液相色谱范文
时间：2023-03-24 17:19:47
导语：如何才能写好一篇液相色谱，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
液相色谱法的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂,或它们的混合液。另外,水性溶剂也常用于缓冲液。有的资料[1]介绍了用于高效液相色谱法的代表性缓冲液的具体调制方法,但通常对缓冲液的解释往往含糊不清。因此,常因资料上表示的内容与实际的配置方法的不同,而产生流动相的差异,影响色谱图和分析结果。而且,不仅缓冲液,有时还要考虑到溶剂的混合方法等流动相调制方法方面的漏洞等因素[2]。本文以具体的事例,研究流动相调制方法对分析结果的影响。
1)缓冲液的调制
例如,写的是“20mM磷酸缓冲液(PH2.5)”在实际中该怎样调制?不妨举几个能想到的情况。首先,可以确定是使用磷酸的缓冲液,但是,是什么离子不明确。即使就以钠离子而言,“20mM”的浓度弄不清是指磷酸,还是指磷酸钠的浓度。若认为是“20mM”磷酸(钠)缓冲液,“20mM”可看作是磷酸的浓度。另一方面,若把“20mM”看作是钠的浓度,也可以认为是“20mM磷酸二氢钠水溶液调整PH后的缓冲液(而且, 20mM磷酸钠水溶液的PH在5.0附近,只要稍用一点酸就可以调到PH2.5)”,这时,由于调整PH用的酸,产生离子对的效果,或者也许会对分析结果有影响。从上述考虑,会产生对缓冲液有多种解释的可能性。
上述例,具体有3种解释。对分析结果会产生多大影响,见图1所示。上段是“20mM”作为磷酸浓度的解释,将作为“20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)”调制的溶液用于流动相的结果。中段和下段“20mM”作为磷酸二氢钠的浓度解释,分别加磷酸和高氯酸调整PH为2.5时的结果。像此例中的二氢可待因那样对保留时间有明显的影响时,给分析方法造成困难。对缓冲液应尽量明确溶液的特性和调制方法,以免产生不同的解释。(如图1）
2)有机溶剂和水性溶剂的混合方法
有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的,但是由于混合方法的不同,有时分析结果相关很大。作为一例,20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)90%与乙腈10%的混合时,混合比为9:1的话,20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)与乙腈的体积比为9:1,也就是可以解释为各自按体积比率的相当量称取后进行混合。另外,按10%乙腈解释的话,解释为用20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5),将乙腈稀释调制也可以成立。在后者的情况下,产生混合体积减少部分,余下的添加20mM磷酸钠缓冲液。两者虽然没有太大的差别,但,如图2所示,由于混合的方式不同,分析结果(特别是保留时间)也会有显著 差别,这点必须注意。（如图2）
在一般情况下,调制高效液相色谱法用流动相时,用A液:B液=3:2(V:V)的表示方法,即A液体积比相当于3,B液体积相当于2,分别称取混合(实际上本溶液混合后的溶液体积比合计体积比5要少)。
不仅是流动相的调制方法,试样溶液和其他溶液的调制也经常有上述问题。另外,在不同部门(医药部门或化工部门)各自都有自己的常识习惯,这也是困惑的原因,在这种情况下,例如,日本药典、卫生试验法、日本工业规格等法定书都有各自作为通则和定义涉及溶液的调制,因此可参考这些书,避免混乱,在日常更好地记住这些表示。
参考文献
篇2
[关键词]高效液相色谱；应用；发展现状；发展趋势
中图分类号：O652.63 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）27-0349-01
在我国科技和经济都在高速发展的时代，很多技术都有了非常明显的改进和提升，同时在这一过程中其所发挥的作用也非常的明显，所以在这样的情况下，其应用的质量和水平也有了非常大的提升，而其经过了长期的发展，得到了人们的高度重视，同时也在更多的领域发挥其积极的作用，所以对色谱仪进行研究是十分必要的。
1、液相色谱在当今时代的发展
1.1 新型高效液相色谱
当前在物质检测的过程中，高效色谱法得到了非常广泛的应用，同时在其发展的过程中也出现了很多新型的色谱，在分配机制层面，亲和色谱通常是按照另外一类分配机制而操作的一种新型的色谱，这种色谱在对物质进行检验的时候能够更好的体现分离的效果，因为它是利用大分子之间的一些特有的共性去识别和分离物质，在操作方面也非常的温和，此外其流动性也非常强，通常其是以超临界流体色谱作为介质，混合物在临街流体色谱上的分离原理和气象色谱和液相色谱都是一致的，但是在应用的范围上，这种液相色谱法要应用得更加广泛。
1.2 液相色谱与其他分析仪器联合使用
1.2.1高效液相色谱（HPLC）与其他分析仪器联合使用
当前，高效液相色谱仪在检测的过程中能够使用的型号十分的有限，但是它在运行中可以选择很多种检测器，在应用的时候能够体现出非常好的灵敏度，这样的情况下也就使得物质在这一过程中可以更好的得到分离，此外仪器自身应用的广泛性也得到了十分显著的提升。比如在环境污染分析当中，对水中烃类物质的测定就是非常重要的，海水当中有很多烃类的物质，其不具备挥发的性质，这样就可以对环境污染分析工作的进行提供更多有价值的参考。从固定相的角度来说高分子固定相也得到了发展和应用。此外高效色谱仪也逐渐增加了紫外线检测器，这种检测器能够同时测定食品当中对位红和苏丹红等若干可溶性的物质，从而也提高了液相色谱仪的应用价值。
1.2.2超高效液相色谱（UPLC）与其他分析仪器联合使用
当前超高效液相色谱串联质谱法是一种比较新的液相色谱法，它在使用的过程中具备非常好的性能，同时在这一过程中其也更加的简单，速度和效率都有了显著的提升，在灵敏度上也更好，在实际的应用中可以有效的减少来自于杂质的干扰，定量方面的限制明显放宽，在定性上更加的准确。
固相萃取和超高液相色谱法是对组织中的氯羟吡啶含量进行分析的一种非常有效的方法，所以这种方法也经常使用在治疗禽球虫病的药物当中。相关的研究人员使用这种方法建立了一个灵敏度非常好，同时检测速度也非常快的检测8种试剂农药残留量的方法，在实际的应用中收到了良好的效果。
同时这种检测方法在实际的应用中能够体现出非常好的分离效果，它能够帮助目标化合物和与其形成竞争关系的化合物杂质分离，这样也就使得质谱检测器的灵敏度得到十分有效的提升，所以，UPLC是当前质谱入口的首选。
2、液相色谱仪的应用
2.1 液相色谱仪在食品安全领域的应用
2.1.1食品添加剂的检测
在食品添加剂当中，人们最常使用的有三种，一种是防腐剂，一种是甜味剂，一种是色素。添加剂的检测方法有很多，在以往的发展中经常使用的有气象法和比色法。但是液相色谱法和其他的方法相比有着非常明显的优势，所以在当今的检测工作中这种方法得到了广泛的应用。
在防腐剂检测方面，研究人员用HypersilODS色谱柱，流动相为0.02mol/LpH5.0乙酸铵甲醇溶液，柱温35℃，在不同波长下同时测定苯甲酸和山梨酸。
