代理商协议范文

导语：如何才能写好一篇代理商协议，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

文明接待礼仪知识之让座与介绍

如果是长者、上级或平辈，应请其坐上座，主人坐在一旁陪同;如果是晚辈或下属则请随便坐。

如果客人是第一次来访，应该给家人介绍一下，并互致问候。然后沏茶、递烟或拿出水果、小吃等招待客人。如果请客人吃东西，应问客人是否要洗手;如果请客人吃西瓜，应准备好放瓜子、瓜皮的盘子和毛巾。

文明接待礼仪知识之谈话

谈话是待客过程中的一项重要内容，是关系到接待礼仪是否成功的重要一环。首先，谈话要紧扣主题。拜访者和接待礼仪者双方的会谈是有目的的，因此谈话要围绕主题，不要偏离主题。如果是朋友之间的交流，要找双方都感兴趣的事情谈，不要只谈自己的事情或自己关心的问题，不顾对方是否愿听或冷落对方。其次，要注意谈话的态度和语气。

谈话时要尊重他人，不要恶语伤人，不要强词夺理，语气要温和适中，不要以势压人。第一：会谈时要认真听别人讲话;第二：不要东张西望地表现出不耐烦的表情，应适时地以点头或微笑做出反应，不要随便插话;第三：要等别人谈完后再谈自己的看法和观点，不可只听不谈，否则，也是对别人不尊重的一种表现。第四：谈话时要注意坐的姿势。第五：不要低头玩手机和频繁看表、打呵欠，以免对方误解你在逐客。

文明接待礼仪知识之敬茶和敬烟

在家庭待客中，为客人敬茶是待客的重要内容。待客坐定，应尽量在客人视线之内把茶杯洗净。即使是平时备用的洁净茶杯，也要再用开水烫洗一下，使客人觉得你很注意讲卫生，避免因茶杯不洁而不愿饮用的尴尬局面。

要用开水泡茶，如没有开水，应立即烧煮少量以应急需，并要对客人打声招呼，请稍等片刻。开水沏茶，有利溢出茶香，同时茶叶沉底后有利饮用。切忌用温开水泡茶，使茶叶浮集杯口，而妨碍交谈，也会使客人不愿饮用。

茶杯要轻放，不要莽撞，以免茶水泼洒出来，弄得茶几上湿漉漉的，即使是连抹带揩，也会影响敬客气氛;如果泼在客人身上，就更加难堪。

端茶也是应注意的礼节，应双手给客人端茶。对有杯耳的杯子，通常是用一只手抓住杯耳，另一只手托住杯底，把茶水送给客人，随之说声“请您用茶”或“请喝茶”。切忌用五指捏住杯口边缘往客人面前送，这样敬茶既不卫生，也不礼貌。

斟茶动作要轻，要缓和。同时注意不要一次性斟得太满，而形成一冲四溢。如凉茶较多，应倒去一些再斟上。斟茶应适时，客人谈兴正浓时，莫频频斟茶。客人停留时间较长时，茶水过淡，要重新添加茶叶冲泡，重泡时最好用同一种茶叶，不要随意更换品种。

敬烟如果前来你处拜访的客人，有吸烟的嗜好，应以烟敬之。敬烟时，把烟盒打开，用手弹出几支，再请客人抽烟。客人不吸烟不可勉强。

文明接待礼仪知识之陪访

陪访是接待礼仪过程中一种常见的一种。在陪同客人参观、访问、游览时，要注意以下几方面：首先，要在接待礼仪计划中事先安排，提前熟悉情况，以便向客人做详细的介绍。其次，要遵守时间，衣冠整洁，安排好交通事宜。再次，陪同时要热情、主动，掌握分寸。

