液相色谱仪范文
时间：2023-03-26 00:36:19
导语：如何才能写好一篇液相色谱仪，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
尹 亮 安徽省计量科学研究院 230051
【文章摘要】
我国在经济发展的时期，每一个行业也都在快速发展，特别是工业等快速的发展，促进了经济的大发展。但是由于行业的快速发展，导致行业的内部也是良莠不齐，因此需要对生产产品用水加以严格的质量分析，这就应用到了液相色谱法，来分析水的质量，以便保证水被应用到产品中是符合规定的，减少造成生命危害的几率。
【关键词】
液相色谱仪；结构；维护
0 前言
随着社会的进步，每个行业产品的进步，经常会出现某些不法分子不用合格的水等，就需要用到液相色谱仪进行一定的分析，看是否符合实际的用水标准质量。但是由于液相色谱仪是一种高科技技术，对本身使用有着一定的要求。并且由于这种技术给了检测水质带来了一定的方便，还使得检测更加准确，使得这种技术很受欢迎。但是由于技术的不断发展，还会出现对水质要求更加严格的产业，因此就需要技术不断的更新发展，以便满足产业要求。
1 液相色谱法的定义和作用
液相色谱法是一种快速有效的有机化合物分析技术，在分析测定有机化合物方面，以其快速、灵敏、选择性好的特点， 倍受分析工作者青睐，是环境监测、卫生防疫、石油化工、食品生产等行业作为水质分析的标准仪器。
2 保养液相色谱仪的重要意义
液相色谱仪是是一个高科技的，高精密度的仪器。它不仅能够在一定时间内， 能够有效细致的分析出水质如何，还能分析出水中的各种物质的含量等。因此这种仪器就需要使用者更加重视保养。只有保养得当，才能最大限度的延长仪器的使用寿命。并且能够保证仪器的精密度，准确性。使得仪器在检测过程中能够更加准确检测出水中的物质，分辨更加清晰。因此为了保证仪器分析的灵敏度和准确性，都要保证对液相色谱仪进行良好的保养。以便能够在使用过程中更加放心其检测结果的真实性。
液相色谱法是一种快速有效的有机化合物分析技术，在分析测定有机化合物方面，以其快速、灵敏、选择性好的特点， 倍受分析工作者青睐，是环境监测、卫生防疫、石油化工、食品生产等行业作为水质分析的标准仪器。
这样的仪器在使用过程中也会因为其精密性更加的容易受到外界环境变化以及水质等问题的影响，甚至会出现检测结果的偏差。因此为了检测结果的真实有效，并且要延长液相色谱仪的使用寿命以及保证仪器的良好运转，就需要对仪器进行及时的维护和保养，这样才能保证在所有的检测过程当中，检验的更加的真实。
3 高效液相色谱仪的结构和原理
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
由于液相色谱仪是一件精密的仪器， 在使用的过程中，主要应用到了物理和化学的相关知识。在世界上所有的物体都有自己独特的生物波和有机构成，这样在使用液相色谱仪的时候，就会根据每一种食物的特性，应用相关的液体，把要检测的液体进行分离，并在液相色谱仪上进行分解出来，这样使得被检测的液体能够被有效的分析出来，从而使得液体的成分也都可以清晰的看见，并肯居所得到的数据进行分析，以便保证分析结果的有效性和真实性，从而达到检测液体所需要的结果。
4 操作注意事项
对于这样一种精密的仪器，不仅需要在操作之后进行仔细的保养，更要在使用过程中对使用者的操作加以规范，以便保证仪器能够在使用过程中不遭受破坏， 确保仪器在正常规范的使用方法下，得出最准确的使用的数据。帮助使用者技术人员进行分析。因此要想达到更好的使用效果，就需要对操作过程中的事项十分的注意，以减少出现错误。
4.1 色谱柱的柱效和保护柱
拿到一根新柱时，一定要先看其使用说明，然后测柱效，定期检测柱效，保留在新色谱柱上得到的色谱图，并记录条件， 定期检测仪器的谱带展宽，若应用于在线监测，应对色谱柱提供在线的物理保护和化学保护，例如采取安装在线过滤器，自装填料保护柱和预装保护柱等。
在线过滤器的作用是防止颗粒在柱头累计，优点是基本不影响柱效，在需要高柱效的时候常用，常更换的消耗品是滤芯和垫圈。
保护柱的作用是防止柱子被化学污染，缺点是多数保护柱影响色谱柱的柱效，特别是在用微柱时，常用的是普通自装填料的保护柱。
但是现在由于技术的进步，也出现了一些更加进步的保护住。不仅能够满足过去本来保护住应有的特点，又增加了新的技术特点，使得保护住更加符合时代的要求。其特点是，高质量、高效填料、增加分析柱效、对脏样品载荷能力大，能延长保护柱寿命，手可拧紧接头，可换芯式设计， 能采用各种不同的填料，主要适用于非常脏非常复杂的样品本底。
