高效液相色谱范文
时间：2023-03-21 17:17:05
导语：如何才能写好一篇高效液相色谱，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
摘要：目的制定柴胡药材中柴胡皂苷a、d的含量测定方法。方法用高效液相色谱蒸发光散射检测法（HPLCELSD）,AlltimaC18色谱柱,流动相甲醇水（80∶20）,速度0.8ml・min1；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度40℃，气压3.5bar。结果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分别在1.908~19.08μg（r=0.9996）和1.804~18.04μg（r=0.9992）范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。结论该方法简便、灵敏、可靠、准确、重现性好,可作为柴胡药材的质量控制方法。
关键词：柴胡；高效液相色谱蒸发光散射检测法；柴胡皂苷
DeterminationofSaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD
Abstract：ObjectiveTodeterminesaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD.MethodsHPLCELSDwasusedinthequantitativeanalysisbyusingAlltimaC18chromatographycolumnandmethanolwater(80∶20)asamobilephase.Theflowrateofmobilephasewas0.8ml・min1.Thetubetemperatureofthedetectorwas40℃.Thepressofpureairwas3.5bar.ResultsThelinearrangesforsaikosaponinaanddwere1.908~19.08μg（r=0.9996）and1.804~18.04μg（r=0.9992）,theaveragerecoverieswere98.35%(RSD=1.26%)and97.64%(RSD=1.58%),respectively.ConclusionThismethodiseasy,sensitive,reliable,accurate,reproducibleandcanbeusedasthequalitycontrolmethodofRadixBupleuri.
Keywords：RadixBupleuri;HPLCELSD;Saikosaponin
柴胡药材来源于伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狭叶柴胡BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根。为常用中药,在我国已有2000多年药用历史,具有和解表里、疏肝、升阳之功效［1］。其主要有效成分为柴胡皂苷,其中柴胡皂苷a，d的活性较强,具有抗炎、保肝、降低血中胆固醇等药理活性［2］。应用高效液相色谱法测定柴胡皂苷a，d含量的报道较多［3，4］。但由于检测波长在210nm,杂质峰干扰十分严重,检测灵敏度低,影响了含量测定的准确性。本文应用HPLCELSD法同时测定柴胡皂苷a，d的含量,其杂质峰干扰小,分离度好,灵敏度高,出峰时间短,便于操作。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：Agilent1100系统，SEDEX75型蒸发光散射检测器；超声波清洗机（中国华南超声波设备厂），工作频率25kHz，功率250w。柴胡皂苷a，d对照品购自中国药品生物制品检定所，含量测定用,批号分别为110777200303和110778200402；甲醇为色谱纯（CALEDONLABORATORIESLSD.），水为重蒸水，其它试剂均为分析纯；柴胡药材经鉴定为柴胡BupleurumchinenseDC.的根。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为AlltimaC18(250mm×4.6mm,5μm);流动相：甲醇水（80∶20）；速度0.8ml・min1，柱温25℃；检测器参数：漂移管温度40℃，气压3.5bar。在选定的条件下，柴胡皂苷a、d对照品与样品中其它组分色谱峰可基线分离，峰形好。按柴胡皂苷d峰计算，理论板数为3000以上。柴胡皂苷a，d对照品，供试品的高效液相色谱图见图1。
1.柴胡皂苷a2.柴胡皂苷da供试品图谱b对照品图谱
图1高效液相色谱图（略）
2.2对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a9.54mg和柴胡皂苷d9.02mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
2.3供试品溶液的制备取柴胡药材粉末（过60目筛）约1g，精密称定，置25ml量瓶中，加入5%氨水甲醇20ml，超声处理40min，放置至室温，加5%氨水甲醇至刻度，摇匀，静置，精密吸取上清液20ml置蒸发皿中，水浴蒸干，加甲醇溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.4线性关系考察分别精密吸取柴胡皂苷a和d的混合对照品溶液2，5，10，15，20μl注入高效液相色谱仪中，分别测定柴胡皂苷a和d的峰面积。以峰面积自然对数值为纵坐标，进样量的自然对数值为横坐标，绘制标准曲线。柴胡皂苷a在1.908~19.08μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y=5.89721.5336X，r=0.9996；柴胡皂苷d在1.804~18.04μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y=5.86191.4965X，r=0.9992。
2.5精密度实验精密吸取对照品溶液10μl，按上述色谱条件重复进样5次，测定峰面积，结果柴胡皂苷a和d的RSD分别为1.18%和1.53%，表明仪器的精密度良好。
2.6稳定性实验取样品溶液,按含量测定方法及色谱条件分别置0，2，4，6,8h测定，结果柴胡皂苷a和d的RSD分别为1.29%和1.68%，表明样品溶液在8h内稳定。
2.7重复性实验精密称取同批号样品6份，按含量测定方法及色谱条件进行测定，结果样品中柴胡皂苷a和d的平均含量分别为11.4541，8.3612mg・g1，RSD分别为1.34%和1.82%。
2.8回收率实验采用加样回收法，，取已知柴胡皂苷a，d含量的样品6份，每份约0.5g，精密称定，分别加入柴胡皂苷a对照品6.0544mg和柴胡皂苷d对照品4.4621mg，按含量测定方法及色谱条件进行测定，结果柴胡皂苷a和d的平均回收率分别为98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。
2.9样品测定取不同批号的药材，按上述供试液的制备方法制备供试液。精密吸取对照品溶液5，20μl及供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，按外标两点法测定柴胡皂苷a，d含量，结果见表1。
3讨论
3.1柴胡皂苷a，d为柴胡的主要有效成分,但在提取过程中其结构易发生变化,因此，严格控制提取条件十分重要。本实验比较了甲醇、5%吡啶甲醇、5%氨水甲醇的提取效果。结果表明，5%氨水甲醇溶液超声提取效果最佳。
表1样品含量测定结果（略）
3.2采用5%氨水甲醇溶液超声处理，分别测定了不同提取时间（20，30，40，50min）样品中柴胡皂苷a，d的含量，结果在40～50min内样品中柴胡皂苷a、d的含量基本不变。故文中采用超声40min的方法。
3.3本文采用HPLCELSD法测定柴胡中柴胡皂苷a，d的含量,较采用紫外检测器检测,能明显减少杂质峰的干扰,峰形好,出峰时间短,有利于提高检测的准确度和工作效率。
参考文献：
［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：198.
［2］张本.柴胡属植物药理作用研究概况［J］.吉林中医药，1983，3(1):39.