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篇2

关键词： 氧化苦参碱；异丙肾上腺素；慢性心力衰竭；ADMA；PRMT1；DDAH2

[收稿日期] 2013-11-06

[基金项目] 国家自然科学基金项目（81060024）

[通信作者] *徐清斌，副主任医师，副教授，博士，硕士生导师，Tel：（0951）6744205，E-mail：

[作者简介] 王洋，硕士研究生，E-mail：

氧化苦参碱（oxymatrine）又名苦参素，是从豆科槐属植物宁夏特色回药材苦豆子Sophora alopecuroides L.中提取的一种具有四环喹嗪啶类结构的生物碱。具有抗炎、保肝和抗肿瘤等多种药理作用[1]，其对心血管系统的作用尤为显著[1-2]。研究表明，氧化苦参碱可以减少左冠状动脉前降支结扎所致急性心肌缺血大鼠心肌梗死范围，抑制心肌细胞凋亡[3]。慢性心力衰竭是各种心脏疾病最为严重的阶段，其发病率和死亡率均较高[4]。血清非对称性二甲基精氨酸（ADMA）水平与各类心血管事件的发生呈正相关，被认为是引发心血管事件的独立危险因子之一[5-6]。临床及动物实验表明，心力衰竭患者和试验动物模型血清ADMA含量均显著升高[7-8]。本实验旨在以ISO诱导大鼠慢性心力衰竭为模型，研究氧化苦参碱对大鼠慢性心力衰竭的抑制作用及其对ADMA代谢通路的影响。

1 材料

1.1 动物 清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠，体重210～250 g，由宁夏医科大学实验动物中心提供，动物合格证号SCXK（宁）2012-0001。

1.2 药品和试剂 氧化苦参碱（宁夏紫荆花药业有限公司，纯度99.8%，批号20091028）；异丙肾上腺素（ISO，上海梯西爱有限公司，纯度>99.0%，批号MVSTF-NF）；心肌肌钙蛋白I（cTn I），ADMA酶联免疫反应检测试剂盒（武汉华美试剂有限公司）；乌拉坦、氯化钠、多聚甲醛（Sigma公司）；凯基全蛋白提取试剂盒、凯基BCA蛋白含量检测试剂盒（南京凯基生物科技发展有限公司）；兔抗山羊PRMT1和山羊抗兔DDAH2抗体（Abcam公司）；小鼠抗β-actin抗体（北京中杉金桥生物技术公司）。山羊抗兔、兔抗山羊和山羊抗小鼠二抗（北京中杉金桥生物技术公司）。Super Signal West Pico Chemiluminescent Substrate购自Thermo Scientific公司；实验用水为超纯水。

1.3 仪器 BL-420E四道生物机能实验系统（成都盟泰科技有限公司）；TY96-ⅡN型超生细胞粉碎机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；H1850R型台式高速冷冻离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；Mutiskan Go 酶标仪（美国Thermo Fisher公司）；PowerPac Basic电泳仪（美国BIO-RAD公司）；培清JS-860B凝胶成像分析仪（上海培清科技有限公司）。

2 方法

2.1 慢性心力衰竭动物模型的制备及分组 60只大鼠，随机分为5组，每组12只，分别是：正常对照组（Control）、单用氧化苦参碱组（100 mg・kg-1）、ISO组和氧化苦参碱高、低剂量组（100，50 mg・kg-1）。根据文献[9]，采用皮下注射ISO 5 mg・kg-1・d-1，连续注射7 d建立慢性心力衰竭大鼠模型。氧化苦参碱各组和ISO组皮下注射ISO 5 mg・kg-1，每天1次，连续7 d。对照组和单用氧化苦参碱组大鼠皮下注射相应体积生理盐水。以上各组均于ISO注射前7 d灌胃给予氧化苦参碱，共14 d，灌胃给药体积为5 mL・kg-1。对照组和ISO组灌胃给予等体积生理盐水。

2.2 心功能血流动力学参数的测定 各组动物末次给药后禁食不禁水24 h，称体重，20%乌拉坦（6 mL・kg-1，ip）麻醉。于颈部偏右侧行纵向切口，分离出右颈总动脉，结扎远心端，用大鼠动脉夹封闭近心端，于两端内剪开血管并插入含有肝素生理盐水（500 U・mL-1）的心导管（PE50）至右颈总动脉，放开动脉夹，通过压力换能器连接到BL-420E四道生物机能实验记录仪，记录动脉血压变化：动脉收缩压（SAP）、动脉舒张压（SDP）、平均动脉压（MAP），稳定后记录15 min， 然后沿颈动脉向心方向将导管轻轻插入3～4.5 cm，当动脉压力波形突然有大幅度的变化、舒张压明显下降时，说明导管已进入左心室，稳定后记录左心室收缩压（left ventricular systolic pressure，LVSP）、左心室压力最大上升/下降速率 （+LVdp/dtmax / -LVdp/dtmin）、心率 （HR） 等。

