醋酸纤维范文
时间:2023-03-31 03:04:15
导语:如何才能写好一篇醋酸纤维,这就需要搜集整理更多的资料和文献,欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文,供你借鉴。
篇1
关键词: 血清醋酸纤维薄膜 电泳 生物化学 实验
电泳是带电颗粒在电场的作用下,向着与带电颗粒电性相反的电极迁移的现象。电泳法可用于分离、鉴定或提纯许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等,因此电泳法已成为开展生物化学和分子生物学研究工作的一种常规的不可缺少的工具。电泳法(血清醋酸纤维薄膜电泳分离及测定)作为一项基本方法,已成为医学生生物化学实验教学常规开设的实验内容,该法操作简便,快速、价廉,样品用量少,实验技术成熟,分辨能力强,没有吸附现象、效果直观,便于保存等优点,但影响电泳图谱的因素较多,学生在实验中操作不当等,均可导致实验失败而得不到理想的电泳图谱。因此,为了达到预期的实验效果、提高学生对电泳实验的动手能力,根据我校学生血清醋酸纤维薄膜电泳(cellulose acetate membrance electrophoresis,CAME)实验的实际情况,本文对CAME实验中电泳图谱常见的问题进行分析,以期为CAME实验教学提供参考。
1.出现五条以上的区带
在CAME实验中,有的同学电泳实验结果看起来很“完美”,有“许多”区带――五条以上(实验结果应是五条区带,分别是清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白),为什么会有这种现象呢?原来出现的“许多”区带(五条以上)正是在点样中出现的,有的同学在点样过程中实施“二次”点样[1]。CAME实验包含准备、点样、平衡、电泳、染色、漂洗、定量(该步骤没要求)等步骤,其中点样成功是获得清晰电泳图谱的关键。在试验中,为了便于学生操作,我们应用玻片进行点样,有的同学没有擦干玻片两侧的血清;有的同学觉得点样量太少,又重复进行一次点样。没擦干玻片两侧的血清,导致玻片两侧有两个点样面,后者进行的“二次”点样不可能在同一个位置,在进行电泳时,有的区带“跑”得快,有的“跑”得慢,区带与区带之间有的重叠,有的未重叠,因而分离出五条以上的区带(事实上,在某一区带并不是同一种蛋白质);有的同学进行多次(两次以上)点样所得到的电泳图谱成片。其实在实验前老师已事先提醒学生不要进行“二次”点样,并详细介绍了可能产生“二次”点样的情况,但少数同学可能没在意或认为点样量“看起来太少”,于是又重复进行点样操作。
2.没出现电泳区带或不足五条区带
有的同学电泳实验结果没有出现区带或不足五条区带主要有下面一些原因。
2.1醋酸纤维薄膜在电泳仪两极放反了。电泳是带电粒子在电场中向电性相反的电极泳动的现象,根据实验原理,点样的一侧应离负极近,而有的同学正好放反,醋酸纤维薄膜放反会导致带电的粒子在薄膜上泳动的距离过短,蛋白质“跑到”滤纸上或电泳槽的缓冲液中去了,结果也就不会出现区带或不足五条区带。
2.2点样点反了。实验要求同学们先在醋酸纤维薄膜点样处划线,但有的同学划线不清楚,结果点样时也不知道具体的位置,事实上点样没有在划线处(在与之对应的离正极近的一侧),造成与上述2.1相同的结果,也不会出现区带。
2.3点样没点上去。点样时要求同学们用力不能太大也不能太小,太大会造成醋酸纤维薄膜折断,太小有可能样品根本没点到薄膜上或在薄膜上的样品太少,出现的结果不清晰,甚至没有区带。
2.4在光滑面点样。醋酸纤维薄膜有两面,一面有光泽,一面无光泽,无光泽面才是实验要求的点样面,操作时必须认真加以区别(有光泽的一面发生的是镜面反射,无光泽的一面发生的是漫反射,以此可以区别)。若点样错误地点在有光泽面上,带电的蛋白质就不可能在薄膜上移动,也就不可能有五条区带。
2.5电压太高或太低。电泳槽两极之间的膜长度为8cm―10cm,则需电压25V/cm膜长,电流强度为0.4mA/cm―0.5mA/cm膜宽。当电压过大或电流强度高,尤其在温度较高的环境中,可引起蛋白质变性或由于热效应引起醋酸纤维薄膜缓冲液中水分蒸发,使缓冲液浓度增加,造成膜片干涸,不可能出现电泳的结果(在预实验中我们曾以此为对照,确实不能出现区带)。电流过低,则样品泳动速度慢且易扩散,导致实验结果实验图谱不清晰或成片,达不到预期的效果。在实验中,当电泳的电压或电流达不到或超过上述值时,则应增加缓冲液浓度或进行稀释。缓冲液浓度过低,则区带泳动速度快,由于扩散变宽,区带中的蛋白质泳动到滤纸桥甚至到缓冲液中,不能形成五条区带;缓冲液浓度过高,则区带泳动速度慢,区带分布过于集中,形成一片,不易分辨出五条区带。