篇2
关键词：高效液相 邻苯二甲酸酯类 残留
当今社会食品安全问题愈来愈受到广大百姓的关心 ,食品安全的范围很广,它不仅仅指食品本身 ,还涉及到与食品相关的诸多方面 ,如食品所用原材料、食品加工工艺过程污染控制、食品放置与储存、食品包装所用材料等方面。
邻苯二甲酸酯（PAEs）也称为酞酸酯，主要用作塑料增塑剂，随着塑料工业的发展和塑料制品的大量使用，邻苯二甲酸酯已成为环境中无所不在的污染物，极为普遍地存在于土壤、底泥、大气、水体和生物体等环境样品中，酞酸酯类物质是一类环境雌激素，它可以扰乱内分泌, 对人体健康危害巨大。世界卫生组织（WHO）1995年公布的必须控制的[5]。其中有6种商品化的邻苯二甲酸酯被美国EPA列为重点控制的污染物（邻苯二甲酸二甲酯 DMP 、二乙酯 DEP 、二丁酯 DBP 、邻苯二甲酸二 2-乙基己 酯 DEHP 、二辛酯 DOP 、丁基苄基酯 BBP）,3种被我国列为优先控制污染物（DMP、DBP和 DOP）,8种被列在世界野生动物基金会(WWF)的环境激素名单中。本文针对食品用塑料包装中添加的增塑剂邻苯二甲酸酯类化合物展开研究 ,建立一种方便、快捷、准确的检测方法。
1实验部分
1.1仪器与试剂
高效液相色谱仪(Waters Allance 2695-2996),Empower2色谱工作站,PDA检测器； SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm色谱柱；吉尔森GX271全自动固相萃取仪。固相萃取小柱，Waters公司的 OASIS.HLB（6mL,200mg）小柱；分析天平：感量0.1mg；美国Organomation N-EVAP112型氮吹仪；IKAR werke T25型均质机；离心机；溶剂过滤装置；0.45μm有机滤膜；Milli-Q超纯水机。
甲醇、乙腈为HPLC级（美国Fisher公司）；丙酮、氯化钠、无水硫酸钠无为分析纯试剂。
邻苯二甲酸酯类标准品：邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二戊酯（DPP）、邻苯二甲酸二己酯（DHXP）、邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、邻苯二甲酸二辛酯（DNOP）。标准品纯度均在97%以上,美国进口,购于百灵威化学品部。
1.2标准溶液的配制[4，7，8]
准确称取上述标准品各0.1000g,分别用甲醇定容至100mL容量瓶中,配成100mg/mL的单标储备液。分别移取上述单标储备液各10mL，放置到100mL容量瓶中。用甲醇定容，配制成100mg/L的混合标准储备液，置于4℃冰箱中保存备用。标准储备液每6个月更换一次，或与标准品比较，发现问题时，必须立即更换。
混合标准系列溶液的制备：取一定量的100mg/L的混合标准储备液，用甲醇分别稀释成质量浓度为0.16、1.60、16.00、40.00mg/L的标准系列，置于4℃冰箱中保存。混合标准系列溶液每1～2个月进行更换，或与标准品比较，发现问题时，必须立即更换。
1.3样品前处理[6]
1.3.1 食品
（1）油脂类固体或半固体样品：称取均匀样品2g(精确至0.1mg)置于离心管中，加入10mL正己烷，均质2min，2500r/min离心3min，己烷层转入125mL分液漏斗中，再用10mL正己烷重复提取一次，己烷层并入125mL分液漏斗中。用90ml乙腈分三次提取，合并三次乙腈提取液于500mL分液漏斗中，加入250mL10%氯化钠溶液，用200mL正己烷分两次提取，经装有10g无水流酸钠的漏斗收集于梨形瓶中，40℃下蒸发近干。残留物用5mL正己烷溶解，待过柱用。
（2）油脂类液体样品：称取均匀样品1g(精确至0.1mg)于小烧杯中，加入20mL正己烷充分溶解，转入125mL分液漏斗中，用30mL乙腈洗烧杯后也转入分液漏斗中，其余处理同（1）进行。
（3）不含油脂的固体或半固体样品：称取混匀试样5.00g，置于50mL离心管中，加适量水（使总水量约10mL），加入20mL丙酮+正己烷混合液（2+3），均质2mim，2500r/min离心3min，取上层清液经装有5g无水硫酸钠的漏斗收集于梨形瓶中。再用20mL正己烷提取一次，合并提取液于40℃下蒸发近干（若含色素较多按（1）过柱净化），用正己烷定容至2mL,待分析。
(4) 不含油脂的液体样品（不含啤酒）：称取均匀样品20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL饱和食盐水，再加入30mL正己烷剧烈振摇，静止分层，上清液经装有5g无水硫酸钠的漏斗收集于梨形瓶中，再用30mL正己烷重复提取一次，合并上清液，40℃下蒸发近干（若含色素较多按（1）过柱净化），用正己烷定容至2mL,待分析。
（5）啤酒：称样20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL饱和食盐水，再加入20mL乙腈、20mL正己烷剧烈振摇，静止分层，上清液经装有5g无水硫酸钠的漏斗收集于梨形瓶中，再用20mL 、20mL正己烷重复提取两次，合并上清液，40℃下蒸发近干，用正己烷定容至2mL,待分析。
1.3.2．食品包装材料：称取经粉碎混匀的试样0.2g(精确至0.1mg)于三角瓶中，加入50mL正己烷，超声提取30min，取上清液直接进行分析（视含量作相应的稀释或浓缩）。
1.3.3净化
(1)．层析柱的制备：玻璃层析柱底部放入少许脱脂棉，加入1cm高的无水硫酸钠，然后依次干法装入2g弗罗里硅土（层析用，200℃烘3h后备用），0.5gPSA（硅胶键合氨基吸附剂），上部再加入1cm高的无水硫酸钠。使用前依次用10mL丙酮、10mL正己烷预淋洗。
(2)．净化与浓缩：待淋洗液下降至无水硫酸钠层时，将试样提取液加入，再用5mL正己烷洗梨形瓶，洗液加入层析柱中，待其下降至无水硫酸钠层时，用25mL丙酮+正己烷（2+98）混合液洗脱，将洗脱液收集于合适的容量瓶中，用正己烷定容，待分析。
1.4测定
1.4.1．色谱条件：
色谱柱：SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm
波长:224nm
柱温度:30℃
进样量:10μL
流速：1.0mL/min
流动相：A-水；B-乙腈 ，梯度配比如表1。
Empower色谱工作站
检测器:PDA检测器
定量方法 ： 取10μL进样，根据保留时间定性，以峰面积计算，以外标法定量。
1.4.3．结果计算
食品及食品包装物中邻苯二甲酸酯类化合物的含量（mg/kg）
式中：x―试样中某种邻苯二甲酸酯的含量（mg/kg）；
v―试样定容体积（mL）；
m―试样质量（g）；
c1--试样中某种邻苯二甲酸酯峰面积对应的标准品组分的浓度（mg/L）；
c0―空白试样中某种邻苯二甲酸酯峰面积对应的标准品组分的浓度（mg/L）
2．实验结果与讨论
2.1 样品前处理：由于食品包装材料及部分样品中成分比较复杂，含有一定量的蛋白、脂肪和纤维等成分，处理不好将直接影响进样，对液相色谱柱损害较大，所以应将样品充分混匀提取后，过净化柱，最后再经高速离心，可较好的去除大分子杂质物质，得到进样溶液。
2.2 波长的选择[3-4]:通过对几种邻苯二甲酸酯标准溶液进行210～400nm扫描,发现在220～240nm之间,吸收峰较强,本实验选择224nm作为方法的固定波长。
2.3标准及样品：在本方法的实验条件下，七种邻苯二甲酸酯类均得到了较好的分离，能够满足实验要求。
2.4 加标回收率：向5份样品中分别加入不同量的邻苯二甲酸二丁酯标准溶液，按本法处理、测定并计算回收率，结果见表2：
2.4 检出限：本方法检出限0.50mg/kg。
3.结论
实验表明，本方法所用乙酸铵流动相浓度低，样品进样量少，对分析柱的损害较小；样品加标回收率在78.00%～114.80%之间；线性系数R>0.9999；检出限为0.50mg/kg；能够满足一般食品等样品中邻苯二甲酸酯类残留量的分析要求。另外本方法具有简便快速、准确灵敏、成本低、可靠性强等优点，应用前景广泛。
参考文献
[1] 修丽华,王陆玲等.高效液相色谱法测定畜、禽肉中土霉素的残留量[J].现代食品科技,2007,Vol.23,No.10
[2] 中华人民共和国国家标准, GB/T18932.5-2002.
[3] 何华, 倪坤仪. 现代色谱分析[M]. 化学工业出版社, 2000, 228-245.
[4] 阎吉昌. 环境分析[M]. 化学工业出版社, 2002, 308.
[5] 陈珠灵, 黄瑜奎, 王桂美, 陈飞.化妆品中邻苯二甲酸酯类环境激素检测方法研究[J] . 环境科学与技术, 2007,Vol30,No.4
[6]佟克兴等食品包装材料中邻苯二甲酸酯的测定.监督与选择[J],2008,64-66.
[7]GB/T5009-2003,食品卫生检验方法[M].中华人民共和国国家标准.
