凝胶色谱法范文
时间：2023-03-22 06:47:58
导语：如何才能写好一篇凝胶色谱法，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
关键词 大豆油；特丁基对苯二酚；凝胶渗透色谱；气相色谱仪
中图分类号 TS221 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）08-0273-02
Abetract Using gel penetration chromatography （GPC） and gas chromatography （GC） technique to establish analysis method of soybean oil antioxid-ant tertiary butyl hydroquinone （TBHQ）. Sample by GPC automatic gel purification quantitative concentration spectrometer purification， HP-5 （30 m× 0.32 mm，0.25 μm） for the separation and deter mination of chromatographic column.The detection limit was 4 mg/kg.TBHQ had a good linearity in the detection range，the concentration in the range of 1～1 000 mg/L and the peak area was linear correlation，the correlation coefficient was 0.999 6.Recovery rate of oil sample was between 88.3% and 95.4%.The relative standard deviation （RSD） was less than 4%.
Key words soybean oil；TBHQ；gel permeation chromatography；gas chromatography
氧化是导致食品品质变劣的重要因素之一，特别是在食用油或者含油量较高的食品中更是如此。大豆油是日常生活中主要的一种食用油，为了防止大豆油氧化酸败，延长货架期，市售大豆油往往需要在其中添加适宜的抗氧化剂[1-3]。特丁基对苯二酚作为油溶性抗氧化剂的新型产品，它的抗氧化能力大于2，6-二叔丁基对甲苯（BHT），被广泛用于延迟或阻止食品油脂的氧化变质中。
食用油脂中TBHQ常用的分析方法有比色法、气相色谱法、液相色谱法，但这些前处理方法比较繁琐，同时样品油脂得不到充分的净化[2-4]。该文采用凝胶渗透色谱/气相色谱法测定大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚，具有步骤简单、结果准确、灵敏度高等优点。
1 材料与方法
1.1 试验仪器与试剂
1.1.1 供试仪器。7683 Series自动进样器；GPC全自动凝胶净化-定量浓缩联用仪：Free StyleTM ；氢火焰离子化检测器（FID）；旋转蒸发仪：HEIDOLPH；漩涡混合器： IKA GENIUS 3；电子天平：梅特勒-托利多ML204；6890N气相色谱仪：Aglient。
1.1.2 供试试剂。TBHQ标准品（纯度99%）：农业部环境保护科研检测所；环己烷、乙酸乙酯均为色谱纯；市售一级大豆油。
1.2 气相色谱分析条件
HP-5非极性毛细管柱（30 m×0.32 mm i.d）， 膜厚0.25 μm （Aglient，USA） ；进样口温度：250 ℃；FID检测器温度：250 ℃；程序升温：初始温度80 ℃，保留1 min，以10 ℃/min速度升至220 ℃，保持稳定1 min；载气流速1.2 mL/min，高纯氮气。
1.3 GPC条件
GPC柱填料为BioBeads S- X3 200～400目，规格（200 mm×22 mm i.d.），流动相乙酸乙酯/环己烷（1∶1，v/v）， 进样量 5 mL， 流速为5.0 mL/min， 样品收集时间9～16 min。
1.4 样品处理
准确量取大豆油样0.5 g（精确值0.1 mg）， 用乙酸乙酯/环己烷（1∶1，v/v）准确定容至10.0 mL，过Ф25 0.45 μm有机膜，漩涡混合2 min，按1.3条件对样品进行处理，将收集液在30 ℃下真空旋转蒸发至近干，再用乙酸乙酯/环己烷（1∶1，v/v）准确定容至2 mL。进样量1.0 μL。按照1.2条件进行气相色谱分析。
2 结果与分析
2.1 GPC净化条件优化
取TBHQ标准样品10 mL，按照1.3条件进行处理，收集9～16 min的流出液，然后在30 ℃下真空旋转蒸发，准确定容至2 mL，按照1.2条件使用气相色谱进行检测，标准品、空白样品加标气相色谱图见图1。
2.2 GPC收集时间的确定
以收集时间为横坐标，以色谱图峰面积为纵坐标绘制TBHQ随时间流出曲线图，具体见图2。可以看出，TBHQ集中在9～16 min流出，因此初步确定流出时间为9～16 min。
2.3 未知样品中TBHQ的含量测定
利用本方法对市售的8种样品进行检测，由分析结果可知，TBHQ均未检出。
2.4 方法的线性关系与检出限
按照3倍信噪比进行计算，方法的检出限约为4 mg/kg。对系列标准工作溶液按照上述色谱条件进样分析，以峰面积定量，从而得到标准溶液浓度与峰面积之间的线性回归方程：Y=2 472X+1.330，保留时间为12.035 min，相关系数R2=0.9 996。
2.5 方法的回收率
在空白大豆油样品中分别添加0.1、0.4、1.0 mg/mL的TBHQ标准溶液， 3次重复，按上述色谱条件进行检测，测定TBHQ的加标回收率分别为88.3%、92.6%、95.4%，相对标准偏差均小于4%，精密度良好，满足分析要求。
3 结论
应用凝胶渗透色谱（GPC）和气相色谱（GC）技术，建立了大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚（TBHQ）的分析方法。样品经GPC全自动凝胶净化定量浓缩联用仪净化，HP-5（30 m×0.32 mm，0.25 μm）色谱柱进行分离测定。 本方法的检出限为4 mg/kg。TBHQ在检测范围内具有良好的线性，在浓度1～1 000 mg/L范围内与峰面积呈线性相关，相关系数R2=0.999 6。加标油样的回收率在88.3%～95.4%之间，相对标准偏差（RSD）小于4%。该方法具有步骤简单、结果准确、灵敏度高等优点，适用于大豆油中抗氧化剂特丁基对苯二酚（TBHQ）的检测[7-8]。
4 参考文献
[1] 许华，穆同娜，李伟.凝胶渗透色谱/气相色谱法测定食用油脂中抗氧化剂特丁基对苯二酚[J].食品科技，2007，35（6）：217.
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[3] 游飞明，翁其香.气相色谱法快速测定油脂及加工食品中的BHA、BHT、TBHQ[J]. 福建分析测试，2005，14（4）：2290-2292.
[4] 张淑玲，张志胜，邢晓慧.气相色谱法测定食品中的抗氧化剂BHA，BHT，THBQ[J].现代生物医学进展，2008，8（12）：2483-2484.
[5] 程航，郭肖媚，梁莹，等.气相色谱法测定饲料中的特丁基对苯二酚[J].饲料研究，2011（8）：48-49.
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篇2
关键词：在线凝胶渗透色谱-气相色谱/质谱 食品 农药残留
中图分类号：TS207 文献标识码：A 文章编号：1007-3973（2013）007-131-02
农药，以造福人类，提高农产品的产量走进了我们的世界，但是随着农药的广泛使用，大量食用含有农药残留的食品会导致机体正常生理功能失调，引起病理改变和毒性危害，它对人类健康，生态环境构成了严重的威胁。食品安全问题已经受到各国政府的密切关注，目前，农药残留分析技术已经不能满足当前社会的需求，GPC-GC/MS在线联用技术具备样品处理简单，分析时间快、溶剂使用量少，定性准确等优势，近几年，逐渐受到食品检测工作者的青睐。在线GPC-GC/MS已经用于粮食、蔬菜、水果、坚果等中的多农药残留分析。
1 在线GPC-GC/MS简介
GPC-GC/MS主要包括两部分：凝胶渗透色谱和气相色谱/质谱。GPC主要目的是去除样品基质中可能干扰目标化物检测的大分子油脂、色素等组分。系统流路图如图1，GPC根据尺寸排阻原理先将分子量较大的脂肪和色素等先从色谱柱中洗脱，通过六通阀位置的切换将这些基质干扰物排出系统，之后将所需检测物质导入试样捕集环中，最后导入GC/MS进行分离检测。
图1 系统流路图
2 在线GPC-GC/MS在农药残留分析中的应用概况
2.1 蔬菜、水果中的农药残留测定
苯氧羧酸类农药凭借其高效、内吸、高选择性的特征广泛用于农业生产中，目前在土壤、水体等环境样品及粮谷类农作物中已经测出苯氧羧酸类农药。张帆等建立了水果中的11种苯氧羧酸类农药在线GPC-GC/MS分析方法。该方法在0.02～0.10mg/kg加标范围内，回收率为66%～112%，相对标准偏差为3.4%～11.5%，定量下限为7～10 g/kg。在柑橘样品中11种苯氧羧酸类农药均有检出；香蕉中检测出2，4-D，含量为0.058mg/kg，其他农药成分未检出。欧阳运富等将蔬菜、水果样品经二氯甲烷-丙酮（1：1，v/v）加速溶剂提取，活性炭柱-氨基柱串联净化结合在线GPC-GC/MS分析了22种农药残留，在0.02， 0.05， 0.4mg/kg 3个添加水平下的回收率为70.5%～107.5%，相对标准偏差为2.1%～8.7%。在线GPC-GC/MS把GPC净化和GC-MS分析检测合二为一，自动化除去为除尽的干扰物质，保证了方法的可靠性和有效性，大大的提高了分析的准确度和有效性。薛丽等利用固相萃取-在线GPC-GC/MS测定了梅菜干中18种有机磷和拟除虫菊酯农药残留，该方法的农药回收率均在80%～120%之间，精密度均小于15%。
2.2 坚果中农药残留测定
吴岩，康庆贺等线GPC-GC/MS测定板栗、松子仁中多农药残留分析。板栗经乙腈-水（4：1，v/v）为提取剂，ENVI-18固相萃取柱净化，除去样品中的大量脂肪和甾醇等干扰基质，在经过在线GPC进一步净化，最后经过GC/MS分析。44种有机磷农药中大部分农药的回收率为65%～120%，相对标准偏差小于15%，检出限为0.002～0.05mg/kg。松子仁也用同样的方法进行了处理，与板栗不同的是提取液经Aluminum-N固相萃取柱净化。28种有机氯农药和拟除虫菊酯农药的回收率为70%～120%，相对标准偏差小于15%，检测限为0.002～0.05mg/kg。固相萃取结合在线GPC-GC/MS有效的解决了低水分高脂质样品前处理复杂、基质干扰严重的难题。
2.3 茶叶中农药残留测定
茶叶作为我国对外出口的传统商品，近年来，欧盟等国对进口茶叶的农药残留限量标准日趋严格。因此，茶叶的农药残留检测成为我们面临的共同问题。李军明等利用乙腈萃取、ENVI-carb固相萃取柱净化结合在线GPC-GC/MS测定了普洱茶、绿茶、红茶、乌龙茶中的153种农药残留量。该方法检出限能够满足欧盟等国的限量要求，为茶叶中的多农药残留提供了检测方法。
2.4 粮食作物中农药残留测定
粮食作物作为人们生活的基本食品，粮食安全与人的生活息息相关，各个国家对粮食中的农药残留都设有严格的限量标准。粮食中含有高的脂肪和淀粉，使得粮食中农药残留的测定样品前处理方法较为复杂。近年利用在线GPC-GC/MS测定粮食中的农药残留减少了样品前处理的繁复过程，缩短了分析时间，挺高了工作效率，减少了溶剂的使用。
3 总结
在线GPC-GC/MS在能够有效的去除复杂基质中的干扰物质，降低背景、改善峰形、减小基质效应。简化了样品前处理、提高了检测的重现性、缩短了分析时间、提高了工作效率、减小了有害溶剂的使用，将成为食品检测中的一颗璀璨明星。
参考文献：
[1] 张帆，付善良，施雅梅，等.在线凝胶渗透色谱/气相色谱-质谱联用法测定水果中11种苯氧羧酸类农药[J].分析测试学报，2013，32（1）：79-83.