4.2 色谱柱的清洗
由于色谱柱是液相色谱仪这个精密仪器的重要一个组成部分，因此对于他的清洗要根据相关的规定进行操作，并且有相关的清洗液体，只有严格按照规定进行清洗，才能保证色谱柱的清洗特别的干净，从而不影响下一次的使用，不影响下一次的检测效果。
4.3 色谱柱的存放
色谱柱由于本身的特性决定了它存在的环境。为了减少空气和周围环境对他的污染，以及增加色谱柱的使用次数，在正确清洗之后，要把它放在规定的地方， 这里的空气温度湿度都是有严格规定的， 只有这样才能保证色谱柱在下次使用的有效性和检验结果的真实性。
5 色谱柱的常见故障及排除
5.1 柱压过高
可能是微粒堵塞，柱床膨胀，不可逆吸附，细菌生长等造成的。也有可能是系统反压问题，例如阻尼器堵塞，进样器堵塞，管路或连接口堵塞，在线过滤器不干净，压力传感器不准确等。
5.2 柱效低
可能是色谱柱被污染、过滤片部分堵塞、色谱柱内的死体积造成，例如流动相pH 值或者组成不合适造成固定相损失，流动相急剧变化造成固定相物理损坏，机械振动造成固定相产生裂缝，柱床收缩或干枯。
5.3 重复性差、不出峰、回收率低
在使用仪器进行检测的时候，是会受到色谱柱的效果影响的。在液相色谱仪中，要想保证得到的效果好，就需要保证色谱柱的使用效果好。但是现在的色谱柱更多会出现重复性差、不出峰、回收率低的问题，这样就会导致在色谱柱上回收的信号时不准确，有缺失的。并且得到的结果也会是偏差很大的，因此需要在色谱柱回收信息的过程加以重视并改进色谱柱， 以便保证结果的可靠性。
6 结束语
对于液相色谱仪来说，它在每一个行业都处于十分重要的位置，因为通过它可以检测出水质的好坏。但是这种高科技的仪器，通常也是一台十分精密的仪器。如果不能保养好，就会给它在成一定的损害，就会影响它的使用寿命以及仪器的见擦结果。所以在使用过程中，要严格按照使用说明来进行，并且在每一次受用完成后，都要清洁保养。
【参考文献】
篇2
【关键词】高效液相色谱 维护 保养 故障分析
高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是以经典的液相色谱为基础，它是以高压下的液体为流动相的色谱过程。它所用的固定相粒度小，有传质快、柱效高等特点。高效液相色谱法（HPLC）是60 年代后期发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。由于液相色谱具有高分辨率、高灵敏度、速度快、流出组分易被收集等优点，因而被广泛应用到医药分析、环境监测、食品分析等各种领域。
在使用液相色谱中，会出现各种各样的问题，现将在使用过程中的维护及常见故障解决方法介绍如下：
1 维护与保养
1.1 环境条件
液相色谱仪应放置在有足够空间的、稳固的、无振动的水平台面上，房间内应无灰尘、无辐射、无磁场、有排风设施。实验室温度应控制在10-30℃，湿度应≤80%。
1.2 开机
打开系统和工作站，检查所用流动相和色谱柱是否正确，流动相是否已经过滤排气，设置好保护压力，对系统先进行排气操作，确保系统中无气泡后再慢慢的将流速调大，以达到保护色谱柱的目的。待系统稳定后，再进行进样操作。
1.3 样品准备
由于很多样品是复杂的混合物，易堵塞、污染系统和色谱柱，因此在进入液相色谱仪之前应对样品进行预处理。可通过离心、萃取、过滤等方法将样品中难溶解的杂质或干扰物质除去。然后再用流动相将样品稀释成适当的浓度进样。此外，可在色谱柱前加一预柱，进一步保护色谱柱不被污染，延长使用寿命。
1.4 关机
液相色谱仪使用完毕后，可先将检测器关掉，以延长灯寿命。如果流动相中含有缓冲盐，应先用5%的甲醇水溶液冲洗系统30分钟，然后再用甲醇冲洗20分钟后停流速、关机。
1.5 泵
泵的密封圈是泵最容易损坏的一个部件，密封圈的损坏会导致系统工作不正常。可以根据泵的使用频率以及使用情况来更换泵的密封圈。密封圈的寿命主要跟密封圈的材质，压力大小以及缓冲液有密切关系。因此每天实验结束后要把泵中的缓冲液洗干净以防止盐沉积，同时使用过滤滤芯，以防止因泵堵塞导致压力过大而烧坏电机。
2 常见故障解决方法
2.1 系统压力异常
2.1.1无压力
开泵后系统无压力显示。可能的原因有：泵头内有空气；溶剂瓶内无流动相；单向阀堵塞；系统漏液；压力传感器损坏；柱塞杆折断。
排除方法：将溶剂瓶内加满流动相，打开排气阀排气，使系统管路中无气泡存在；单向阀堵塞或污染后，可将其拆下置异丙醇中超声清洗，然后再重新装入；如有漏液，重新接管路排除；如果是压力传感器或柱塞杆折断导致无压力，则需更换新的配件。