在合成色素的检测方面，吴敏等采用Zorbax80AExtend―C8色谱柱，高效液相色谱仪配备紫外检测器，同时测定食品中对位红和苏丹红等8种脂溶性燃料。
近几年随着色谱柱填充制备技术的高速发展，已经可以一次性分离糖精钠、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、柠檬黄、苋菜红、亮蓝这十种食品常用添加剂。其效率之高非其他仪器分析方法可比。
2.1.2食品中危害物质的检测
食品中有害物质主要可分为：农药、兽药残留；霉菌毒素；重金属；加工过程中高温或其它特殊条件下形成的致癌物质等。
黄曲霉毒素普遍存在于多种谷物类食品当中，具有极强的致畸致癌作用，研究人员用HyPersilODS―C18色谱柱，测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量，该方法方便快捷，定性准确，较传统的点板法，酶联免疫吸附法更为科学准确。
高效液相色谱法在应对2008年奶粉掺入三聚氰胺风波的检测中发挥了重要作用，面对全国众多乳制品企业的样品进行检测，尽快出具检测结果给老百姓一个公正准确的结果，检测方法必须既要快，又要准，检出量还非常微小，能做到完美完成这一任务的，仅有高效液相色谱法能够做到。
2.2 液相色谱仪在工业上的应用
以往，在石油化工、农药、环保等方面，经常采用薄层色谱法（TLC）和气相色谱法（OC）进行含量测定，而液相色谱法（LC）只是用于对组分标样的测定和分离的可能性的研究。
从上个世纪70年代开始，我国的很多科研部门和该行业当中的工厂就开始对液相色谱仪的生产和改进进行了研究，在这一阶段，LC开始出现在我国众多的科研领域当中，其也体现出了非常高的实用性，特别是对于那些热稳定性不是非常好或者是蒸汽气压不是很高的样品具有非常好的检测和分析效果，这样也充分的显示出了LC方法自身的优势。
2.3 液相色谱仪在生命科学领域的应用
生命科学研究工作中，最大的难题就是基因的解密工作，从基因组DNA序列尚不能回答某基因的表达时间、表达量、蛋白质翻译后加工和修饰的情况、以及它们的亚细胞分布等等。这些在基因组中不能解决的问题可望在蛋白质组学（Proteome）研究中找到答案。在所研究的细胞中会有3～5万种功能各异的蛋白质，目前蛋白质组研究所使用的双向电泳法一般只能分辨到2000～3000个蛋白质点。现代蛋白质组的分析可尝试使用第一向是体积排阻色谱的双向HPLC高效液相色谱作预分离。高效液相色谱和双向电泳将会成为蛋白质组学的重要分离工具。因此，高效液相色谱仪将为深入地揭示生命奥秘作出更大的贡献。
3、结语
高效液相色谱法在物质检测方面有了非常广泛的应用，同时在这一过程中其也在不断的完善，这是因为我国的科学技术在不断的发展，在这样的情况下，其应用的范围也在不断的拓宽，在更多的领域都能看到高效液相色谱法的身影，这对我国药品行业和食品行业的发展都有着非常重要的意义，因此我们必须要加大对这种技术的投入，使其更好的体现出自身的优势和价值，从而更好的推动我国相关行业的发展。
参考文献
[1]郑和辉，王萍，李洁.超高效液相色谱法检测化妆品中的12种磺胺抗生素[J].色谱.2007（02）
[2]李熠，赵静，薛晓锋，周金慧.超高效液相色谱法同时测定蜂胶中的12种活性成分[J].色谱.2007（06）
篇3
关键词 检测器 判别液 纯度
高效液相色谱法定量的前提是色谱峰由单一组分构成，因此色谱峰的纯度即一个色谱究竟是有一种组分构成，还是包含两种以上的成分，这就是我们大家所要关心的问题。二极管检测器(DAD简称)的开发，是过去20年内高效液相色谱峰的定DAD检测器可以得到各个波长的吸光度值即可以得到样品在各时刻的吸收光谱图。
使用这些方法判别峰纯度时都要求待测组分色谱峰中洗脱杂质的紫外光谱，明显不同于主组分的紫外光谱。光谱间的差异越大对于其洗脱杂质的检测就越低，然而有机物的紫外光谱一般均显示曲线变化不明显的宽带。缺乏能够说明细微差别的精神结构，尤其是对于那些生色团相同而结构上的差异部分，由于生色团不同的化合物间的结构差异不能够予以足够的描述实际上许多情况下，例如同分异构体的杂质和主组分的降解或代谢产物与主组分结构上是非常相似的。这是利用组分的紫外光谱信息判别色谱峰纯度时就会遇到不能检测到分析物的共洗脱杂质的情况，甚至有时候会给出完全错误的峰纯度结果从而给下一步的定性定量分析很大误差。
使用DAD可以获得三维谱图，进而得到等吸收图提取所要检测波长下的色谱图。本文通过选择头孢拉定作为分析对象对DAD用于判别液相色谱峰纯度时的局限性研究。
1 试验部分
仪器和试剂AgilenFechnologiesl200SeriesDAD检测器、甲醇(色谱纯)其它试剂均为分析纯。头孢拉定、头孢氨苄对照品由中国药品生物制品检定所提供。
色谱柱：EXSILCl8柱5μm150*406mid，流动相：水、甲醇、3.86％醋酸钠溶液、4％醋酸溶液(1654：400：30：6)流速为0.7ml／min-0.9ml／min进样量10μl柱温为室温。
对照品溶液制备：①取头孢拉定对照品约35mg精密称定置50ml量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度摇匀。②取头孢氨苄对照品约20mg精密称定置50ml量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度摇匀。供试品溶液的制备实验用的混合溶液根据要求按不同的配比使用标准对照溶液和流动相来配制。
2 结果与讨论
2.1DAD用于色谱峰纯度判别
头孢拉定和头孢氨苄其二者在合适的条件下可以被分离。通常头孢拉定中含有一定量的头孢氨苄从二者的紫外光谱，可以发现他们的紫外光谱形状几乎完全一致。事实上二者结构上的相似在实际工作中由于柱效下降或者分离条件偶尔变化有时仍然会遇到二者严重重叠或者其洗脱的情况通过一根使用过一段时间的色谱柱对供试品的洗脱得到的头孢氨苄和头孢拉定的洗脱的色谱峰利用归一化光谱对照和吸收比值图法对该假单峰的纯度进行鉴定。结果头孢拉定和头孢氨苄的共洗脱色谱峰前沿峰顶和峰尾提取的紫外光谱柱归一化后重叠，头孢拉定中含有微量的头孢氨苄由于二者结构和性质上的相似使得他们保留的时间也很相近对流动相的配比略作改变后可使头孢氨苄峰被掩盖表现上呈单一峰。使用DAD抽取该色谱图归一化后重叠和利用吸收比值图对该色谱的纯度进行判别的结果，认为该色谱图峰是纯的。幸运的是它们在适当的条件下可以被分离开，从上面选择的有代表性的分析物或者光谱相似杂质组成的体系中可以明显的看出使用DAD判别液相色谱峰纯度有时可能会得出错误的峰纯度信息。文献中也认为任何情况下相同的吸收比或者整个色谱峰归一化光谱的一致只应该被当作是峰纯度的一个相对指示而不是一个绝对的证据，对于可能存在于主组分结构相似的杂质的样品体系的液相色谱分析方法，峰纯度的可靠评价最好是通过收集色谱峰出液，然后更换不同的色谱体系或者是由于对微小结构差异灵敏的质谱等手段来验证。
篇4
[关键词]液相色谱技术；食品；安全；检验；应用；
中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）03-0379-01
高效液相色谱技术因其具有分离效率高、检测速度快、检测灵敏度高等特点，已在食品安全检验领域发挥着重要作用，同时随着高效液相色谱-质谱联用技术的不断改进与发展，必将发挥越来越重要的作用。
1 高效液相色谱法