篇3
【摘要】 【目的】建立丹参药材中水溶性成分丹酚酸类和脂溶性成分丹参酮类的超高效液相(UPLC)指纹图谱方法，为丹参的质量控制提供快速、科学的方法。【方法】以Acquity C18 BEH(21 mm×100 mm，17 μm)色谱柱，乙腈(A)体积分数04%甲酸溶液(B)梯度洗脱，90%~50%A，0~10 min;75%A，15 min。检测波长280 nm，柱温30℃，流速05 mL/min。【结果】在15min内得到丹参药材水溶性和脂溶性成分的指纹图谱，峰容量85。并采用液质连用技术(HPLCDADESI/MSn) 鉴定了其中的20个特征峰。【结论】UPLC指纹图谱方法具有灵敏、快速、简便、准确等特点，适合于丹参药材及其制剂的指纹图谱研究和质量控制。
【关键词】 丹参/化学;丹酚酸类/分析;丹参酮类/分析;指纹图谱;色谱法，超高效液相;液质连用
丹参是我国应用最广泛的中药品种之一，临床上有很好的疗效，以丹参作为原料药或君药的单一或复方制剂种类繁多。丹参药材指纹图谱的研究主要集中在分别研究丹参的水溶性成分和脂溶性成分指纹图谱[1-6]，这些方法基本均是将水溶性与脂溶性成分分开，分别建立指纹图谱。作为一种药材中的两大类成分，若能将两者结合起来，在同一张谱图上得到表征，直观地比较其化学成分的差异，将是一项十分有益的工作。目前也有一些报道采用高效液相色谱—二极管阵列检测器(HPLCDAD)或高效液相色谱—质谱检测器(HPLCMS)连用的方法建立同时表征丹参药材中水溶性与脂溶性成分的指纹图谱，但是采用HPLC 技术，尚难以兼顾和保证两类成分都具有良好的分离度，而且耗时较长。因此，本课题组尝试采用快速色谱技术——超高效液相色谱(UPLC)建立丹参的指纹图谱，现报道如下。
1材料与试剂
11实验材料共收集了12个省、市(区)的丹参商品药材13份(表1)。药材经上海中医药大学中药研究所吴立宏博士鉴定为唇形科植物Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根茎。
12仪器与试药Waters ACQUITY UPLCTM超高效液相色谱仪，包括Acquity Binary Solvent Module 二元可选四溶剂高压梯度泵，含在线真空脱气机、Acquity Sampler Module 低扩散自动进样器、Acquity TUV Detector高速紫外检测器及Empower II色谱管理软件(Milford，Boston，MA，USA)。MilliQ system超纯水制备器(Millipore，Bedford，MA，USA)，KQ250DB数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，BP211D型电子天平(Satorius Co.Ltd.，德国)。甲醇、乙醇、甲酸均为分析纯(上海国药集团试剂有限公司)，乙腈为色谱纯(Merck公司)，超纯水为MilliQ处理水(Millipore Co.)。对照品丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氢丹参酮I、丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮IIA均由上海中药标准化研究中心提供。
2方法与结果
21 色谱条件与质谱参数
211超高效液相色谱条件 Acquity C18 BEH(21 mm×100 mm，17 μm)色谱柱，乙腈(A)-体积分数04%甲酸溶液(B)梯度洗脱，90%~50%A，0～10 min;75%A，15 min。检测波长280 nm，柱温30℃，流速05 mL/min，进样量2 μL，运行时间15 min。表1不同产地丹参药材
212超高效液相色谱—质谱连用(LCMS)条件 流动相为乙腈(A)—体积分数04%甲酸溶液(B)，洗脱程序与上述条件相同。柱后分流，分流比为1∶50，进样量10 μL，柱温30℃，电喷雾离子源(ESI)，源电压-32 kV，负离子模式，雾化气(GAS1)：233 Pa，帘气(CUR)：16 psi，去簇电势(DP)：-20V，聚焦电势(FP)：-80 V，去簇电势2(DP2)：-20 V。质谱扫描质量范围质荷比(m/z)100～800。
22样品溶液和标准品溶液的制备
221样品溶液的制备取丹参粉末05 g(过40目筛)，精密称定，精密加入体积分数10%甲醇20 mL，浸泡30 min后，超声提取30 min，放冷，3 000 r/min离心10 min，取上清液5 mL置25 mL量瓶中。残渣加甲醇20 mL，浸泡30 min后，超声提取60 min，放冷，3 000 r/min离心10 min，取上清液将上述25 mL量瓶补足至刻度，即得。
222标准品溶液的制备取对照品丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氢丹参酮I、丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮IIA适量，精密称定，置同一容量瓶中，用甲醇溶解，制成含上述对照品102、126、113、106、137、118、762、100、114、122、119 μg/mL的溶液，作为对照品溶液。
23方法学考察
231精密度实验取同一份供试品溶液，连续进样5次测定，以丹酚酸B为参照峰，分别计算20个特征色谱峰的相对保留时间和相对峰面积sR值，均小于3%。说明仪器精密度良好。
232稳定性实验取同一份供试品溶液，分别于1、3、5、7、9、12、24、48 h进样测定，以丹酚酸B峰为参照峰，分别计算20个特征色谱峰的相对保留时间和相对峰面积sR值，均小于3%，说明样品溶液在48 h内稳定。
233重复性实验同一样品粉末分别精密称取5份，按照上述样品制备方法制成供试品溶液，进样检测。以丹酚酸B峰为参照峰，分别计算色谱中20个特征色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的sR值，均小于3%。说明该方法的重复性良好。
24结果与分析
241丹参高效液相指纹图谱主要色谱峰的LCMS鉴定以13个产地丹参药材的共有模式作为丹参药材的指纹图谱(图1)。在该指纹图谱中，20个色谱峰被选为特征峰。通过与对照品比较相对保留时间(tR)，紫外光谱(UV)和液相色谱—质谱联用(LCMS)质谱数据(见表2)，结合对照品和文献[7-12]对照，确定了19个色谱峰的归属为1号峰丹参素，2号峰原儿茶醛，3号峰咖啡酸，4号峰丹酚酸D，5号峰丹酚酸G，6号峰丹酚酸E，7号峰丹酚酸C，9号峰迷迭香酸，10号峰紫草酸，11号峰丹酚酸B，12号峰丹酚酸A，13号峰异丹参酮IIA，14号峰羟基丹参酮IIA，15号峰丹参新醌A，16号峰丹参酮IIB，17号峰二氢丹参酮I，18号峰隐丹参酮，19号峰丹参酮I，20号峰丹参酮IIA。11号峰(丹酚酸B)既是该指纹图谱中的最强峰，又是有效成分。故以其为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间(tR)和相对峰面积(ARP)，结果见表3。表2丹参药材中化学成分质谱数据及鉴定表313批不同产地药材中20个特征峰的相对峰面积值
242丹参药材UPLC指纹图谱分析采用上述已建立的指纹图谱方法，对13批丹参药材进行指纹图谱分析，得不同产地丹参药材指纹图谱，结果见图2(彩图页第616页)。为了说明丹参药材之间的差异，引入总差异率pTD(%)的概念。差异率的定义是以每个特征指纹峰与相应的标准特征指纹峰的面积归一化值间的差与标准特征指纹峰面积归一化值的比值来表示两者间的差异程度，总差异率则是将每个特征指纹峰的差异率求和即得。计算公式：
pTD=ΣniAs′-Ai′As′×n
其中，pTD 为总差异率，As′为标准特征峰面积归一化值，Ai′为待比较药材特征峰的面积归一化值，n为特征峰个数。以pTD代表样品图谱与标准图谱之间的相似度，当pTD>1时，表明待测样品与标准样品之间差异较大，说明待测样品有可能非欲鉴定品种。当pTD
在本实验中，选取13批丹参药材样品的特征峰面积归一化值的平均值作为标准特征峰面积归一化值(表4)，结果显示：(1)这些丹参药材的化学成分的分布具有相似性，每批药材被检测的色谱峰的数目几乎相等。(2)丹酚酸B的色谱峰占非常高的比例，最高达6313%，最低有3598%，说明该化合物是药材中主要成分之一。(3)水溶性成分中，丹参素的含量均较低，脂溶性成分以5个色谱峰为主(平均占总脂溶性成分的80%以上)。(4)就每一个化学成分来说，药材之间的相互差异比较大，13批药材统计处理，所有成分的sR均在20%以上。(5) 根据pTD值来看，13个产地或收集地的丹参药材pTD值均小于1，说明13个样品与标准样品之间的相似度均较高。表4不同产地13批丹参药材指纹图谱共有峰面积归一化值
3讨论
丹参中的两大类化学成分极性差异较大，文献报道显示采用HPLC对这两类成分进行指纹图谱分析，通常耗费时间长而且色谱峰之间并不能达到理想的分离度，较难在一张图谱上直观地比较这两种成分之间的差异[1-6]。本课题在大量实验的基础上优选出合适的UPLC色谱条件，建立丹参的指纹图谱，只需运行15min就可以将丹参的水溶性与脂溶性成分在同一张色谱图上表征，且色谱峰之间有较好的分离度，达到了高分离度兼顾快速的目的，适合于大量复杂样品的分析。
中药的指纹图谱研究中，HPLC法是最常用的分析技术，但是对于一些复杂体系如中药的指纹图谱研究，HPLC相对来说也是一种慢速技术，由于中药中所含化学组分多，化学差异较大，为保证目标组分的分离度，需要较长的运行时间，有时也可得到理想的色谱参数如分离度、对称因子和容量因子等。如何在得到理想的色谱参数的情况下，尽可能地缩短分析时间是科研人员比较关注的问题。UPLC的色谱柱采用了17μm的小颗粒填料，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量，能显著提高分离的效率从而达到缩短分析时间的目的。
本实验中采用了UPLC技术建立丹参药材的指纹图谱。结果显示，在15min中内即可获得丹参水溶性成分和脂溶性成分的指纹信息。丹参药材的UPLC指纹图谱与HPLC指纹图谱比较，色谱峰的个数、整体分布和峰形基本一致，但增加了最难分离物质对的分离度，增加了峰容量，减少了分析时间，说明UPLC比HPLC的分离能力强。
UPLC与HPLC具有相同的分离原理，因此UPLC色谱条件在HPLC条件的基础上稍加优化即可得到理想的色谱图结果。本实验根据上述UPLC的色谱条件获得了丹参药材及其制剂的指纹图谱，且与HPLC色谱指纹图谱一致的结果，因此，采用UPLC 指纹图谱方法具有灵敏、快速、简便、准确等特点，适用于丹参药材及其制剂的指纹图谱研究和质量控制，值得推广和应用。
参考文献
[1]宋敏，杭太俊，张正行.丹参水溶性成分HPLC指纹图谱指纹对照品对照法的研究[J].中草药，2005，36(3): 360.
