干细胞范文10篇

摘要:干细胞药物是一种新兴的生物制药产品，具有巨大的潜在治疗意义。目前，大部分国家已将干细胞制剂归为药品进行管理并大力扶持，然而药学生缺乏干细胞相关课程的学习，难以满足干细胞药物产业的发展需求，药学高等教育中开设干细胞药学课程很有必要。文章阐述了课程设置的必要性、培养目标、教学内容和方法等方面，希望通过该课程帮助学生了解该领域的基础知识和最新进展，优化知识结构体系，培养高素质的复合型药学人才，为干细胞药物产业发展奠定基础。

关键词:干细胞;药学教育;人才培养

干细胞是一类可自我更新、多向分化的细胞群体，根据分化潜能大小可分为全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞，根据发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。干细胞治疗是干细胞研究的重要分支，正逐渐发展为生命科学、临床医学、药学等多学科交叉融合的转化应用型新兴学科［1］。随着干细胞基础研究的不断深入，干细胞治疗已在多种疾病中展现出很好的治疗前景，被认为是继药物治疗、手术治疗后的第三种治疗途径［2］。目前，世界上大多数国家和地区都对干细胞产业表现出很大兴趣并积极出台相关政策扶持，预计2020年全球干细胞治疗相关市场市值将达4000亿美元，我国在该领域的市值也将达到500亿美元［1］。因此，发展干细胞治疗及其相关技术对医药发展和人类健康有着划时代意义。目前大多数国家将干细胞治疗相关产品按照药品进行监管，为干细胞治疗这一新兴产业的发展指明了方向［3］。药品是要求极其严格的特殊商品，从业人员都是经过严格的、系统的、规范化培训的药学专业人员。干细胞药物作为医药史上最为复杂的产品，其研发、生产是一项复杂的系统工程，从业人员除了需要干细胞的专业知识，更需要药学专业知识。因此，在药学高等教育中开设干细胞药学课程，在药学生中普及干细胞药物的相关知识，可从根本上吸引更多的药学生从事干细胞药物的研发、生产工作，这必将促进干细胞药物产业的发展。干细胞药学的基本内容涵盖干细胞的基础理论、行业指南、政策法规、临床医学和药学等相关知识，是多学科相融合的一门新兴交叉学科。要创建这一课程，就要求相关研究人员探索出与其相适应的课程体系和教学模式［4］。本教研组联合其他多个学科的优秀人才，结合自身多年从事该领域的经验，探索出了与干细胞药学课程相适应的培养目标、教学内容与教学方式，建立了一套相对完整的干细胞药学教学体系。本文主要阐述在药学本科教学中开设干细胞药学的必要性以及开设该课程的具体思路与方法，让学生充分了解该领域的基础知识和产业发展情况，最终实现干细胞药学专门人才的储备，为行业发展助力。

1.开设干细胞药学课程的必要性

1.1干细胞药学的发展需要药学专家的参与。目前全球已获批了14种干细胞药物，我国国家药品监督管理局已临床默示许可4种干细胞药物，可预计未来几年全球将有更多干细胞药物获准上市。现有从事干细胞产业的人员主要是干细胞相关领域的科研人员，其普遍缺乏系统的药学专业知识，生产的干细胞治疗产品质量参差不齐，药理、药效学相关研究也不够系统和深入，这些方面的欠缺严重制约了干细胞药物治疗相关产业的规范发展。干细胞药学研究涉及药学领域的方方面面，缺乏既懂干细胞又懂药学知识的复合型人才，是干细胞药学发展的主要限制因素。干细胞药物的研发生产、质量控制、注册申报、审查批准等均应严格按照药物的报批流程进行，干细胞药物的药效、药理、毒理、药代等方面的研究也需要药学专家的高度参与。1.2干细胞药学的发展为传统制药行业注入新活力。近几年来，制药行业中传统的化学药物增速放缓，而生物制药却呈飞速上升趋势。干细胞药物作为一种新兴的生物制品药物，其原料来源于人体组织，具有安全性高、副作用小的优点，对运用传统治疗手段治疗效果不好或无效的多种疑难病症有着较好的疗效。如多发性硬化、阿尔兹海默病、脊髓损伤、黄斑病变、小儿脑瘫等［5］。干细胞药物产业是生物制药领域最有发展前景的产业之一，相信会给制药行业带来革命性变革。而现有的药学专业人员对干细胞相关知识了解不多，对干细胞产业的兴趣不足，这使得药学专业人员对干细胞治疗领域的研究参与度不高，这在一定程度上限制了传统制药行业在干细胞药物领域的新发展。究其根源，可能与药学专业高等教育课程中涉及干细胞内容偏少有一定关系。因此，对部分药学专业人才，特别是从事生物制药相关专业的人员普及干细胞药学的相关知识，将极大地促进传统制药行业在生物制品药物领域的发展。1.3药学专业设立干细胞药学课程十分必要。现阶段药学及相关专业的培养方案中主要的基础课程和专业课程包括有机化学、分析化学、生物化学、微生物学、药剂学、药理学、药物分析学、药物化学等，部分医学院校还会开设一些生理学、免疫学、细胞生物学等课程，这些构成药学专业高等教育的常规课程体系［6-7］。目前的课程设置缺乏干细胞药学相关知识的介绍，因此，笔者建议在药学本科教育中也设立干细胞药学选修课程，希望以此可以弥补这方面的教学空白，一方面丰富学生的知识体系，另一方面为学生提供新的药学研究视角。干细胞药物既具有传统药物的特征，又具有自身独特的特点，该领域还有很多问题没有得到很好解决，其需要研究人员运用创造性思维打破常规去解决，所以干细胞药学课程将是培养学生独立思考、分析问题、解决问题的有效工具。该课程的开设能促进干细胞药学基础知识的普及，为该类药物的发展奠定人才知识储备基础。

