鹿茸加工工艺论文

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1材料与仪器

1．1药品与试剂

考马斯亮蓝G－250(北京百诺威生物科技有限公司);尿素;PMSF(北京百诺威生物科技有限公司);牛血清白蛋白(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司);乙醇;磷酸;异丙醇;去离子水。

1．2主要仪器

WFJ－2000紫外分光光度计(尤尼柯仪器有限公司);高速台式离心机(Sigma公司);LGJ－12冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司);胶体磨，DHG－9123A电热鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司);电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司)。

2方法与结果

2．1样品制备

鹿茸鲜品:取－80℃冷冻保存的鲜鹿茸，液氮保护下低温粉碎成细粉。鲜品去血:取－80℃冷冻保存的鲜鹿茸，切成小块后室温融化，用去离子水洗去血水，然后抽干水分，液氮保护下低温粉碎成细粉。直接冻干品:取－80℃冷冻保存的鲜鹿茸，直接用小型冻干机冻干，然后在液氮保护下低温粉碎成细粉。鹿茸匀浆品:取－80℃冷冻保存的鲜鹿茸，液氮保护下低温粉碎成细粉，然后加入2倍量去离子水混匀后胶体磨匀浆5min，收集匀浆液。冻干品(加冻干保护剂):取鹿茸匀浆品，加入10%冻干保护剂海藻糖，搅拌溶解，分装于片剂模具中进行冷冻干燥，制备冻干加保护剂鹿茸样品，成品见插页Ⅲ图1。冻干品(未加冻干保护剂):取鹿茸匀浆品，直接分装于片剂模具中进行冷冻干燥，制备冻干未加保护剂鹿茸样品冻干品(加冻干保护剂)40℃10天:取冻干品(加冻干保护剂)放入烘箱，40℃保存10天。制备冻干品(加冻干保护剂)40℃10天样品。煮炸茸:取－80℃冷冻保存的鲜鹿茸，按传统煮炸工艺用沸水煮炸4～5次，60～80s/次，待血从鹿茸另一侧完全渗出后取出60～70℃烘干8h，冷却后液氮保护下低温粉碎成细粉。

2．2供试品溶液的制备

取上述样品，按1∶5的比例分别加入含8M尿素和1mMPMSF的裂解液，冰上裂解30min，期间每10min震荡一次，然后4℃，15000r/min离心45min，取上清液备用。

2．3考马斯亮蓝

G－250染色液的制备称取100mg考马斯亮蓝G－250，溶于50mL乙醇中，加入85%磷酸100mL，最后用蒸馏水定容至1000mL。

2．4方法学考察

2．4．1标准曲线绘制

分别精密量取12．5、15、17．5、20、22．5μL浓度为5mg•mL－1的BSA溶液，加裂解液定容至100μL，摇匀，制备浓度分别为0．625、0．75、0．875、1、1．125mg•mL－1的BSA对照品溶液。分别加入考马斯亮蓝G－250染色液5mL进行染色，在595nm波长下测定吸光度。以溶液浓度(X)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标作线性回归，得回归方程为A=0．4828x+0．0046，r2=0.9988。

2．4．2显色稳定性实验

精密称取鹿茸匀浆样品，依法制备供试品溶液。每隔一定时间测定一次吸光度值，结果表明10min～2h内样品溶液吸光度值无明显变化，RSD值小于2%，说明10min～2h内显色稳定性良好，结果见图3。

2．4．3重现性实验

精密称取鹿茸匀浆样品5份，依法制备供试品溶液，测定蛋白质含量，计算RSD值小于3，表明方法的重现性良好。

3讨论

Bradford比色法是依据考马斯亮蓝G－250染料能与蛋白质结合的特点建立的。考马斯亮蓝G－250染色液在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变成深蓝色，并且其蛋白质含量与染料结合量成正比，该颜色在波长595nm有一个最大吸收峰，通过比色法可测知蛋白质含量。本法最突出的特点是操作极为快速、简单，重复性良好。本实验的研究结果表明，不同加工工艺的鹿茸中蛋白质含量由大到小的顺序依次是鹿茸鲜品(a)＞直接冻干(d)＞匀浆鹿茸(e)＞冻干未加保护剂(g)＞冻干加保护剂40℃10天(h)＞冻干加保护剂(f)＞鲜品去血鹿茸(b)＞煮炸鹿茸(c)。经秩和检验统计分析，其它各组的蛋白质含量均显著低于鹿茸鲜品组(P≤0．05)。说明鹿茸加工过程中的冻干、粉碎、匀浆、加热等工艺均会影响鹿茸中蛋白质的含量。与煮炸鹿茸相比，其它各组的蛋白质含量均显著提高(P≤0．05)。这与鹿茸传统煮炸工艺中的高温加热与去血操作有关。高温加热极易破坏鹿茸中的活性蛋白质成分，而鹿血中含有大量的蛋白类成分，上述操作致使煮炸鹿茸(c)在所有鹿茸制品中蛋白质含量最低。与传统煮炸工艺相比，冻干工艺在低温下进行，有利于保持鹿茸中蛋白类成分的含量和活性。

鹿茸冻干品是由－80℃冷冻保存的鲜鹿茸匀浆后冻干制备的，与鲜鹿茸直接冻干和鲜鹿茸匀浆相比，工艺过程更为复杂。从蛋白质含量上看，鹿茸匀浆组显著低于鹿茸直接冻干组(P≤0．05);鹿茸冻干品组显著低于鹿茸匀浆组和鹿茸直接冻干组(P≤0．05)。说明鹿茸的加工工艺步骤越多，工艺越复杂，对活性蛋白质成分的破坏作用越大。但鹿茸冻干品可以在常温下长时间贮存，能够直接服用，无需在使用前进行粉碎、加热等二次加工，与鲜鹿茸匀浆和鲜鹿茸直接冻干品相比有其自身优势。为进一步提高鹿茸冻干品中蛋白质成分的稳定性，还需通过冻干保护剂种类和用量，以及冻干工艺参数的优选来改善。

作者:靳梦亚董玲戴俊东魏宝霞朱美玲侯成波莫美隗丽单位:北京中医药大学