[2]周欣，王道平，梁光义，等.丹参药材水溶性成分的高效液相色谱指纹图谱研究[J].色谱，2005，23(3): 292.
[3]夏广萍，潘勤，程英莹，等.中江产丹参药材的指纹图谱研究[J].中草药，2004，35(9): 1009.
[4]黎琼红，张国刚，徐世义，等.丹参药材脂溶性成分的HPLC指纹图谱[J].沈阳药科大学学报，2006，23(1): 22.
[5]金樟照，祝明，张文婷，等.不同产地丹参水溶性成分和脂溶性成分指纹图谱测定及相关性研究[J].中草药，2004，35(10): 801.
[6]张尊建，李茜，王伟，等.丹参及丹参注射液指纹图谱的HPLCMS研究[J].中草药，2002，33(12): 1074.
[7]Zhao Y，Chen B，Yao S Z.Simultaneous determination of abietanetype diterpenes，flavonolignans and phenolic compounds in compound preparations of Silybum marianum and Salvia miltiorrhiza by HPLCDADESIMS [J].J Pharma Biomed Anal，2005，38(3): 564.
[8]Li X C，Yu C，Cai Y B，et al.Simultaneous determination of six phenolic constituents of Danshen in human serum using liquid chromatography/tandem mass spectrometry [J].J Chromatogr B，2005，820 (1-2): 41.
[9]Zhang J L，Cui M，He Y，et al.Chemical fingerprint and metabolic fingerprint analysis of Danshen injection by HPLCUV and HPLCMS methods [J].J Pharma Biomed Anal，2005，36(5):1029.
[10]Jiang R W，Lau K M，Hon P M，et al.Chemistry and biological activities of caffeic acid derivative from Salvia miltiorrhiza[J].Current Medicinal Chemistry，2005，12(1): 237.
篇4
5 μm),柱温30 ℃,甲醇-0.5%醋酸(体积比为35∶65)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长254 nm。结果 小蓟中芦丁的含量为0.580 8 mg/g。结论 经过系统的方法学考察,该方法具有简便、专属、稳定、可重复的特点,可用于小蓟中芦丁的含量测定。
【关键词】 小蓟；芦丁；含量测定；高效液相色谱法
abstract：objective hplc was used to establish a method for determination of rutin in herba crisii. methods lichrospher c18 column (4.6 mm×200 mm, 5 μm) was used with methoanol-acetic acid (35∶65) as mobile phase, flow rate being 1.0 ml/min, column temperature at 30 ℃, detection wavelength at 254 nm. results the content of rutin in herba crisii was 0.580 8 mg/g. conclusions the method is proved to be simple, rapid, and accurate. it can be applied to content determination of rutin in herba crisii.
key words：cirsium setosum (willd.) mb.；rutin；content determination；hplc
小蓟为菊科植物小蓟[cirsium setosum(willd.)mb.]的干燥地上部分或根,具有凉血止血、祛瘀消肿的功能,可用于治疗衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外伤出血、痈肿疮毒等。小蓟中所含有机酸中有芦丁、咖啡酸等,文献记载芦丁、咖啡酸为其止血活性成分。本实验采用高效液相色谱法测定小蓟中芦丁的含量,方法稳定、快速、重现性好。
1 实验材料
1.1 仪器
lc-10at高效液相色谱仪,spd-10a检测器,class-lc10色谱工作站；sartorius bp211d电子天平；shimadzu ay220电子天平；kq-500型超声波清洗器。
1.2 试剂与药物
甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。芦丁购自中国药品生物制品检定所(批号0080-9705)。小蓟药材分别购自江苏(南京医药股份有限公司,批号020313)、安徽(安徽省亳州市永刚饮片有限公司,批号031205)、上海(上海华宇药业有限公司,批号040802),经本院药用鉴定教研室陈建伟教授鉴定为小蓟正品[cirsium setosum(willd.)mb.]。
1.3 色谱条件及系统适用性试验
1.3.1 色谱条件的选择
色谱柱：lichrospher c18(4.6 mm×200 mm,5 μm),柱温30 ℃,流动相：甲醇-0.5%醋酸(体积比为35∶65),流速1.0 ml/min；检测波长：254 nm。对照品、样品的高效液相色谱图见图1。
1.3.2 提取溶剂的考察
取本品2份,各1.0 g,精密称定,置2个50 ml具塞锥形瓶中,分别加入50 ml甲醇和50 ml 40%甲醇,称重,浸置1 h,超声处理(功率500 w,频率50 khz)40 min,补足称重,滤过；微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。分别吸取上述2份溶液各10 μl,注入高效液相色谱仪,按外标法以峰面积计算。结果表明,以体积分数为40%甲醇为提取溶剂效果较好。
2 方法与结果
2.1 溶液制备
2.1.1 对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品0.98 mg,置25 ml容量瓶中,加40%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
2.1.2 供试品溶液的制备
各取3个产地药材粉末(过2号筛) 1.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别加入50 ml 40%甲醇,称重,浸置1 h,超声处理(功率500 w,频率50 khz)40 min,补足称重,过滤,微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。
2.2 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5 ml稀释10 ml,依次精密吸取稀释的对照品溶液10 μl注入液相色谱仪,测定其峰面积值,以芦丁的浓度(g/l)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,进行线性回归。得回归方程为：y＝25 845 255x－28 716, r＝0.999 6。结果表明,芦丁在0.003 92～0.019 6 g/l范围内具有良好的线性关系。
2.3 精密度试验
吸取3号对照品溶液10 μl,重复进样5次,测定其峰面积积分值,rsd＝1.503%。表明本法精密度较好。
2.4 稳定性试验
分别于0、1、2、4、6、12、24 h精密吸取同一份供试品溶液20 μl进样,测定其峰面积积分值,计算6 h内rsd＝1.972%。结果表明,供试品溶液在6 h内常温保存基本稳定。
2.5 重复性试验
