.05)；A,B,C组肝组织中ATP含量与D组比较均降低(P<0.05),但C组的降低程度小于同时间点的A,B两组(P<0.05)；A,B,C组血清ALT,AST水平均高于D组(P<0.01,P<0.05).结论：异丙酚能增强缺血再灌注时肝细胞线粒体中SDH的活力,增加肝组织中ATP的含量,对HIRI有保护作用.

【关键词】二异丙酚；肝；再灌注损伤；琥珀酸脱氢酶；腺苷三磷酸

0引言

肝脏缺血再灌注损伤(hepaticischemiareperfusioninjury,HIRI)机制复杂,以往大量研究证明与氧自由基（OFR）损害、线粒体功能异常、能量代谢障碍、钙离子超载、微循环障碍、中性粒细胞浸润、内毒素作用等因素有关.本实验通过建立家兔HIRI模型,观测麻醉药异丙酚对肝细胞线粒体中SDH活力的影响,对缺血再灌注肝组织中ATP含量的影响,以及ALT和AST水平的变化,旨在探索异丙酚对在体HIRI的保护作用及机制,为临床肝移植术中应用异丙酚麻醉和保护移植肝功能提供理论依据.

1材料和方法

1.1材料西安交通大学医学院动物中心提供健康雄性家兔40只,兔龄6mo左右,体质量2.0~2.5kg,随机分为4组,每组10只.A组为缺血再灌注组,B组缺血再灌注加生理盐水组，C组缺血再灌注加异丙酚组，D组假手术对照组.术前12h禁食,自由饮水.

1.2方法

1.2.1麻醉与模型建立将各组兔用30g/L戊巴比妥钠（1.0mL/kg）耳缘静脉缓慢注射麻醉后,仰卧固定于手术台上.行颈内动脉插管,持续监测平均动脉压（MAP）,并行同侧颈内静脉置管,接肝素帽待用.A,B,C实验组经兔上腹部正中切口,暴露肝门,用无损伤动脉夹钳闭肝门,完全阻断肝血流30min后除去动脉夹实施再灌注,再灌注后30min,60min取标本待测.D组只手术而不用动脉夹钳闭肝门.

1.2.2用药B,C两组由微量注射泵经颈内静脉分别持续输注生理盐水2mL/（kg・h）和异丙酚8mg/（kg・h）直至术毕.异丙酚为瑞典AstraZenecaS.P.A.生产制造(200mg/支).

1.2.3肝组织中SDH活性和ATP含量的测定各组分别于再灌注后30,60min时取左外叶肝组织少许,生理盐水洗去血液,中性滤纸吸干,准确称取肝组织0.2g,冰浴中制成匀浆,分别按试剂盒步骤,测定SDH活性和ATP含量.

1.2.4下腔静脉血ALT,AST含量测定各组分别于再灌注后30,60min时经下腔静脉抽取静脉血4mL左右,置于37℃水浴箱中1h,血液凝固后3000r/min,4℃离心10min分离血清,-70℃保存备用,全自动生化分析仪测定.

统计学处理：实验结果以x±s表示,使用SPSS11.5统计学软件进行分析处理.组间比较采用单因素方差分析及LSDt两两比较,P<0.05为差异有统计学意义.

2结果

2.1肝组织中SDH活性再灌注后30,60min时,A,B两组肝组织中SDH活性与D组比较降低(P<0.05),C组与D组间无统计学差异(P>0.05,表1).

表1各组肝组织中SDH的活性（略）

P<0.05vsD.

2.2肝组织中ATP含量与D组比较,A,B,C组肝组织中ATP含量于再灌注后30,60min时均降低(P<0.05),但C组的降低程度小于同时间点的A,B两组(P<0.05,表2).

表2各组肝组织中ATP的含量（略）

aP<0.05vsD,bP<0.01vsD,cP<0.05vsC.