[2] 欧阳运富，唐宏兵，吴英，等.加速溶剂萃取-在线凝胶渗透色谱-气相色谱-质谱联用法快速测定蔬菜和水果中多农药残留[J].色谱，2012，30（7）：654-659.
[3] 薛丽，钟艳梅.固相萃取-在线凝胶渗透色谱-气相色谱质谱联用测定蔬菜干制品中的 18 种有机磷和拟除虫菊酯残留[J].现代食品科技，2012，28（8）：1088-1090.
[4] 吴岩，康庆贺，高凯扬，等.固相萃取-在线凝胶渗透色谱-气相色谱/质谱法测定板栗中44种有机磷农药残留[J].分析化学，2009，37（5）：753-757.
[5] 康庆贺，吴岩，高凯扬，等.固相萃取-在线凝胶渗透色谱-气相色谱/质谱法测定松子仁中的28种有机氯农药和拟除虫菊酯农药[J].色谱，2009，27（2）：181-185.
篇3
【关键词】 高效液相色谱法 风湿骨康胶囊 士的宁 马钱子碱
风湿骨康胶囊是由麻黄、马钱子、防风、牛膝等16味中药组成的复方制剂，是由风湿骨康片［1］通过改变剂型而得的胶囊剂，具有追风散寒、除湿止痛的功效。马钱子中的主要成分为士的宁和马钱子碱，其毒性大，具有使中枢神经系统兴奋等多种作用，安全范围窄，过量使用常会导致惊厥、抽搐、昏迷等严重的神经系统不良反应［2，3］。已报道的测定方法有薄层色谱法、紫外光谱法、高效液相色谱法等［4，5］。为了更有效地控制含量，提高产品质量，本实验采用高效液相色谱法测定两者含量。
1 试剂和药品
天美高效液相色谱仪；千谱工作站。士的宁对照品（批号0705-200005）购自中国药品生物制品检定所、马钱子碱对照品购于上海顺勃生物制品有限公司；风湿骨康胶囊为市售，贵州的确神药业有限公司生产；缺马钱子阴性样品（自制），乙腈为色谱纯，三乙胺、磷酸为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品、马钱子碱对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每毫升含士的宁0.216 mg马钱子碱0.183 mg的对照储备液。各取1 ml置10 ml量瓶中，制成含量分别为21.6，18.3 μg的混合对照溶液，即得。
2.2 供试品溶液的制备取样品胶囊20粒，倾出内容物，研细，混匀，精密称取0.25 g于150 ml具塞锥形瓶中，加1 ml浓氨水润湿样品后，准确加入50 ml氯仿，称重，超声提取30 min，静置，冷却，称重，加氯仿补足失去的重量，摇匀，过滤，取其滤液25 ml，挥干，用甲醇溶解残渣，定量转移至5 ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.3 阴性对照溶液的制备按处方比例及制备工艺，配制不含马钱子的阴性对照品，并照“2.2”项下方法制得阴性对照溶液。
2.4 色谱条件和系统适用性实验色谱柱：Hypersil BOD C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.3%三乙胺(磷酸调pH至2.8)（12∶88）；流速1.0 ml/mim；检测波长254 nm；柱温35℃；进样量10 μl。记录色谱图。如图1～3。
图1 阴性样品色谱图（略）
图2 对照品色谱图（略）
图3 样品色谱图（略）
2.5 线性关系考察 分别精密量取士的宁和马钱子碱的混合对照品溶液0.25，0.5，1，2，4，8 ml于10 ml容量瓶中，用甲醇至刻度，摇匀，作为系列对照品混合溶液。在上述色谱条件下分别进样20 μl，记录色谱图。以对照品进样量（μg）为横坐标，对色谱峰面积（A）为纵坐标绘制标准曲线。结果表明，士的宁在0.010 8～0.345 6 μg范围内线性关系良好，回归方程（n=6）为：Y=262 606X-21.573（r=0.999 6）；马钱子碱在0.009 2～0.292 8 μg范围内线性关系良好，回归方程（n=6）为：Y=4 832.9X-6.475 6（r=0.999 9）。
2.6 精密度实验 精密吸取对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录各峰面积，计算相对标准偏差，结果RSD分别为1.1%，0.6% 。
2.7 重复性实验取同一批号（071002）6份，按“2.2”项下制成供试品溶液，依法测定，记录峰面积，RSD分别为1.9%，1.8%。
2.8 加样回收率实验 准确称取样品（071002）5份，按照“2.2”项下方法制备。各进样10μl，计算回收率。得到士的宁、马钱子碱回收率分别为：100.4%，97.78%；RSD为1.1%，0.15%。结果见表1～2。
表1 士的宁回收率测定结果（略）
表2 马钱子碱回收率测定结果（略）
2.9 稳定性实验 取供试品溶液，分别在0，1，2，4，6，8 h依法测定。结果表明，士的宁、马钱子碱在8 h内稳定性良好，RSD分别为1.7%，2.3%。
2.10 样品测定 取本品，按“2.2”项下操作，按拟定方法测定，分别计算士的宁和马钱子碱含量。结果见表3。
表3 样品测定结果（略）
3 讨论
1 g士的宁能溶于6 400 ml水、150 ml乙醇、5 ml氯仿、260 ml甲醇，极微溶于乙醚和石油醚［6］，故选择氯仿和甲醇作为提取溶剂进行考察。结果显示以氯仿提取效果更好。
经过筛选，以乙腈-0.3%三乙胺（12∶88）为流动相，pH调至3.0时，两个对照峰分离效果不好，且保留时间短，将pH调至2.8后，两者能完全分离，保留时间合适。
【参考文献】
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［2］ 孙 杰，谷学新 ，赵新颖，等.HPLC测定风湿安泰片中马钱子碱和士的宁的含量［J］.药物分析杂志，2007，27（5）：757.
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［4］ 武建民，王杏云，颜战胜，等.薄层扫描法测定风湿骨康片中士的宁的含量［J］.现代中医药，2004，3：66.