取同一批号小蓟样品共5份,每份1.0 g,精密称定,按供试品溶液的制备方法平行制备5份,分别进样10 μl,每份测定2次,平均含量为0.703 5 mg/g,rsd＝1.129%。
2.6 回收率试验
精密称取小蓟样品6份,各1.0 g,分别精密加入芦丁对照品适量,按供试品溶液的制备方法制备,每次进样10 μl,每份测定2次,取平均值,计算加样回收率,平均加样回收率为98.70%,rsd＝2.88%。见表1。表1 芦丁加样回收率测定结果(略)
2.7 样品测定
取3个产地的小蓟样品,按供试品溶液的制备方法制备,分别精密吸取对照品溶液和样品溶液,注入液相色谱仪,测量峰面积,按外标法计算,结果总平均值为0.580 8 mg/g。见表2。表2 小蓟中芦丁含量测定结果(略)
3 小结
对于小蓟中芦丁的含量测定,有人曾采用聚酰胺薄层扫描法[1],此法受薄膜表面光洁度、均匀度、厚薄等因素影响而不太稳定,张氏等[2]采用hplc法测定苦荞麦中芦丁含量。查阅文献,还未曾有人用过hplc法测定小蓟中芦丁含量。本实验采用hplc法测定芦丁含量,具有简便快速、结果准确可靠的特点,可以作为小蓟药材及饮片质量控制方法。
【参考文献】
篇5
【关键词】高效液相色谱法 刺五加 药品检测
中图分类号：R927 文献标识码：B 文章编号：1005-0515（2012）1-343-02
高效液相色谱法（high perfornance liquid chromatography）是被纳入我国药典的主要色谱分析法其固定相均匀规则，分辨率高，传质阻抗小，多用于药品检验，尤其是其对中药类成分的定性和定量检测被广泛应用于中药领域[1]，本文采用高效液相色谱法对刺五加的主要活性成分刺五加甙B的含量进行了检测，现报告如下：
1 仪器与材料
SPD10A型紫外检测仪，四元泵，高速离心机，电子秤量分析天平（上海市化学仪器厂），HP1100型HPLC色谱仪。
用于检测的刺五加产地为吉林省长白山，其对照品刺五加甙B由中国生物药品制品检定所提供，产品编号为111498-201004。
以乙腈为色谱纯（江苏化学制剂厂），水为重蒸水，甲醇（山东省禹王药物制剂有限公司），0.1%磷酸水溶液为分析纯（中国药科大学制药厂）。
2 方法与结果
2.1 HPLC色谱条件 以Kromasil ODS为色谱柱（4.6mm×250mm），以浓度0.1%磷酸水溶液/乙腈（80/20）为流动相，波长为230nm，在25℃，流速为0.8mL/min的条件下进行HPLC检测。
2.2 配制待测样品溶液 将待测的刺五加（吉林长白山）洗净，取其茎部和根部组织，切成长约1cm的薄皮，置入干燥箱行高温烘干（75℃），待失去水分后碾成粉末状，使用电子分析天平精确秤量茎部和根部的样品各0.5g，加浓度为50%的甲醇溶液20mL于100mL烧杯，连同样品一起混合，经1h回流提取，取得样品滤液由50%浓度甲醇进行溶解转移，并用25mL容量瓶进行定容，取适量滤液进行高速离心机离心（12000r/min）,用时为5min，待静置后，其上清液即为待测样品溶液。
2.3 配制对照溶液 使用电子分析天平精确秤量刺五加甙B（中国生物药品制品检定所）5.65mg，加浓度为50%甲醇溶液于5mL容量瓶中，与对照品混合溶解进行定容，制成对照储备溶液，取储备溶液1mL于25mL容量瓶进行稀释，加浓度为50%甲醇溶液至刻度，得到刺五加甙B浓度为44.31μg/mL的对照品溶液，放入冰箱5℃储存待用。
2.4 HPLC检测
2.4.1 HPLC色谱图分析
在波长为230nm，柱温为25℃，流速为0.8mL/min的条件下进行HPLC检测，可见刺五加甙B对照品的保留时间为11.7min，并在色谱图上表现出很好的与其他成分进行了分离。
2.4.2 HPLC线性关系分析
取制备好的刺五加甙B对照品溶液，分别稀释配制成浓度为44.31μg/mL，35.55μg/mL，
26.78μg/mL，14.50μg/mL，4.28μg/mL，2.98μg/mL，对HPLC色谱仪加样20μL进行检测，记录不同浓度对照品溶液色谱图，以峰值面积为纵轴，样品浓度为横轴，制得PHLC标准曲线图，分析其线性关系，计算刺五加甙B的线性方程为y=62.337x+2.4316，浓度范围值为2.98μg/mL～44.31μg/mL ，r为0.9997。
2.4.3 测试加样回收率
用电子分析天平称取制备的待测刺五加粉末0.5g，称取5次后，均混入对照品溶液，使用HPLC色谱仪进行检测，测得刺五加甙B的5次测样的回收率平均值为99.6%，测得其RSD为1.9%。
2.4.4 HPLC检测刺五加甙B稳定性
采用HPLC色谱仪加样测试待测样品液，浓度为2.98μg/mL，加样量每次为20μL，共加样5次，每次间隔2h，测算样品液的峰值面积和刺五加甙B的RSD，经HPLC测得其RSD为1.7%，在8h内样品具有很好的稳定性。
2.4.5 HPLC测定的重现性
电子分析天平称量样品粉末0.5g，称样5次后，再次制备待测样品溶液，重复测定刺五加甙B的RSD值，实验测得其样品的RSD值为1.8%，证明HPLC检测样品含量有很好的重现性。
2.5 待测样品的刺五加甙B测定
采用HPLC对制成的待测根部样品和茎部样品进行刺五加甙B含量的测定，共进行3次加样，具体数据见表1。
表1 吉林长白山刺五加根部和茎部的刺五加甙B含量
3 讨论
据《中华国家药典》有关记载刺五加的主要活性成分是刺五加甙B和刺五加甙E[2]，该两种成分主要存储于刺五加的根部和茎部[3]，本文通过对吉林长白山的刺五加样品的测定证明其茎部的刺五加甙B含量远远高于根部，采用高效液相色谱法以乙腈为色谱纯（江苏化学制剂厂），水为重蒸水，甲醇（山东省禹王药物制剂有限公司），0.1%磷酸水溶液为分析纯（中国药科大学制药厂），测得在浓度为2.98μg/mL～44.31μg/mL的范围内，其峰值面积分值RSD为为1.9%，回收率为99.6%，r为0.9997，这表明高效液相色谱法在测定刺五加甙B的含量上准确有效，重现性好，稳定性高。
参考文献
[1] 孙会敏，田颂九，高效液相色谱法简介及其在药品检验中的应用[J]，齐鲁药事，2011，30（1）：38―42.
篇6
【关键词】 芹菜籽；，，3-正丁基苯酞；，，高效液相色谱法
摘要：目的高效液相色谱（HPLC）法测定芹菜籽中3-正丁基苯酞的含量。方法采用YMC ODS C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈酯酸钠（45∶55），酯酸钠0.05 mol・L-1，冰酯酸调节pH4.6；检测波长为228 nm；流速为1.0 ml・min-1；柱温：40℃。结果3-正丁基苯酞在0.044 1 ~0.161 7μg范围内线性关系良好，r= 0.999 7，方法的回收率为98.19%，RSD为1.38%（n=5）。结论 该方法能够准确可靠地测定3-正丁基苯酞的含量，可作为芹菜籽的质量控制指标之一。
关键词：芹菜籽； 3-正丁基苯酞； 高效液相色谱法
Determination of 3-n-Butylphthalide in Celery Seed by HPLC
Abstract：ObjectiveTo establish a method for determining 3-n-butylphthalide in Celery Seed by HPLC.MethodsYMC C18 column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used. The mobile phase consisted of acetonitrile-sodium acetate(45∶55) with flow rate 1.0 ml・min-1. The detection wavelength was set at 228 nm and the column temperature was 40℃. ResultsThe linear range of 3-n-butylphthalide was at the range of 0.044 1 ~0.161 7 μg (r=0.999 7，n=5) ，the average recovery was 98.19%，and RSD was 1.38%(n=5). ConclusionThe method is rapid， highly accurate and precise. It can be used to control the quality of Celery Seed.