2.6点样用力不均匀或样品涂在玻片时不均匀。点样用力不均匀的结果是,样品有的点上去了,有的没有,这与取样涂在玻片不均匀相关。在血清中有的样品的量比较少,没点样上去导致不能形成区带。
2.7点样处放在电泳滤纸桥上。醋酸纤维薄膜上有样品的点样处不能放在滤纸桥上,薄膜放在滤纸桥上有一个平衡的过程,在此过程中,蛋白质的热运动可能造成样品在滤纸上扩散,而得不到五条区带。
2.8电泳的时间过短或过长。电泳时间过长,造成血清蛋白电泳区带“跑”到滤纸桥上或电泳槽的缓冲溶液介质中;电泳时间过短,造成血清蛋白电泳区带没有完全分离。在CAME实验时,电泳的时间以45―60min为宜,电泳的时间过短或过长,均得不到满意的结果。
2.9醋酸纤维薄膜的有光泽的一面向下。有光泽的面向下,导致实验电流不易通过,不能出现五条区带。
3.区带不均匀
3.1选择的醋酸纤维薄膜不合规定。市售醋酸纤维素薄膜均为干膜片,薄膜的浸润与选膜是否恰当也是电泳成败的重要步骤之一。将干膜片漂浮于缓冲液表面,其目的是选择膜片的厚薄及均匀度,若飘浮于液面的薄膜在15―30s内迅速润湿,整条薄膜色泽深浅一致,则此膜均匀可用于电泳。若膜片吸水不均匀,有白斑点或条纹,提示膜片厚薄不均匀,则应舍弃不用,以免造成电泳后区带不均匀或扭曲,区带与区带之间界线不清,背景脱色困难,结果重现性差。由于醋酸纤维薄膜亲水性比纸小,浸泡30min以上是保证膜片上有一定量的缓冲液,并使其恢复到原来多孔的网状结构。最好是让漂浮于缓冲液的薄膜吸满缓冲液后自然下沉,这样可将膜片上集聚的小气泡赶着走。点样时,应将膜片表面多余的缓冲液用滤纸吸去,以免缓冲液太多引起样品扩散。但也不能吸得太干,太干则样品不易进入薄膜的网孔内,而造成电泳起始点参差不齐,影响分离效果。吸水量以不干不湿为宜。为防止指纹对实验结果的影响,取醋酸纤维薄膜时,应用镊子或戴指套。
3.2铅笔划线时用力过大。铅笔划线时用力过大,可将膜条弄破或出现凹陷,而影响电泳区带分离的均一性。
3.3点样时用力过大、过小。点样时用力太大,将膜条弄破或出现凹凸不平,而影响电泳区带分离效果;点样时用力过小,玻片可能没有与膜片接触,导致点样量太少,则蛋白质量少,区带模糊不清。
3.4点样量不均匀。点样时,玻片片身必须与薄膜保持垂直,若不垂直,则既可能使点样量过少,又可能使薄膜折断或受损;在用玻片进行点样时,玻片上的样品涂得不均匀,有的地方多,有的地方少,会导致在醋酸纤维薄膜上的样品的量分布不均一,实验的结果也就显示图谱不均一。
当然,引起血清CAME图谱不理想的因素有很多,除上面介绍外,还有加样量、薄膜的致密性、醋酸纤维薄膜对蛋白质的吸附性、缓冲液的离子强度、电场中的电渗作用、实验温度的高低、薄膜放置是否与滤纸桥垂直、血清是否新鲜等诸多因素都可以影响实验结果。因此,在实验前,我们应对实验的条件进行考察,做好预实验;在实验中,要对学生进行认真的指导;在实验结束后,要组织学生讨论,对实验结果认真分析,保证学生实验顺利进行。
篇2
[关键词]生物化学实验 图示教学法 教学方法 教学实践 醋酸纤维素薄膜电泳
[中图分类号] G642 [文献标识码] A [文章编号] 2095-3437(2014)05-0048-02
生物化学常见实验技术包括分光光度技术、电泳技术、层析技术、离心技术、色谱技术和分子生物学技术等六大类。醋酸纤维素薄膜电泳实验在《生物化学》和《有机化学》课程的学生实验中长期使用,也是各层次的医学生《生物化学》课程中的必开实验课。但是,醋酸纤维素薄膜电泳实验步骤相对较多,且受人为操作因素影响较大,很容易出现失败的实验结果。多媒体教学虽然能够进行形象化实验教学,但受学科建设经费所限,在基层教学单位装备多媒体设备的实验室并不普遍,因此如何更好地利用传统的板书来讲授并指导醋酸纤维素薄膜电泳实验课,仍然是当前普遍且急切的问题。近年来我校生物化学与分子生物学教研室将图示教学法成功运用到生物化学实验《血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳―微量法》的实验教学中,取得了良好的教学效果。