2.干细胞药学课程的培养目标

【摘要】本研究探讨造血干细胞移植（HSCT）对恶性淋巴系统血液病的疗效。通过8例非霍奇金淋巴瘤（NHL）及3例淋巴细胞白血病患者在前期化疗基础上进行造血干细胞移植，分别观察造血重建、并发症及生存期等指标，以了解造血干细胞移植对该类疾病的疗效。结果表明：HSCT后11例患者(其中自体移植7例，异基因移植4例)造血顺利恢复，均能达到完全缓解（CR）。随访3年，5例NHL患者无病生存，1例NHL患者于移植后2个月死亡，1例自杀；4例接受异基因造血干细胞移植的患者中，1例非霍奇金淋巴瘤（NK细胞型）移植后79天死亡，1例慢性淋巴细胞白血病患者无病生存，2例急性淋巴细胞白血病患者分别于移植后第54天、第17个月死亡。结论：造血干细胞移植是治疗恶性淋巴系统血液疾病的一个有效手段，但自体HSCT的患者尚有一定的复发率，而异基因HSCT患者有可能因严重的移植相关并发症而死亡。

【关键词】造血干细胞移植；淋巴瘤；淋巴细胞白血病

EffectofHematopoieticStemCellTransplantationinMalignantHematologicDiseaseofLymphaticSystem

AbstractThestudywasaimedtoinvestigatetheeffectofhematopoieticstemcellstransplantation(HSCT)intreatmentforhematologicmaglignaciesoflymphaticsystem.Throughobserving8patientswithnon-Hodgkin′slymphoma(NHL)and3patientswithlymphoblasticleukemia,whoreceivedautoorallo-HSCTafterchemotheraphy,thehematopoieticreconstitution,complicationandsurviraltimewereevaluated.Theresultsshowedthat11patients(7patientsafterauto-PBSCT,4patientsafterallo-PBSCT)allachievedhematopoieticreconstitutionandcompleteremission(CR).Withinthreeyearsfollowing-up,5patientswithNHLweresurvival,butonecaseofNHLdiedatthe2monthsafterauto-PBSCT,onepatientsuicided.From4casesreceivedallo-PBSCT,onepatiantwithNHL(NKcell)wasdiedat79dayslater,onepatientwithchroniclymphoblasticleukemiawassurviving,another2casesofacutelymphoblasticleukemiaweredeadat17monthsand54daysrespectivelyafterallo-PBSCT.InconclusionHSCTisaneffectivetreatmentforhematologicmaglignanciesoflymphaticsystem,butthereplasewouldoccurinsomepatientsreceivedauto-PBSCT.Theothersbyallo-PBSCTmightdieofseverecomplicationoftransplantation.

Keywordshematopoieticstemcellstransplantation;lymphoma;lymphoblasticleukemia

造血干细胞移植（HSCT）已被公认为是治疗恶性血液病的有效方法，特别是对急慢性白血病及中高度恶性、初治耐药、易于复发等预后不良淋巴瘤效果尤为突出［1］。外周血造血干细胞移植（PBHSCT）是HSCT中的一种类型，因其采集方法简便，移植后造血重建迅速，痛苦相对较少,易于被患者个人或供者接受，而广泛应用于临床治疗。本研究在已有的造血干细胞移植研究基础上［2-7］，重点探讨HSCT治疗淋巴系统恶性血液病的效果。

【摘要】探寻体外诱导骨髓基质干细胞成软骨细胞的最佳细胞因子，寻求体内修复家兔软骨缺损的最为有效方案。［方法］rhFGF1、rhTGF-β1、rhIGF-I单独或联合应用对骨髓基质干细胞进行体外诱导培养，应用常规染色、MTT、免疫组织化学染色的方法筛选诱导骨髓基质干细胞成软骨细胞的最佳细胞因子，并将其与骨髓基质干细胞复合于纤维蛋白凝胶制成凝胶复合物，直接种植到兔膝关节实验性关节软骨缺损处，并与对照组相比较，观察软骨修复效果。［结果］常规形态学观察，rhTGF-β1和rhIGF-I联合应用诱导的细胞在形态上类似于软骨细胞，免疫组化染色提示诱导细胞具有软骨细胞表型。凝胶复合物直接种植在体内能诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化，修复缺损的软骨，缺少细胞因子的对照组软骨缺损修复效果差。［结论］rhTGF-β1和rhIGF-I联合应用可作为诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的最佳组合，骨髓基质干细胞凝胶复合物能修复软骨缺损。

【关键词】细胞因子骨髓基质干细胞软骨细胞软骨缺损

Abstract：［Objective］Toretrievalabestcellfactorwhichcaninducebonemarrowstromalcells(bMSCs)intochondrocyteinvitroandtoexploreaneffectiveplantorepairrabbit''''schondrocytedefect.［Method］IsolatedbMSCswereculturedinvitro.rhFibroblastGrowthFactor1(rhFGF-1)、rhTransformingGrowthFactor-β1(rhTGF-β1)、rhInsulinlikeGrowthFactor-Ⅰ(rhTGF-Ⅰ)wereutilizated.TheproliferationofcellswasdetectedbyMTTassay,andthemacroscopichistology,HEstainingandimmunohistochemicalexaminationswereperformedtoseekthebestcellfactor.Invivo,toinvestigatetherepairofthearticularcartilage,bMSCscombinedwithfibringlueandrhTGF-β1、rhIGF-Iwascomparedwithcontrolgroup.［Result］ThecellsinducedbyrhTGF-β1andrhIGF-Iweresimilartochondrocytesinmorphology,andimmunohistochemicalexaminationsshowedthecellspossessedphenotypeofchondrocytes.RhTGF-β1andrhIGF-Icoulddifferentiatebonemarrowstromalcellsintocartilagecellsinvivo,andrepairthearticularcartilagedefect.Thecontrolgroupcouldnotrepairthearticularcartilagedefectefficiently.［Conclusion］rhTGF-β1andrhIGF-IarebestgroupwhichstimulatebMSCstodifferenateintocartilagecells.BMSCscombinedwithfibringlueandrhTGF-β1、rhIGF-Icanrepairthearticularcartilagedefect.