Key words：Celery Seed; 3-n-butylphthalide; HPLC
芹菜籽是伞形科旱芹属植物芹菜Apium graveolens L.的种子。在我国维吾尔医药中主要用于治疗高血压病、关节炎、类风湿关节炎、气滞性子宫炎、腹水、肾脏等疾病［1］。3正丁基苯酞（3nbutylphthalide）是从芹菜籽中提取的药理活性成分，目前已经被开发成脑血管病领域的国家一类新药，具有抗脑缺血、减轻脑损伤等作用［2，3］。因此有必要对芹菜籽征性成分进行定性、定量研究。本实验以HPLC法测定芹菜籽中3-正丁基苯酞，为科学评价芹菜籽的药材质量，制定规范、合理、可行的质量控制提供依据。
1 仪器与试药
Waters公司MICROMASS ZQ液质联用仪（Waters 996型二极管阵列检测器，Waters 2690液相分离系统）； METTLER TOLEDO DELTA 320 pH计。乙腈（色谱纯，USA Tedia公司）；Triton X-100（Sigma公司）；三水乙酸钠（C2H3NaO2・3H2O，优级纯，天津市光复精细化工研究所）；冰乙酸（分析纯，北京化工厂）。 3正丁基苯酞对照品（自制，质量分数99%）。芹菜籽经中科院新疆生态与地理研究所克力木副研究员鉴定。
2 方法与结果
2.1 色谱条件YMC C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈酯酸钠（V∶V=45∶55）；酯酸钠0.05 mol・L-1，冰酯酸调节pH 4.6；体积流量1.0 ml・min-1；检测波长228 nm；柱温40℃。
2.2 对照品溶液的制备取标准品14.7 mg，置于10 ml容量瓶中，加入1 ml 10% Triton X-100振摇使溶解后用流动相定容，摇匀，作为贮备液；移取贮备液1 ml置于100 ml容量瓶中，用流动相定容，摇匀，制成3正丁基苯酞质量浓度为0.014 7 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备称取干燥的芹菜籽10 g，分别用100，80 ml和60 ml的70%乙醇回流3，2 h和1 h，总共提取3次，合并滤液，浓缩得到的粗提物水分散后用8倍体积的石油醚萃取5次，得到石油醚萃取的样品。取38.7 mg样品， 置于25 ml容量瓶中，加入2 ml 10% Triton X-100振摇使溶解后用流动相定容，摇匀，作为贮备液；移取贮备液1 ml置于10 ml容量瓶中，用流动相定容，摇匀，作为供试品的溶液（0.155 mg/ml）。
2.4 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液，分别进样3，5，7，9，11 μl，记录各样品的色谱图。以对照品溶液进样量C为横坐标，峰面积A为纵坐标作标准曲线，结果表明3-正丁基苯酞在0.044 1 ~0.161 7μg范围内线性关系良好，回归方程：A =21 734 000 C + 23 475，r= 0.999 7。空白对照、对照品和供试品的色谱图分别见图1~3。
图1 空白对照色谱图（略）
图2 对照品色谱图（略）
图3 供试品色谱图（略）
2.5 精密度实验精密吸取0.014 7 mg/ml 3正丁基苯酞对照品溶液，连续进样6次，5μl/次，按上述色谱条件测定，峰面积分别为1 647 597，1 626 279，1 645 968，1 665 844，1 639 422，1 614 002，RSD=1.10%，表明仪器的精密度良好。
2.6 稳定性实验 精密吸取供试品溶液（0.155 mg/ml）5 μl，分别在0，2，4，6，8，10 h进样，按上述色谱条件测定，峰面积分别为1 568 873，1 622 012，1 588 530，1 615 787，1 600 297，1 622 424，RSD为1.33%，表明供试品溶液在10 h内基本稳定。
2.7 重现性实验取同一批的样品5份，按上述样品溶液的制备操作和色谱条件测定，RSD=0.77%（n=5）。结果显示，该方法具有较好的重现性。
2.8 加样回收率实验取已知含量的样品，精密加入一定量的对照品，平行操作5份，按上述条件进行测定。结果见表1。
表1 加样回收率实验（略）
2.9 样品的测定按2.3方法制备样品，按2.1色谱条件对3批样品进行含量测定。结果见表2。
表2 样品测定结果（略）
3 讨论
3.1 本实验考察冷浸和热提萃取处理两种提取方式，结果采用乙醇提取石油醚萃取得到的含量比冷浸处理得到的含量高，提取更完全，故采用热提萃取法。
3.2 对照品和供试品均为油状物，所以加入表面活性剂Triton X-100促其溶解，为保证基线平稳，Triton X-100的加入量控制在1%。
参考文献
［1］ 新疆维吾尔自治区卫生厅.维吾尔药材标准（上册）［S］.1993：8.
篇7
关键词：超高液相色谱技术；药物分析；应用研究
1 概述
超高效液相色谱技术在药物分析领域具有分析速度快、灵敏度高、药品的分离效率高、适用范围更广等特点，其测试全自动化，药品成分容易吸收且处理方法简单的特点，使得它在市场中占有一定的主导地位。随着社会的不断发展以及不断更新的科学技术，超高效液相色谱仪逐渐出现在人们的视野中。它拥有高效液相色谱技术的所有优势，而且还具有超高速、超高灵敏度和极高分辨率的性能，被人们称为现代液相色谱法的另一个发展方向。研究表明，超高液相色谱技术在药物分析领域的能力已经令人信服，其卓越的性能也已被证明。在文章中，笔者从超高液相色谱技术的技术点本质出发，对什么是超高效液相色谱法，超高效液相色谱技术有哪些优势和缺点进行描述，对超高效液相色谱法在药物分析的应用做出了详细的介绍。
2 什么是超高效液相色谱技术
2.1 超高效液相色谱技术的原理
超高液相色谱技术是以范德米特方程作为理论基础，和高效液相色谱法的原理相同。具体公式为HETP=Ad P+B/v+Cd P2v，式中HETP代表理论塔板高度，A是涡流扩散系数，dP代表填料颗粒的尺寸半径，B表示分子的扩散系数，C表示传质因子，v表示移动相线速度。该公式的含义是：颗粒的粒径越小，色谱的柱效率将更高。颗粒的粒径不同，其最佳色谱的效果就不一样；粒子的粒径越小，最高柱流速将会向流速大的方向移动；颗粒尺寸越小，其线速度的范围就更广泛。由此可以得出结论：降低粒径的尺寸大小，不但可以提高色谱柱的效率，而且还可以提高速度。也就是说色谱分辨率同填料颗粒的粒径大小成反比关系。经过有关人员的研究发现，当填料颗粒的粒径小于2N，m时，理论塔板高度的最低范围将被扩大，即小于2N，m的粒径相比于较大的微粒能够获得更大的流速范围，色谱柱的效果也会增加，可以在没有损失的前提下增加微粒的流速和粒子的分析速度。
2.2 超高效液相色谱技术的原理的优点
超高效液相色谱的分离原理与高效液相色谱技术相同，但相对来说，超高效液相色谱技术的性能较好且具有更高的速度、灵敏度和分辨率。超高效液相色谱技术在线速度较大或者高压下环境下依然可以实现良好的效果，对样品进行高效的分离。超高效液相色谱技术使用的粒径为1.7N，m，它比粒径为5N，m的色谱柱提高了三倍的长度。与此同时，其柱不变，就可以使得分析是在提高3倍流速下进行的，大大缩短了分析时间。超高效液相色谱技术主要是通过减少颗粒的粒径的方法，让颗粒的色谱峰变窄，从而可以提高检测的灵敏度。超高效液相色谱法与高效液相色谱法相比大大地提高了分辨率，更有利于对杂质样品进行离子化，有助于对基质杂质进行分离，提高检测灵敏度。
2.3 超高效液相色谱技术的原理的缺点
超高效液相色谱技术虽然具有很多优势，但在实际的应用过程中，也仍然存在一些问题和不足。比如说：超高效液相色谱仪器在性能方面虽然要高于高效液相色谱仪器，但是价格也会随着大大地增长，这就会限制该仪器和技术的推广，不能达到普及应用的目的；由于超高效液相色谱法技术对药物分析具有较高的要求，这就使得加工精度很难把握。生产该机器的厂家少，进样的数量也少，而且还使用半环的方式注入，这就会导致其峰值面积的重复性较差。与此同时，因为色柱谱的颗粒半径非常细微，为了避免色谱柱被样品堵塞，对样品的要求也比较严格。
3 超高效液相色谱技术在药物分析领域的应用
3.1 制剂药物分析