篇4
【关键词】凝胶渗透色谱；农药残留分析；全球经济一体化；监测系统
1 引言
随着经济的不断发展和人民生活水平的不断提高，健康问题已得到社会各界的广泛关注，食品安全问题也提上记事议程，环境的破坏和食品农药残留问题不断涌现，逐渐成为阻碍我国出口贸易发展的屏障。农药是一种农业生产不可或缺的生产资料，在适量的条件下，对生存与农业、林业和畜牧业之间的害虫和细菌有积极的预防作用，也能在一定程度上促进动植物的生长，预防各种虫害，为农业的创收增产和预防传染病方面有不可磨灭的突出作用。在有限的科技手段中，农药仍是预防疾病、增产创收、缓解粮食压力的最快捷、最便利、最廉价、最有效的方法之一。可是，农药也不是面面俱到，农药的使用本身存在着巨大的隐患，由于我国是农业大国，农药的大量长期使用不仅污染土地和大气，还造成生态环境的严重失衡，更严重的是，农药可残留于食物中，使牲畜和人类中毒，产生严重的后果。然而，农药残留的原因复杂繁多：使用了价格低廉，不易分解的农药；使用农药过量；畜牧业药浴；在动物即将宰杀前仍使用农药；饲养牲畜的饲料为受过农药污染的产品等。近日，农药残留分析方法及检测技术得到了突飞猛进的发展，但食品分类复杂以及农药品种的化学性质千差万别，为农药残留分析检测带来了更大的挑战。其中，农药残留分析的样品前处理技术包含先进的固相萃取技术、基质固相分散萃取技术、凝胶渗透色谱技术以及加速溶剂萃取技术等等。这些技术的功能特点不尽相同，有的是专门分析水源和土壤的，有的是分析果蔬的，有的是分析生物样品的，而本文讨论的凝胶渗透色谱技术在大分子样品分离净化脂肪、色素等方面有显著效果。
2 凝胶渗透色谱技术
前处理和测定是农药残留分析处理的主要手段，而分析的关键是样品的前处理问题。凝胶渗透色谱技术大部分使用的是XAD系列的凝胶，其洗脱剂是配比不同的乙酸乙酯和环乙烷，将大小分子不同的多孔凝胶分离，把油脂、叶绿素、聚合物和生物碱等大分子物质首先淋洗处理，分子质小的后淋洗处理。然后将洗脱液收集起来再次进行分析。凝胶渗透色谱分离的关键因素是柱填料，它分为有机凝胶和无机凝胶，这要求其必须具备强韧的机械强度和化学惰性，还要有流动性小，分离广等特点。一般的分离方法有机溶剂消耗量极大，误差也大，从而操作繁琐，而凝胶渗透色谱技术分离样品运用物理方法分离蛋白质脂肪，并且过程简单，误差小。
2.1 凝胶渗透色谱技术的应用原理
检验农药残留的方法颇多，目前主要有两种____生化法和色谱法。生化法操作简单，测速快效率高。色谱法是使用色谱分离技术，选取合适的仪器测定农药残留的方法，也是农药残留检测的常见方法。凝胶渗透色谱技术是根据溶质分子的大小进行分离的技术，它可用于分析化学性质相同但分子体积有差异的同系物质。先用洗脱机把注射进色谱柱中的预处理浓缩样品洗脱分离完成，使样品的形状和分子大小各异，在通过固定凝胶直径使大分子样品首先被洗脱出来，小分子随之被洗脱出来。凝胶渗透色谱是一项十分有发展前景的分子量测量方式的课题，从一开始的生物学向生化、高分子化学、无机化学等广泛扩展领域，可见其应用范围之广泛，渗透领域之普遍，是农药残留分析的关键性的净化方法。
2.2 凝胶渗透色谱技术在农药残留分析中的应用
农药残留分析同时需要灵敏度极高的检测技术和操作精良的方式方法，其难点就是在除掉杂质的时候保持较高的回收率。提取液的选择要根据农药的极性来判断，即极性弱的提取液配备极性小的有机氯农药。，而极性强的农药配备丙酮提取液。对于特殊的复杂基质，如油脂较高的物质常常不能使用较为普遍的液态萃取或者柱层净化萃取法，使用凝胶渗透色谱技术则可以在柱填料和被分离式样无相互作用的情况下按自身大小进行自动分离。值得欣慰的是，此技术完全可以在常温下进行，没有可逆吸附，能使每一个凝胶渗透色谱技术的分离样品完全洗脱。并且凝胶渗透色谱净化法能够排除大分子的干涉，对各种形态大小复杂的基质都适用。
随着科技的进步，农药品种不断增多，溶剂体系也不断加强完善，Bio-Beads SX-3作为凝胶渗透体系的柱填材料也有迅猛发展。我们对凝胶渗透色谱技术在粮食中的应用为例做简要的分析。粮食中包含脂肪，蛋白质，淀粉等多种材料，这位提取农药残留时排除干扰物进入溶剂增加了困难，因此必须用合适的净化手段对基质的干扰进行解除。将研究人员分为ABCD四个小组，A组用凝胶渗透色谱技术对糙米进行净化，对糙米中的有机氯农药和多氯联苯农药进行分析时采用气相色谱技术，测出的平均回收率约为80%-92%。B组还引用了新的气质联用技术，分析检验了玉米中的三唑醇和三唑酮，结果为农药回收率大约为96%-115%。而C组使用凝胶渗透色谱技术净化糙米，对其中可能存在的60多种有机磷农药进行残留分析，其中35种农药回收率在65%-110%之间。D组用词技术净化和气相色谱技术建立大豆中8种二硝基苯胺类除草剂的残留分析方法，去除量很高。又如，运用凝胶渗透色谱技术同样能对水果蔬菜的农药残留净化起到积极作用。实验表明，运用凝胶渗透色谱技术对果蔬进行抽样净化，其中有机磷农药进行分析的结果为回收率67%～105%。
2.3 凝胶渗透色谱技术的缺陷
运用凝胶渗透色谱技术净化的方法是利用分离大分子干扰杂质，最终可将农药从基质中脱离出来，其最终效果的如何与分子大小、形状和阻碍情况有关。但其中也包含一些不可避免的问题。首先，分子分离可能不彻底，这是由于小分子可以被洗脱到农药里，可大分子极可能跟随油脂先流出去，这时便需要使用柱色谱来净化。其次，GPC所耗费的溶剂量很大，这样当柱色谱内直径比较大时，处理较多样品时速度就会减慢，消耗的能量也多。为了避免这一弊端，科学家研制出了自动化的凝胶渗透色谱净化仪，让净化柱更加趋向柱内直径小，载荷量大和体积小的进样发展，使其分离度得到改善，应用范围得以拓宽。第三，其限制的条件较多。基质的选择和情况对化合物的准确定性和定量有较强的影响力，当从事食品样品的残留分析时，必须考虑多种因素才能得到精确的结果，这要求我们既要对基质反复评估又要通过有效途径进行消除和补偿。
3 总结
凝胶渗透色谱技术目前已日臻成熟，其提取和净化方法的研究和实验已十分常见，此方法除了农药外，还被广泛运用到药材、甘蓝、蜂蜜等成分的分析中，其在农药残留方面的贡献还要远大的发展前景。
参考文献：
[1]赵子刚，王建，贾斌.凝胶渗透色谱-气相色谱法检测小麦中的24种农药残留[J].河南工业大学学报（自然科学版），2010（3）.
篇5
[关键词] 喷昔洛韦；眼用凝胶；制备；质量控制
[中图分类号]R944 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）07（c）-034-02
Preparation and quality control of Penciclovir Ophthalmic Gel
ZHU Ji-feng1, LI Jin-wei2,MENG Xian-li2
(1.The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China;2. Henan Provincial People′s Hospital, Zhengzhou 450003,China)
[Abstract] Objective: To prepare and establish quality control for Penciclovir Ophthalmic Gel.Methods:Penciclovir Ophthalmic Gel was prepared with PVA-124.The content of penciclovir was determined by HPLC at the wavelength of 252 nm.Results: There was a good linear correlation within the range of 5.00~100.00 μg/ml（r=0.999 7）of penciclovir concentration; the average recovery was 98.71%（RSD=0.75%）.Conclusion: This method is convenient,accurate and reproducible ,which can be used for the quality control of Penciclovir Ophthalmic Gel.