Keywords：cellfactor;bonemarrowstromalcells;chondrocyte;cartilagedefect

作者简介：童培建(1961-)，男，杭州人，教授，主任医师，在读博士研究生，研究方向：关节外科，(电话)0571-87070956骨髓基质干细胞（BMSCs）中含有少量的多功能基质干细胞，能向成骨系细胞、成软骨系细胞分化［1］，为骨、软骨组织的损伤提供了潜在的修复可能。临床软骨缺损自行修复的效果较差，可能跟软骨损伤局部BMSCs的含量少有关。因此作者通过对BMSCs在体外扩增培养、应用不同的细胞因子进行诱导，从中寻找体外促进骨髓基质干细胞增殖分化的最佳条件，并将细胞因子与骨髓基质干细胞复合于纤维蛋白凝胶制成凝胶复合物，植入缺损处，探讨体内修复家兔软骨缺损的效果。

1材料与方法

【摘要】骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)，又称骨髓基质干细胞，是骨髓中非造血实质细胞的干细胞，具有高度的自我复制能力和多向分化潜能，可分化成多种细胞。

【关键词】骨髓干细胞

骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)，又称骨髓基质干细胞，是骨髓中非造血实质细胞的干细胞，具有高度的自我复制能力和多向分化潜能，可分化成多种细胞。近来研究表明它可以向三个胚层的多种组织分化，如来源于外胚层的神经元、神经胶质细胞等，MSCs移植为脑缺血患者开辟了一种新的治疗方法。本文对MSCs移植治疗脑缺血的研究综述。

1骨髓基质细胞的生物学特性

1.1目前发现至少存在3种形态的MSCs。Colter等从培养的人骨髓细胞中分离出MSCs后，发现来自单细胞的克隆中除了含有小的梭形和大的扁平MSCs外，还有一种非常小的圆形细胞，这种小圆形细胞有更强的折光性，它们比大的MSCs能更快分裂、增殖，并且有更强的多向分化潜能，当将MSCs放在不同的微环境内时，它们可相应地分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞或成肌细胞等[1-3]。MSCs具有多向分化的潜能，MSCs经静脉途径或局部注射移植到不同的组织时，MSCs即可在相应的组织内分化形成该类组织细胞[3，4]。

1.2MSCs的易粘附、易贴壁生长，易增殖特性使得它们经过数次换液和传代后得到分离、纯化[3]。

【摘要】本研究探讨异基因外周血造血干细胞移植(alloPBSCT)后迟发性非感染性肺部合并症（lateonsetnoninfectiouspulmonarycomplications,LNIPC）的发生、危险因素、预后及治疗方法。对70例alloPBSCT患者的临床资料进行了回顾性分析。结果发现：在存活超过3个月的63例患者中，9例发生了LNIPC，发生率为14.3%，其中5例并发感染,由LNIPC导致死亡者4例。移植时疾病处于晚期及慢性广泛性GVHD与LNIPC的发生显著相关；性别、年龄、预处理方案的选择、HLA相合程度及GVHD的预防等均与该并发症的发生无明显相关。结论：移植后定期监测胸部CT、肺功能等甚为必要，对LNIPC早期诊断者采用强的松复合或不复合环孢菌素A治疗，其中多数患者能获缓解。

【关键词】异基因外周血造血干细胞移植迟发性非感染性肺部并发症移植物抗宿主病

LateonsetNoninfectiousPulmonaryComplicationsafterAllogeneicPeripheralBloodStemCellTransplantation

AbstractTheaimofstudywastoexploretheincidence,riskfactors,outcomeandefficacioustreatmentoflateonsetnoninfectiouspulmonarycomplications(LNIPC)afterallogeneicperipheralbloodstemcelltransplantation(alloPBSCT).SeventypatientsreceivedalloPBSCTwereanalyzedretrospectively.Theresultsshowedthat9outof63patientssurvivingmorethan3monthsoccurredlateonsetnoninfectiouspulmonarycomplications(14.3%).Fiveoutofthe9patientsdevelopedsecondarypulmonaryinfections.In4patients,LNIPCcauseddeathdirectly.Advancedstageofdiseaseattransplantationandextensivechronicgraftversushostdisease(GVHD)happenedinassociationwithLNIPC.However,othertransplantationrelatedfactorsincludingageattransplantation,genderofpatient,conditioningregimen,HLAmatchingandGVHDprophylaxiswerenotsignificantlycorrelatedwiththeincidenceofLNIPC.Itisconcludedthatperformingpulmonaryfunctiontest(PFT)andthoraciccomputertomographyshouldbetakenroutinelyaftertransplantation.MostpatientswhogetcorrectandearlydiagnosisforLNIPCwillshowapositiveresponsetoprednisonewithorwithoutCsA.

Keywordsallogeneicperipheralbloodstemcelltransplantation；lateonsetnoninfectiouspulmonarycomplications；graftversushostdisease

迟发性非感染性肺部合并症（lateonsetnoninfectiouspulmonarycomplications,LNIPC）是造血干细胞移植晚期主要的合并症之一，文献报道其发病率为3%-23.7%［1-3］。迄今为止，这方面的报道多限于异基因骨髓移植（alloBMT），而异基因外周血干细胞移植（alloPBSCT）后LNIPC发生情况的报道尚不多。为此，我们对2000年1月到2004年12月间在我院进行alloPBSCT后患者发生的迟发性非感染性肺部合并症进行总结分析。

【摘要】目的探讨2型重组腺相关病毒（recombinantadeno-associatedvirus2,rAAV-2）载体能否有效地转染NSCs。方法采用含有增强型绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP）报告基因的rAAV-2（rAAV-2/EGFP），以感染复数（multiplicityofinfection,MOI）分别为1×104、1×105、1×106转染体外分离、培养的大鼠胎鼠NSCs，在荧光显微镜下观察EGFP的表达；同时检测子代细胞的活力、增殖倍数、分化情况来评估对其存活、增殖、分化能力的影响；当EGFP表达稳定后，流式细胞仪检测rAAV-2/EGFP对NSCs的转染效率。结果转染10天后各转染组便可观察到NSCs克隆球发出绿色荧光，起始荧光强度不一，随MOI值的增大而增强；各转染组荧光强度随时间的延长而逐渐增强，至转染21天后达高峰并维持，此时流式细胞仪检测rAAV-2对NSCs的转染效率：MOI为1×104、1×105、1×106时转染率分别为25.68%、50.60%、54.72%,荧光指数（FI）分别为4.08、12.72、14.06；转染组和未转染组细胞培养7、14、21天时其细胞活力、增殖倍数、分化差异均无显著性。结论rAAV-2能有效地转染NSCs，所介导的目的基因能高效表达。