2.3 全心质量/体重比值及左心室质量/体重比值测定 各组动物在取血后立即处死，开胸取心脏，称全心湿重，沿冠状沟走行分离左心室并称重。计算全心质量/体重的比值和左心室质量/体重的比值。

2.4 血清心肌肌钙蛋白 I（cTn I）和ADMA水平的测定 全血于6 000×g离心15 min，取血清，严格按照ELISA试剂盒厂家说明书所述方法操作，检测血清cTn I和ADMA的含量。

2.5 病理组织学观察 切取心尖组织，置于10%中性甲醛固定24 h，石蜡包埋，切片4 μm，行常规HE染色，200×镜检观察。参照文献[10]，将心肌病理损伤分为4级：0级（-），心肌细胞结构清晰，心肌纤维排列整齐，横纹清楚，无炎细胞浸润，无细胞水肿、坏死或纤维化，间质毛细血管无扩张或轻度扩张；I级（+），心肌细胞排列稀疏，少量炎细胞浸润、心肌细胞水肿，间质血管扩张，心肌组织可见局灶性纤维化，限于心内膜下；Ⅱ级（），较多炎细胞浸润，心肌细胞水肿，心肌细胞纤维化呈片状分布，累及心壁全层，间质可见明显血管扩张；Ⅲ级（），有明显的间质血管扩张、水肿及炎细胞浸润，心肌广泛性大面积纤维化，灶间相互连接累及心壁全层。

2.6 Western blotting检测 在约50 mg经液氮研磨的心肌组织中加入0.3 mL冷裂解缓冲液，冰浴下超声破碎细胞。4 ℃，1万 r・min-1离心10 min，取上清蛋白定量，剩余上清液加入上样缓冲液100 ℃水浴10 min，-20 ℃保存。取蛋白样本60 μg上样，10%SDS-PAGE凝胶电泳（80 V/120 V电压），200 mA恒定电流转膜至硝酸纤维素膜，5%脱脂奶粉封闭1 h后，分别用抗PRMT1抗体（1∶300）、抗DDHA2抗体（1∶300）及抗β-actin抗体（内参，1∶1 000）4 ℃孵育过夜。分别加入山羊抗兔、兔抗山羊二抗（偶联有HRP，1∶3 000）和兔抗小鼠二抗（偶联有HRP，1∶5 000）常温孵育2 h，加入超级化学发光底物反应液，曝光胶片。胶片扫描结果采用Quantity-one软件分析，将目的条带的吸光度与其相对应的内参β-actin的吸光度相比以校正误差，所得比值代表该目的蛋白的相对含量。

2.7 统计学处理 实验结果以SPSS 11.5统计分析软件包进行分析，数据以±s表示，多组间均数的比较采用One-way ANOVA分析，P

3 结果

3.1 氧化苦参碱对心肌损伤标志物cTn I的影响 单用氧化苦参碱组与对照组相比血清cTn I无显著性差异。与对照组相比，ISO组血清cTn I水平升高（P

与对照组相比1）P

图1 氧化苦参碱对ISO诱导慢性心力衰竭大鼠血清cTn I的影响（±s，n=8）

Fig.1 Effect of oxymatrine on level of cTn I in ISO-induced chronic heart failure in rats （±s，n=8）3.2 氧化苦参碱对ISO诱导慢性心力衰竭大鼠血 流动力学的改善 单用氧化苦参碱组与对照组相比，血流动力学各项指标均无显著差异。模型组与对照组比较，心率（HR），SAP，MAP，LVSP，+LVdp/dtmax均降低（P

3.3 氧化苦参碱对ISO诱导慢性心力衰竭大鼠全心质量/体重比值及左心室质量/体重比值的影响 单用氧化苦参碱组与对照组比较，全心质量/体重比值及左心室质量/体重比值无显著性差异。ISO组全心质量/体重比值及左心室质量/体重比值与对照组相比明显增高（P

3.4 病理组织学HE染色观察 单用氧化苦参碱组和对照组相比，大鼠心肌组织未见异常，病理损伤均为0级。ISO组心肌纤维排列松散，出现炎细胞浸润，大面积心肌纤维化，心肌细胞肿胀和毛细血管扩张严重，仅见少量正常心肌组织细胞，病理损伤以Ⅱ，Ⅲ级为主。氧化苦参碱随给药剂量的增高，心肌纤维化程度依次有所改善，并且氧化苦参碱（100 mg・kg-1）改善情况较为明显，但未见炎细胞浸润、心肌细胞肿胀及毛细血管扩张有明显改善，病理损伤以I，Ⅱ级为主。提示氧化苦参碱可以减轻ISO诱导慢性心衰大鼠心肌损伤及心室重构，见图2和表3。