[Key words] Penciclovir；Ophthalmic gel；Preparation；Quality control
喷昔洛韦(penciclovir，PCV)是英国SKB公司开发的开环核苷类抗病毒药物，是无环核苷活性衍生物,是伐昔洛韦的活性代谢物。有抗单纯疱疹病毒HSV-Ⅰ, HSV-Ⅱ, VZV(带状疱疹)和EB病毒的作用，它的作用机制与阿昔洛韦相似。与阿昔洛韦相比，其抗病毒效果显著，是一种抗病毒谱较广的药物[1]。主要用于治疗单纯疱疹病毒引起的感染，也可用于治疗带状疱疹病毒感染。喷昔洛韦同类药物的眼用凝胶剂治疗病毒引起的疱疹性角膜炎、眼睑单纯疱疹、病毒性角膜炎及流行性结膜炎等，均有较好疗效[2]。故我们研制了喷昔洛韦眼用凝胶并制定了质量标准。
1 仪器与试剂
高效液相色谱仪（美国Dionex P680）；UV-754 紫外分光光度仪（上海第三分析仪器厂）；喷昔洛韦原料药(丽珠集团常州康丽制药有限公司，批号：050608)；喷昔洛韦对照品(由原料药精制所得，含量>99.5%)；PVA-124上海化学试剂站分装厂分装；其他试剂均符合分析纯或药用标准。其他试剂均为分析纯，水为注射用水。
2 处方与制备
2.1 处方
喷昔洛韦2 g，PAV-124 100 g，甘油50 g，聚山梨酯-80 20 g，5%尼泊金乙酯醇溶液10 ml，注射用水加至1 000 g。
2.2 制法
先取PVA-124、甘油、聚山梨酯-80加适量注射用水，水浴加热，搅拌使溶解；另取伐昔洛韦用适量注射用水溶解，搅拌加入尼泊金乙酯醇溶液（必要时加热），将两溶液混合，加注射用水至全量。搅拌混匀后，于100℃灭菌30 min，分装即得。
3 质量控制
3.1 性状
本品为类白色胶体，pH值5~7，符合滴眼液项下其他规定。
3.2 鉴别
3.2.1 取喷昔洛韦眼用凝胶适量(约相当于喷昔洛韦10 mg)，加水20 ml，置水浴中加热使溶解过滤，滤液中滴加氨制硝酸银试液数滴，即产生白色沉淀。
3.2.2 参照高效液相色谱法[3]操作，样品主峰保留时间与喷昔洛韦对照品峰保留时间(均为8.282 min)一致。
3.3 含量测定
3.3.1 色谱条件Diamonsil C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)缓冲液(用三乙胺调 pH值至7. 0)(10∶90)；检测波长：252 nm；进样量：20 μl；理论塔板数按喷昔洛韦峰计算应不低于2 000。
3.3.2 标准曲线的制备精密称取干燥至恒重的喷昔洛韦对照品50 mg，置于100 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0，5.0，10.0，15.0，20.0 ml分别置100 ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，进样20 μl，照高效液相色谱法测定峰面积，记录色谱图，将峰面积（Y）对相应的喷昔洛韦浓度（X）进行回归处理，得方程：Y=-7 627.76X+60 800.52，r=0.999 7。结果表明，喷昔洛韦在5.00~100.00 μg/ml浓度范围内线性关系良好。
3.3.3 稳定性试验取“3.3.2”项下溶液1份（50 μg/ml），分别在0，1，2，4，6，8 h进样20 μl，照高效液相色谱法测定峰面积，结果样品在8 h内稳定，峰面积的RSD=0.91%。
3.3.4 精密度试验 取“3.3.2”项下溶液（50 μg/ml），进样量20 μl，连续进样5次，测得RSD=0.51%。
3.3.5 回收率试验模拟处方配制高、中、低3种浓度，每种浓度取样3次。精密称取不同浓度的喷昔洛韦和适量辅料，置100 ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀、过滤。精密量取续滤液10 ml，置100 ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。进样20 μl，照高效液相色谱法测定峰面积，计算回收率。结果详见表1。
3.3.6 样品含量测定精密称取喷昔洛韦眼用凝胶适量（约相当于喷昔洛韦50 mg）置100 ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀、过滤。精密量取续滤液10 ml，置100 ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，进样20 μl，照高效液相色谱法测定。三批制剂的测定结果详见表2。
3.4 稳定性实验
将喷昔洛韦眼用凝胶剂于55℃恒温水浴放置6 h，于-15℃ 冰箱放置24 h，以2 500 转/min的转速离心30 min，室温放置2个月，在以上条件下凝胶均未发生分层。
3.5 刺激性实验
取健康成年家兔5只(由郑州大学实验动物中心提供)，体重(2.5±0.5) kg， 每只均于右眼涂敷喷昔洛韦眼用凝胶，左眼滴入生理盐水1滴作对照，tid，每次用药后观察，家兔无躁动，眼部无充血、红肿、流泪、羞明、分泌物增多等现象。连续用药两周后将家兔处死，取眼部组织作病理切片检查，未发现任何病理变化。
4 讨论
缓释制剂可以比较持久地释放药物，减少给药次数，避免或减少血药浓度的峰谷现象而提供平稳有效的血药浓度，提高药物的安全性和有效性。目前眼用凝胶的研究已越来越多，制剂中加入适当的基质，可增加药液的黏度，延长药物作用时间和具有较好的流变学性质。喷昔洛韦是以抗疱疹病毒特异性抑制药物而开发研制的，对HV、ADV也有抗病毒作用，主要通过直接灭活病毒或阻止病毒吸附与进入细胞两环节而发挥作用，可以替代伐昔洛韦成为一种有希望的新型抗疱疹病毒药物[1]。
[参考文献]
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[3]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:化学工业出版社，2005.附录32.
篇6
摘要介绍了农药残留分析中常用的6种样品前处理新技术,并对气相色谱及气质联用技术在农药残留检测中的应用作了综述。
关键词气相色谱;气质联用;农药残留分析
abstractin the paper,six new technologies of analytic sample preparation commonly used in the analysis of pesticide residues were introduced. and the applications of gc and gc-ms in pesticide residue anlysis were summaried.
key wordsgc;gc-ms;pesticide residue analysis
目前,农药残留分析方法很多,其中以色谱技术为主。常见色谱方法有气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱法、液相色谱-质谱联用法,新兴色谱技术如免疫亲合色谱法、凝胶渗透色谱法等。气相色谱-质谱联用(gc-ms)既具有气相色谱高分离效能,又具有质谱准确鉴定化合物结构的特点[1],可同时、准确、快速测定微量的多种农药残留。
1农药残留的现状及危害
20世纪50年代以来,化学合成农药在全世界的广泛应用,无疑在防治病虫害、铲除杂草、增加农业产量方面发挥了举足轻重的作用,对人类社会进步和生产力发展起到了巨大的促进和推动作用。但是农药是一类有毒化学物质,而且是人们主动投放到环境中的[2],长期大量使用,对环境生物安全和人体健康产生了较大的不利影响。近年来因农药污染造成人和牲畜中毒的事件屡见报道,特别是蔬菜、水果类食品的中毒。目前,农药已成为世界上主要的污染源之一,田间喷洒的农药只有10%～30%粘附在作物上,其他大部分通过各种方式散播出去,污染大气、土壤和水等[3]。
2农药残留分析技术
农药残留分析是对复杂混合物中痕量农药的母体化合物、有毒代谢物、降解产物和农药杂质进行的分析,是一种需要精细的微量操作手段和高灵敏度的痕量检测技术[2]。随着人们对食品、环境安全的日益关注以及新的、更高要求的农药残留限量标准的出台,农药残留分析技术发展迅速。现代农药残留分析技术通常包括样品前处理和测定两部分。
2.1样品前处理技术
目前,已报道或已取得广泛应用的新技术主要有:固相萃取(spe)、固相微萃取(spme)、超临界流体提取(sfe)、加速溶剂萃取(ase)、微波辅助萃取(mae)等[4]。
2.1.1固相萃取(spe)。固相萃取是液固萃取和液相色谱柱技术相结合的发展,其基本原理是利用固体吸附剂对液体样品中目标化合物或杂质的吸附,选用合适强度的洗脱溶剂,使目标化合物选择性地洗脱或保留在柱上,与样品基体和干扰物分离,从而达到分离和富集的目的。固相萃取节省时间,可减少杂质引入,对操作者安全,重现性好,同时对农药残留物能够快速富集。
2.1.2固相微萃取(spme)。固相微萃取是一种新型的无溶剂化样品前处理技术,由pawliszyn在1989年首次报道。固相微萃取以特定的固体(一般为纤维状萃取材料)作为固相提取器将其浸入样品溶液或顶空提取,然后直接进行gc、hplc等分析[5]。该技术集采样、萃取、浓缩、进样于一体,灵敏度高、成本低、所需样品量少,重现性及线性好,操作简单、方便快捷。它通过吸附/脱吸附技术,富集样品中的挥发性和半挥发性成分,克服了一些传统样品处理技术的缺点,已经广泛应用于水、食品、环境以及生物样品分析。spme技术在食品分析中的应用很广泛,如酒、果汁、蔬菜、肉、蛋等。还用于食品中其他一些有害残留组分的分析上,如牛奶中的磺胺类和四环素类抗生素残留;熏制火腿中的致癌物n-亚硝胺;谷物中丙烯酞胺残留以及人乳中多氯联苯及其他含氯有机化合物的分析等[6]。
2.1.3超临界流体提取(sfe)。超临界流体(scf)是临界温度(tc)和临界压力(pc)状态下的高密度流体。超临界流体既具有液体对溶质有较大溶解度,又具有气体易于扩散和运动的特点。由于超临界流体的粘度、密度、扩散系数、溶剂化能力等性质随温度和压力变化很大[7],因此对选择性的分离非常敏感。早在1879年,hannay等就发现超临界乙醇流体对无机盐固体具有显著的溶解能力,但超临界萃取技术(sfe)却是在近30年才迅速发展起来的一种新型物质分离、精致技术[8]。付玉杰等[9]用scf-co2技术萃取甘草中甘草次酸,并与索氏提取法、超声法进行了比较,提取率是索氏提取法的13倍、超声法的5倍,且溶剂用量小,周期短。目前,sfe已应用于植物样品、动物组织、土壤、水等样品中多种杀虫剂、杀菌剂和除草剂的萃取。