【关键词】神经干细胞；2型腺相关病毒；转染；感染复数；绿色荧光蛋白；荧光指数；细胞活力

绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）基因是一种新的报告基因，由于其表达产物GFP可被直接激发产生荧光，不需要任何底物或辅助因子，较传统的标记基因如β2-半乳糖苷酶基因、荧光素酶基因等更具有明显的优越性；在GFP的基础上进行F64L和S65T的突变从而形成增强型绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP），EGFP增强了GFP的荧光性能，更容易观察、检测［1］。2型腺相关病毒具有与人类疾病无相关性、宿主范围广、可整合入细胞染色体DNA介导外源基因长期表达等优点,是较理想的基因载体［2］。随着神经干细胞（neuralstemcells，NSCs）的分离、培养、纯化及生物学功能研究深入［3～5］，寻找NSCs基因修饰载体及标记分子，已成为研究NSCs在体内、外分化调控和细胞工程基因治疗中枢系统疾病的研究热点。运用基因修饰神经干细胞治疗中枢系统疾病具有细胞修复和转基因治疗的双重优势。理想的基因转移载体是基因修饰的关键。

1材料与方法

1.1病毒载体rAAV-2/EGFP购于863生物领域病毒基因载体研究开发基地、北京本元正阳基因技术股份有限公司，滴度为5×1011v.g/ml。

1.2神经干细胞分离、培养、鉴定［6］按参考文献进行，体外分离胚胎大鼠大脑额叶皮质、悬浮培养，经Nestine鉴定为神经干细胞（见图1），作为实验细胞株。

【摘要】目的探讨自体骨髓浓缩干细胞在股骨颈骨折中的成骨作用。方法在加压螺纹钉固定股骨颈骨折的基础上，取骼嵴骨髓血进行分离浓缩，获得的浓缩干细胞注射到骨折处。结果63例股骨颈骨折57例得到随防，骨折均愈合，有2例出现股骨头坏死。结论骨髓浓缩干细胞有明显的促进骨折愈合作用。骨折类型、复位效果对股骨头坏死影响较大。该方法简单、易操作，有推广价值。【关键词】骨折；浓缩骨髓干细胞；移植TheTreatmentofFemoralNeckFracturebyConcentratesStemCellsfromtheBodyMarrowSONGJianhua，ZHONGWei，LIANGJinfeng(1.DepartmentofOrthoptaedics，SonggangPeople′sHospital，Shenzhen518105，China；2.DepartmentofOrthopaedicsthePeople′sHospitalofBaoanDistrict，Shenzhen518100，China)Abstract：ObjectiveTodiscussthetreatmentoffemoralneckfracturebyconcentratesstemcellsfromthebodymarrow.MethodsAfterthreadcompressionnailsfixedfemoralneckfracture，theiliaccrestmarrowbloodwastakentocarryontheseparationconcentration，Theconcentrationstemcellswasinjectedtofractureplace.Results57casesof63femoralneckfracturewerefollowedup.2casesoffemoralheadavascularnecrosisoccured.ConclusionBonemarrowconcentratesstemcellsboostboneunionobviously.Femoralheadavascularnecrosiswererelatedtofracturetype，replacementeffect.Thismethodissimple，easytohandleandisworthytoextended.Keywords：bonefracture；concentrationmarrowcell；transplant随着股骨颈骨折治疗方法增多，出现骨不连和股骨头坏死概率呈下降趋势，由于治疗手段、复位情况、个人技术的不同，各家报道的发生率都不一样。寻求一种治疗股骨颈骨折、避免骨不连和股骨头坏死的有效方法是目前临床研究的热点。近年对骨髓干细胞进行了不少的研究，干细胞的成骨作用得到了肯定［1～3］。临床上也有用骨髓干细胞治疗骨不连的报道［4］。但直接用抽取的骨髓血注入骨不连处，干细胞浓度低，需多次注入，成骨作用显然受到一定影响。如将骨髓干细胞进行浓缩再注入骨折处，成骨作用将大大提高。我院自2002年2月至2006年6月采用加压螺纹钉固定自体骨髓浓缩干细胞治疗股骨颈骨折63例，在这方面进行了一些研究，取得满意效果。1临床资料1.1一般资料本组63例，男41例，女22例；年龄15～30岁22例，31～59岁23例，60～82岁18例，平均40.6岁。Garden分型：Ⅰ型9例，Ⅱ型23例，Ⅲ型21例，Ⅳ型10例；其中车祸伤24例，坠落伤25例，摔伤14例。均采用加压螺纹钉固定。Ⅰ型用1枚螺纹钉固定，Ⅱ～Ⅳ型用2枚螺纹钉固定，入院后完善检查后即行手术治疗，陈旧性骨折1例。Ⅰ型病例在手术同时进行骨髓浓缩干细胞移植，Ⅱ～Ⅳ型固定后5～7d行骨髓浓缩干细胞移植。1.2手术方法及术后处理骨髓干细胞浓缩操作技术：在全麻或连续硬膜外麻醉下，于双侧髂前上棘或骼后上棘消毒，铺无菌巾。用内径1.5mm、长6～8cm穿刺套针穿至松质骨，用20mL的塑料针管抽吸骨髓。在抽吸的过程中，每次将刺针斜面转动60°，每次抽4mL左右。完成一整圈的转动抽吸后，再进针1.5cm，同样的旋转方式吸取骨髓，一个进针点可有几个穿刺方向。可在距原穿刺点4cm处重新穿刺抽吸直至每侧抽吸75mL左右骨髓血。抽出的骨髓血放在一个有抗凝剂(内含15000U肝素)的无菌袋中。利用密度梯度离心原理对抽集的骨髓血进行快速细胞分选，速度为3000r/min，离心5min，离心力可将较重的多核细胞置于周边，便于从剩余物中分离和收集。无核细胞由于质量较轻而位于中间，将其消除。获取的淡黄层除骨髓干细胞外，还包括其他一些单核细胞，其中一些细胞可能是对临床有用的血管生成素和成骨细胞活素的来源［5］，每150mL骨髓血可收集浓缩干细胞30mL。手术方法：在硬膜外麻醉下，病人平卧在骨科牵引床上，在C型臂X线机透视下，边牵引边复位，患肢内旋15°，一定要透视证实复位效果好；两骨折端移位不超过1/5，个别游离骨块不强求复位，颈干角要求达到正常角度。常规消毒、铺巾、取外侧切口，长5～7cm。切开皮肤，逐层分离达股骨，剥开骨膜。在大转子顶点下3cm左右，用配套的导针，按照颈干角130°～135°的角度向股骨头方向旋入，沿导针攻丝后，拧入长度合适的加压螺纹钉，钉尖部达头下0.5cm。另在第1颗螺纹钉下方1cm处并与之平行的方向再钻入第2根导针，同样方法拧入加压螺纹钉。C型臂X线机透视螺纹钉位置和复位情况，务必达到上述复位标准，螺纹钉要固定在位。如果是Ⅰ型骨折的病人，采集干细胞和内固定手术同时进行。在做内固定前先采集骨髓，送到另一间手术室进行分离收集，待手术做完马上将采集到的骨髓浓缩干细胞30mL注入到骨折处。如果是Ⅱ～Ⅳ型骨折，因出血较多，马上行干细胞移植会加重关节囊内压力。5～7d后出血停止、血肿开始吸收，再行干细胞移植为宜：即在5～7d后把病人送到手术室，按上述方法采集骨髓干细胞，将收集的骨髓干细胞30mL在透视下一次注入骨折处。髓象分析：数字数据通过均数和标准差的形式表达，设定P＜0.05为差异有统计学意义，采用多变量分析手段对个体间的性别、年龄与干细胞间的相关性通过spearman相关检验来获得。每个病人抽取骨髓数量平均为150mL，不同个体间骨髓内的有核细胞数目在100～2400万/mL之间。结果是干细胞的数量与性别无关(P＝0.26)，但随着年龄的增大而逐渐减少(P＝0.03)，男性干细胞和年龄无相关性(P＝0.28)，而女性随年龄增长而出现显著的下降(P＝0.04)。