一、 教学对象
教学对象是我校2008级至2011级临床医学专业、口腔学专业、影像学专业和预防学专业本科学生,进行传统式实验教学,即教师实验课堂授课30分钟、学生实验和最后10分钟的实验小结。教学按教学计划进行,实验课教室未安装多媒体设备,授课手段为传统的口述结合黑板板书。
二、图示教学法讲授生物化学实验《血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳―微量法》实验原理
(一)电泳原理(如图1)
(二)蛋白质两性电离原理(如图2)
(三)血清蛋白电泳效果图(如图3)
(四)《血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳―微量法》实验操作――滤纸吸去醋酸纤维素薄膜上多余的缓冲液(如图4)
(五)《血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳―微量法》实验操作――血清和溴酚蓝混匀(如图5)
(六)《血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳―微量法》实验操作――点样(如图6)
(七)《血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳―微量法》实验操作注意点――电泳槽(我校生物化学实验采用的特制电泳槽)左右电泳方向相反(如图7)
(八)《血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳―微量法》实验操作――将醋酸纤维素薄膜放置到电泳槽(我校生物化学实验采用的特制电泳槽)(如图8)
(九)《血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳―微量法》实验操作――将醋酸纤维素薄膜放置到电泳槽的常见错误(如图9)
三、生物化学实验《血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳―微量法》实验授课时口述注意事项
(一)将醋酸纤维素薄膜在pH为8.6的缓冲液中浸泡5-10分钟,使醋酸纤维素薄膜内充满pH为8.6的缓冲液。
(二)用滤纸吸去醋酸纤维素薄膜上多余的缓冲液,注意不能吸得太干或太湿。
(三)加样时,动作应轻、稳,用力不能太重,加样只能加一次,注意加样需均匀,使形成一定宽度、粗细均匀的直线。
(四)醋酸纤维素薄膜浸泡和上电泳时粗糙面要朝下,这样才能保证浸泡充分。
(五)印好样立刻摆进电泳槽,注意电泳方向。全部同学的醋酸纤维素薄膜摆好后,调节醋酸纤维素薄膜间的隙缝,使之紧挨着,但醋酸纤维素薄膜之间不能接触,盖好电泳盖,再置2分钟后才通电,以保证每一片醋酸纤维素薄膜都能充分湿润。这样电泳时强度均匀。
(六)丽春红染色时间要充分,大于5分钟。并不停用镊子搅散,以防有两张以上的醋酸纤维素薄膜紧贴在一起而不能充分染色。印样的血清量少和染色不充分都会使结果的带条不清。
(七)其他:避免电泳仪或电泳槽正负极接错;避免醋酸纤维素薄膜正负极摆放错误等。
图式教学法,是指用一些简单的线条、图形、图像和表格,将授课中的重点难点简明扼要地概括出来,激发学生的学习兴趣,更好地掌握知识,促进教学效果的提升。其本质就是使抽象的知识具体化、形象化,零碎的知识点系统化。图示教学法的核心就是要设计出能够高度概括知识点的一连串的图。授课老师刻苦钻研教材,整体把握授课内容的所有知识点(包括重点难点)是使用该教学法的前提条件。而如何做到主次分明,重点难点突出;如何做到将各知识点之间的联系理清,将知识点条理化系统化;以及如何绘制简单的图表,以适应传统板书的要求,也是做好应用图示教学法的关键所在。图示教学法广泛应用于包括生物医学在内的各学科的教学中。[1-5]而我校生物化学与分子生物学教研室自2009年以来将图示教学法成功地运用到生物化学实验《血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳―微量法》的实验教学中,设计了包含该实验所有重点难点在内的直观且系统的9个图,取得了非常好的教学效果。
[ 参 考 文 献 ]
[1] 杨留才.图示教学法在生化教学中的应用[J].卫生职业教育.2004,22(20):61-62.