A.对照组；B.单用氧化苦参碱组；C.ISO组；D.氧化苦参碱高剂量+ISO组；E.氧化苦参碱低剂量+ISO组。

图2 氧化苦参碱对ISO诱导慢性心力衰竭大鼠心肌组织形态的影响（HE，×200）

Fig.2 Effect of oxymatrine on cardiac histopathological changes of ISO-induced chronic heart failure in rats（HE，×200）

3.5 氧化苦参碱对ISO诱导慢性心力衰竭大鼠血清ADMA的影响 单用氧化苦参碱组与对照组血清ADMA无显著性差异。与对照组相比，ISO组血清ADMA含量明显升高（P

3.6 氧化苦参碱对ISO诱导慢性心力衰竭大鼠心肌组织PRMT1和DDAH2表达的影响 Western blotting检测结果显示，与对照组比较，单用氧化苦参碱组心肌组织PRMT1和DDAH2未见显著性差异，而ISO组PRMT1表达明显增加（P

4 讨论

氧化苦参碱是苦豆子中主要生物碱之一，具有对抗急性心肌缺血损伤，改善慢性心力衰竭大鼠心肌细胞功能及血流动力学，逆转心室重塑等显著的心血管作用[1-3， 11]，ADMA是新的独立于传统心血管疾病危险因素的预测因素，血清ADMA的浓度与慢性心力衰竭密切相关，降低血清ADMA含量对改善慢性心力衰竭有益[5-7]。本课题组前期研究发现，苦豆子中的另一主要生物碱苦参碱对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血损伤具有保护作用其机制与ADMA代谢通路有关[8]。为此，本研究进一步探讨了氧化苦参碱对ISO诱导大鼠慢性心力衰竭的抑制作用的机制是否与ADMA代谢通路有关。研究结果表明，氧化苦参碱对ISO诱导的大鼠慢性心力衰竭具有保护作用，可改善左心室功能和结构，其作用机制与调控ADMA代谢通路有关。

cTn I是心肌纤维高特异性的调节蛋白，是心肌损伤敏感且特异的血清标志物，当心肌细胞损伤时，可大量释放入血[12]。动物实验研究结果表明，ISO致急性心肌缺血大鼠血清cTn I浓度升高[12]。本实验研究结果表明，氧化苦参碱（100，50 mg・kg-1）能够显著降低ISO所致血清cTn I的水平，提示氧化苦参碱对心肌损伤具有保护作用。5 mg・kg-1异丙肾上腺素连续给药7 d，可以显著降低心脏收缩和舒张功能，本实验研究表明，ISO可以明显降低大鼠HR，

图3 氧化苦参碱对ISO诱导慢性心力衰竭大鼠血清ADMA的影响（±s，n=8）

Fig.3 Effect of oxymatrine on level of serum ADMA in ISO-induced chronic heart failure in rats （±s，n=8）

图4 氧化苦参碱对ISO诱导的慢性心力衰竭大鼠心肌组织PRMT1表达的影响（±s，n=7）

Fig.4 Effects of oxymatrine on expression of PRMT1 in hearts from ISO-induced heart failure rats （±s，n=7）

SAP，MAP，LVSP和+LVdp/dtmax并升高-LVdp/dtmin，与已有文献报道一致[9]。氧化苦参碱（100，50 mg・kg-1）可不同程度的改善ISO所致的各项异常血流动力学指标，提示氧化苦参碱对慢性心力衰竭大鼠的心功能具有保护作用。此外，ISO组大鼠全

与对照组相比1）P

图5 氧化苦参碱对ISO诱导的慢性心力衰竭大鼠心肌组织DDAH2表达的影响（±s，n=6）

Fig.5 Effects of oxymatrine on expression of DDAH2 in hearts from ISO-induced heart failure rats （±s，n=6）

