生物碱范文10篇

1材料与仪器

桑叶总生物碱提取物为市售产品(DNJ含量>50%)。桑叶、桑椹、桑白皮、桑枝药材购于成都荷花池中药材专业市场，经鉴定为Morusalba的干燥叶、果、根皮和嫩枝。硅胶G（青岛海浪化工厂）、732阳离子交换树脂(上海汇珠树脂有限公司)、中性氧化铝(成都市科龙化工试剂厂)、活性炭(成都市科龙化工试剂厂)，其余各种试剂为化学纯或分析纯。TU-1800紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)。

2方法与结果

2.1桑树总生物碱分析方法的研究实验中以桑叶总生物碱提取物为样品进行了分析方法的研究；后经证实，桑椹、桑白皮和桑枝的总生物碱实验结果与之一致。

2.1.1检识反应与生物碱沉淀试剂的反应：取桑叶总生物碱提取物适量，加蒸馏水溶解，以盐酸调pH2～3，过滤，所得溶液为浅黄色，取5份，分别与碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂、硅钨酸试剂、磷钼酸试剂、苦味酸试剂反应，结果见表2。表2桑叶生物碱的检识反应（略）

碘化铋钾、硅钨酸、磷钼酸与样品呈阳性反应，可用于定性鉴别。

【摘要】生物碱是许多中草药及药用植物的有效成分。如何从天然产物中提取与分离生物碱，吸引了人们的广泛关注。传统的提取方法是建立在生物碱的理化性质基础上，有溶剂提取法、直接提取法等。随着超声波、色谱技术、膜分离技术、超临界萃取技术以及酶学技术的应用和发展，其提取与分离方法也不断地得以改进。随着对生物碱药用价值认识的提高，生物碱的提取与分离方法将更加高效、迅速、完善。文章综述了近年来生物碱提取分离的新方法。

【关键词】生物碱;分离;提取;纯化

生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物，大都有明显的生理活性，所以常常是很多中草药的有效成分。生物碱大多数来自植物界，以罂粟科、豆科、防己科、毛莨科等科的植物中分布较多。生物碱含量一般都较低，大多少于1%，长春花中的长春新碱含量只有百万分之一［1］。而中草药所含成分十分复杂，既有有效成分，又有无效成分和有毒成分。为了提高中草药的治疗效果，就要尽最大限度提取有效成分，去除无效成分及有毒成分。因此，如何从天然产物中提取与分离生物碱，吸引了人们的广泛关注，其提取与分离方法也不断地改进和发展。

1生物碱的提取方法

1.1传统的提取法

生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取［2，3］。包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。

［摘要］目的从平贝母植株中分离内生真菌，从中筛选可以产生与贝母药材相同或相似生物碱的菌株。方法以平贝母幼嫩植株为材料，用常规微生物学方法分离出其中的内生真菌。以碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂和碘化汞钾试剂分别对这些真菌的提取物进行生物碱定性检测；再对阳性样品进行TLC分析，并与药材提取物进行比较。结果从平贝母幼苗中共分离出9种内生真菌，其中一种（Fu7）在3种生物碱定性反应中都呈阳性，其菌丝提取物经薄层层析后，出现两个与药材样品有相同Rf值的斑点。结论该内生真菌菌株应具有产生贝母生物碱的能力。

［关键词］平贝母；内生真菌；生物碱

平贝母（Fritillariaussuriensis）为常用中药材，其中的贝母碱类化合物有清热润肺、止咳化痰等功效。由于对其需求量大，而且植株生长缓慢，野生资源人为破坏严重，自1987年起便被《中国珍稀濒危保护植物名录》列为渐危种［1］。植物内生真菌是指生活在植物体内或生活史的一定阶段处于植物体内的真菌，它们在植物体内的存在具有一定的普遍性，其中一部分可能产生一些与其宿主相同或相似的生理活性成分，包括治疗人类疾病的药物［2，3］。因此，如果能从贝母中分离出可以产生贝母碱类生物碱的内生真菌，就有可能采用工业发酵的方法生产其药用成分，这样不仅可以改善目前该药材紧缺的状况，还有利于保护这种珍贵的药用植物资源。