1.1 高效液相色谱法简介
液相色谱技术（HPLC技术）是一种起源于西方国家的先进的检验技术，在物理分离、化学分析中都得到了广泛的应用，以高效液相色谱仪为主要代表。液相色谱技术具有悠久的发展历史，经过不断的发展与更新而形成，具有时代性和历史性。色谱法就是利用色谱技术来利用物理性质来使其分离成固定相和流动相，进而展现出不同的分布特点，达到分离的目的。色谱法以凝胶色谱、气象色谱和液相色谱为主，其中液相色谱技术的应用价值最高。随着食品安全问题的愈演愈烈，食品安全检测工作被提上了日程，将液相色谱技术应用于食品安全检验中，对食品样品的在液体与固体或不互溶的情况下进行分离与分析，并对其中的成分进行鉴定的过程，能充分了解食品中所含有的成分并对其进行分析，可明确了解到食品是否具有安全性。
1.2 高效液相色谱法特点
与气相色谱法、经典液相色谱法相比，高效液相色谱法具有如下优点：①在小口径短不锈钢柱内填充颗粒极细的固定相，降低了传质阻力，有效提高柱效，分离效能高。②采用高压输液系统提高流动相的流速，缩短分析时间，分析一个样品仅需几分钟到几十分钟，分析速度高。③采用高灵敏度检测器，检测灵敏度高，紫外检测器可达0.01ng。④通过流动相可以控制和改善分离过程，同时色谱柱
2 液相色谱技术进行食品安全检验的几点思考
2.1 实现对食品营养成分的检验
高效液相色谱法可对食品中的营养成分进行定性、定量分析，即确定营养成分的种类及含量，如糖类、脂肪酸类、维生素等人体所必须的营养成分。裘立群[1]等用反相高效液相色谱法同时测定水果中脂溶性维生素。该方法准确度高，灵敏度好，回收率在88.5%～93.6%之间，适合于水果等低含量脂溶性维生素的测定。
2.2 实现对食品添加剂的检验
食品添加剂是指为改善食品色、香、味等品质，以及为防腐和加工工艺的需要而加入食品中的化合物质或者天然物质。我国规定了食品添加剂的最大使用量或残留量，但是目前超量使用添加剂的现象非常多，过量的添加剂对人体产生潜在的毒害。林海丹等建立了利用高效液相色谱法同时测定食品中18种添加剂的分析方法。该方法采用乙腈-6%乙酸溶液作为流动相，梯度洗脱程序，检测波长为280nm。结果显示在1.0～25mg/L的浓度范围内18中添加剂的线性良好，相关系数均在0.99以上，相对标准偏差在2.43%～11.7%之间，回收率在88.9%～99.9%之间，操作简便，结果准确度高。阿不都外力.吐尼亚孜[3]等利用反高效液相色谱法同时测定食品中14中食品添加剂，包括苯甲酸、山梨酸、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丁酯、尼泊金丙酯、糖精钠、安赛蜜等添加剂。样品经简单处理后，经HypersilODS（4.6×200mm，5m，DEAIC）色谱柱分离，采用20mmol/L乙酸铵（pH=6.8）-甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速设置为1mL/min，柱温控制在30℃，在波长234nm、254nm处利用紫外检测器对食品中的14种添加剂进行检测，并在18min内完成分析流程。该方法平均加标回收率在94%～99%之间，相对标准偏差小于4.5%。
2.3 实现对残留农药的检验
农药残留是农药使用后一个时期内没有被分解而残留于生物体、收获物、土壤、水体、大气中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。据统计目前世界上化学农药年产量达200万t，其中有近1000种人工合成化合物被用作杀虫剂、杀菌剂、杀藻剂、除虫剂、落叶剂等类农药。农药尤其是有机农药的大量施用，造成严重的农药污染问题，成为对人体健康的严重威胁。食用含有大量剧毒残留农药的食物会导致人、畜急性中毒事故。长期食用农药残留超标的农副产品，可能引起人和动物的慢性中毒，诱发疾病，甚至影响到下一代。由于农药残留对健康的危害极大，各国对农药的施用都进行严格的管理，并制定了每种农药在食品中的最大残留限量。目前广泛使用的农药中以有机化合物为主，该类化合物的特点是分子量大、挥发性低、受热易分解或失去活性，高效液相色谱技术在此类化合物的定量分析中发挥着不可替代的作用。杨涛[4]等建立了高效液相色谱法测定果蔬中防腐杀菌剂的方法，可同时测定噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯、对苯基苯酚、联苯醚、联苯胺、多菌灵、乙萘酚、乙氧基喹、抑霉唑10种防腐杀菌剂。该方法固定相采用ZORBAXExtend-C18柱，流动相采用不同比例的甲醇和pH8.0的磷酸盐缓冲溶液，检测器为紫外检测器进行检测，相对标准偏差（n=6）在0.83%～4.71%之间。
2.4 分析霉菌毒素
食品在加工、存储过程中，容易存在多种霉菌毒素，如黄曲霉素、玉米烯酮霉素等，有致癌性，严重危害人体健康。应用高效液相色谱技术和免疫亲和柱萃取，检测限为10ng/kg，可检测酸奶等食品中是否含有黄曲霉素；应用高效液相色谱与大气压化学电离质谱联用，检测限下降为0.12pg/kg，可检测粗提物食品中的玉米烯酮霉素。随着环境的日益恶化，像汞、锌、铅及其化合物等重金属也称为环境中广泛存在的一类污染物，对农作物和水产品的生长造成了危害，常采用化学法、原子荧光法等测定其含量，近年来随着HPLC技术的不断完善和发展，也出现了以HPLC技术测定无机离子的的报道，且效果良好。
3 高效液相色谱-质谱联用技术
高效液相色谱-质谱联用技术是一项新的分离技术，它利用质谱法提供未知物丰富的结构信息，从而克服了高效液相色谱法无法准确定性的缺点，该技术的特点集中表现在具有高分离能力、高灵敏度、应用范围广和极强的专属性方面。因其在对高沸点、难挥发、热不稳定性化合物的定性定量分析方面有其独特优势，已被广泛应用于食品安全检验领域，同时在药物分析特别是中草药分析领域也有极为广阔的应用前景。
4 结束语
综上所述，HPLC技术作为目前市场上进行食品安全检测的一种行之有效的分析分离手段，得到了广泛的应用，但是任何一种检测方法不可能做到面面俱到，因此合理综合使用多种色谱技术，实现检测结果的精确可靠且方便快捷，才能更好的服务于社会。另外政府也需加强市场监管，建立规范的市场经济秩序，杜绝食品安全问题，相关技术人员和部门需不断突破创新，开发更多、更好、更实用的食品检测方法，造福人类，促进社会和谐发展。
篇5
关键词：色谱柱 维护与保养 高压液相色谱 应用
0 引言
色谱作为一种分离技术与方法，自本世纪初起已经有100多年的历史了，现在已经成为分析化学学科中的一个重要的分支。在人类进入新时代之际，人们面临着在信息科学、生命科学、材料科学、环境科学等领域的快速发展的挑战，在这些领域人才的需求成为国家高度发展的至关重要的因素。而色谱技术是生命科学、材料科学、环境科学必不可少的手段和工具。根据最近的统计在全世界各类分析仪器中气象色谱仪和液相色谱仪的营销总额占25%-30%。
科学技术的发展，使得色谱技术也得到进一步的发展，不断有新的联用的技术得到应用。生物医学的发展，也不断要求高灵敏和高选择性的方法对研究的对象进行定性和定量的研究。
1 色谱柱的相关性质
1.1 色谱柱的定义：装填有固定相用以分离混合组分的柱管。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等形状。