[2] 张秀萍,田迎春,安力彬,姜波.在统计软件SPSS教学中应用PBL和图示教学法的效果评价[J].护理研究.2008,22(6):1487-1488.
[3] 丁春芳.图示教学法在数据结构教学中的应用[J].邢台学院学报.2010,25(2):127-128.
篇3
1、PC材质
优点:材料价格较低。有一定的柔韧性。耐冲击(这就是被称为太空片的原因),皲裂但不会有碎屑崩裂。
缺点:表面喷漆不环保,漆层易剥落。舒适性较差,耐用性也不好。镜架无法因应不同脸型做出调整。
2、TR材质
优点:材质透明度高。柔韧性好,可以迁就不同尺寸的需求,耐挤压踩踏(会断裂的是因为加入再生料所致)。质地很轻。
缺点:表面喷漆处理,不环保,喷漆技术差的漆层也会很快剥落(好的大约2年)。因为弹性很好,镜架无法调整,镜框的柔软也给技术差的加工镜片师傅以最大的宽容度,就是说做很差的镜片很容易装入镜架。
3、塑钢材质
优点:强度及表面硬度比TR好。柔韧性比TR略低,比PC高。质轻。因强度高,可以做出非常纤细的圈形,可以做出最接近金属镜架的超细镜框,当然,掌握这项技术的企业还不多。表面漆层附着力较高。
缺点:表面亚光质感,需要喷漆处理,对喷漆技术的要求很高,技术不过关的镜架喷漆后会导致镜架容易脆断。
4、碳素纤维
优点:质地轻盈,高强度、耐高温、表面有独特的质感。
缺点:大幅度弯折易断裂。
5、醋酸纤维素材质
优点:表面硬度高。不需表面处理,质感高贵,耐磨。可以根据不同的脸部尺寸做适当的舒适性调整。是国际服饰类品牌眼镜品类产品中较多选用的成熟材质。
缺点:材质较硬,如果调整不恰当舒适性较差。酸性料不能配PC材质的镜片,会导致镜片开裂。较重。会回平(因为是由平板切割而成)需要调整,镜脚需铜芯定型。
6、海马尼材质
优点:市面上比较完美地解决包裹内容物(薄片状的真实干花、不锈钢薄片、牛仔布料、蕾丝等等)的材料,呈现的质感更有立体感和层次感。表面无喷漆电镀处理,经久耐用。质地较醋酸纤维素轻。柔韧性也较醋酸纤维素好。可以适度调整镜架以更加贴合脸部尺寸。
篇4
三菱丽阳集团是一家以功能型腈纶纤维和醋酸纤维为支柱,世界独一无二的化学合成纤维厂家,致力于在材料开发中活用独自的聚合体设计和纺纱技术。今年是三菱集团下属三菱丽阳有限公司及三菱纺织有限公司携手伊藤忠纤维贸易(中国)有限公司、诸城裕民针织有限公司、青岛ROY-NE有限公司第二次联合参展,展示了他们共同开发的最新超细旦纤维和腈纶纤维系列产品。
据三菱丽阳株式会社部长河崎介绍,三菱丽阳此次展出了最新成果包括:超细旦腈纶纤维、纱线及成品,包括业界首创的带有丝滑光泽的全新超细纤维CELWARM,具有超蓬松超轻量性能的超细纤维AIRWARM和消臭功能的晴纶纤维CUTELY等等。其中,超细旦腈纶纤维除了具有柔软细腻的优点外,同时还具有吸湿发热、抗菌、消臭、轻盈、保暖、高雅的光泽度等功能。
拥有全球独家生产的SOALON三醋酸纤维系列产品,备受品牌商青睐。河崎部长表示,SOALON三醋酸纤维系列产品是世界上独一无二的二醋脂与三醋酸混合纤维。以天然纸浆为原料的纤维素纤维,水分率和其他的合成纤维相比很高,具有优异的吸水速干性、光泽性、发色性。做成的面料既有天然的手感又有化纤的稳定性。SOALON产品目前多用于高档女性服饰及内衣产品,也受到了世界高档女装品牌的青睐。
此外,三菱丽阳携手伊藤忠、裕民针织、青岛ROY-NE的联合参展也是此次展会的一大亮点。据伊藤忠纤维贸易(中国)有限公司营业课长林进平介绍,,联合上下游优势的企业,共同发掘消费者真正需要的产品、研发市场未来需要的新产品,让观众和消费者能够真正感觉和体验最舒适和环保的功能面料。从今年开始,伊藤忠纤维贸易(中国)有限公司成为三菱丽阳有限公司的拳头产品“美雅碧”(MIYABI)在中国内衣业的独家商,而美雅碧正是三菱丽阳最新研发的超细旦纤维,是三菱丽阳革命性技术创新的成果,美雅碧具有比莫代尔、粘胶和丝更优异的柔滑性,比羊毛和莫代尔更细、更轻、更温暖的性能,而且具有良好的穿着舒适性。