术后处理：术后所有病例不牵引。Ⅰ、Ⅱ型骨折病人术后可在床上活动，Ⅲ、Ⅳ型骨折病人不主张术后马上活动，可作被动的轻微活动，2周后在床上主动活动。Ⅰ型病人8周后撑拐下床活动，3个月弃拐下床活动；Ⅱ型病人3个月撑拐下床活动，6个月弃拐下床活动；Ⅲ、Ⅳ型病人4～5个月撑拐下床活动，8～9个月弃拐下床活动。前3个月每个月摄1次片，2～10个月每两月摄1次片，1年后每半年摄1次片。2结果有57例得到随防，随防时间1年至5年，平均3年8个月。骨折愈合时间：2～3个月愈合16例，4～5个月愈合17例，6～7个月愈合15例，8～9个月愈合9例。有2例虽然骨折愈合但分别在1年6个月和2年后出现股骨头坏死，均为Ⅳ型骨折，有游离骨块，骨折端移位1/5。坏死的标准是股骨头密度增高不均匀、塌陷。按Harris标准进行评分，优36例(63.2％)，良19例(33.3％)，差2例(3.5％)，优良率达到96.5％。3讨论骨髓干细胞的成骨作用国内外都作了不少的研究，结果是肯定的［1～3］，如果抽吸的骨髓血直接注入到骨折部位，干细胞的浓度低，成骨作用受到一定影响。Connolly等［6］经过动物实验指出骨髓的成骨能力和骨髓细胞浓度存在正相关，临床研究也证实干细胞浓度控制在1000/cm3以上是很有必要的［7］。我院运用骨髓干细胞浓缩技术治疗股骨颈骨折经5年的随防，结果也证实这一点。57例随防病人中骨折均愈合，骨折愈合时间明显缩短。潘显明等［8］报道82例股骨颈骨折愈合时间最早3个月，而本组最早只有2个月，提前1个月愈合。有1例右侧陈旧性股骨颈骨折的病历较典型。患者男性31岁，在外院手术12d复查，螺纹钉脱落，骨折端移位，到我院就诊，考虑到股骨颈短缩，转我院治疗后即行切开复位带旋髂深血管蒂髂骨瓣移植加螺纹钉内固定术，但术中不慎损伤旋髂深动脉，只好将髂骨块植入到骨折端之间，加长股骨颈。众所周知，股骨颈骨折本身就难以愈合，更何况此病例在骨折端加入无血运的骨块，更是难以愈合。术后我们通过3次注入浓缩的骨髓干细胞到骨折处，9个[1][2]月复查X线片见骨折已基本愈合，并取出内固定，遗憾的是此病例失去联系，没有得到继续随访，以后股骨头是否坏死就不得而知了。此例病例说明一点，在常规下不能愈合的骨折在用干细胞治疗后，竟然愈合了，说明骨髓干细胞有明显的成骨作用。本组随防57例病人中有2例出现股骨头坏死，坏死率3.5％，比文献上报道的21％［9］和青壮年组86％、老年组10％～42％低得多。我们在没有进行浓缩干细胞治疗之前，只作单纯加压螺纹钉固定病例54例，股骨头坏死率达18％，比用干细胞治疗的股骨头3.5％的坏死率高得多，有显著的统计学意义(P＜0.001)。股骨头的血运主要依靠骨内的血管网而无骨膜下血管供应。骨折愈合时间越早，为股骨头血运的重建提供了可靠的保障。而骨髓内的干细胞和血管生成素也能促进骨折处的血管再生，这些因素都可能是本组股骨头坏死发生率低的原因之一。本组病例在术后最早是在8周后才撑拐下床活动，而且X线片提示骨折线已模糊，负重活动要在骨折线基本消失后才能进行。胥少汀等［10］用X线图像分析方法发现股骨头在愈合过程中曾经处于坏死状态的发生率为87％。所以即使骨折开始愈合股骨头仍处于缺血状态，过早的活动对于尚无生机的股骨头是致命的损害。张永飞等［9］对非负重下活动的病例进行观察，股骨头仅发现有骨质疏松，无典型头下囊性变、塌陷等情况。股骨头坏死都发生在股骨颈骨折愈合后负重行走时才开始。但也有主张固定后即下床活动。有学者报道用三刃钉治疗112例，结果分成两组，一组术后2周负重57例，另一组术后12周负重55例，随防3年以上，股骨头坏死无差别。这可能是三刃钉固定股骨颈血管损伤大，2周与12周股骨头血运都难以建立的缘故。我们的经验还是要根据骨折愈合情况决定下地活动的时间，不宜太早。2例股骨头坏死都属Ⅳ型，有骨碎片，复位难度大，移位达1/5。Ⅳ型骨折暴力大，骨折处呈粉碎性，血管损伤重，关节囊内出血多，1周内注射干细胞可能受到一定影响，再加上复位不良，角度也可能出现旋转，改变了骨小梁的应力方向，在负重后尚未重塑应力的骨小梁不能承受身体的压力而出现塌陷。陆维举等［11］分析的影响骨折愈合因素：骨折类型(P＝0.0003)，其后依次是复位质量(P＝0.004)，内固定质量(P＝0.032)，年龄(P＝0.047)，复位差对股骨头坏死起到至关重要的作用，本组病例也证实了这一结果。其他因素相同的情况下，良好复位、有效可靠的固定是治疗股骨颈骨折的基本条件。骨折愈合与干细胞的数量有关，干细胞的数量与年龄、性别也有一定的关系。随着年龄的增长，干细胞会逐渐减少，在青春期骨生长旺盛，骨髓中的干细胞较多，青春期后随着生长停止而减少。但男性下降较慢，而女性比较明显，这可能与绝经前后雌激素水平下降而出现骨质疏松有关。但本组未发现男女各年龄组在骨折愈合上有明显的差异(P＞0.05)，这可能与老年组股骨头坏死率较低、弥补了老年组干细胞数量相对不足有关。骨髓干细胞浓缩技术治疗股骨颈骨折，技术要求不是很高，操作也较简单，取材容易，对身体也没有太大影响，有推广价值。但本组在干细胞移植的时间、剂量上没有对照组，还有待进一步研究。在不同的骨折类型，对干细胞的保留情况不是很了解。如何更好地预防股骨头坏死，出现股骨头坏死应采取什么样的补救措施，都有待进一步探讨。【参考文献】［1］WerntzJR，LaneJM，BursteinAH，etal.Qualitativeandquantitativeanalysisoforthotopicboneregenerationbtmarrow［J］.JOrthopRes，1996，14(1)：8593.［2］BoehmCA，MuschlerGF.Rapidconcentrationofbonemarrowderivedosteoblasticpropenitorcell(CFUOs)inallograftbonepowder［J］.JBoneMinerRes，1999，14(SupplD)：474.［3］ConnollyJF，GuseR，TiedemanJ，etal.Autologousmarrowinjectionasasubstituteforoperativegraftingoftibialnonunions［J］.ClinOrthop，1991(266)：259270.［4］梁雨田，张伯勋，卢世璧，等.经皮自体骨髓移植治疗骨折愈合［J］.中华骨科杂志，1999，19(12)：709711.［5］TateishYuyamaE，MatsubaraH，MuroharaT，etal.Therapeuticangiogenesisforpatientswithlimbischanmiabyautologoustransplantationofbonemarrowcells：apilotstudyandarandomisedcontrolledtrial［J］.Lancet，2002，360(9331)：42735.［6］ConnollyJ，GuseR，LippielloL，etal.Developmentofanosteogenicbonemarrowpreparation［J］.JBoneJointSurg(Am)，1989，71(5)：684691.［7］吴浩波，严世贵.经皮自体骨髓移植治疗骨不连［J］.骨科动态，2006：4249.［8］潘显明，胡修德，谭映军，等.82例青壮年股骨颈骨折治疗结束的评价［J］.中华创伤杂志，2003，16(3)：145147.［9］张永飞，张义修.股骨颈骨折术后股骨头坏死的力学因素［J］.骨与关节损伤杂志，2001，16(4)：270272.［10］胥少汀，刘树清.股骨头坏死图像分析的类型和转归［J］.中华骨科杂志，1995，15(3)：165167.［11］陆维举，许斌，赵建宁，等.股骨颈骨折内固定后骨不连、头坏死的因素分析［J］.中华创伤杂志，1998，14(2)：104105.