1.2 分类：色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。液相色谱通常均采用填充柱。色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相，以及色谱柱的制备和操作条件。简单而言：常见的分配住填料：碳十八柱（ODS/C18)、碳八柱（Octy了/C8）、碳六柱（Hexyl/C6）、碳四柱（Butyl/C4）、碳一注（Methyl/C1）、阴离子交换柱（SAX)、阳离子交换柱（SCX）、苯基柱（Phenyl）、氨基柱（Amino/NH2）、氰基柱（Cyano/CN/Nitrile）。常见的吸附柱填料：硅胶柱
色谱柱的选择会直接影响混合物中组分的分离。举例来讲：对于填充柱而言，可选择的固定相较多，柱容量较大，但是受柱长的限制，分离能力有限，主要应用于简单化合物的分离。
2 色谱柱的维护与保养
2.1 色谱柱的维护。我们在使用新的色谱柱应该在我们自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。而且在使用的过程中常常有堵塞的现象，造成这种现象的主要原因是①溶剂中的不溶物②样品中的不溶物③泵进样器等中的不溶物④柱内不溶物的形成等。如果当色谱柱堵塞以后我们可以对色谱柱进行修复，首先，使用含盐缓冲液后（如离子对试剂）应用溶解性强的溶剂（如水）进行冲洗。其次，先断开检测器，然后用对来自样品中的物质有强溶解性的溶剂进行冲洗，对于反相色谱柱，可使用甲醇、乙睛、四氢呋喃、氯仿、庚烷等，在此条件下，应避免溶剂的pH低于2或高于8。最后如果经过上述还是没有修复，色谱柱压力还是没有下降，则要断开检测器，将色谱柱反方向放置，然后检查柱压，若压力稳定下降，则保持色谱柱反方向连接，用低于0.5 ml/min 流速冲洗一小时。如果压力不下降，则要看内置过滤器是否被堵塞，如果被堵塞应冲洗或更换，若进口端的填料发生堵塞，柱子将不可能被彻底恢复，只能通过去掉进口端的部分填料，重新填充进行有限的柱效恢复。而且修复的厚度是2-5mm。
2.2 色谱柱的保养。色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。我们在对色谱柱使用前进行测试以后，我们要根据不同的情况对色谱柱进行保养：①反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。②长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。
概括起来就是：①柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；②当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净；③要注意流动相的脱气；④避免使用高粘度的溶剂作为流动相；⑤进样样品要提纯；⑥严格控制进样量；⑦每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；⑧每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；⑨若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭。
3 色谱柱的维护与保养在高压液相色谱中的应用
高效液相色谱(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的分离分析技术，是现代分离测定的重要手段。问世以来，因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析高沸点但不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析。高效液相色谱柱是消耗品，会随使用时间或进样的次数增加，出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰，柱效下降。需要定期进行彻底清洗和再生，不同的色谱柱清洗方法各不相同比如：
篇6
关键词：鱼藤酮；残留；液相色谱-质谱
中图分类号：O657.7+2；O657.63 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2012）21-4868-02
Determination of Rotenone Residue in Cabbage by LC-MS
LIU Jun1，LI Xian-bo1，2，SHEN Jing1
（1.Agricultural Quality Standards and Inspection Technology Research Institute， Hubei Academy of Agricultural Science， Wuhan 430064，China； 2.College of Science， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070，China）
Abstract： A method for determination of rotenone residue in cabbage was established by LC-MS. Rotenone residue was extracted from sample with acetonitrile， cleaned up by ProElut Carbon/NH2 SPE to achieve sample preparation， and separated on the MGШ-C18 column using a mixture of acetonitrile and 0.1% formic acid solution （60∶40） as mobile phase. Determination was performed by using ESI+ and under the mode of SIM. Quantitative detection of ions at m/z 395， the retention time of rotenone was about 4.8 min. Linearities were held in the ranges of 0.001～1.000 mg/L with the correlation coefficient for 0.999 98. The average recoveries of rotenone in cabbage at the spiked amounts of 0.01、0.10、0.50 mg/kg were 70.5%～112.6%， and the relative standard deviation was lower than 20.9%（n=5）. The limit of detectable amount （S/N=10） was 2.5×10-11 g. The accuracy and precision of this method could meet the detection requirements.