2.1.2柱压持续偏高或不断上升
开泵后柱压持续偏高或不断上升，可能的原因有：流动相使用不当；单向阀脏；保护柱或色谱柱筛板脏；线路过滤器堵塞。
排除方法：确保使用的流动相正确；将单向阀拆下置异丙醇中超声清洗；如果保护柱脏了，需更换新的，如果色谱柱筛板脏，需将色谱柱筛板取下用异丙醇清洗后重新装入；线路过滤器导致压力高需更换新的。
2.1.3压力波动
开泵后压力波动较大，超出正常范围，可能的原因有：泵头内有气泡；单向阀脏或损坏；柱塞杆密封圈磨损严重。
排除方法：打开排气阀将气泡排除；用异丙醇超声清洗单向阀或更换新的；更换新的柱塞杆密封圈。
2.2 漂移问题
漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移
2.2.1基线漂移
液相色谱仪刚启动时，基线容易发生漂移，平衡一段时间后漂移现象就会消失，如果使用缓冲溶液或缓冲盐，或在低波长下平衡时间相对增加，这都是正常现象。若实验过程中发现基线漂移，则可能是由以下原因引起：
（1） 柱温波动
即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。
排除方法：控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器。
（2） 流动相不均匀
流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。
排除方法：使用HPLC 级的溶剂，高纯度的盐和添加剂，流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。
（3） 流动相污染、变质或由低品质溶剂配成变化
排除方法：检查流动相的组成；使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。
（4） 样品中有强保留的物质
样品中有强保留的物质（高K 值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
排除方法：使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
（5）检测器没有设在最大波长处
排除方法：这时只需要将检测器调至最大波长处即可解决问题。
2.2.2保留时间漂移
保留时间的改变是很多液相色谱使用者常碰到的问题。其包括了保留时间增大和减小，它的产生与很多原因有关。保留时间的漂移往往由柱老化引起，而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上，保留时间漂移的多半原因是由于不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解） ，色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。保留时间漂移的几种最常见的原因和解决方法如下：
（1）系统不平衡
应使用充足的时间来平衡整个系统，特别在色谱柱第一次使用离子对试剂时，要有充足时间和流动相体积来平衡色谱柱，每次开机使用平衡时间至少0.5-1h，在改变流动相是也需要0.5h来重新平衡柱子。
（2）温度变化
温度变化可引起保留时间漂移，这时应设定一个稳定的恒定温度。当室温较所需温度大时应适当提高柱温。
（3）色谱柱被污染
由于色谱柱被污染导致保留时间漂移时，更换新的色谱柱子即可解决保留时间漂移的问题。
（4）梯度滞后时间设置不正确
检验泵和流路系统维护记录，确定系统最后使用之前有无调整。如果有变化，重新计算新的梯度滞后体积。
（5）流动相组成
流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等，应防止流动相由于蒸发、反应等原因造成的变化。
3 峰形异常
3.1 前延峰和拖尾峰
导致前延峰和拖尾峰的原因有：保护柱或色谱柱筛板脏；色谱柱柱头塌陷；柱外效应；可能有干扰峰；样品过载；溶解样品的溶剂选择不当。
排除方法：如果保护柱脏了，需更换新的，如果色谱柱筛板脏，需将色谱柱筛板取下用异丙醇清洗后重新装入；色谱柱柱头塌陷应更换新的色谱柱；应确保各个接头连接良好，无柱外效应；确保无干扰峰；减少样品的进样量或降低样品浓度；尽量选用流动相溶解样品以排除溶剂效应。
3.2 分叉峰