2.1.4凝胶渗透色谱(gpc)。凝胶渗透色谱是一种快速净化技术,它是基于体积排阻的分离机理,通过具有分子筛性质的固定相,用来分离相对分子质量较小的物质,并且可以分析不同分子体积、具有相同化学性质的高分子同系物。gpc现已广泛应用于农药残留分析中脂类提取物与农药的分离,是含脂类食物样品农药残留分析的主要净化手段[10]。陆继伟等[11]经冰浴超声提取,gpc净化,测定了灵芝中24种有机磷农药的残留量,回收率在75.28%~117.18%,rsd在3.19%~15.57%,效果较好。
2.1.5加速溶剂萃取(ase)。加速溶剂萃取是在提高温度(50～200℃)和压力(1 000~3 000pa)下用溶剂萃取固体或半固体样品的新型样品前处理方法。相比于其他萃取方法,ase法具有快速、溶剂用量少、萃取效率高、安全等优点[12],已被美国epa收录为处理固体样品的标准方法之一。ase现已在环境、药物、食品等领域得到广泛应用,特别是在残留检测方面,被用于土壤、动植物组织、蔬菜和水果等样品中的pcb、多环芳烃、有机磷杀虫剂、苯氧基除草剂等有害物质的萃取。
2.1.6微波辅助萃取(mae)。微波辅助萃取是微波和传统的溶剂萃取法相结合后形成的一种新萃取方法。它是利用微波能来提高萃取速率的一种最新发展起来的技术。微波萃取具有设备简单、萃取效率高、重现性好、快速、节省试剂、污染小等优点,有较大的推广价值。onuska等[13]用多种溶剂从泥渣中微波提取有机氯农药残留,实验仅用3.5min就获取了索氏萃取法6h的结果。lopez-avila等[14]以乙烷-丙酮(体积比为1∶1)为溶剂,在115℃下从土壤中提取有机物,萃取15min,45种有机氯农药中的38种回收率在80%~120%,并证明用微波萃取法所得的有机氯农药的回收率比索氏萃取或超声波萃取法至少提高7%。
2.2gc及gc-ms在样品测定中的应用
2.2.1气相色谱法(gc)。20世纪50年代农药残留分析局限于化学法、比色法和生物测定法,检测方法缺乏专一性,灵敏度也不高。60年代初气相色谱开始应用于农药残留分析,许多高灵敏度检测器的使用,推动了农药残留分析技术的发展,大大提高了农药残留量的检测精度。由于气相色谱法具有分离效率高、分析速度快、选择性好、样品用量少、检测灵敏度较高等优点,因此广泛应用于分离气体和易挥发或可转化为易挥发的液体及固体样品。目前该方法已成为农药残留分析中最常用、最主要的方法。
气相色谱仪的检测器具有各种不同灵敏度和选择性的种类,通过灵活应用这些检测器,可以用于各种试样的分析。电子俘获检测器(ecd)可以实现多种有机氯、菊酯类农药的分离和测定;火焰光度检测器(fpd)对有机磷农药有很好的响应值;氮磷检测器(npd)对氮、磷等化合物的响应大大提高,成为测定有机磷、氨基甲酸酯类农药的有效检测器[15]。
王建华等[16]采用乙腈均质提取,psa固相萃取柱净化,再用gc-ecd及fid检测含硫蔬菜中的有机磷、有机氯和拟除虫菊酯多类农药残留组分,样品的回收率在70%~110%,rsd为3.5%~14.2%。李慧冬等[17]将甘蓝预制样品经高速匀浆法提取、弗罗里硅土层析柱净化后用gc-ecd检测啶虫脒的残留量,外标法定量,回收率为80.2%~99.8%,最低检出浓度为0.001mg/kg,测定结果的rsd不大于3.4%。宋家玉等[18]建立了食品和中药中有机氯农药残留量的毛细管气相色谱检测方法。样品经有机溶剂超声提取,硫酸净化,采用ov-1701毛细管柱,不分流进样,程序升温分离,ecd检测,外标法定量,平均回收率为84.3%~100.6%,rsd为1.28%~3.56%。任红波[19]建立了气相色谱检测氟胺氰菊酯的方法。蜂蜜样品用水溶解后,经正己烷-二氯甲烷提取,提取液经c18固相萃取小柱净化,采用gcd-ecd测定,回收率在80%以上,检出限为0.001 3mg/kg。吕芬等[20]用石油醚提取蔬菜、水果中痕量拟除虫菊酯,浓缩后经florisil固相萃取柱净化,用气相色谱-ecd测定,结果小白菜中的平均回收率为86.2%~93.4%,rsd为3.4%~8.6%;苹果中的回收率为87.3%~92.8%,rsd为2.8%~8.1%。
2.2.2气相色谱-质谱联用法(gc-ms)。将高效分离与高性能鉴定仪器组成联用技术,是20世纪末期仪器分析领域的重大技术进展。其中,现代gc-ms联用技术是目前技术最成熟、普及应用最广泛的一种联用模式。
质谱法具有灵敏度高、定性能力强等优点,但要求进样要纯,且定量分析较复杂。气相色谱法则分离效率高,定量分析简便,但定性能力较差。因此,这2种方法联用,可以相互取长补短,既发挥色谱法的高分离能力,又发挥了质谱法的高鉴别能力,适用于做多组分混合物中未知物的定性鉴定,可以判定化合物的分子结构、准确测定未知组分的相对分子质量、鉴定部分分离甚至未分离的色谱峰等。
朱静等[21]利用spe对环境水中噻唑硫磷农药残留进行净化,用gc-ms对其进行测定,对环境水中噻唑硫磷的最低检测质量浓度为56.4ng/l,加样回收率大于85.5%,rsd小于4.42%,适用于环境水中痕量农药的监测。eiji ueno等[22]首先用乙腈提取蔬菜中89种农药,盐析后乙酸乙酯再溶解,共溶物自动过凝胶色谱和活性碳串联双柱,之后再用气质联用分析,回收率在70%~120%,rsd小于5%,方法已应用到188种果蔬的日常检测中。李云飞等[23]用gc-ms以选择离子(sim)检测方式对果蔬类农产品中含有机氯、有机磷、氨基甲酸酯及除虫菊酯类4类12种农药的残留量进行定性和定量分析,结果表明,方法回收率在80%~120%,变异系数在6%~20%。胡贝贞等[24]采用c18固相萃取小柱对啤酒中的有机磷农药进行提取、净化,用乙酸乙酯洗脱后供gc-ms分析。当添加浓度为50μg/kg和100μg/kg时,平均回收率为80.3% ~95.0%,rsd为1.97%~8.28%(n=6),方法的检出限为1.20~15.3μg/kg。该方法可用于啤酒中痕量有机磷农药残留的测定。赵凤英等[25]以丙酮-石油醚(v/v=3∶1)为提取剂,采用超声波提取土壤中农药残留,经弗罗里硅土层析柱净化,gc-ms以选择离子监测法同时测定土壤中多种有机磷和氨基甲酸酯类农药,取得了较好的效果。在0.1、0.5μg/ml 2个质量浓度添加水平的回收率分别为70.1%~119.0%和78.1%~119.0%,rsd分别为6.30%~9.80%和5.20%~8.23%。
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篇7
关键词：电力绝缘油色谱；分析方式；注意事项
中图分类号：TM205 文献标识码：A
构建电网内含多样的操控步骤，各环节都设定了高水准的操控要求。解析绝缘油表现出来的色谱状态，慎重把控了油液本体的特性。在这种基础上，操作者应能精确予以调配油液，发挥了最佳范围内的绝缘实效。绝缘油拥有冷却及绝缘的多样性能，解析这些性能，依循设定好的标准流程予以完善。调配各阶段内消耗的绝缘油都应依照规程，不应忽视细微的分析事项。
一、绝缘油的价值
电力体系含有内在多类设备，可综合调度某一区段的电能，维持了长久的输电供电。在送电线路内不可缺失绝缘油，耗电设备也留存了这种油液。电力系统配有日常可选用的绝缘油，这种油液被留存至指定好的用电设备。从总体来看，绝缘油可确保常规的电力构件性能，防控缓慢的装置磨损。由此可见，电力绝缘油拥有自身的必要价值。
首先，作为绝缘材料，电力绝缘油首先可用作绝缘，防控电荷的伤害。从绝缘特性看，运转状态下的各类设备都会附带电荷。添加了绝缘油，是为防控某一时点的电流及电压击打因而损毁外在表层。这是由于，电力设备有着本身较高的运转负荷，绝缘油含有优良的绝缘特性以此来妥善防控外在的流通电流。这样做，防控了过载态势的设备被损毁，有序保护系统。高峰耗电期内，若突发了某一故障则会减低总体架构内的绝缘特性，减弱根本的内在性能。涂抹绝缘油液以后，额外负荷即可被减低，由此也避免故障。
其次，绝缘油可用作冷却。电力体系预设了高低温彼此的互换，针对这种流程增添绝缘油品，冷却了原本的电力体系。经过油液的冷却，慎重防控了超标情形的设备运转，限定了最合适的温度。油添加了某比值的抗氧剂，依照设定好的比例着手调配了油液。这种混合油品可用作设备介质，导出了构件冗余的内在热能以此来制冷。遇有较高温度，扩散形态下的油液也可增设绝缘；与之相比，低温油液还可防控凝结，发挥绝缘的更高价值。
第三，绝缘油也可减低本体的损耗，带有稳定的作用。在给定电场内，油液维持了较长的稳定，减低损耗的总体油液。绝缘油有着抵抗氧化这类的优良特质，可以保持稳定。随着技术进步，调配绝缘油可选的若干技术都日渐更新，配置新式绝缘油且提升了更高的稳定性。经过了改进后，绝缘材质延长了原本的可运转年限，改善绝缘属性。
二、色谱分析选用的方式
采纳色谱法调配了不同样态及特质的油液，针对混合状态的固定相物质设定了流动相的洗脱。经过洗脱步骤，不同速率流动着的各类物质将会流向固定相，这样即可分离双重的固液相。20世纪初创设了色谱法，历经快速的进步，现今色谱法可归入独立的色谱学。科技调研可选取常见的这种探析方法，色谱法可选取的配套仪器也趋向于完整。测定绝缘特性时，色谱法拥有必要的价值，可迅捷测定油液浓度、内含的多成分。色谱解析得出的数值也可用作后续参照。
色谱分析依循的机理为：洗脱液相及固相两类的物质，这种基础上可以分离不同特质的油液。这种洗脱利用了不等的液体流动速率。历经多年的进展，现今色谱仪整合了敏锐及自动的特性，更加稳定且可用作多样的测定流程。从分类视角看，色谱仪含有液相、气相及凝胶性的仪器。针对化学产品，色谱仪可测定某一高分子材质，解析内在的多成分。此外，测定某一成分内含的分布状态、内在分子量等可选取凝胶色谱。电力配备的绝缘油可采纳色谱分析，这种途径已被采纳并推广。
例如：气相色谱辨析了可溶解的内在气体，识别了油液内含的若干成分。针对充油设备，测定内在显现的某一故障点。监测充油状态下的配套设备，是现今检测进展的总体趋向。充油设备可承载某规格的绝缘油，借助色谱辨析了装置潜在隐患，从而妥善予以消除。由此可知，色谱解析可测定潜在的细微故障，反映了装置设定的某类构件故障。
三、解析注意事项
电力系统设定了绝缘，绝缘油被广泛用作电力类装置的绝缘。可选色谱分析，这类分析流程依循了根本的色谱原理。在科学指引下，解析了绝缘油常态的性能。色谱分析可协助电力人员以便于确保衔接着的电力设备是完备且安全的，调控稳定态势下的电力运转。从现存进展看，色谱分析日渐完善了可用的仪器、装置性能等，但仍存有潜在的弊病有待于整改。慎重把控细节，确保绝缘特质的油液可被有序调用。分析绝缘油呈现的色谱时，尤为注重如下的事项：
（一）初期筛选样本
色谱分析针对选定的绝缘油，为此先要妥善选样。选取了样本后，再去进入测定环节。解析绝缘油可得的数据要吻合给出来的数据指标，可筛选适量的油液当成调研对象。调配绝缘油、进行后续分离，也都要顾及不同特质的物质形态。若筛选的绝缘油本身拥有独特的某类属性，那么真正去解析以前还应增设处理环节。为了便利操控，抽检筛选的样本应能搭设自动调控依托的平台，最好设定自动平台。
（二）选取探测的必要装置