Key words： rotenone； residue； LC-MS
鱼藤酮是豆科藤本植物鱼藤根部的一种天然杀虫剂，具有高效、低毒、广谱、杀虫快、对农作物不产生药害和不易产生耐药性等优点，对防治果树、蔬菜、茶叶、花卉和粮食作物上的数百种害虫及蚊、蝇等卫生害虫有良好效果。但过量使用会造成环境污染，对人类健康带来危害，特别是其对中枢神经的毒性作用日益引起社会各界的关注[1]。因此，鱼藤酮在得到广泛应用的同时，开展鱼藤酮的残留检测方法研究就显得非常重要。目前，有报道采用液相色谱、液相色谱-质谱、液相色谱-串联质谱以及气相色谱-质谱检测鱼藤酮在蜂蜜[2，3]、鱼肉[4]、河水[5]、果蔬[6]、食品[7]、血浆[8]、鱼藤[9]以及水产品[10]中的残留。但甘蓝中鱼藤酮的残留检测方法未见报道，本研究建立了高效液相色谱-质谱法检测甘蓝中鱼藤酮的残留量，该方法快速、准确，准确度和灵敏度均能满足残留检测要求。
1 材料与方法
1.1 仪器及试剂
LC 210ADvp高效液相色谱仪（日本岛津公司），配有LC-MS 2010 EV质谱检测器和电喷雾离子源，自动进样器，LC-MS工作站。
鱼藤酮标样（99.0%，德国Dr. Ehrenstorfer公司），甲醇和乙腈均为色谱纯（J. T. Baker公司），甲酸（99.0%，Acros Organics公司），氯化钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），超纯水用 Barnstead超纯水机制备，其他试剂均为分析纯。
1.2 样品前处理
称取经捣碎处理的甘蓝样品10.00 g于100 mL离心管中，加入20 mL乙腈，以21 000 r/min匀质2 min，加入3.0 g氯化钠，再匀质1 min。以3 500 r/min离心5 min，吸取上清液5 mL（相当于2.5 g样品）于100 mL烧杯中，于80 ℃水浴蒸发近干，加入2 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）待净化。
1.3 样品净化
用5 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）预淋洗Carbon/NH2柱（6 mL，500 mg），待淋洗液接近固体层面时迅速倒入上述待净化液，同时收集淋洗液，再用6 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）分两次淋洗，合并上述淋洗液，于45 ℃水浴中旋转蒸发近干，2.5 mL甲醇定容，待质谱检测。
1.4 液相色谱-质谱条件
色谱柱：MGШ-C18（100 mm×2.0 mm，5 μm）；流动相采用乙腈∶0.1%甲酸溶液（60∶40，V/V）；流速：0.2 mL/min；进样体积：5 μL；柱温：35 ℃；离子源 ESI （+），SIM 扫描模式（m/z 395）；CDL温度：250 ℃； 加热模块温度：200 ℃；雾化气流速（N2）：1.5 L/min；干燥气（N2）压力：40 kPa；检测电压：1.65 V。
2 结果与分析
2.1 定量离子的选择
在上述色谱条件下选择SCAN （+）模式，直接进100 mg/L的鱼藤酮标样溶液，扫描范围m/z 50～450得到全扫描质谱图。由图1可见m/z 395 （M+H）的强度最大，所以选择 m/z 395 为定量离子。以m/z 395为定量离子采用SIM（+） 模式，鱼藤酮的添加和标样图谱以及甘蓝空白谱图见图2。
2.2 线性范围和检出限
配制鱼藤酮标准溶液浓度分别为0.001、0.005、0.010、0.050、0.100、1.000 mg/kg进行检测，以m/z 395质量色谱图峰面积为纵坐标，对应的鱼藤酮质量浓度（mg/kg）为横坐标，绘制标准曲线如图3，其线性回归方程为：y =672 954 0x+112 02，相关系数为0.999 98。按S/N=10计算鱼藤酮最低检出量为2.5×10-11 g。
2.3 方法的回收率、精确度和最小检出浓度
在未施用鱼藤酮的菜地采集空白甘蓝样品，分别添加0.01、0.10、0.50 mg/kg 3个水平鱼藤酮标准溶液，每个水平5次重复，检测结果见表1，添加样品中鱼藤酮加标回收率为70.5%～112.6%，相对标准偏差（RSD）在4.1%～20.9%。鱼藤酮在甘蓝中的最小检测浓度为0.01 mg/kg。回收率、相对标准偏差和最小检测浓度能满足农药登记残留试验的要求。
3 小结与讨论
采用乙腈提取，Carbon/NH2柱净化，液相色谱-质谱检测农药鱼藤酮在甘蓝中的残留，该方法操作方便，其添加回收率、精确度和最小检出浓度均能达到农药登记残留试验的要求。
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收稿日期：2012-06-01
基金项目：农业部农药检定所农药登记试验项目（2011P325）
篇7
【关键词】 战骨；，，黄毛豆腐柴；，，指纹图谱；，，高效液相色谱法；，，壮药
摘要：目的采用高效液相色谱法对壮药战骨药材进行指纹图谱的研究，为战骨药材质量标准的提升提供实验依据。方法实验采用Phenomenex Gemini C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.05 mol/L 醋酸水溶液为流动相进行二元梯度洗脱，流速1.0 ml / min，柱温25℃，检测波长274 nm。结果以23个共有峰为评价指标，精密度和重复性实验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%，符合有关规定要求。结论此方法操作简单，精密度、稳定性和重复性良好，有助于战骨药材的质量控制。
关键词：战骨； 黄毛豆腐柴； 指纹图谱； 高效液相色谱法； 壮药
Abstract：ObjectiveThe fingerprint chromatograms were established for quality evaluation of traditional Zhuang nationality medicine Zhangu ( the root of Premna fulva craib) by high performance liquid chromatography. MethodsThe analysis was performed on a Phenomenex Gemini C18 column（4.6 mm×250 mm，5 μm） with acetonitrile0.05 mol/L ethanoic acid as mobile phase in a gradient mode at a flow rate of 1.0 ml/min， and at a column temperature of 25℃. The detection wavelength was 274nm. ResultsTwenty three peaks were selected as the common fingerprint peaks. The relative standard deviations for relative retention values and relative peak areas were less than 3% in the precision and repeated test. ConclusionThe method is reliable and can be helpful in the quality control of Zhangu.
Key words：Zhangu； Premna fulva Craib.； Fingerprint； High performance liquid chromatography； Traditional Zhuang Nationality medicine
壮药战骨是马鞭草科植物黄毛豆腐柴 Premna fulva Craib.的干燥茎，别名土霸王、穿云箭［1］。多分布于广西百色、南宁地区等地，药源丰富，价廉易采收，属可持续利用的天然药物资源。战骨具有活血散淤、强筋健骨、驱风止痛的功效，广西民间常用于治疗腰腿痛、跌打损伤、风湿性和类风湿关节炎及感冒身痛、淋巴结炎、肝区疼痛等［2～4］。战骨中含有多种化学成分，其主要有效成分为柚皮素等黄酮类化合物［5～7］。由于受产地、气候、生态环境等因素的影响，不同药材所含有效成分差异较大。针对中药材的某个有效成分对药材进行定性、定量并不能有效控制中药材的质量。指纹图谱能够从综观和整体上表征中药材的特征，目前已成为国际上公认的控制天然药物质量的有效手段［8，9］。本文以提高战骨药材质量标准，促进民族医药发展为目的，对广西不同产地战骨药材进行了指纹图谱的研究。