导致分叉峰的原因有：保护柱或色谱柱筛板脏；色谱柱柱头塌陷；柱外效应；可能有干扰峰；溶解样品的溶剂选择不当。
排除方法：如果保护柱脏了，需更换新的，如果色谱柱筛板脏，需将色谱柱筛板取下用异丙醇清洗后重新装入；色谱柱柱头塌陷应更换新的色谱柱；应确保各个接头连接良好，无柱外效应；确保无干扰峰；尽量选用流动相溶解样品以排除溶剂效应。
3.3 峰展宽
导致峰展宽的原因有：样品过载；流动相粘度高或流速低；柱外效应。
排除方法：减少样品的进样量或降低样品浓度；增加柱温箱温度使流动相粘度降低或增加流速；确保各个接头连接良好，无柱外效应。
3.4 鬼峰
出现鬼峰的原因有：进样阀中有残留；样品脏；柱子未平衡好；流动相不洁净。
排除方法：用合适的溶剂反复清洗进样阀，确保无残留；将样品进行预处理，确保无干扰物质；给柱子充分的平衡时间；确保配制流动相的试剂（包括水）都是干净无污染的。
用上述方法解决实际工作中遇到的问题收效良好，做到了有的放矢，有问题能够得到及时解决，而且延长了仪器的使用寿命，使仪器的性能得到了最大限度的发挥。保证了检测的准确性和稳定性，降低了检测成本。
参考文献
[1] 刘春伟. 高效液相色谱仪使用中常见故障及对策[J].商品与质量.2012，5：326
[2] 王娜，王海娇，岳明新，赵恩好，刘琦. 高效液相色谱常见问题分析与对策[J].辽宁化工，2008，37（4）：277-280
[3] 黄加龙.高效液相色谱仪使用中常见问题及解决方法[J]饲料工业，2006，27（15）：34-35
[4] 陈莲，高洪，肖啸.饲料工业. 高效液相色谱仪使用过程中中常见问题及解决方法[J].饲料工业，2005，26（14）：42-44
篇3
【关键词】 高效液相色谱法 食品 人工色素 技术研究
食品中的人工合成色素为化学合成方法所制备的，以苯、甲苯、萘等化工产品作为原料，经一系列反应合成制得。目前食品中合成色素滥用现象严重，食品合成色素检测已经成为食品检查工作中一项重要内容[1]。本次研究中建立了高效液相色谱法对食品中人工色素进行了检测，现汇报如下。
1 材料与方法
（1）仪器与试剂
实验中所需仪器为我实验室现有高效液相色谱仪，电子天平、旋涡混合仪、超声波清洗机、恒温水浴锅、高速离心机、纯水器。
实验试剂包括：甲醇、乙腈均为色谱纯，乙酸铵、乙酸铅为分析纯，日落黄（0.500mg/mL）、柠檬黄（0.500mg/mL）、苋菜红 （0.500mg/mL）、亮蓝（0.500mg/mL）、胭脂红（0.500mg/mL）、赤藓红（100mg/L）以及诱惑红（100mg/L）标准品。
（2）样品来源：本次实验中样品来源于周边超时、零售摊点以及菜市场食品。
（3）方法：（a）标准品配制：将上述7种标准品经浓度为20%的甲醇进行溶解制成质量浓度为100mg/l的混合标准储备液，在4℃条件下保存。将制备好的混合标准储备液经浓度为20%的甲醇稀释成不同浓度（0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0mg/l）的标准系列溶液，先用现配。（b）色谱条件：实验中所需色谱柱为Venusil MP C18柱，柱温设定为30℃，流动相A相为甲醇乙腈，B相为浓度为0.02mol/l的乙酸铵溶液，流速为1.0ml/min，梯度洗脱：0-12.0 min时A相5%，12-30min时A相自5%-35%，30-35min时A相自35%-98%，35-35.1min是A相在98%-4%，35.1-55min时A相维持5%。进样量为10ul，检测波长分别为：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄为254nm，诱惑红、赤藓红为500nm，亮蓝为600nm。分别展开线性关系考察、加样回收实验、精密度实验。（c）样品处理：所取样品进行处理后取上清液，在10ml的离心管中在10000r/min条件下离心操作5min，经0.45微孔滤膜过滤后备用。
2 结果
2.1 线性关系考察结果
本次试验中7种人工合成色素0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0mg/l不同浓度溶液经1.3.2色谱条件进样检测，以峰面积为纵坐标，以色素浓度为横坐标，的线性回归方程，结果发现，色素浓度在0.5-20.0mg/l时存在良好线性关系，r>0.9991，详见表1。
2.2 加样回收实验结果和精密度