伊藤忠作为纺织品国际贸易公司,在做原料贸易的同时,积极保持与上下游厂商的合作,他们认为供应链的有效管理是他们最赖以生存的商业方式。林进平告诉记者,伊藤忠通过在中国纺织服装供应链的有效管理整合,不断优化产品的品质和功能性,致力于提供人类最舒适的穿着材料,为世界及中国一流的品牌提供优质的服务。
篇5
[关键词]重组人酸性成纤维细胞生长因子;乙醇脂质体;微针阵列;经皮给药
[中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2012)07-1159-04
因大面积烧伤、创伤等因素引起的皮肤组织的缺损通常需要再生皮肤组织进行修复,目前可选用的方法有异体组织移植、组织工程、自体皮肤扩张转移等,虽然异体组织移植、组织工程具有潜在的治疗前景,但是目前仅有自体组织扩张术可再生出具有完全生理功能的皮肤组织。由于扩张产生的皮肤颜色、质地、结构和毛发均与受区相近似,是理想修复材料,并且扩张产生的皮瓣多数能保存感觉神经,供区继发畸形小,具有其它治疗方法不可比拟的优点,因此对于某些疾患如面颈部瘢痕的治疗,皮肤扩张术已成为首选的治疗方法。然而该技术存在治疗周期长,再生皮肤有限,患者经济负担较重等缺陷。目前人们也尝试了各种办法加速皮肤组织的生长,但是并没有取得理想的效果。本研究旨在寻找一种新的、简单易行的方法,加速皮肤组织再生,从而缩短治疗周期,减轻患者负担。
酸性成纤维细胞生长因子(acidic Fibroblast GrowthFactor,aFGF)是一种广谱促分裂原,对来源于中胚层及神经外胚层的细胞具有促增殖作用,能够促进皮肤组织生长、新生血管形成。但是,目前尚没有aFGF的外用制剂可以使aFGF穿透皮肤角质层进入到皮肤组织内。
微针阵列(microneddle array,简称微针)是近年来兴起的一种新型的给药方式,它利用微针组成的阵列可以在皮肤上人为造成数百上千条微米级的通道。这种通道是可见的,要比分子的尺寸大得多,并且通过角质层延伸至表皮内部,因此它可以很容易地让大分子物质通过;但是它并不会在皮肤上形成明显的伤痕,通道一般也不触及神经及血管,在使用过程中不会引起疼痛感。目前微针在经皮给药领域中的应用受到了广泛关注。
微针促渗技术尽管在很大程度上减小了角质层的传导阻力,但是大分子多肽、蛋白类物质的经皮传导仍是依靠浓差推动的被动扩散来实现的,由于药物滞留、浓差极化、药物在油水相分配系数的影响,渗透量仍然较低。要进一步提高药物的经皮渗透量,必须强化药物的被动扩散,这可以通过改善药物在临时的局部传输区域、皮肤组织和组织液问的分配系数,增加新的推动力来实现。乙醇脂质体是一种生物相容性很好的表面活性剂,可改善大分子多肽、蛋白类药物在皮肤中的分配系数,使药物的经皮渗透性获得显著提高。
为了促进酸性成纤维细胞生长因子在外用给药时可以穿过角质层有效地进入真皮层内,我们将近年来在经皮给药中具有优良促渗作用的先进技术一乙醇脂质体载体技术与微针技术相结合,使两种方法共同作用,扬长避短,促进酸性成纤维细胞生长因子有效、大量地透过角质层。同时本实验也为大分子蛋白、多肽类物质外用给药提供了一种新的方法。
1材料和方法