1 材料与方法
1.1 仪器与药品仪器：美国PerKinElmer公司Series 200高效液相色谱仪（包括Series 200紫外检测器、Series 200二元泵、600 Series 接口及色谱工作站）。 Phenomenex Gemini C18 色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）。药材：战骨（产地：广西，经广西南宁食品药品检验所中药室鉴定，均为马鞭草科植物黄毛豆腐柴的干燥茎。来源见表1）。试剂 ：乙腈、甲醇为色谱纯，乙醇、醋酸为分析纯，水为高纯水，柚皮素对照品（中国药品生物制品检定所）。
表1 战骨药材样品来源及批号（略）
1.2 色谱条件以乙腈-0.05 mol /L 醋酸水溶液为流动相进行二元梯度洗脱，流速1.0 ml/min，柱温25℃，检测波长274 nm，进样量20 μl。梯度洗脱程序结果见表2。
表2 流动相梯度洗脱程序（略）
1.3 方法
1.3.1 参照物溶液的制备取柚皮素对照品适量，用甲醇溶解，定容，作为参照物溶液（含柚皮素104 μg/ml）。
1.3.2 供试品溶液的制备取各批战骨药材粉未（过2号筛）约2.5 g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入30%乙醇溶液50 ml，超声处理1.5 h ，放冷，再称定重量，用30%乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。不立即分析的样品可暂存于4℃的冰箱保存。
1.3.3 测定方法分别精密量取参照物溶液和各供试品溶液20 μl，注入液相色谱仪，记录90 min色谱图即得。以柚皮素的色谱峰（S）的保留时间和峰面积为1，计算其它各峰的相对保留时间和相对峰面积比值。
2 结果
2.1 方法学考察
2.1.1 精密度以1# 药材制备供试品溶液，在“1.2”项下色谱条件下，连续进样5次，检测指纹图谱。结果表明，色谱图中各色谱峰的相对保留时间的RSD小于0.98%；相对峰面积的RSD小于2.31%，符合指纹图谱要求，表明仪器精密度良好。
2.1.2 重复性以1# 药材5份，制备供试品溶液，分别检测指纹图谱，结果表明各色谱峰的相对保留时间的RSD小于1.91%；单峰面积大于等于5%总峰面积的色谱峰其相对峰面积的RSD小于2.28%，表明方法的重复性良好。
2.1.3 稳定性取1# 药材制备供试品溶液，分别在0，12，17，37，48h 检测指纹图谱，结果表明，各主要色谱峰的相对保留时间的RSD小于2.51%，相对峰面积比值的RSD小于2.89%，表明供试品溶液在48 h内稳定。
2.2 指纹图谱的建立及分析
2.2.1 指纹图谱及共有峰的标定对10个战骨药材样品进行了测定，其色谱图有23 个主要的共有特征峰（占总峰面积的90%以上）。其典型的HPLC-UV指纹图谱见图2。其中17 号峰为柚皮素（与参照物对照确认，色谱图见图1）。10批样品中，单峰面积与总峰面积的比值大于20%的共有峰只有17号峰，大于10%的共有峰有21 号峰，大于5%的共有峰有1号和4号峰。结果表明1，2，3………23号峰在10批样品的色谱图中均出现。以柚皮素对照品保留时间为参照，计算各共有特征指纹峰的相对保留时间，相对保留时间的RSD小于2.10%（n=10，结果见表3）。因此标定此 23个峰为共有指纹峰，并据此建立战骨药材的HPLC指纹图谱。
表3 10批战骨药材共有指纹峰的相对保留时间（略）
2.2.2 共有指纹峰面积与参照物峰面积的比值以柚皮素峰面积为参照，计算各批药材供试品共有指纹峰的峰面积比值，结果见表4。由表4和图3可见，各批供试品指纹图谱的重现性较好，但各批样品间共有指纹峰的相对峰面积有一定差异。
2.2.3 非共有峰面积供试的10批样品共有指纹峰面积之和占总峰面积比值平均为93.69 %，则非共有峰面积占总峰面积的比值平均为6.31 %，符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》［10］。
2.3 指纹图谱的检验取10批战骨药材，按供试品溶液的制备方法操作，分别取各批药材制成的供试品溶液，按供试品检测法进行检测，并与典型的指纹图谱相比较，结果表明各批样品指纹图谱相似度较好，共有23个共有峰，而且各共有峰的相对保留时间的RSD均小于3%。结果见图3及表3。
3 讨论
3.1 实验过程中选择了多种流动相系统：①甲醇-水，②甲醇-醋酸水溶液，③乙腈-水，④乙腈-醋酸水溶液等度和梯度洗脱几种方式，并对梯度洗脱程序进行优化，结果表明以“1.2”项下系统为最佳。各色谱峰分离度较好，峰型尖锐，保留时间适中。
3.2 实验中对战骨药材供试品溶液进行紫外扫描，在274 nm和280 nm有最大吸收。分别在254，274，280 nm和288 nm［11］波长下测定指纹图谱，从色谱图中的基线、峰型和分离度等因素综合考虑，选择274 nm为指纹图谱的检测波长。
表4 10批战骨药材共有指纹峰的相对峰面积（略）
3.3 不同产地的战骨药材指纹图谱相似度较高，23 个共有峰相对保留时间符合程度较好，但相对峰面积有一定差异。提示药材应在固定产地的前提下才能保证药品的一致性，同时说明以简单测定一个或几个成分含量为主的传统质量控制方法已不能真正反映中药材质量，而利用指纹图谱对药材进行综合、宏观地评价是当今对天然药物质量控制的有效手段。
3.4 本实验所建立的方法，精密度、稳定性和重复性符合指纹图谱研究的技术要求［10］，为壮药战骨及制剂的质量控制提供了一定的科学依据，对壮药战骨药材质量标准的提升进行了有益的探索。
图1 柚皮素HPLC图谱（略）
图2 战骨药材HPLC指纹图谱（样品1#）（略）
图3 10批战骨药材HPLC指纹图谱（略）
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篇8
关键词：超高效液相色谱 氯丙嗪 残留量 猪肉
中图分类号：R155.5 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）10（c）-0187-03
Determination of chlorpromazine residues in meat products by ultra high performance liquid chromatography
LIU Chun
（Dongcheng district Center for Diseases Prevention and Control，Beijing，100009，China）
Abstract：Objective： Ultra High Performance Liquid Chromatography（UPLC） method was determination of chlorpromazine residue in pork. Method： The target analyte was extracted form sample with acetonitrile and determined by UPLA. Chromatographic column： BEH C18 1.7 μm× 50 mm×2.1 mm， flow rate： 0.4 mL/min， mobile phase： acetonitrile∶ammonium acetate=60∶40， column temperature： 40℃， detection wavelength： 254 nm， injection volume：10μL.Result：The detection limit was 15.0μg/kg.The linearity ranged form 0 to 1.00 mg/L with the correlation coefficient of 0.9998. The recovery was 87.7% to 101.0%， RSD was 1.2% to 2.6%. Conclusion： The method was suitable for determination of chlorpromazine residue in pork.