1材料与方法

1.1实验材料

平贝母引种自吉林市左家中国特产所，栽种于西北大学校园生物实验地，春季取整株幼苗作为分离内生真菌的实验材料。平贝母药材（干燥鳞茎）购自中药店。

1器材

实验药物：小檗碱、药根碱、黄连碱和巴马亭（由实验室从石柱黄连中提取分离制备，HPLC检测纯度均在97%以上）。实验菌株：金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，金黄色葡萄球菌耐药菌（MR），脓肿分枝杆菌，伤寒杆菌，绿脓杆菌，志贺氏痢疾杆菌，克雷伯氏菌，肠炎沙门菌，巨大芽孢杆菌，枯草杆菌，大肠杆菌变形杆菌，白色葡萄球菌，假丝酵母，白色念珠菌，四联球菌，鱼害粘球菌和鱼肠型点状产气单胞菌（实验菌株由重庆医科大学基础医学院病原微生物教研室和西南大学资源与环境科学学院微生物教研室提供）。

培养基：真菌采用改良沙保氏培养基（配方为：蛋白胨10g，葡萄糖20g，蒸馏水1000ml），鱼病原菌（鲑肾杆菌，鱼害粘球菌和鱼肠型点状产气单胞菌）采用胰蛋白胨醋酸钠培养基（配方：胰蛋白胨5.0g，醋酸钠2.0g，酵母膏5.0g，牛肉膏0.2g，蒸馏水1000ml），其它细菌采用普通细菌培养基加减成分进行培养。配制时固体培养基加入1.5%的琼脂，液体培养基不加。

实验设备：96微孔板，酶标仪，超净工作台，灭菌锅，恒温培养箱。

2方法

2.1微生物敏感性实验将备选的菌种采用较高浓度的药液进行药物敏感实验，初步确定3种生物碱对实验菌的抑菌作用，为进一步研究药物对敏感菌的抑菌能力提供依据。

［摘要］目的从平贝母植株中分离内生真菌，从中筛选可以产生与贝母药材相同或相似生物碱的菌株。方法以平贝母幼嫩植株为材料，用常规微生物学方法分离出其中的内生真菌。以碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂和碘化汞钾试剂分别对这些真菌的提取物进行生物碱定性检测；再对阳性样品进行TLC分析，并与药材提取物进行比较。结果从平贝母幼苗中共分离出9种内生真菌，其中一种（Fu7）在3种生物碱定性反应中都呈阳性，其菌丝提取物经薄层层析后，出现两个与药材样品有相同Rf值的斑点。结论该内生真菌菌株应具有产生贝母生物碱的能力。

［关键词］平贝母；内生真菌；生物碱

平贝母（Fritillariaussuriensis）为常用中药材，其中的贝母碱类化合物有清热润肺、止咳化痰等功效。由于对其需求量大，而且植株生长缓慢，野生资源人为破坏严重，自1987年起便被《中国珍稀濒危保护植物名录》列为渐危种［1］。植物内生真菌是指生活在植物体内或生活史的一定阶段处于植物体内的真菌，它们在植物体内的存在具有一定的普遍性，其中一部分可能产生一些与其宿主相同或相似的生理活性成分，包括治疗人类疾病的药物［2，3］。因此，如果能从贝母中分离出可以产生贝母碱类生物碱的内生真菌，就有可能采用工业发酵的方法生产其药用成分，这样不仅可以改善目前该药材紧缺的状况，还有利于保护这种珍贵的药用植物资源。

1材料与方法

1.1实验材料

平贝母引种自吉林市左家中国特产所，栽种于西北大学校园生物实验地，春季取整株幼苗作为分离内生真菌的实验材料。平贝母药材（干燥鳞茎）购自中药店。

【摘要】【目的】探讨金钗石斛(DendrobiumnobileLindl.)总生物碱和粗多糖对白内障的抑制作用。【方法】采用溶剂法分离提取金钗石斛总生物碱和粗多糖;体外培养大鼠晶状体,加入H2O2与总生物碱(或粗多糖)共培养24h;分别在培养后6、12、18、24h共4个时段于解剖显微镜下观察并记录晶状体混浊度的改变;检测晶状体水溶性蛋白、谷胱甘肽(GSH)的含量及总超氧化物歧化酶(TSOD)和丙二醛(MDA)的活性。【结果】金钗石斛总生物碱和粗多糖均能减轻晶状体混浊度,并能显着升高晶状体水溶性蛋白、GSH含量及TSOD活性,降低MDA的活性(均P<0.05),其中石斛总生物碱高剂量组效果最佳。【结论】金钗石斛总生物碱和粗多糖在体外均有一定的抗白内障作用,其机制与拮抗晶状体的氧化损伤有关,而总生物碱的效果优于粗多糖。