[关键词]糖尿病干细胞胰岛健康网讯:

【摘要】本文对本世纪以来干细胞治疗糖尿病的若干研究，包括胰岛的体内发育、分化及其标志物，以及应用胰导管干细胞和胚胎干细胞进行定向诱导分化为胰岛对糖尿病进行细胞治疗的实验进行了综述。随着干细胞技术的不断完善，人类最终能治愈糖尿病。全球糖尿病（diabetesmellitus，DM）患者约1.25亿（我国也已达4000万，预计2025年将达3亿［1］，已成为严重危害人类健康的重大疾病之一，特别是久病引发的多系统损害，及最终的肾功能衰竭。DM发病机制复杂，涉及遗传、环境、免疫调控和化学因子。自1922年发现了胰岛素至今，DM的治疗以药物和注射胰岛素为主，目前，学者们开始关注经胰岛移植恢复患者体内代谢紊乱的方法，但因组织来源匮缺，制约了胰岛移植研究的开展，因此寻找合适的胰岛移植物的研究便成为了当务之急。随着分子、细胞和发育生物学技术的进展，增加了干细胞定向诱导分化成胰岛的可能性但由于这一技术还处于实验室的实验阶段，而且方法也并不统一，因此有必要将近期研究进行汇总，希望能对在这方面进行研究的同僚们有所帮助。1胰岛体内的形成、发育、分化与鉴定