在进行药物分析时，往往样品的含量非常少，在进行分析分离时非常困难，所浪费的时间也比较多。因此，我们迫切需要一个能够提高分析速度，提升分离效率的技术，其应该具有灵敏度高、精确度高的特点。超高效液相色谱技术在解决这些问题时，就提供了强有力的支持，逐步显示出其具有良好的发展前景。对A1z、AzZ和A3z这三种化合物的研究分析中，在保证分析效果相同的前提下，使用超高效液相色谱技术可以大大地缩短分析时间，其精度和灵敏度也相比于其他技术要好很多。超高效液相色谱技术适合用于常规药物的分析，使用混合模式的固相萃取和超高效液相色谱技术同时使用测定相应的药物成分。其最终的分析结果可以达到美国食品和药物管理局在精度和准确度方面的要求。
3.2 生物基质中药物的分析
药物代谢涉及到药物人体内的吸收、分布、代谢和排泄，包括对药物及其在复杂基质中的代谢物的分离，以及对痕量分析的结构鉴定。目前，生物体的体液系统中含有非常多的相对分子质量相同、保留时间相同的复杂成分。与此同时，药物正在向着低剂量的方向发展，这就会给现有技术提出难度，使得常规的分离技术和痕量成分的检测难以满足在精度方面的要求。能否在许多具有相同保留时间的干扰组分影响下，快速识别出代谢产物依赖于高效的色谱分离和敏感度极高的分辨质谱技术。超高效液相色谱技术在药物代谢产物分析中，就充分体现了高敏感性和专属性特性，并且可以在同一时间段内对多种组分浓度进行测定，可以达到样品分析测量高效率的要求。
3.3 中药质量控制
中药中含有多种复杂结构的化学成分，使用超高效液相色谱技术进行分析时，能够迅速地检测多种化学成分，具有速度快、灵敏度高的特点，因此在中国传统医药化工分析和质量控制中具有良好的应用前景。通过对比超高效液相色谱技术和高效液相色谱技术对羊藿、冬虫夏草、三七、丹参等中药的药物分析结果，超高效液相色谱技术不仅体现在速度更快的分析时间，更重要的是超高效液相色谱技术可以使得小颗粒填料后的分离度也得到了提高。使用超高效液相色谱技术测定羊藿黄酮类成分时，与高效液相色谱技术相比分离程度得到了大大的改善。在中国中医药的多种组分分析过程中，其化合物种类多、数量不明确、含量差异也比较大的特点一直是技术分析的瓶颈问题。现在将超高效液相色谱技术引入多组分的中国医药分析中，可以建立一个更有利的分析平台。
4 结束语
超高效液相色谱技术是近年来一种新型的技术。在近几年的使用过程中，人们发现超高效液相色谱技术在药物分析领域正在发挥着越来越大的优势，广泛开阔了现代色谱技术的应用前景。其注射体积小、耗电少、快速分离的特点被广泛应用于天然和合成药物组合物的分析技术、药物的代谢产物分析等，是一种更有效、更准确、更精细的一种分析技术。尽管超高效液相色谱的仪器成本高，样本量也较少，容易出现色柱堵塞，对使用技术的要求也更高等缺点和不足，但是随着技术的发展和填料注入技术的不断改进，药物分析的方法也在逐步变化中。我们相信超高效液相色谱技术将会在药物的分析中扮演越来越重要的角色，不断推动药物分析的发展，更好地造福人类。
参考文献
[1]印成霞.超高效液相色谱法在药物分析中的应用研究[J].中国实用医药，2013，23.
篇8
【关键词】 靛玉红； 青黛； 高效液相色谱法
Abstract:ObjectiveTo establish the method of determination of indirubin from Indigo Naturalis. Methods HPLC was employed， which chromatographic column was spherisorb C18 (4.6 mm×200 mm)， mobile phase was methanol0.1 mol/L of ammonium acetate， flow rate was 1 ml/min， detection wavelength was 280 nm and column temperature was 35℃. ResultsA good linear correlationship was obtained when indirubin content ranged from 5.98 μg/ml to 59.8 μg/ml(r=0.999 5). Average recovery was 99.87%， RSD was 1.31%. ConclusionThis method is simple， rapid， reliable and suitable for assay of indirubin from Indigo Naturalis.
Key words: Indirubin; Indigo Naturalis;
HPLC
青黛为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica 、爵床科植物马蓝Baphicacanthus cusia 、豆科植物木蓝Indigoferas tinctoria 、蓼科植物蓼蓝Polygonum tinctorium等的叶或茎叶，经加工制得的干燥蓝色粉末或团块，是常用中药。近年来研究发现， 靛玉红是青黛中的抗癌有效成分，主要抑制白血病细胞的DNA合成。为了有效控制其质量，制定科学的质量检测标准，确保疗效，本文采用高效液相色谱法测定其活性成分靛玉红的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器Shimadzu HPLC仪 ，LC10ATVP溶液输送泵， SPD10AVP紫外可见检测器，SLC10AVP控制器，CTO10ASVP控温箱，LcSolution工作站。
1.2 试药青黛(福建仙游)，靛玉红对照品(中国药品生物制品检定所，717200204，供定量测定用)，甲醇为色谱醇；乙酸铵、醋酸乙酯为AR）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Spherisorb C18 (4.6 mm×200 mm)；流动相为甲醇0.1 mol/L乙酸铵(65∶35)；流速为1 ml/min；检测波长为280 nm；柱压为5.4 MPa；柱温35℃ ，Shimadzu SPD 10AV 紫外检测器。进样量10μl。理论板数按靛玉红色谱峰计算不低于2200，靛玉红色谱峰与相邻峰之间的分离度均大于1.5。
2.2 对照品溶液的制备精密称取靛玉红标准品2.99 mg， 加适量醋酸乙酯超声溶解，并定容于25 ml容量瓶中，配制成浓度为119.6 μg/ml的对照液。
2.3 供试品溶液的制备准确称量青黛1.3 g，置索氏提取器中，用醋酸乙酯提取，然后移到50 ml容量瓶中，用醋酸乙酯定容，混匀后用微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。
2.4 标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液0.5，1，2，3，4，5 mI 置于l0 ml量瓶中，用醋酸乙酯定容，摇匀并用微孔滤膜滤过。依次进样10 μl，按上述色谱条件操作，以峰面积分值为纵坐标，相应浓度为横坐标绘制标准曲线，进样线性回归，得回归方程y=4 786.5x +31 185(r=0.999 5)，结果表明靛玉红在5.98～59.8 μg/ml范围内线性关系良好。
2.5 精密度实验取同一靛玉红对照品溶液连续进样5次，10 μl/次，根据峰面积计RSD=0.5%。
2.6 稳定性实验取同一样品溶液分别在制备后12，24，36，48，60，72，84，96 h分别测定1次峰面积，结果RSD=0.8%，表明样品至少在4 d内稳定性良好。
2.7 重现性实验取同一批样品(批号20060401)3份，按上述色谱柱条件测定其含量，结果平均含量为3.0 %，RSD＝0.9% 。
2.8 加样回收实验在已知含量的样品(同批号20060401)供试液中，加人不同量的靛玉红对照品，按照含量测定方法进行测定。结果见表1。表1 回收率实验结果（略）
2.9 样品测定
按上述方法，对样品中靛玉红的含量进行测定。靛玉红对照品溶液及批号20060601样品的HPLC见图1～2，测定结果见表2。表2 样品测定结果（略）
3 讨论
流动相的选择：曾实验多种流动相，结果发现以甲醇－0.1 mol/L乙酸铵(65∶35)，样品中靛玉红与其它成分可达到基线分离，空白对照液亦无干扰。