【关键词】金钗石斛/药理学金钗石斛/化学白内障/中药疗法晶状体/病理学器官培养

白内障(cataract)是一种常见的致盲眼病,它是多种因素共同作用的结果,氧化损伤是其发病机制之一[1]。当前许多中药研究都是从提高晶状体抗氧化能力入手,利用抗氧化剂或抗氧化酶激活剂来消除或中和晶状体中的氧化产物,阻止或逆转晶状体变浑浊,从而抑制或延缓白内障的发生发展[2]。石斛是一种名贵中药材,抗白内障是其主治功效之一。已有研究证实,石斛水煎剂可通过改变晶状体相关酶的活性而对D半乳糖性白内障起到防治作用[3],石斛的乙酸乙酯提取物在体外还可抑制醛糖还原酶和过氧化脂质(LPO)的产生[4],这些研究在一定程度上揭示了石斛抗白内障的作用机理。然而,石斛化学成分复杂,其抗白内障的具体有效成分是什么,至今仍未见报道。本实验通过体外培养晶状体,对金钗石斛(DendrobiumnobileLindl.)的粗提物总生物碱(totalalkaloids)和粗多糖(polysaccharides)抗白内障作用进行了探讨,现报道如下。

1材料和方法

1.1动物4~5周龄Wistar大鼠20只,体质量80~120g,雌雄不限,由广州中医药大学实验动物中心提供,合格证号:粤临证字2007A025。

1.2药材和试剂金钗石斛由贵州赤水信天石斛有限公司提供,经广州中医药大学中药鉴定教研室李薇教授鉴定。DMEM低糖培养基(杭州吉诺生物医药技术有限公司);胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);磷酸盐缓冲液(PBS,福州迈新生物技术开发公司);体积分数30%过氧化氢(H2O2,浙江临安化工二厂);吡诺克辛钠滴眼液(武汉天天明药业有限责任公司,批号:070102);Bradford蛋白质定量试剂盒(上海申能博彩生物科技有限公司);谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测定试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品;其他试剂均为国产分析纯。

1草乌的化学成分［6～9］

草乌中主要成分是乌头碱型生物碱，如乌头碱(aconitine)中乌头碱(新乌头碱mesaconitine)、素馨乌头碱(jesaconitine)、次乌头碱(下乌头碱hypaconitine)、去氧乌头碱(deoxyaconitine)，除此之外，草乌中还含有北乌头碱(beiwutine)、得姆啶(denudine)等。

1.1生物碱

王永高等对草乌中的生物碱进行了研究，其生物碱为乌头碱(aconitine)、中乌头碱(mesaconitine)、次乌头碱(hypaconitine)、3-脱氧乌头碱(3-deoxyaconitine)、北乌碱(beiwutine)。李正邦等对草乌中的生物碱进行了更深一步的研究得到新的生物碱：10-羟基乌头碱(aconifine)、14-苯甲酰乌头原碱(14-benzoylaconine)、14-苯甲酰中乌头原碱(14-benzoylmesaconine)、尼奥宁(neoline)、15-α-羟基尼奥宁(15-α-hydroxyneoline)、查斯曼宁(chasmanine)、塔拉萨敏(talatizamine)、弗斯生(foresticine)、牛扁碱(lycoctonine)、氨茴酰牛扁碱(anthranoyllycoctonine)和一海替生重排产物。此外，ZinurovaE.G.等也对草乌的化学成分进行了研究，发现了新的生物碱acsonine。

1.2非生物碱

孙玉军等对草乌中的多糖进行了研究。草乌中的糖类有：木糖(Xyl)、甘露糖(Man)、半乳糖(Gal)和葡萄糖(Glc)。GC表明草乌多糖有鼠李糖(Rha)、木糖(Xyl)、甘露糖(Man)、阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)，它们的摩尔比为Rha-∶Xyl-∶Man-∶Ara-∶Glc-∶Gal=1∶1.7∶203∶1.7∶59.7∶3.5。其中甘露糖含量特别高，占总糖的78.27%；而Rha，Xyl，Ara含量比较少。