色谱分析借助了色谱仪，顺利展开后续解析。色谱分析必备配套的仪器，这些仪器辨析了绝缘油呈现出来的理化特性，反映油液本身的各类特质。这样做，在根本上反映了绝缘油属性，测定信息应是客观且完备的。筛选色谱仪时，要慎重辨别型号规格、装置的精度、可操控的属性等。针对选取时的细节尤为注重，不可忽视细节。从现存市面看，常见气相的、液相及凝胶3类的色谱仪。真正去选用时还应衡量真实的检测现状，适当予以选取。
篇8
Abstract: In the process of using high-performance liquid chromatography, unavoidably will encounter all sorts of problems, from the valve, chromatographic column and flow equal to introduce the correct use of chromatography, common failure causes and eliminating methods.
关键词:高效液相色谱仪;故障排除;正确使用
Key words: high performance liquid chromatography;troubleshooting;used correctly
中图分类号:TS207 文献标识码:A文章编号:1006-4311(2010)20-0097-01
0引言
高效液相色谱仪是分析实验室常用的测试仪器之一,其应用越来越广泛。此种仪器在使用过程中,难免会出现各种各样的问题,并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。
1使用试管的问题
①试管的洁净问题。高效液相色谱分析法是一个很灵敏的分析方法,如果因使用不洁净的试管,便会影响试验结果的准确性。②塑料试管的溶解问题。可用相同的实验条件先行试验一下,看看不含被抽提物时,提取液在检测器上能否产生干扰信号,如确有干扰信号存在,就只能换用耐有机溶剂的玻璃试管了。③被测样品在试管壁上的吸附问题。操作中宜采用聚丙烯管,为防止提取中吸附现象发生,可采用0.5%的已二胺已烷液做为提取剂,可有效地防止吸附。
2操作进样阀的问题
在高效液相色谱法的试验过程中,有时会有异常色谱峰的出现以及重现性不好的问题,这主要是由于操作方法不当所引起,要想解决此类问题,需从以下几个方面入手。①进样量的控制。用进样阀来进样时,阀内的样品环是定量的,由于进样时,注射到进样阀内的样品溶液在样品环的管路中有径向的速度梯度。因此,要想使样品环中充满样品溶液,从而使用进样阀来准确地定量,则必须使进样量大于样品环体积的两倍。②进样阀的清洁问题。如果样品环中有上次进样时样品的残留,必然会污染下次注射进的样品,为防止这种现象的发生,应按下列步骤操作:1)进样阀有两个位置,INJECT和LOAD。首先在LOAD位置时,以注射器将流动相注入进样阀内清洗几次,每次用量大约40ul;2)然后将进样阀板手扳至INJECT位置时,再以流动相清洗几次,每次用量还是40ul;3)再将样品注射到进样阀里.按照上述的步骤操作,可以避免由进样阀引起的污染,从而使干扰峰消除并提高分析结果的准确性。③进样阀溢流管的堵塞。堵塞的原因多半是由于溶解样品的流动相用的是盐溶液,而其中的盐在溢流管的排空端口处结晶所致。此时,可用小烧杯盛少量蒸馏水对溢流管口稍加浸泡,端口处盐的结晶就能被溶解掉,故障排除。如能在每次进样完成之后,用蒸馏水反复冲洗至溢流管中的盐分全部冲出,则可避免此故障的发生。
3流动相的问题
甲醇和乙腈在高效液相色谱分析法中常常被用来配制流动相。高效液相色谱法中常用的试剂最好是高等级的专用试剂,如色谱纯试剂。高效液相色谱分析法中常用的是紫外检测器,因此,从降低基线噪音和提高分析灵敏度上来考虑,应该使用紫外吸收小且杂质含量少的色谱纯试剂。①流动相的过滤。配制好的流动相在使用前一定要先用0.5um孔径的微孔滤膜来过滤。这是因为溶液中含有很多肉眼难以发现的微小颗粒,如果不把它们滤除掉,就会堵塞泵口、柱头上的过滤器,这样就堵塞了流动相的正常通道,使色谱柱的阻力增加,柱压升高,柱效下降。碰到这种情况时,要换用经过滤的流动相,并将堵塞的滤器拆下来浸泡在20%的硝酸水溶液中以超声波清洗机清洗20分钟,以除去滤片上的堵塞物。②流动相的脱气。流动相在使用前必须脱气,以尽可能的除去溶解在流动相中的气体,否则,这些气体会使柱填料的性能降低,还能够对检测器的信号产生很大的干扰。水和甲醇混合后会产生大量的气泡,如果不脱气就使用,气泡就会进入色谱柱和检测器,并将影响分析工作的正常进行。
4色谱柱的使用和保养
色谱柱是高效液相色谱仪最主要的部件,被测物质能否被很好的分离和测定,色谱柱的性能起着决定性的作用。在日常工作中,应特别注意色谱柱的正确使用和维修保养,以延长色谱柱的使用寿命。
4.1 使用预柱和保护柱预柱安装于泵和进样器之间,它给色谱柱中的流动相提供了完全的平衡,并防止了对柱填料有破坏作用的组分或污染物进入色谱柱。保护柱可以阻挡能够牢固地吸附于色谱柱上的组分进入色谱柱,保护柱应与色谱柱的填料相同。
4.2 防止气体进入色谱柱有些色谱柱是不允许气泡进入的,否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。因此,为了防止气泡进入色谱柱,一定要使用经过脱气的流动相,并且要严格按照下列步骤来安装色谱柱。①拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝,观察是否有溶剂渗出;②如有溶剂渗出,即可将色谱柱接到管路上,以避免气泡的进入;③如无溶剂渗出时,表明色谱柱的此端已经进去空气了,可将色谱柱的出口端接到进样阀上,以流动相来反方向冲洗色谱柱,以便将柱内的空气排除。④如果流出的溶剂里不含有气泡,说明柱内的气体已经被排出了,再将色谱柱以正确的方向接好,这样气泡就进不到色谱柱里面了。
4.3 色谱柱的清洗为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中,在每次的样品分析工作完成之后,都应及时地清洗色谱柱。首先要用对被测样品洗脱能力强的溶剂来洗脱色谱柱,以分析工作中常用的反相色谱分析法为例,因其先流出的物质是极性大的物质,此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来,洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。凝胶滤过色谱法中所使用的凝胶柱常用缓冲溶液做流动相,用完之后当然要用蒸馏水来冲洗。
4.4 色谱柱的存放如果色谱柱暂时不用,存放时要注意:①几天之内的短期放置,应先用溶剂冲洗好色谱柱,再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。②如果色谱柱长期不用,仅用上述方法来处理就不行了,这时应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱,反相柱一般使用甲醇,正相柱则可用正已烷或庚烷,而凝胶柱则不能用水了,因柱内如果有微生物的生长则会使柱效降低,此时应用0.05%的NaNs水溶液来冲洗色谱柱,再将色谱柱封严。
篇9
护理
【关键词】 僵蚕 抗凝活性部位 化学成分 凝胶色谱法 高效液相色谱法 氮测定法
Abstract：Objective To explore the anticoagulating active components in water extraction, alcohol sedimentation and fraction separated by gelfiltration chromatography of Bombyx Batryticatus. Methods Anticoagulating active fractions were prepared by the methods of water extraction, 70% alcohol sedimentation and gelfiltration chromatography. Components (such as porteins or polypeptide, amino acids, oxalic acid ammonium) in each fraction were determined by chemical reaction indentification, Kjeldahl method, conductance, UV and HPLC. Results Polypeptide, amino acids and oxalic acid ammonium were the main components in anticoagulating active fractions, content of which reached more than 80%. The content of oxalic acid ammonium decreased about 52% processed by alcohol sedimentation, while the content of polypeptide and amino acids only decreased about 8%. The content of peptides and amino acids increased about 28% purified by gelfiltration chromatography compared with the one in water extraction and about 39% compared with the one in alcohol sedimentation. The content of oxalic acid ammonium was the same as the one in alcohol sedimentation, but decreased about 1 time compared with the one in water extraction. The content of 15 kinds of amino acids were 40%～50% in the solids of each fractions, which maked up to 60%～76% of the content of proteins determined by Kjeldahl method. Molecular weight range of peptides is 1.0～4.4 kDa. Conclusion This study provides a experimental basis for further separation and purification of anticoagulating active components from Bombyx Batryticatus.