1.1材料:新西兰大白兔8只,清洁级,雌雄不限,5~6月龄,体重3.50~4.50kg,由中国医学科学院整形外科医院动物实验中心提供,采用复层活动式兔笼笼养,饲养条件遵照国家相关规定和基本要求。饲养亦是由中国医学科学院整形外科医院动物实验中心提供:购入后常规混合饲料喂养2周,无异常情况及病症即投入使用。微针治疗系统(长度1000μum,阵列密度均为30针/cm2,广东高要市奇福微针有限公司)。重组人酸性成纤维细胞生长因子(recombinant humanacidic Fihroblast Growth Factor,rhaFGF)(艾夫吉夫,上海万盛生物技术有限公司免费提供)。
L 2离体实验
1.2.1微孔分布的观察:新西兰白兔2只,处死后取新鲜全厚兔皮,剃毛,用大头钉固定于平木板上,保持自然张力,用微针处理后亚甲蓝染色,10min后自来水冲洗、擦干,观察微孔的分布,拍照记录。
1.2.2微孔深度的测量和组织学观察:将微针处理的离体兔皮,浸入OCT液中,存储于-80℃低温冰箱过夜,次日用低温冷冻切片机切片(厚5μm),HE染色,光学显微镜下观察微针针道,并随机选取50个针道测量其深度,求(x±s),显微成像系统拍照记录。
1.3在体实验
篇6
也会勾丝的。
三醋酸纤维素的原材料选用高品质的木浆纤维素。这种木材一般选用针叶木,也就是软木纤维素。从结构来讲,软木、硬木和精制棉的化学结构是一样的。但这些高等植物的细胞壁一般含有纤维素比例不同,棉花纤维素含量为88—96%,木材、甘蔗渣为50%左右。
(来源:文章屋网 )
篇7
1、用香蕉水滴在衣服的胶渍上,用刷子对着胶渍刷,一段时间之后,胶会变软从衣物上脱落,这时再用清水漂洗,然后晾干即可。
2、可以使用丙酮进行清洗,胶粘在醋酸纤维上,纤维会被溶解,便会造成破洞,在用丙酮要非常注意。
3、使用绝缘油效果很好,胶能很快变软,然后直接洗掉。
(来源:文章屋网 )
篇8
【关键词】 高丽参;水溶性粗多糖;分离纯化;抗氧化活性
本文对高丽参粗多糖进行分离纯化,并对它的组成成分等性质以及体外抗氧化活性进行了研究。
1 实验材料
高丽参[1]:购于辽宁丹东。氯化硝基氮蓝四唑(NBT),吩嗪硫酸甲酯(PMS),脱氧核糖,硫代巴比妥酸(TBA)及还原型辅酶I (NADH·2Na),标准品为Sigma公司试剂;DEAEsepharose CL6B为Pharmacia公司产品;其他试剂均为上海化学试剂有限公司分析纯。MC992自动核酸蛋白分离层析仪,上海沪西分析仪器厂;高效液相色谱,安捷伦HP1100;气相色谱仪,安捷伦6890N。
2 实验方法
2.1 高丽参粗多糖的提取
准确称取高丽参250 g,加入一定体积80%乙醇,在50℃水浴中回流提取6 h,间隙搅拌。提取完毕,过滤,残渣烘干用于热水提取。将上述残渣50 g加入3 000 mL的蒸馏水,封口,在80℃恒温水浴下提取2 h,过滤,将滤液合并,60℃ 减压旋转蒸发浓缩至小体积,离心,弃去沉淀物,上清液加入4倍体积无水乙醇进行醇沉,放置4℃冰箱中过夜。次日离心10 min(3 000 r/min),取沉淀,常规干燥(沉淀分别用无水乙醇和无水乙醚洗涤1次,置于真空干燥器内干燥)得粗多糖GP。
2.2 粗多糖的分离与纯化[23]
3%粗多糖溶液,按照酶Sevage法联合脱蛋白,至无游离蛋白为止。500 mg脱蛋白后的GP溶于10 mL蒸馏水,采用DEAESepharose CL6B柱层析制备,先后用蒸馏水和0~1M NaCl进行洗脱。
2.3 多糖样品纯度鉴定方法
多糖样品的纯度鉴定采用高效液相色谱法和醋酸纤维素薄膜电泳法。高效液相色谱柱为SUGAR KS804,水作流动相,流速1 mL/min,柱温50℃,示差检测器检测。
2.4 多糖性质分析[4]
红外光谱分析确定样品是否含有多糖的特征吸收峰;采用气相色谱法分析单糖组成。分子量测定采用高效液相色谱法,色谱柱为SUGAR KS804。测出各标准样品(T10、T40、T70、T500、蓝色葡聚糖、葡萄糖)及待测样品的保留时间。