Key word：UPLC;chlorpromazine;residues;pork
氯丙嗪（Chlorpromazine，CHL）又称冬眠灵，属于吩噻嗪类药物，是抗精神病类药的一种，涉及中枢神经、植物神经、心血管和内分泌系统等方面，其中主要被用作镇静药。一些养殖户因经济利益的驱使，在饲料中违规添加氯丙嗪抑制动物的运动，从而间接起到催肥作用。氯丙嗪在家畜饲养中的滥用，不仅会引起动物的中毒，还会通过在动物性食品的残留直接危害到人类。欧盟早已将氯丙嗪列入禁用清单中，我国也规定氯丙嗪禁止用于食品性动物。建立猪肉中氯丙嗪的检测方法，对于研究其在猪、禽体内的代谢及组织残留，实施猪、兽药残留监控具有重要的实际意义。
目前主要采用高效液相色谱法，液质联用法，气质联用法，化学发光法和免疫分析法检测氯丙嗪，采用超高效液相色谱测定猪肉中氯丙嗪含量鲜有报道。本文采用乙腈进行样品前处理，超声波提取，建立了超高效液相色谱测定猪肉在氯丙嗪的方法。
1 试验部分
1.1 主要仪器与试剂
Waters Acquity UPLC H-Class超高效液相色谱仪（美国，Waters公司）;3-30K冷冻高速离心机（美国，Sigma公司）。
氯丙嗪标准品（纯度≥99.0%，CAS：50-53-3，Dr.Ehrenstrfer公司）;乙腈（色谱纯，Fisher公司）;试验用水为电导率在18 MΩ・cm以上的超纯水。
1.2 分析方法
1.2.1 色谱条件
ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）;流动相乙腈∶乙酸铵=60∶40;检测波长254 nm;流速0.4 mL・min-1;柱温40 ℃;进样量5 μL。
1.2.2 标准曲线
精确称取氯丙嗪标准品0.0100 g，用少量乙腈溶解，并转移到10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪标准储备液浓度1.00 mg/mL。取氯丙嗪标准储备液1.00 mL，转移到100 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪标准使用液浓度10.00 μg/mL。4 ℃避光保存，保存期1个月。
精确吸取氯丙嗪标准使用液0.01 mL、0.50 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL于10 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，过0.22 μm尼龙微孔滤膜，即为0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪标准溶液。此溶液注意避光，现用现配。
1.2.3 样品制备
取适量粉碎混匀的样品于50 mL离心管中，加25.00 mL乙腈，漩涡混匀30 s，超声避光提取15 min，12000 r/min离心10 min，避光静置20 min，取上清液过0.22 μm尼龙微孔滤膜，上机测定。
1.2.4 样品测定
在色谱条件下，测定标准系列及样品。以目标化合物保留时间及特征光谱图定性;以峰面积为响应值，外标法定量。
1.2.5 定量计算
式中：X-试样中氯丙嗪的含量，单位为微克每千克（mg/kg）。
C-试液中氯丙嗪的含量，单位为微克每毫升（μg/mL）。
V-试样稀释总体积，单位为毫升（mL）。
m-试样质量，单位为克（g）。
计算结果保留两位有效数字。
2 结果与讨论
2.1 色谱条件的优化
采用不同体积比的乙腈∶水、乙腈∶乙酸铵作为流动相，将1.00 μg/mL的标准溶液进样检测，比较出峰情况。综合考虑峰形、峰宽、出峰时间，选择乙腈∶乙酸铵=40∶60作为流动相。图1为氯丙嗪标准品的色谱图。图2为氯丙嗪标准物质扫描光谱图。
按色谱条件进行分析，图3为空白猪肉样品的色谱图。图4为添加1.00 μg/kg氯丙嗪标准品样品色谱图。
2.2 方法的线性范围和检出限
精确吸取氯丙嗪标准使用液，用乙腈溶液依次稀释，配制成0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪标准溶液，以氯丙嗪的浓度和峰面积进行回归，得回归方程y=69121.94x-396.59，相关系数=0.9999。
按照取样10.0 g，定容25.00 mL，以基线噪声3倍相当的标准物质为检出限，计算最低检出限为7.5μg/kg，最低检出质量浓度为0.01 μg/mL。
2.3 方法的准确度和精密度
以空白猪肉为测试对象，分别添加低（0.25 mg/kg）、中（2.50 mg/kg）、高（5.00 mg/kg）3个水平的氯丙嗪标准品做加标回收实验，以考察方法的准确度（结果见表1）。
实验结果表明，本方法均回收率为87.7%～101.0%，RSD为1.2%～2.6%，符合方法学要求。
要获得氯丙嗪理想的回收率和较低的检出限，需要注意以下方面：氯丙嗪见光易分解，样品前处理全程需进行避光操作，标准使用液要贮存在棕色容量瓶中;样品离心后，须避光静置20 min，使样品进一步沉降分层;微孔过滤膜须采用尼龙材质（Nylon），避免目标物吸附在微孔过滤膜;配制标准溶液时，需采用100%乙腈，避免产生溶剂效应。
3 结语
本方法采用乙腈溶液超声提取，建立了超高效液相色谱测定猪肉中氯丙嗪的方法。方法重现性好，灵敏度高，操作简便，精密度及准确度满意，适用于猪肉中氯丙嗪的日常监测工作。
参考文献
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篇9
【关键词】液相色谱；纯度分析；油田化学品原料
Analysis of the Purity of AMPS by HPLC
CHEN Fan-bin FU Jun-fang ZHANG Hao
（Oilfield Chemicals Department， COSL， Yanjiao Hebei， 065201， China）
【Abstract】A method was developed for analyzing of AMPS， a main material of Oilfield Chemicals by HPLC detection. The separation was performed on an agilent ZORBAX SB-AQ（5 μm，4.6×150 mm， Agilent）with Solution 0.01 mol/L KH2PO4（pH=2.3） Methanol （volume ratio 95：5） at a flow rate of 1.0ml/min， the column temperature at 20 ℃， the detection wavelength at 210 nm for VWD，. The Sample from different regions were successfully analyzed by using this method. These results demonstrated that the proposed method is simple， sensitive and reliable for analysis material of Oilfield Chemicals
【Key words】HPLC； Purity analysis； Material of Oilfield chemicals
AMPS（2-丙烯酰胺-2-甲基-丙磺酸）与甲基丙烯酸、丙烯酰胺制成三元共聚物，用于固井水泥外加剂，可起到高温缓凝作用，可以在高温高盐环境下使用；与N，N-二甲基丙烯酰胺的共聚物可用于油井水泥浆失水剂；与木质素磺酸钙、丙烯酰胺的接枝共聚物，是非常优异的水泥分散剂、早强剂、增强剂；AMPS与丙烯酸、四氢苯甲酸、木质素磺酸等接枝共聚，可以制备钻井液分散剂和抗钙性能好的稳定剂、降粘剂、降滤失剂等；AMPS与N-乙烯基吡咯烷酮类的嵌段共聚物，作为三次采油的增粘剂，在高温、高压、高剪切条件下使用不发生降解，稳定性良好。
目前AMPS作为有效的改性单体已经渗入油田化学品各个领域的聚合物改性，很好解决了采油聚合物中抗盐性、抗高温性、抗剪切三大棘手问题。中国AMPS最大市场是油田三次采油，作为钻井液、完井液和压裂液等。目前中原油田等已经将AMPS聚合物作为油田三次采油的化学品立项，预计仅此一项2005年国内将至少消耗1万吨。
目前全球约1/3的AMPS单体用于水处理工业。AMPS的均聚物或与丙烯酰胺、丙烯酸等单体的共聚物，可作为污水净化过程中的淤泥脱水剂；在封闭水循环系统中用作铁、锌、铝、铜以及合金的防腐剂；还可用于加热器、冷却塔、空气净化剂和气体净化剂的除垢剂、阻垢剂等。国外大量使用表明，以AMPS作为处理剂用量少，效果优于现有聚丙烯酰胺类水处理剂。目前国内一些大中城市污水处理已经开始使用AMPS，其中华东年消耗约300吨，华南年消耗约150吨，京津唐年消耗200吨，年总消耗量约650吨，预计2005年将达到1000吨。