【摘要】通过归纳和总结多年来的研究结果及国内外的文献，从生药研究、化学成分研究、药理毒理研究、临床应用几个方面对伏毛铁棒锤的研究进展作一简要综述。认为伏毛铁棒锤AconitumflavumHand.-Mazz.具有多种活性成分及较强的药理活性，且有长期作为民间药和民族药使用的历史。指出该药用植物的各种研究及合理应用均有待深入，为今后的相关研究提供了有用信息。

【关键词】伏毛铁棒锤化学成分药理作用

伏毛铁棒锤AconitumflavumHand.-Mazz.系毛莨科乌头属植物，其干燥块根俗称“铁棒锤”。其主要有效成分为各类生物碱，民间及临床的应用均取其消炎、镇痛及麻醉等功效。

1生药研究

毛茛科乌头属药物作用强烈，疗效较为肯定，且品种众多。史上历代本草著作多有关于川乌、草乌等的记载。本属植物伏毛铁棒锤A.flavum见于《全国中草药名鉴》《中华本草》，作为回药“雪上一枝蒿”的部分植物来源［1］。部颁标准将伏毛铁棒锤A.flavum作为藏药“榜那”的部分基源植物［2］。但四川大学华西药学院等两家单位对“榜那”几类基源品种进行一系列理化鉴定后指出，榜那的生药名似不应为“铁棒锤”，其植物来源不应定为毛茛科植物伏毛铁棒锤A.flavum和铁棒锤A.pendulum，此应再作探讨［3］。据报道，地处西北腹地的甘肃省大部分地区［4,5］、青海省内［6］、宁夏六盘山地区［7,8］、陕西省宝鸡地区的陇县附近、四川省成都以西主产伏毛铁棒锤A.flavum，民间作“铁棒锤（又称铁牛七、三转半、一枝箭等）”入药。同时，伏毛铁棒锤A.flavum与铁棒锤A.pendulum，同为云南产著名草药雪上一枝蒿主要植物来源［9,10］。伏毛铁棒锤A.flavum作为从民间药和民族药开发出的新药材，极大地丰富了我国的中药材品种，也成为中药材资源开发利用的一个方向［11］。

陕西省中医药研究院对铁棒锤药材（伏毛铁棒锤A.flavum来源）质量标准进行了研究。该研究包括药材性状描述、显微特征及薄层鉴定等。重点在含量测定及其方法学的探讨，最终确定以乙醚-氯仿(3∶1)为提取溶媒，振摇作提取方法，实现对乌头碱最佳提取效率，并通过空白实验、稳定性实验、重复性实验、精密度实验及回收率实验证明对溶剂系统对测定结果无影响、供试品溶液在8h内稳定性良好、精密度等良好［12］。由此总结出了一套较为可靠的研究方法，为药企业投料的准确性和临床应用的安全性提供了有用信息。

[摘要]目的：通过设置不同的炮制环节参数和设计加压蒸制正交试验获得不同的附子黑顺片，对生物碱含量和单酯型生物碱与双酯型生物碱的比值比较，研究附子黑顺片在不同工艺参数的加工过程中生物碱的变化趋势，以期获得既能保证用药安全，又能充分保留药效的加工工艺。

[关键词]附子；黑顺片；生物碱；工艺参数

附子为毛茛科植物乌头AconitumcarmichaeliDebx.的子根加工品[1]，主要含乌头类生物碱和一些多糖和脂类物质。附子味辛，性大热，有毒，有回阳救逆、助阳行水、逐风寒湿邪的功效，被称为“回阳救逆第一品”[2]。本研究以减毒增效的目的，设置不同附子黑顺片加工工艺参数获得不同的样品，并进行生物碱的含量的检测与分析，综合分析得到最佳加工工艺。