2.5 体外抗氧化活性的测定[45]
超氧阴离子清除能力实验用样品浓度为0(对照)、0.78、1.56、3.125、6.25、10、20、40、50、80 mg/mL。羟自由基清除作用实验用样品浓度为0(对照)、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.3、12.5、25、50 mg/mL。对邻苯三酚自氧化的抑制测定实验用样品浓度为0(对照)、5、10、40、80 mg/mL。
3 结果与分析
3.1 粗多糖的提取与分离纯化
高丽参经水提取,粗多糖GP得率为28.05%。GP经DEAESepharose CL6B蒸馏水洗脱曲线如图1所示。
由图1可以看出,GP的蒸馏水洗脱液在490 nm下检测到2个糖峰。借助糖峰来收集洗脱液。收集54~80管洗脱液,浓缩,醇沉,沉淀常规干燥,命名为GPⅡ。GP的NaCl梯度洗脱液经苯酚-硫酸检测含有一个糖洗脱峰,暂且不做分析。
3.2 GPⅡ的纯度鉴定
配制0.1%的样品液,0.4 μm纤维素膜过滤,进样量20 μL。GPⅡ的高效液相色谱结果(图2)检测出一条峰,证明GPⅡ是纯度较好的样品。GPⅡ在醋酸纤维素薄膜电泳上均跑出来一条区带,再次验证GPⅡ为成分单一的多糖。
3.3 GPⅡ的性质分析
GPⅡ的保留时间是6.291,查标准曲线(Y=-3.913 X+6.318 3;R2=0.990 6),得GPⅡ的分子量是30万左右。红外光谱分析表明, 它在3 600~3 200 cm有-OH吸收峰,在2 923 cm左右有一强的吸收峰,为-CH、-CH2的共振吸收峰,在1 635 cm左右有多糖的水合振动峰。GPⅡ经酸水解,衍生化后的气相色谱结果如图3所示,对照标准单糖的气相色谱图,中间峰代表内标甘露醇,得出GPⅡ由葡萄糖组成。
3.4 GPⅡ的体外抗氧化活性
从图4可以看出,GPⅡ体外有显著的超氧阴离子清除作用,整个反应体系含0.3 mg样品时,即显示抑制超氧阴离子的能力,随着提取物质量浓度的升高,抑制作用也逐渐加强,呈现量效关系。相对维生素C而言,在反应体系含样品量小于5 mg时,GPⅡ显示更高的超氧阴离子清除活性,大于5 mg时,GPⅡ和维生素C对超氧阴离子的清除作用相当。
从图5可以看出,GPⅡ体外有显著的抑制羟自由基的作用,整个反应体系含0.32 mg时,GPⅡ即显示抑制羟自由基的能力。相对维生素C而言,GPⅡ有稍强的羟自由基清除作用。
GPⅡ对邻苯三酚自氧化速率的抑制作用,结果见图6。从图6可知GPⅡ能够清除邻苯三酚自氧化反应所产生的活性氧,其抑制率随反应体系含GPⅡ量的增加而加大,GPⅡ对邻苯三酚自氧化的抑制作用相当于维生素C。
4 结论
为除去高丽参中皂甙、单糖、双糖、低聚糖等物质,我们用80%乙醇回流对高丽参进行预处理,得到的残渣烘干后用水煮提取,得高丽参粗多糖。粗多糖经脱蛋白,DEAE Sepharose CL6B 柱层析分离纯化后在蒸馏水洗脱部分得GPⅡ。通过高效液相色谱和醋酸纤维素薄膜电泳鉴定,GPⅡ是纯度较好的样品。分子量研究表明GPⅡ的分子量是30万左右,气相色谱研究表明,GPⅡ由葡萄糖构成。对高丽参多糖GPⅡ的体外抗氧化活性进行研究表明,GPⅡ显示高于维生素C的羟自由基清除作用和超氧阴离子清除作用,以及相当于维生素C的邻苯三酚自氧化抑制作用。
参考文献
[1]李春平,欧春燕,邱专财.高丽参与伪品的鉴别要点[J].海峡药学,2003,15(5):7982.
[2]陈凤清,陈智博,温得中,等.长白山松杉树芝子实体水溶性粗多糖的纯化及结构初探[J].吉林中医药,2005,25(12):5354.
[3]邢文善, 纪耀华,张彦形,等.半枝莲粗多糖的提取及总糖的含量测定[J].吉林中医药,2005,25(7):56.