心质量/体重比值及左心室质量/体重比值与对照组相比均显著增高；心肌病理组织切片表明，ISO组心肌组织损伤严重，以心肌组织纤维化为主，与文献报道结果一致[9]。氧化苦参碱（100，50 mg・kg-1）可显著降低慢性心力衰竭大鼠全心质量与体重的比值及左心室质量与体重的比值；明显减轻心肌组织损伤程度，尤其是减轻ISO所致慢性心力衰竭大鼠心肌组织纤维化最为明显，而对炎细胞浸润、心肌细胞水肿及毛细血管扩张无明显改善。提示氧化苦参碱可改善心力衰竭大鼠心室重构和心肌损伤。

ADMA是一种内源性一氧化氮合酶（NOS）抑制剂，能够降低内源性一氧化氮水平。研究表明，慢性心力衰竭患者血清ADMA水平明显增高，体内过多ADMA可增加心血管事件的风险[5-6]。动物实验表明，ISO诱导的急性心肌缺血大鼠血清ADMA含量显著增高[8]。 本实验结果表明，ISO诱导慢性心力衰竭大鼠血清ADMA含量较正常大鼠明显增高，给予氧化苦参碱（100，50 mg・kg-1）可明显降低血清ADMA水平。提示氧化苦参碱抑制ISO诱导大鼠慢性心力衰竭作用与降低血清ADMA水平有关。

ADMA在体内是以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，在蛋白精氨酸甲基转移酶1（PRMT1）作用下催化，经蛋白水解酶水解生成；其代谢主要是被二甲基精氨酸二甲胺水解酶（DDAH）分解为胍氨酸和二甲胺。DDAH是一种胞浆蛋白酶，存在2个亚型，DDAH1和DDAH2，其中DDAH2多存在于以内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达为主的组织中，如心肌组织和血管等[5-6，13]。本实验结果表明，ISO可诱导心肌组织PRMT1表达增多，并降低心肌组织中DDAH2的表达。氧化苦参碱（100，50 mg・kg-1）可明显增加DDAH2的表达，但对升高的PRMT1表达无影响。提示，氧化苦参碱通过恢复ISO诱导的心肌组织中降低的DDAH2，而减少ADMA含量。

综上所述，氧化苦参碱对ISO诱导大鼠慢性心力衰竭具有抑制作用，其机制与增加心肌组织DDAH2的表达，进而降低血清ADMA水平有关。

氧化苦参碱是一种药理作用广泛的药物，临床用于治疗乙型肝炎、肝纤维化，对慢性肾脏病患者可防止肾间质纤维化，其不良反应发生率低[14-15]。氧化苦参碱尚具有抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤血管生成等作用；与环磷酰胺、平阳霉素、顺铂和5氟尿嘧啶等抗肿瘤药物联合使用可增强疗效，并降低放化疗的副作用[16]。本实验研究结果进一步明确了氧化苦参碱对大鼠慢性心力衰竭的保护作用与机制，一方面，为今后氧化苦参碱用于治疗慢性心力衰竭提供了实验依据，另一方面，也为研究氧化苦参碱是否对抗肿瘤药所致心脏损伤具有保护作用提供了重要线索。

[参考文献]

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[2] Hu S T， Tang Y， Shen Y F， et al. Protective effect of oxymatrine on chronic rat heart failure [J]. J Physiol Sci，2011，61（5）：363.

[3] Hong-Li S， Lei L， Bao-Feng Y，et al. Cardioprotective effects and underlying mechanisms of oxymatrine against ischemic myocardial injuries of rats [J]. Phytother Res，2008， 22（7）： 985.

[4] Roger V L. The heart failure epidemic[J]. Int J Environ Res Public Health，2010，7（4）：1807.

[5] Sibal L， Agarwal S C， Home P D， et al. The role of asymmetric dimethylarginine （ADMA） in endothelial dysfunction and cardiovascular disease[J]. Curr Cardiol Rev，2010，6（2）：82.

[6] Boger R H， Sullivan L M， Schwedhelm E， et al. Plasma asymmetric dimethylarginine and incidence of cardiovascular disease and death in the community[J]. Circulation，2009，119：1592.

[7] Hsu C P， Lin S J， Chung M Y， et al. Asymmetric dimethylarginine predicts clinical outcomes in ischemic chronic heart failure [J]. Atherosclerosis. 2012，225（2）：504.

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[9] Krenek P， Kmecova J， Kucerova D， et al. Isoproterenol-induced heart failure in the rat is associated with nitric oxide-dependent functional alterations of cardiac function [J]. Eur J Heart Fail，2009， 11（2）： 140.