目前AMPS已成为国内引人瞩目的热点有机化工原料，部分科研机构的合成技术也较成熟，尤其是中国许多油田处于三次采油期，国内水处理领域用量巨大，都对AMPS质量和数量提出了更高更多要求。因此，国内在加快建设AMPS装置的同时，应加大应用研究力度，以促进AMPS工业健康快速发展。
AMPS单体的纯度对其后续的加工有着很大的影响，本文建立了一种快速分析AMPS单体纯度的方法。
1 实验部分
1.1 仪器、试剂与药品
HP1100高效液相色谱仪（美国Agilent），包括G1311A四元梯度泵、G1315A二极管阵列检测器和G1329A自动进样器；Milli-Q超纯水仪（美国Milli-Pore公司）；磷酸、磷酸二氢钾均购自北京分析试剂厂，均为分析纯；甲醇为Fisher试剂公司色谱纯；水为超纯水。
1.2 溶液配制
流动相的配制：以甲醇体积含量为5%的超纯水溶液为溶剂，配制0.01mol/L KH2PO4磷酸盐缓冲液，并以5%磷酸调节溶液pH为2.3，经0.45μm水系滤膜过滤后备用。
1.3 色谱条件
色谱柱：ZORBAX SB-AQ柱（5μm，4.6×150mm， Agilent）；流动相：0.01mol/L KH2PO4溶液（用5%H3PO4调节pH为2.3）-甲醇（体积比为95∶5）；检测波长：210nm；流速：1.0mLmin-1；柱温：20℃；进样量：5μL。
1.4 标准曲线的制备
因实验室没有AMPS的标品，所以使用日本的7号样品作为标准来测定其他样品的相对纯度。
表1 标准溶液配制
根据前述实验步骤和条件，按表一将混合标准溶液（M溶液）逐级稀释，得不同浓度的标准溶液，经0.45μm水系滤膜过滤后，以进样5 μL进行色谱分析，以对照品浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得工作曲线：
Y=3178.52682X-2.2716745 （r2=0.9999）
1.5 样品的测定
将样品按照1.4的方法配制，以5ul进样量进入色谱分析，结果见表2。
表2 样品AMPS纯度（%）
1.6 讨论
以上分析六种AMPS单体的纯度，从测定结果（图1）可以看出，样品在色谱柱中的保留时间完全吻合，具有很高的精确度。在实际的AMPS聚合工作中，同等条件下2号样合成效果最好，3号样聚合效果最差，与色谱分析的纯度结果一致，说明这种方法是可行的。所建立的分析方法不仅用于单体纯度的测定，而且还可应用于聚合物开发、生产过程中单体转化率的测定。
由于实验室缺少AMPS的标品采用了日本产7号样作为相对标准，在以后的检测工作中应使用AMPS的标品作为标准物，以取得准确的数据。
图1 AMPS各样品色谱图
2 结论
本文建立了高效液相色谱法测定AMPS单体的方法，该方法准确、简便、快速，不仅适用于单体纯度的测定，而且还可应用于聚合物开发、生产过程中单体转化率的测定。该方法可用于目前市场上一些油田化学原料的检测分析，便于区分不同批次样品纯度，方法简便易操作。
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篇10
关键词：高效液相色谱法 兰索拉唑 含量测定
中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2015）02（b）-0000-00
兰索拉唑为苯并咪唑衍生物，为继奥美拉唑之后的新一代的质子泵抑制剂，能有效地抑制胃酸分泌，治疗胃酸相关性疾病。国外大量临床应用证明，兰索拉唑对消化性溃疡有很好的疗效，由血液吸收入壁细胞后作用于壁细胞质子泵即抑制H+/K+-ATP酶的活性，从而持续抑制胃酸分泌。
兰索拉唑不耐酸，目前比较普遍给药方式为口服的兰索拉唑肠溶片和肠溶胶囊，起效较慢，而改变给药途径为静脉给药的注射用兰索拉唑提高了兰索拉唑的生物利用度，缩短了起效时间。为保证产品质量，我们拟用高效液相色谱法对其含量测定方法进行研究。
1 仪器与试药
Agilent 1260高效液相色谱仪；AlltimaTM C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；MS105型精密电子天平（梅特勒）；兰索拉唑对照品（批号：100709-201304，含量为99.8%，中国食品药品检定研究院）；注射用兰索拉唑（30mg，以C16H14F3N3O2S计，自制）；甲醇、三乙胺、磷酸均为色谱纯，水为注射用水。
2 含量测定方法
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，AlltimaTM C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水-三乙胺-磷酸（600：400：5：1.5）[用磷酸溶液（110）调节PH值至7.3]，检测波长为284nm；流速为1.0ml/min；柱温30℃；进样量20μl。调节流动相比例使兰索拉唑峰的保留时间约为16分钟。
2.2 测定法
精密称定样品，约含兰索拉唑15mg，置100ml容量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml与甲醇-水（60：40）溶液适量，超声使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取兰索拉唑对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
3 方法学试验
3.1 准确度试验
按照制剂处方，分别称取18mg、15mg、12mg的兰索拉唑对照品各3份，分别加入处方量的辅料于同一100ml容量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml与甲醇-水（60：40）溶液适量，超声使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液分别作为测定浓度120%、100%、80%的供试品溶液，按外标法以峰面积计算测得量和回收率，试验结果见表1。
表1 准确度试验结果
加入量（mg）
测得量（mg）
加样回收率（%）
平均回收率（%）
RSD（%）
18.01
18.07
100.33
100.08
0.42
18.03
17.99
99.78
18.10
18.08
99.89
15.02
15.01
99.93
15.04
15.06
100.13
15.08
15.16
100.53
12.02
12.12
100.83
12.01
11.95
99.50
12.05
12.03
99.83
结果表明：含量测定平均回收率为100.08%，RSD为0.42%，准确度试验符合测定要求。
3.2 线性范围试验
储备液的制备：称取兰索拉唑对照品15mg，置50ml容量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml与甲醇-水（60：40）溶液适量，超声使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀释至刻度，作为储备液。
精密量取上述溶液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，分别置10ml容量瓶中，加甲醇水（60：40）溶液稀释至刻度，作为线性试验溶液。分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以兰索拉唑浓度与相应峰面积计算线性回归方程，y=13263x-368.8，相关系数r=0.9994。结果表明，兰索拉唑浓度在0.09mg/ml～0.21mg/ml范围内，具有良好的线性关系。
3.3 重复性试验
取供试品，照含量测定项下方法试验，重复测定6次，计算其平均值。
结果表明：6次测定的平均含量为标示量的101.98%，RSD为0.21%，平行性好，重复性试验符合测定要求。
3.4 溶液稳定性试验
取供试品，照含量测定项下方法试验，每隔1小时测定一次，共测定5次，计算其平均值。
结果表明：兰索拉唑平均含量为标示量的101.44%，RSD为0.36%，供试品溶液在室温条件下5小时内稳定。
3.5 进样精密度试验
取供试品溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，连续进样6次。
结果表明：兰索拉唑平均峰面积为11891.5，RSD为0.56%，该方法进样精密度良好。
3.6 中间精密度试验
取供试品，照含量测定项下方法试验，变动因素为不同日期，不同人员。计算其平均值。
结果表明：兰索拉唑平均含量为标示量的101.48%，RSD为0.41%，该测定方法中间精密度良好。
4 样品含量测定
取三批供试品，照含量测定方法分别进行测定。结果表明：三批供试品含量均为98.0%～102.0%之间。
5 讨论
建立的高效液相色谱法通过准确度试验、线性范围试验、重复性试验、溶液稳定性试验、进样精密度试验及中间精密度试验等方法学试验，表明该含量测定方法具有准确、可靠、灵敏度高等特点，可有效控制注射用兰索拉唑的含量。
参考文献
[1]兰索拉唑质量标准 中国药典2010年版第一增补本 281.