1文献综述

1.1附子的简介。附子，又名：乌头或附片，别名：草乌铁花、五毒，为毛茛科植物乌头aconitumcarmichaeliDebx.的子根的加工品。收获时间为每年6月下旬至8月上旬，剪除母根、须根，除去泥沙，被称为“泥附子”[1]。根据不同的加工炮制工艺可分为：黑附子(黑顺片)、白附片、淡附片、盐附子、炮附片。传统产地是四川的江油和陕西的城固等地。1.2研究意义。中医里附子的使用有悠久的历史，早在《诗经》、《国语》、《神农本草经》、《本草纲目》等医书中就有介绍。有大量的表明附子具有强心、抗心律失常、抗癌、免疫抑制等多种药理活性[3]。主要有效成分兼毒性成分为乌头碱、次乌头碱与新乌头碱[4]，所以附子在中药的临床应用上受到很大的限制。因此，中药附子的炮制从古至今以减毒为第一目的。为了降低或减除乌头碱，传统工艺经过多次的浸泡、蒸制环节，然而这就导致其他生物碱大量的流失[5-6]。首先传统工艺耗时长，人力消耗大，传统工艺对生物碱的流失较大，没有标准控制。加压蒸制工艺的研究的优点在于耗时短，人工消耗较少，也统一了标准，也提高了附子的品质；其次传统加工工艺各个作坊加工标准不一，都是凭借着经验摸索，因此各个产地的附子品质差异较大，用药剂量难以把控，因此统一规范的饮片炮制加工工艺尤为重要。本次研究通过实验设计进行加压蒸制工艺研究和黑顺片炮制工艺的优化，以期获得既能保证用药安全，又能充分保留药效的加工工艺。1.3附子中化学成分。附子化学成分复杂，附子的化学成分复杂，主要分为生物碱类物质、多糖、脂质类物质、氨基酸等。其中生物碱类物质为其主要成分，包括脂溶性生物碱：双酯型(乌头碱类)、单酯型(苯甲酰乌头碱类)、醇胺型(乌头原碱类)；水溶性生物碱：江油乌头碱、新江油乌头碱、去甲猪毛菜碱等[7]。其中双酯型生物碱乌头碱、新乌头碱、次乌头碱为其主要成分，总百分含量约为0.4%~0.8%，易溶于亲脂性有机溶剂，难溶于水，微溶于石油醚。1.4附子的主要功效。在应用方面，附子不仅在中医领域占有重要的地位，而且现代临床医学中常用附子治疗心脏方面的疾病，并且取得了相对显著的效果[8]。而且有大量的研究表明，附子在抗肿瘤方面也有明显地作用。1.4.1强心作用。有实验表明附子中的生物碱和一些非生物碱类物质都是附子的主要强心作用成分[4]，其中有效成分中分离得到的单体化合物去甲猪毛菜碱、去甲乌药碱[9]、多巴胺等均是附子强心作用的主要成分[10]。丁涛[11]实验结果表明附子中附子苷有改善大鼠心率衰竭的作用并明显降低心率衰竭大鼠死亡率，从而达到达到治疗效果。综合证明附子中含有很多强心成分且强心作用十分明显。1.4.2抗心律失常。徐硕、梁晓丽、李琼，等人[12]研究证明附子的水煎液中去甲乌药碱能使血管扩张，在防治异位搏定型心律失常有显著功效。汪星、孙卫、张铁军[13]用附子水提取物对心律失常小鼠进行实验，实验证明附子能够增强心肌活力和心肌供氧能力，能够平衡心肌氧的供需因而对小鼠的心律失常具有明显的预防作用而且效果十分显著。1.4.3增加血流量及血管扩张作用去甲乌药碱静脉注射液或附子注射液，在对麻醉犬进行静脉注射后，表明其股动脉血流量以及脑血流量均有所增加，血管压力也有所减小，轻度扩张冠状血管[14]。1.4.4抗肿瘤作用。张晓迪，吴酉霆[15]的实验结果表明附子的提取物能对肿瘤细胞有明显的抑制作用，提取物的浓度以及药物在体内存在的时间对肿瘤细胞的生长影响较大，且体内的肿瘤细胞有明显的凋亡趋势。董兰凤、张英俊、刘京生，等[16]人采用附子多糖和阿霉素的共同使用，能明显的促进体内肿瘤细胞的凋亡，附子多糖和阿霉素的共同使用能刺激特异性免疫并加强机体的免疫系统，且体内的杀伤细胞活性显著提高，达到抗肿瘤效果。