Key words：Bombyx Batryticatus；anticoagulating active fractions；chemical components；gelfiltration chromatography；HPLC；Kjeldahl method
僵蚕为蚕蛾科昆虫家蚕Bombyx mori L.4～5龄的幼虫感染(或人工接种)白僵菌而致死的干燥体,为传统中药,性味咸、辛、平,归肝、肺、胃经[1]。具熄风止痉、活血通络、化痰散结等功效,可用于治疗急性惊风、癫痫、中风、面瘫及顽固性头痛等。僵蚕含有蛋白质、脂肪酸、氨基酸、草酸铵、白僵菌素以及微量元素等成分[2-4],其水提液在体内外实验中均表现出很强的抗凝、抗血栓、促纤溶及抗内毒素所致红细胞膜损伤等作用[5-7],草酸铵和蛋白质(或多肽)、氨基酸等可能为其主要活性成分[8]。为进一步研究僵蚕的抗凝活性成分,本实验探讨了僵蚕水煎煮液的醇沉液和凝胶色谱分离净化,及其抗凝活性成分中氨基酸和草酸铵等的定性定量分析,现报道如下。
1 实验材料
护理
Waters 515 HPLC系统(Waters 公司)；BS100A自动部分收集系统(上海市沪西仪器厂)；Start-4半自动四通道血凝仪(法国STAGO公司)；4300-Pro紫外分光光度计(瑞士安玛西亚公司)；HR2838型匀浆机(菲力普公司)；LP115 pH计(METTER TOLEDO公司)；DDS-ⅡA电导率仪(上海理达仪器厂)；移液枪(0.1 mL和1.0 mL,日本)；半微量凯氏定氮装置；Z-16和Z-26层析柱(上海化学仪器厂)。制僵蚕(购自湖南振兴中药饮片有限公司)；葡聚糖凝胶(Biotech公司)；凝血酶试剂(上海太阳生物技术公司,批号N25006)；兔血浆(自制)；15种氨基酸对照品(Sigma公司)；水为超纯水；甲醇(色谱纯)、三氟乙酸(THF)、2-巯基乙醇、邻苯二甲醛(OPA)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)等化学试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 样品溶液的制备
称取制僵蚕1 500 g(样品A),用8倍量水浸泡过夜,以3 000 r/min匀浆,然后煎煮2次,每次30 min,过滤,合并滤液,离心,得提取液8 450 mL(样品B),将其浓缩至含原药材2 g/mL,加无水乙醇浓度至60%,4 ℃放置过夜,3 000 r/min离心,取上清液水浴浓缩至含原药材约6 g/mL,即得粗提液240 mL(样品C)。将30 mL该液加到用0.05 mol/L NaCl的0.02 mol/L Tris-HCl (pH 7.4)缓冲液平衡的Sephadex G-25凝胶柱(φ2.6 cm×80 cm)上,用相同缓冲液洗脱,自动分步收集器收集,2.5 mL/ (10 min·管),每2～3管按文献方法[8]测定凝血酶时间(TT,s)、紫外吸收光谱,用重量法测定质量百分浓度(m/v)、电导率仪测定溶液电导率,得洗脱曲线(见图1)。将TT在40～100 s之间的组分合并得洗脱液69 mL(样品D),TT≥100 s的组分合并得洗脱液82.5 mL(样品E),E即为抗凝活性部位。
图1表明, 紫外吸收光谱法(UV)检测的最强色谱峰的前半部分为具有抗凝活性的部位,与UV法测得的G-25凝胶色谱峰值不重合,而按质量百分浓度(M/V)和电导率法测得的色谱峰值与抗凝活性峰值基本重合。
2.2 抗凝活性部位的化学成分理化鉴别
2.2.1 茚三酮反应、pH值、电导率、AgNO3/HNO3反应和CaCl2/HNO3反应 分别取B～E样品溶液进行理化测定,结果表明,僵蚕提取分离后的B～E样品所检测的理化性质结果一致,提示所含主要成分基本相同。茚三酮反应阳性,活性部分电导很大,与AgNO3产生白色沉淀,滴加HNO3后沉淀部分溶解,与CaCl2产生沉淀,滴加HNO3沉淀溶解。提示抗凝活性成分可能是盐类(如氯化物、草酸盐等)、蛋白质、肽类或其它含氨基酸的化合物。
2.2.2 紫外吸收光谱
取各样品稀释适当后在200～400 nm扫描,其紫外吸收光谱见图2。
图2表明,样品B～E的UV光谱形状均不相同,表明提取分离所得样品化学成分有所不同。提取分离后除去了大量的无活性物质,特别是经过凝胶色谱纯化后,UV光谱变化较大。
2.2.3 样品E的凝胶色谱分析及其分子量分析
取样品E中TT≥600 s的馏分2 mL上Sephadex G-15(φ1.6 cm×50 cm)柱,用水洗脱盐,4.0 mL/(10 min·管),自动分步收集器收集,测定各管的TT值、260 nm和280 nm处的吸光度及化学反应特性,结果见表1。表1 TT≥600 s馏分的凝胶柱脱盐中馏分的抗凝活性和理化特性检
测结果（略）注：*必要时,通过稀释馏分,测定吸光度在0.2～0.8之间,计算而得
2.3 定量分析护理
2.3.1 固形物含量测定
精密吸取样品B～E各2.0 mL,80 ℃下烘至近干,100 ℃下烘至恒重,精密称定,按每1 mL样品溶液扣除5.0 mg的Tris和NaCl重量,得固形物重量和浓度(各样品均为n＝3,RSD不超过0.8%),结果见表2。表2 僵蚕各部位中的固形物和蛋白质测定结果（略）注：*与样品A比
2.3.2 指标检测
蛋白质：按《中华人民共和国药典》中半微量氮测定法操作,计算总氮含量。将该氮含量扣除铵态氮含量,再与6.25相乘,即为蛋白质质量和百分浓度(W/V)。各样品均为n＝3,RSD不超过1.4%。铵根[9]：按《中华人民共和国药典》中半微量氮测定法操作(40% NaOH试液用120 g/L氧化镁悬浊液代替),计算铵根质量和百分浓度(W/V)。各样品均为n＝3,RSD不超过1.2%。草酸根[3]：精密取B～E样品液约5 mL,氯化钙沉淀-高锰酸钾滴定法测定(各样品均为n＝3,RSD不超过1.0%)。结果见表3、表4。表3 僵蚕各部位中铵根和草酸根的测定结果（略）注：*与样品B比表4 僵蚕各部位固形物中蛋白质和草酸铵含量比较（略）
2.3.3 HPLC法测定氨基酸含量
2.3.3.1 色谱条件
色谱柱：Agilent ODS(4.6 mm×200 mm, 5 μm)；流动相A为50 mmol/L NaAc(pH 6.8)-甲醇-THF(82∶17∶1),流动相B为50 mmol/L NaAc(pH 6.8)-甲醇-THF(22∶77∶1),梯度洗脱；柱温：27 ℃；流速：1.0 mL/min；荧光检测器：λex 338 nm,λem 425 nm。
2.3.3.2 样品测定 样品溶液B～E经5.7 mol/L盐酸液,在110 ℃水解24 h,OPA试剂衍生化,然后取20 μL注入液相色谱仪。测定结果见表5。表5 僵蚕各部位中氨基酸的测定结果(略)
3 讨论
本研究表明,僵蚕的水煎煮提取、醇沉和凝胶色谱分离所得抗凝活性部位中,多肽、氨基酸类和草酸铵都是其中的主要成分。已有报道,草酸铵具有抗凝活性[8],本研究表明,凝胶色谱分离部位中不含草酸铵,但含多肽和氨基酸类成分的馏分具有抗凝活性,因此,僵蚕中的多肽类或氨基酸类成分可能是抗凝活性成分之一。本研究对僵蚕抗凝活性部位的化学成分和理化特性进行的初步探索,也为今后对僵蚕抗凝成分的分离纯化提供了实验基础。
【参考文献】
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[2] 卫功庆,鞠贵春,李慧萍,等.白僵蚕化学成分的分析[J].吉林农业大学学报,1995,17(3)：46－49.