篇9
镜框的材质有:
纯钛镜架,密度小,重量轻,相当于合金架的一半,不易掉色,生锈,属于眼镜行业最高端的镜架材料,另外还有钛合金牢固性好,这是镜框或主体部分的材料;合金镜架,如铝镁合金,镍铬合金等,耐腐蚀,质感好,坚固耐用,也是目前较流行和常用的材质;记忆镜架,分为塑胶记忆与金属记忆两种材质,TR90属于此类,一种具有记忆性的高分子材料眼镜架,是目前国际最流行的超轻高档眼镜架,适度拉动、扭转也可自动恢复,鼻梁低者易滑落不适合配戴;板材镜架,成分一般是醋酸纤维,少数高档镜架成分为丙酸纤维,时尚耐用,更易搭配服装,但长期摘戴容易变形。
(来源:文章屋网 )
篇10
关键词:医学检验;临床检验仪器;教学;实验;设计
笔者在临床教学中选用的教材为曾照芳主编的《临床检验仪器学》第二版,为了将理论联系实际,在紧密结合理论课教学内容的基础上,笔者在设计实验课教学时重点考虑了以下几点:
(1) 课时分配。“临床检验仪器学”总课时为54课时,具体课时分配为:理论课36学时,实验课18学时,其课时比为2:1,充分体现了实验环节在整个“临床检验仪器学”教学中的重要性,也为学生理论指导实际,锻炼自己的动手能力和实验技能提供了充裕的时间。
(2)实验课内容的设计。重点突出了以下两点:第一就是要注重学生基本技能、基本操作的培养和锻炼;第二是要熟知重点大型检验仪器、业内先进检验仪器,使学生紧跟时代潮流,贴近临床实际。在实验教学中,教师分别安排学生进行全自动尿液分析仪、全自动血液分析仪、流式细胞仪、全自动生化分析仪的实验和见习,使学生亲临临床一线,参观或自己动手操作,熟悉了解最新、最实用、最先进的临床检验仪器,为以后参加临床检验工作打下良好基础。
(3)实验成绩的考核。在每次实验结束后,要求学生书写实验报告,教师根据学生实验课表现和实验结果评分,在本课程理论考试中,试卷上也有题目涉及实验教学内容。在“临床检验仪器学”课程的考试成绩中,实验成绩占到20%,从而要使学生重视实验环节,认真参与实验,也使得教师能较为全面地掌握学生的实验课受教情况。
根据以上的设计思路,在实际的实验教学中,笔者设计并实施了以下具体实验内容:
(1)普通光学显微镜/摄影显微镜的使用。光学显微镜是医院检验科最为常用的基础仪器,利用显微镜对标本进行镜检也是检验专业学生必须掌握的内容之一。所以,在第一次实验课上,安排学生熟悉并使用光学显微镜。教师从讲解光学显微镜的具体结构和使用入手,利用临床血液涂片的样本,供学生观察并熟悉显微镜的调节和使用,另外还准备了一些病理学涂片样本,供学生自由选择,使用显微镜进行观察了解,增加学习兴趣。
(2) 可见/紫外分光光度计的使用和调试。第一是对分光光度计光源波长进行校准,利用镨钕滤光片两个吸收峰对应的波长标准值,来校准光源发出的光线波长;第二是给学生准备好几种溶液,比如硝酸钠、重铬酸钾等溶液,让学生利用分光光度计实测这几种溶液的吸光度,计算吸光系数,测算浓度值帮助学生加深对朗伯比尔定律的理解,掌握其具体应用。
(3) 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳。电泳仪的使用及电泳技术是临床检验专业学生必须掌握的技能,本次实验安排学生利用最基本的电泳仪,进行血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳。在实验中要求学生掌握电泳仪的基本使用,掌握血清蛋白醋酸纤维电泳的基本操作技能,并利用分光光度计对电泳试验后的区带条进行初步分析。
(4)自动生化分析仪见习实验。自动生化分析仪是医院检验科重要的仪器之一,为了能够让学生能够紧贴实际、紧贴先进检验仪器,本次生化分析仪实验安排在医院检验科进行,安排学生参观检验科生化室罗氏生化分析仪、强生干式生化分析仪,由医院专门的仪器操作人员对学生进行讲解,使学生能够了解机器性能、熟悉机器操作,并对医院检验科的具体工作形成初步印象。
(5) 血液、尿液自动分析仪见习实验。徐州医学院附属医院(以下简称“我院”)检验科目前配备有多种型号的血液、尿液自动分析仪。为了能让学生在学习中能密切接轨临床工作,接触先进的仪器,本次实验课也安排在我院检验科进行。由专门的仪器操作人员现场演示、现场讲解,并指导学生进行常规的仪器操作。通过本次实验,学生了解了最新、最常用的临床检验仪器,对检验科的常规检验项目有了进一步的了解,并掌握了血液、尿液自动生化分析仪的基本操作。
总之,教师在实验指导教学中,要充分发挥学生的主观能动性,将理论课的教学联系到具体的实践之中,让学生能够接触到检验仪器,不断激发和培养学生的学习兴趣,这样才能更好地完成“临床检验仪器学”的课程教学。
参考文献:
精品范文
1醋酸纤维