2附子黑顺片的加工现状及发展趋势

【摘要】目的研究川芎(CHX)生物碱对局灶性脑缺血再灌注（I/R）大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及动物苏醒后神经功能、脑梗死容积的影响。方法腹腔注射（ip）CHX生物碱50、100、200mg/kg和生理盐水1w后将其制成局灶性脑大鼠损伤模型，并检测血清中的SOD活性、MDA含量，神经功能损伤评分以及脑梗死容积的变化，同时与假手术组比较。结果I/R组与假手术组相比，血清中的SOD活性降低，MDA含量增加（P＜0.01）。CHX50mg/kg组、CHX100mg/kg组、CHX200mg/kg组与I/R组相比，血清中的SOD活性均升高（P＜0.01），MDA含量均降低（P＜0.05），脑梗死容积明显缩小（P＜0.01）；神经功能评分差异显著（P＜0.05）。结论CHX生物碱对脑I/R引发的自由基损伤有保护作用，从而减轻脑I/R后脑组织的损害。

【关键词】川芎生物碱；缺血再灌注；超氧化物歧化酶；丙二醛；自由基

近年来，人们倾向于采用超早期溶栓治疗脑梗死，迅速恢复局部血供，以达到理想的治疗效果，但缺血再灌注（I/R）损伤可引起一系列复杂的继发改变，导致缺血组织损伤恶化〔1〕。如何防止脑I/R，寻找有效的防治药物，促进脑卒中后中枢神经系统功能恢复，一直是相关学科研究的重点之一。某些中药如叁附、大黄、川芎等经临床验证可通过多种环节防止缺血性损伤〔2〕,但目前国内有对照的临床研究病例数较少,本实验通过观察川芎（CHX）中的生物碱对大鼠脑I/R损伤后血清中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量及动物苏醒后神经功能评分、脑梗死容积大小的影响探讨CHX生物碱对脑I/R损伤的保护作用，为CHX防治中枢神经系统缺血性损伤提供理论依据。

1材料与方法

1.1动物分组及给药方法选择健康Wistar大鼠50只,体重280～350g，由吉林大学实验动物中心提供。编号：SCXK(吉)20030004，随机分成5组，每组10只。CHX生物碱由北华大学药学院中药研究室制备,用时调配至所需浓度。①I/R组（生理盐水组10ml/kg），腹腔注射（ip）生理盐水10ml/kg7d，每天1次。②I/R＋CHX50mg/kg组，ipCHX生物碱50mg/kg连续7d，每天1次。③I/R＋CHX100mg/kg组，ipCHX生物碱100mg/kg连续7d，每天1次。④I/R＋CHX200mg/kg，ipCHX生物碱200mg/kg连续7d，每天1次。⑤假手术组，进行手术而未制造大鼠局灶性脑I/R病理模型。⑥阳性对照组，用葛根素（GGS）5mg/kg，连续7d，每天1次。除假手术组外，其余各组用药7d。后制造大鼠局灶性脑I/R病理模型。

1.2I/R造摸方法大鼠用25％乌拉坦ip（0.3ml/100g）加乙醚吸入麻醉。背位固定，颈右侧切口，暴露右颈总动脉（CCA）。向外牵引二腹肌和胸锁乳突肌，由CCA分叉处向头端依次游离。电凝颈外动脉（ECA）的所有分支。在甲状腺上动脉远端结扎，切断ECA，使其主干游离备用，然后分离颈内动脉（ICA）至颅底，结扎其分支翼腭动脉，仅保留ICA入颈主干。用1号丝线在ECA根部打一松扣，用动脉夹暂时关闭CCA和ICA，将预先制备好的尼龙线经ECA主干的切口插入至CCA分叉处,将ECA根部的丝线缚紧,以防止其中的尼龙线滑出或出血，然后移去ICA的动脉夹，将动脉夹缓慢向ICA入颈的方向推进，以分叉处为标记，推进约17mm时可感到阻力，表明尼龙线的头端已通过大脑中动脉（MCA）的起始处,到达较细的大脑前动脉内，移去CCA上的动脉夹，此时即完成右侧MCA的阻塞，缝合切口，将尼龙丝的尾端留在皮外，再灌注时将尼龙线轻轻抽感到阻力时，表明尼龙线的头端已回到ECA的主干中，从而实现MCA的再灌注。术中及术后注意保持体温，室温保持在20℃～24℃。