2.3血清ALT,AST含量与D组比较,A,B,C实验组血清ALT,AST于再灌注后30,60min时均升高(P<0.05),但C组的升高程度低于同时间点的A,B两组（P<0.01,表3).

表3各组血清ALT,AST含量（略）

aP<0.05vsD,bP<0.01vsD,dP<0.01vsC.

3讨论

我们研究表明,异丙酚能增强缺血再灌注时肝细胞线粒体中SDH的活力,增加肝组织中ATP的含量,对HIRI有保护作用.HIRI是肝移植术、肝叶切除术及严重肝脏创伤手术等常涉及的共同病理生理变化,直接影响患者的恢复及术后生存率.其发生机制复杂,与OFR损害、线粒体功能异常、能量物质耗竭、钙离子超载、微循环障碍等因素有关［1-3］.在肝脏缺血再灌注过程中,OFR大量生成引起强烈的脂质过氧化反应,造成细胞膜基本特性改变,蛋白质（酶）活性丧失等.线粒体的脂质双层膜中不饱和脂肪酸含量比细胞膜多,对过氧化更敏感.而线粒体中的大部分酶活性有赖于膜的完整性,因此膜结构的变化必然影响线粒体酶系的作用.SDH是线粒体内膜呼吸酶系的关键酶之一,其活性的变化可以直接反应呼吸链的正常功能.在本实验中缺血再灌注后各时间段A组肝组织中SDH活力明显低于D组(P<0.05)，说明呼吸链的正常功能受到明显的影响.同时,缺血缺氧、线粒体受损引起氧化磷酸化过程障碍和ATP合成急剧下降,各种离子泵的功能不能维持,细胞离子稳态失衡,导致细胞急剧水肿和细胞内钙超载,启动引起肝损伤的链锁反应［4-5］.再灌注时,由于肝脏微循环障碍,缺血缺氧继续存在,能量代谢障碍进一步加重,导致能量衰竭,最终引发肝脏一系列病理生理改变.本实验结果表明：缺血再灌注后各时间段A组肝组织中ATP含量明显低于D组(P<0.01),也证明ATP匮乏在HIRI中起着重要作用,而改善肝细胞能量代谢有助于HIRI的防治.

新型静脉麻醉药异丙酚是近年用于研究保护脏器IRI最多的药物之一.它具有很强的亲脂性,能迅速而广泛地从血液分布到各器官和身体各部位的组织中去,已在临床上广泛应用.研究认为它对心、脑、肾等重要脏器IRI有很好的保护作用［6-7］,除了能直接作用于血管平滑肌,有扩张周围血管、增加血流、改善循环的作用外还具有抗氧化作用.它的酚羟基结构与OFR清除剂类似,在生物体中可直接与OFR反应生成2,6二异丙基苯氧基团,使OFR灭活,从而抑制自由基介导的脂质过氧化反应［8］.

本实验建立家兔HIRI模型,并设假手术对照组排除手术创伤引起应激反应的干扰,通过测定ALT,AST释放量反应在HIRI中肝细胞膜的受损情况；测定肝组织中SDH活性变化反应线粒体呼吸链受到的影响；测定肝组织中ATP含量变化反应肝脏的能量代谢情况,同时观察静脉给予异丙酚后对上述指标的影响.结果显示：异丙酚组肝细胞中转氨酶的释放量比缺血再灌注组和生理盐水组少,而肝组织中SDH的活性以及ATP的含量比缺血再灌注组和生理盐水组高,表明异丙酚能通过减少OFR的生成、降低OFR水平,减轻脂质过氧化反应,提高细胞抗氧化损伤的能力,稳定肝细胞膜的功能,减轻膜受损程度,增强肝细胞线粒体中SDH的活力,维持线粒体功能的稳定；提高肝组织中ATP的含量,改善缺血肝脏的能量代谢,防止肝细胞水肿、细胞内钙超载和肝脏微循环障碍等的发生,从而抑制了HIRI的生化反应和病理过程,多种途径有效地防治了HIRI.

【参考文献】

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