1.1胚胎胰岛分化胚胎胰岛的分化分4个阶段:（1）胚胎9～10周为零散的多激素细胞阶段;（2）胚胎11～15周为未成熟的多激素阶段;（3）胚胎16～19周为单激素核心胰岛阶段;（4）胚胎30周后为多形胰岛阶段（Bocian，HistochemCellBiol，1999）。在胰岛形成过程中，内胚层细胞形成许多小导管网，其末端膨大部分的细胞团发育为外分泌腺泡，与此同时，一些细胞群或细胞索不出现管腔，卷曲成团并与其他细胞索分离开，分散在腺泡之间，内含丰富的毛细血管网，最后发育成具有内分泌功能的胰岛。

1.2胰岛细胞分化的调节Ferber［2］认为胚胎发育早期的信号源于脊索，后期的信号源于间质，经诱导的胰管上皮细胞增殖分化形成胰岛细胞，但至今为止其诱导因素并无统一认识。

PDX1:一种同源框转录因子（homeoboxtranˉscriptionfactor），即胰十二指肠同源异型盒基因（pa-ncreaticandduodenalhomeobox1），编码胰腺十二指肠同源框蛋白1，又称IPF-1、IDX-1、IUF-1。Lu（Lu，Endocrinology，1996）认为PDX1是胰腺发育及胰岛素基因转录表达的关键性转录因子，即决定于胰腺前体细胞向B、A、D细胞的分化。Mckinnon［3］认为PDX1对于肠内胚层背胰芽和腹胰芽的生长、分化起重要作用。Dutta［4］认为早期胰腺表达的PDX-1对胰腺上皮的形成和分化是必需的。Gu［5］认为所有胰腺细胞均来源于PDX1表达的前体细胞，是最先发现的胰腺发育决定基因，随着胰腺发育PDX1的表达逐渐减弱，如缺失将导致胰腺无法形成。Docherty［6］的研究证实小鼠PDX1基因的纯合子缺失、突变会导致胰腺无法形成。ngn3:ngn3即神经元素3（neurogenin3），是胰腺发育过程中短暂表达的蛋白，可能是胰腺内分泌细胞系的定向因子，且在成熟胰岛中不存在。用PDX1启动子促进转基因小鼠中早期胰腺前体细胞中ngn3表达，会导致内分泌细胞数增加，外分泌胞数减少。ngn3缺失的纯合子小鼠中胰岛细胞和nestin胰岛前体细胞在发育各阶段都缺失［6］。Lee［7］认为ngn3基因与胰岛分化有密切关系，因为ngn3基因缺陷小鼠不能表达胰岛其他特异性转录因子，包括islet1、PAX4、PAX6，而缺乏PAX6、NeuˉroD1、NKN6.1或NKX2.2的动物胰腺中表达ngn3，表明ngn3位于这些因子的上游，且对启动内分泌细胞分化必不可少，而分化后期关闭。Gasa［8］通过表达的腺病毒感染胰腺导管细胞，建立了体外调控分化模型，发现ngn3和N

euroD1活化胰岛分化的基因并不重叠，表明这两个bHLH蛋白在胰岛发育活动中具有不同的功能。Mellitzer［9］通过将cDNA插入到前体细胞的3′端非翻译区，通过EYFP定位NGN-3表达，发现内分泌前体细胞在缺乏间充质信号刺激情况下，可在体外扩增，向内分泌细胞分化为其默认的途径。Leon［10］用抗新霉素基因筛选用含Nkx6.1前体基因质粒转染鼠胚胎干细胞。培养后用筛选Nkx6.1阳性细胞，发现这些细胞分泌胰岛素，注入糖尿病鼠体内可使其血糖恢复正常。

摘要：干细胞是上世纪生物医学领域的重大发现，是当前生命科学的研究热点，为世人瞩目。神经干细胞(NeuralStemCell，NSC)是其中最有发展前景的重要分支，它具备未分化特性、增殖和自我更新以及分化产生中枢神经系统主要类型细胞的能力。Mckay将NSC的概念概括为：能无限增殖，具有分化为神绍元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力，能自我更新并提供大量脑组织细胞的细胞。

关键词：神经干细胞临床应用

1NSC的来源

据来源部位的不同，可分为胚胎来源及成体来源，分别称为胚胎干细胞(EmbryonicStemCell，ESC)及成体干细胞(AdultStemCell，ASC)。ESC来源于胚胎胚泡阶段，即胚胎发育过程中植入于宫壁内之前阶段。ASC来自于成体组织，能在很长一段时间内准确复制自己，进行自我更新，能生长成成体的细胞类型，具有一定形态特征和指定的功能。由于ESC研究与应用面临伦理、宗教、法律、免疫排斥和潜在致瘤性等问题，在实际操作上仍有一定困难。而ASC“可塑性”的发现及相关研究在不同程度上避免了这些问题，是细胞替代治疗和基因组织工程研究的热点之一。

2临床应用

对于神经系统退行性病变及严重损伤，NSC移植有可能替代衰老、变性和死亡的神经细胞，重建神经网络，恢复受损的脑功能。这种治疗方法具有以下的特点：a.NSC在脑中能根据周围环境的诱导而分化成相应的细胞类型，其形态功能与附近原有细胞非常类似。b.免疫源性弱，免疫反应小。c.低毒性，致瘤性弱。