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护理
[4] 赵建国,彭延古,彭新君,等.薄层色谱法分离僵蚕中蛋白质和氨基酸类成分的研究[J].湖南中医学院学报,2005,25(2)：26－27.
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篇10
【摘要】 目的 优选大蒜油β-环糊精(β-CD)包合物缓释片处方，制备中药挥发油固体缓释制剂。方法 以大蒜油中有效成分大蒜素的释放度为指标，采用正交设计法优化缓释片的制剂处方工艺。结果 优化所得处方为羟丙基甲纤维素9%，乳糖15%，聚维酮10%，微晶纤维素10%。以此处方制备的大蒜油β-CD包合物缓释片在体外可缓释8 h。结论 优化所得处方合理稳定，缓释片达到了缓释效果。
【关键词】 大蒜油β-环糊精包合物缓释片；正交设计；制备工艺
Abstract：Objective To optimize the formulation of the Garlic oil β-CD sustained-release tablet. Methods The preparation formulation of the sustained-release tablet was optimized by orthogonal design which took the released rate as the index. Result The optimized formulation contained 9% HPMC， 15% lactose， 10% PVP， 10% microcrystalline cellulose. The ingredient of Garlic oil sustained-release tablet by this formulation was released slowly in 8 h. Conclusion The optimized formulation is rational and stable， the tablet could be released slowly.
Key words：Garlic oil β-CD sustained-release tablet；orthogonal design；preparation technology
大蒜油是从大蒜(Allium sativum L.)中提取的挥发油，具有抗菌消炎、提高机体免疫力、防治心血管系统疾病及防癌抗癌等功效。用大蒜做成的中药制剂已有多种剂型，如胶囊、口服液、滴丸、糖衣片、软胶囊、微囊、注射剂、乳剂等，并已在降血脂、降血糖、心脑血管病等诸多方面用于临床。但因直接口服大蒜对胃黏膜有刺激性、静注使用不便、肌注疼痛，使其应用受到一定程度的限制[1]。通过对大蒜油进行β-环糊精(β-CD)包合，再制成凝胶骨架缓释片，可以延长作用时间、减少用药次数、降低不良反应、提高制剂的生物利用度以及降低大蒜油对胃肠道黏膜的刺激性，比纯大蒜油具有更好的应用价值。
1 仪器与材料
DP-120型单冲打片机(丹东市制药设备厂)；D-800型智能药物溶出仪(天津大学精密仪器厂)；H66MC型超声波发生仪(无锡超声电子仪器厂)；Waters 600E-2487型高效液相色谱仪(美国沃特斯公司)。大蒜素对照品(购于青岛江兴生物科技有限公司)；聚维酮(PVP，广州市化学试剂批发部)；乳糖、微晶纤维素(天津市巴斯夫化工有限公司)；羟丙甲纤维素(HPMC)K15M(上海卡乐康包衣技术有限公司)。
2 方法与结果
2.1 大蒜油的提取
称取剥皮大蒜2.5 kg，用搅拌机适当粉碎，加2倍量水于55 ℃发酵2 h，以挥发油提取器提取6 h，得大蒜油约5 mL。
2.2 大蒜油β-环糊精包合物的制备
取β-CD 60 g溶入30 ℃蒸馏水中，制成饱和溶液，将大蒜油用少量乙醇稀释后，在不断搅拌下滴入β-CD饱和水溶液中， 于30 ℃超声40 min使大蒜油被包合，所得包合物混悬液于0～5 ℃，冷藏放置24 h，抽滤，40 ℃干燥，研细，即得白色粉末状的大蒜油β-CD包合物。
2.3 大蒜油凝胶骨架缓释片的制备
2.3.1 正交设计
本制剂选用亲水凝胶骨架材料HPMC K15M为基本骨架，选用乳糖、PVP及微晶纤维素作为填充剂、致孔剂及崩解剂，片重约0.6 g，β-CD包合物占50%(0.3 g)。各因素分别选取3个水平，正交设计因素与水平见表1。表1 大蒜油缓释片制剂工艺因素水平表（略）
2.3.2 方法
将β-CD包合物与HPMC、乳糖、PVP及微晶纤维素等辅料分别过8O目筛。精密称取处方量的β-CD包合物与辅料，充分混匀，用95%的乙醇制软材，过2O目筛制粒，5O ℃以下干燥，18目筛整粒，加1%硬脂酸镁、3%滑石粉，混合压片。
2.3.3 试验安排与结果
本试验采用L9(34)表正交试验法优选最佳条件。考察指标为大蒜油中有效成分大蒜素的释放度，分别测定2、6、8 h的释放度(P)，再综合评分：Yi＝(︱P2 h－30%︱＋︱P6 h－50%︱＋︱P8 h－85%︱)×100，以Yi小者为佳。正交试验安排见表2。
2.3.4 释放度测定方法
取本片剂，照2005版《中华人民共和国药典》(二部)附录ⅩD规定的释放度测定法(第一法)，采用2005版《中华人民共和国药典》(二部)附录ⅩC规定的溶出度测定法(第二法)的装置，以(37±0.5)℃水600 mL为溶出介质，转速为150 r/min，将片剂置于转篮中，在2、6、8 h分别取溶液2 mL(并及时在操作容器中补充空白介质溶液2 mL)，用0.45 μm微孔滤膜滤过，分别精密吸取续滤液200 μL，以高效液相色谱法测定大蒜素的溶出量。另分别取各批试验号片剂10片，研细，取粉末约30 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加水40 mL超声提取30 min，取出，放冷，加水定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，以0.45 μm的微孔滤膜滤过，滤液以高效液相色谱法测定该片剂中大蒜素的含量。按二者之间的比值分别计算每片药物不同时间点的释放度。
色谱柱：DiamonsilTM C18柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水-甲酸(80∶20∶0.1)；流速：1.0 mL/min；检测波长：218 nm；柱温：25 ℃。
精密称取大蒜素对照品10 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1 mL含大蒜素100 μg)。
分别精密吸取大蒜素对照品溶液10 μL与供试品溶液200 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。正交试验释放度测定结果见表2。表2 大蒜油β-CD包合物缓释片制剂工艺正交试验及结果（略）
对上述试验结果进行极差直观分析，结果各因素对制剂缓释效果的影响程度为A>B>D>C，缓释片处方以A2B1C2D1为最佳。
2.4 验证试验
为进一步验证上述辅料配比和制备工艺的可行性和稳定性，以此辅料配比制备了3批样品，进行验证试验，结果见表3。表3 验证试验结果（略）
由表3结果可见，优化处方所得试验结果综合评价优于正交设计中各次试验，结果令人满意，说明优化成功。
3 讨论
本实验大蒜油的提取及其β-CD包合物的制备工艺均经试验考察后而确定的最佳工艺，制得的包合物亦经薄层色谱及紫外分光光度法检验证实大蒜油已被包合。因本试验为制剂工艺研究，在此未加细述。制剂处方正交设计的考察因素是经过单因素考察后，根据各因素及其不同水平对释放度的影响而确定的，制得的片剂在外观及硬度等方面均符合片剂的要求。
大蒜油的含量测定可以采用分光光度法，最大吸收波长在215 nm左右，但在此波长处辅料也有吸收，对含量测定有干扰，因此，本试验采用高效液相色谱法[2]测定大蒜素的含量作为考察指标，因溶出液中大蒜素含量较低，又不宜浓缩，因而进样体积定为200 μL。大蒜油β-CD包合物缓释片为凝胶骨架片。骨架材料为亲水性凝胶骨架HPMC，遇水或消化液膨胀，形成凝胶屏障而具控制有效成分溶出的作用，达到缓释的目的。该缓释片的释药机理是骨架溶蚀和药物扩散的综合效应过程。
【参考文献】