溶剂的选择：曾选用氯仿［1］和醋酸乙酯作溶剂实验。结果发现以醋酸乙酯作溶剂靛玉红与靛蓝可完全分离，分离效果与峰形均好。
本文用HPLC法测定青黛中靛玉红的含量，实验证明，本法具有操作简便、快速、结果可靠、易于掌握的特点，是较理想的靛玉红质量控制方法。至于靛玉红含量的控制范围，有待进一步研究。
篇9
【关键词】 咪达唑仑高效液相色谱法血药浓度
【中国分类号】R969【文献标识码】A【文章编号】1044-5511（2011）11-0491-01
咪达唑仑（咪唑安定）是一个短效的水溶性苯二氮卓类药物，是咪唑苯二氮卓衍生物之一。与地西泮的油溶液相比，水溶性可将注射疼痛及血栓性静脉炎的发生降低到最小，咪达唑仑常于手术局麻时作为镇静催眠药，较高剂量则用于全身麻醉诱导剂［1］由于其较短的消除半衰期（1.5~2.5h）［2］,并且临床上缺乏理想的长效制品，这就使咪达唑仑更适合作为镇静剂长时间推注。值的注意的是，在使用高剂量作诱导麻醉时，在反应上有个体差异，有资料显示，给予咪达唑仑0。3mg.kg-1iv，从开始给药致意识丧失的时间存在着个体差异，50a以上患者意识丧失比年轻人快［1］，本文采用高效液相色谱法测定血浆中咪达唑仑的方法，为临床进一步研究其血药浓度与药效学之间的关系，探索合理有效的给药剂量提供一定帮助。
1 材料与方法
1．1仪器与试药waters515HPLC pamp；waters2487紫外检测器；杭州英谱HS色谱数据工作站；80-2离心沉淀相，咪达唑仑水针剂（江苏恩华制药有限公司，批号B363MFD191998）；地西泮（北京益民制药厂，批号9801017）甲醇（HPLC，上海吴泾化总厂）；二乙胺（上海化学试剂总厂附属上海试剂三厂）乙腈（HPLC级，上海方可唯寄生物化学技术有限公司）；乙醚、磷酸均为分析纯。
1．2溶液配制：咪达唑仑溶液精取咪达唑仑水针剂1mL，量100mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成0.05mg.mlL1的标准溶液备用，地西泮内标溶液，精称地西泮10mg置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，制成0.1 mg.mL-1的内标溶液备用。
1.3色谱条件: 色谱柱：waters Nov-pak G18（4um.3.9mm×150mm）；Alltech保护柱C1830μn。检测波长：225nm。灵敏度：2AUFS。流动相：甲醇一水（60：40，V/V）,含乙腈1%、二乙胺0.1%、磷酸0.05%。流速：0.6 mL.min-1。
1.4样品预处理：取含有咪达唑仑的人血清0.5mL。置于10mL具塞试管中，加地西泮内标溶液5uL，涡旋混和加3mol.L-1Naoh溶液0.5mL，涡旋振荡，加提取液乙醚3mL，涡旋振荡2min，以4000r. min-1转速离心分离2 min，取上层提取液重复提取一次，合并提取液，以40℃氮气吹干，加甲醇50μL回提，取回提取液20μL进样。
2、结果
2．1咪达唑仑及内标色谱，用上述提取方法及色谱条件得到血清色谱图见图1显示咪达唑仑与内标峰完全分离，保留时间分别为（11.21±0.58）min和（9.41±0.39）min见图Ⅰ
2．2标准曲线取人血清0.5mL,加适量标准液，配成浓度为0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2. 0ug.mL-1的标准血清，加地西泮内标液5μL，按上述提取方法及色谱条件进行测定。以咪达唑仑浓度为χ轴，以测定的咪哒唑仑与地西泮的峰面积比为Y轴进行线性回归。结果表明，样品在0.1~0.2 ug.mL-1范围内线性良好，回归方程为：Y=P×10-4X－9.17×10-2，r=0.9998。最低检测浓度为0.05 ug.mL-1。
2.3精密度及回收率.日内精密度及回收率:在同1d内配置3种不同浓度咪达唑仑的血清样品,按上述方法提取,分别测定5次,计算的内平均浓度,RSD及相对回收率,结果见表Ⅰ。 日间精密度及回收率：取3种不同浓度的咪达唑仑血清样品分别在3d内提取，测定结果见表Ⅰ
3 讨论
咪达唑仑的化学名为8-氯-6-（2-氟苯）-1-甲基-4H-咪唑［1.5-a］［1.4］苯丙二氮卓，以盐酸或马来酸盐形式存在。本方法根据其结构特点，先碱化使其以分子形式存在，再用有机溶剂提取，挥干后以甲醇回提。用分析纯的乙醚提取，杂质峰多选用蒸溜乙醚提取后，减少了杂质峰的干扰，而且乙醚来源易的，价廉毒性较低。流动相的摸索过程中，先后选用了不同配比的甲醇和水作为流动相，发现甲醇一水（60：40V/V）含乙腈1%，磷酸0.05%的比例较好,但咪达唑仑和内标峰分离不太理想,峰型稍有拖尾,加入二乙胺期望改善峰形。经比较含二乙胺0.1%流动相能使内标峰和咪达唑仑峰完全分离,且峰形致改善。
碱化过程中,先后对不同浓度的Na oH及不同用量作了比较,发现无明显差别为保证咪达唑仑碱化完全,我们选用了3mol.L-1NaoH,,用量以0.5mL为宜.。
本文用高效流相色谱法测定血清中咪达唑仑的浓度,提取方法简便,提取溶剂,流动相价廉易的,毒性低,方法线性良好重现性理想,适合临床进行诱导麻醉剂量的探索研究及药动学的研究.
参考文献
［1］Dandee jn,Haliday Nj Harper KW et al Midaxolam;areview of its Pharmacological properties and therapeutic use［1］Drags 1984.28 519
篇10
【关键词】流动相配制 体积比 质量比 高效液相色谱法
【中图分类号】O657.72 【文献标识码】A 【文章编号】1674-4810（2013）33-0172-01
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，另外水性溶剂也常用于缓冲液。常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动相的差异，影响了色谱图和分析结果。本文以具体的事例研究流动相调制方法对分析结果的影响。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。因此，只要没有特别标明，就可按体积比进行混合。但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
一 有机溶剂和水性溶剂的混合方法
有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的，但由于混合方法不同，有时分析结果相差很大。如20mM磷酸钠缓冲液（pH 2.5）90%与乙腈10%的混合液，混合比为9∶1时，20mM磷酸钠缓冲液（pH 2.5）90%与乙腈10%的体积比为9∶1，也就是可以解释为各自按体积比例的相当量称取后进行混合。另外，按10%乙腈解释，用20mM磷酸钠缓冲液（pH 2.5）将乙腈稀释调制也可以成立。在后者情况下，产生混合体积减少部分，余下的添加20mM磷酸钠缓冲液。两者虽然没有太大的差别，但由于混合方式不同，分析结果，特别是保留时间，也会有显著的差别，这点必须注意。
二 50%或（V/V=1/1）乙腈水溶液的配制方法
对于用V/V=1/1的表示配制乙腈水溶液，多按这种方法进行：用量筒测定乙腈500ml，用另一量筒测定水500ml，两种液体在瓶内充分摇晃混合。
不过50%乙腈水溶液的表示时，同样也多是按上述方法配制，但查化学辞典时，实际上是按这种方法进行配制：首先将500ml乙腈，注入1L的量瓶中，量瓶边搅拌边加水，等待液温达到室温，用全量水，使溶液到1L。
这样一来，用%表示和“V/V”体积比表示，最终得出的流动相组成不同。也就是说，混合溶剂的密度，与由原溶剂密度计算的单纯平均值不相同，所以用上述两种方法调制的流动相组成差异。如在室温（25℃）附近水50ml和乙腈50ml混合时体积不是100ml，而有所减少，约为96ml。在一般情况下，多用操作简便的第一种方法。
三 溶剂体积的温度影响
如前所述，溶液的密度受周围温度的影响。刚从溶剂冷藏箱拿出来的溶液温度与实验室的室温相比，要低不少，乙腈和水混合液因发热反应，溶液温度升高。因此，为能调制再现性好的流动相，建议在使用前用水浴（或热水浴）将液温调到接近室温。
四 用两台泵进行溶剂混合