【关键词】干细胞动脉缺血移植护理动脉硬化闭塞症是一种退行性病变，是大、中动脉的基本病理过程，主要是细胞、纤维基质、脂质和组织碎片的异常沉积，在动脉内膜或中层增生过程中复杂的病理变化。经典的治疗方法主要有药物、内膜剥脱术、旁路转流术和球囊扩张支架成形术等，但均有一定指征、创伤和局限性。肢体外周血干细胞移植是下肢动脉缺血性疾病最有前景的方法〔1〕。1资料与方法11病例资料2004年9月～2005年10月我院严重下肢缺血的患者31例，男27例，女4例，年龄33～71(平均52)岁，分别诊断为动脉硬化闭塞症21例，血栓闭塞性脉管炎8例，广泛动脉闭塞2例；所有患者体验均未触及明显的足背和胫后动脉搏动，皮温低于正常肢体；合并高血压17例，糖尿病19例，脑梗死史2例，冠心病史4例，长期吸烟史22例。12移植方法①术前骨髓评估：移植前进行骨髓像评估，发现1例骨髓增殖减低，应用粒、单核细胞集落刺激因子，4d后复查明显好转。②单个核细胞的获得：局麻下抽取自体骨髓300～400ml，在体外经过淋巴细胞分离处理、离心后，提取单个核细胞层，稀释成单个核细胞悬液80～120ml。③干细胞移植：硬膜外麻醉下，根据缺血范围，选取缺血肢体大腿中下段及小腿部前、后、外肌群肌肉注射，每个穿刺点1ml/次，间隔1cm，多点穿刺注射。术后7～10d出院。13判断标准痊愈:术后动脉搏动良好,疼痛缓解,皮温、肤色恢复正常、间歇性跛行消失；显效：动脉搏动恢复较健侧弱,疼痛明显减轻,皮温、肤色明显改变、间歇性跛行距离超过1000m；有效：动脉仍不能触及，但疼痛减轻、皮温较前升高，肤色由术前的苍白、青紫转为暗红色、间歇性跛行距离超过500m；无效:动脉无触及，症状、体征无明显改善、间歇性跛形距离无明显变化。14护理方法在进行常规护理基础上，辅以足部护理、心理护理，并指导患者进行功能锻炼，观察患肢血运情况，对出院患者进行指导。15结果术后第1天患者均反映患肢不适感好转。出院时，所有患者静息痛消失，麻木感和冷感减轻，跛行距离延长。2例术后1个月症状出现反复，表现为跛行距离恢复至术前水平。1例闭塞性血栓血管炎(TAO)患者，术后3个月再次出现晚间患肢麻木、怕冷。所有患者均无病情加重。所有患者均未恢复正常水平。2讨论评估患者心理状况，针对不同心理进行有针对性的疏导。由于长期的情绪波动，会促使机体丘脑/垂体/肾上腺素系统发生变化，外周血管长时期处于收缩紧张状态，神经系统兴奋增强，机体儿茶酚胺增加，一方面促进血管收缩，使血压升高，另一方面降低疼痛阈值，使患者承受疼痛的能力减弱。因此，护理人员应加强与患者的沟通，以消除患者的不安，取得配合。吸烟是动脉缺血性疾病的主要危险因素，力劝患者戒烟，以减少烟碱和尼古丁对血管的刺激。患者宜摄入高热量，高蛋白，高维生素饮食，少食动物脂肪及胆固醇含量较多的食物，改善营养状况，指导患者有规律的下肢功能锻炼，以改善下肢血液循环，促进侧支循环的建立。动脉缺血患者多存在肢体末端血运障碍、缺血营养障碍，进一步发展可造成溃疡和坏疽。护理内容包括：①每日用温水洗脚，用毛巾擦干，不可用力摩擦，揉搓皮肤；②保持皮肤干燥、滋润，穿棉袜及透气性良好松软的鞋子，并及时更换，保持鞋袜干爽，洁净。足部可涂凡士林油保持皮肤滋润；③保护足部免受损伤，注意修剪指甲，注意足部保暖，严禁冷热敷；④有肢端慢性溃疡和坏疽者，湿性坏疽可用消炎液湿敷，分泌物减少后改用生理盐水换药，每日1～2次，干性坏疽应保持干燥，滋润，防止感染〔2〕。自体骨髓干细胞(BMSC)移植后，即可行局部按摩，以促进侧支循环的建立，从而减轻肢体凉、痛症状。术后1d鼓励患者缓步行走，在预计发生间歇性跛行疼痛之前停步休息，如此每天进行数次。另外，也可采用Buerger运动，即病人平卧，先抬高患肢45°，1～2min后再下垂2min，并作伸屈或旋转运动10次，如此每次重复5次，每天数次，循序渐进，逐步增加活动次数和力度。由于此手术方法的目的是改善肢体血运，因此，术后要密切观察患肢皮肤温度、皮色、感觉、肌力、疼痛及肢端动脉搏动情况，每小时观察1次，并做好详细记录。本组资料发现，自体BMSC移植治疗动脉缺血，所有患者术后7d时疼痛均缓解，冷感减轻，间歇性跛行距离缩短，踝/肱指数升高。在术后1～3月出现症状反复，但与术后7d时无显著差异。自发性出血是尿激酶及肝素的主要副作用，在用药过程中，应注意观察口腔黏膜、皮肤、牙龈等处有无出血点，穿刺点有无渗血及血肿发生。31例患者住院期间均接受抗凝、溶栓治疗，5例因凝血指标异常而减小抗凝溶栓药物的剂量；1例因有皮肤出血点而减少用药次数和药物剂量。因此，在抗凝、溶栓治疗期间应每隔2d查凝血指标1次，以及时调整药物用量。出院时指导病人：①功能锻炼：采用被动运动与主动运动相结合的方法，按摩由小肌群到大肌群，由局部到整体，使用助行器到脱离助行器自己行走为原则〔3〕。②用药指导：出院后仍需服用小剂量抗凝、祛聚药物，指导患者观察皮肤黏膜有无出血现象，定期复查凝血时间，血、尿常规等。③复诊：一旦发现肢体疼痛，皮温降低，应立即到医院就诊。【参考文献】1姚燕丹，林少芸，胡以则肢体干外周干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的研究进展〔J〕中国医药导刊，2004;6(6)：42012蒋雪松动脉硬化闭塞症肢体缺血的护理〔J〕医药论坛，2005；26(9)：7673胡琼华，张红，郭晖介入治疗急性肢体动脉栓塞病人的护理〔J〕护理学杂志，2003;8(2):119