本次实验中在样品中分别添加各色素含量为3、15、40mg/kg的标准品，以1.3.2所示色谱条件进样检测，外标法进行定量，计算回收率和RSD值，结果发现，7中色素加样回收率在78.6%-100.7%之间，RSD值在0.2%-4.3%之间，详见表2。
3 讨论
近几年的实验研究发现，高效液相色谱法在药学、食品等诸多领域均发挥了重要作用，为含量测定、质量控制等工作提供了可靠的参考依据[2]。本次实验中建立的高效液相色谱法在7种食品人工合成色素检测中，色素浓度在0.5-20.0mg/l之间时存在良好线性关系，回收率在78.6%-100.7%之间，相对较高， RSD值在理想范围内，精密度良好，检测效果理想，在大批量样品中多种色素检测中可发挥重要作用，值得对其给予重视并推广，为今后的食品安全检验工作提供参考依据。
参考文献
篇4
关键词：高效液相色谱仪自动进样器校准方法；不确定评定；测量方法
一、高效液相色谱仪自动进样器校准方法
1.高效液相色谱仪自动进样器校准方法的引进条件
众所周知，测量始终是分析某物质不可避开的方法，并且也是确定物质各项指标是否合格，以及各成分，还有个成分之间如何发生反应以及之后的各项指标的重要方法，但是单一的测量方法存在着很多的不足之处，而在测量之中任何一点小的纰漏都有可能造成最后的巨大损失，所以在现实的严峻条件之下，为了更好更全面地发挥测量的效果和应有的准确度，引进了高效液相色谱仪自动进样器校准方法。在此之前，国际标准化组织（ISO）曾于1993了《测量不确定度表示指南》，这样的标准曾是国际上用于测评物品的最低准则，而高效液相色谱仪自动进样器校准方法也是在严格依据指南上的说明来进行创造发明的方法，也正是因为这样的标准使得高效液相色谱仪自动进样器校准方法在起点之处的效果就高于普通的校准方法。此外，国家质量技术监督局也曾于1999年批准颁布过JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》。而这之中德CNAL/AC01∶2005《检测和校准实验室认可准则》（等同于ISO/IEC17025∶2005）中5.4.6对有关不确定测量的相关方法进行了明确的规定，包括对实验室中应有的用于测量的设备配套设施，还有在测量之中应该遵循的程序守则。也正是因为这种测量效果的有效性和权威性，在基本的测量方法被普及之后，各大报告中均要求在最后提交的时候附上关于高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定评定的评价结果，举一个明显的例子，在参加能力验证和比对中，就要求附上不确定评定的最后结果。
2.高效液相色谱仪自动进样器校准方法的具体操作原理
高效液相色谱仪自动进样器校准方法一般采用的方法，是根据液体的最小浓度来进行差量检测，而根据国家的的对于液体的最新研究显示，液体中的浓度的测量时液体中最敏感的地方，其敏感度超过了所有的其他指标，是能够准确得出测量结果的标杆，也因此成为了测量的最重要的指标之一。在测量中，利用高效液相色谱仪自动进样器校准方法来进行基本的测量，然后再通过对测量的结果进行分析合成，就能得到初步的结果。试验条件之下对液体的最小浓度的检测，在达到了一个极点之后，整体上就会成为一个饱和的状态，在这种饱和状态之下的液体很难检测出所想要的数据和效果，所以在液体到达饱和状态之前就必须要能够测量出有效地的结果，这就对测量的时间效应有了严格的要求，而高效液相色谱仪自动进样器的优势之一就是其对时间的把握度能够高于普通的仪器，这样不仅能够节省相应的时间，也能够在保证试验效果的同时，尽量避免对检测物品的浪费，（因为一旦物品至于空气之下，则会很开与空气产生化学反应，在这样的化学反应之下，不仅是液体的纯度会发生变化，需要检测到的液体的相关数据也会因为化学反应产生质的变化，这样便会导致最后的测量结果出现差错）
除此之外，最新发表的欧洲《质量控制文件》中也提供了具体的供高效液相色谱仪自动进样器校准方法如何操作和具体的流程做出了详细的解释和说明。在参考控制文件之中，提出了通过高效液相色谱仪自动进样器校准方法在进行测量的时候，应该对被检测的液体的体积，残体，密度等进行具体的测量，而在测量之后还应该进行至少5次以上的重复测量，在这样的测量结束之后，建立相关的体积误差，残液留样的数据分析对比，并且通过重复性检测建立复式校准方法，最后保证经评定之后的效果进样体积误差的相对扩展不确定度为1.8%。通过具体的标准对检测结果进行限定，不仅能够提高检测的效率，还能减少成本的使用你，是一个利益双得的两全之法，同时这样的检测结果标准规定也是为之后的高效液相色谱仪自动进样器的校准进行其他类似的校准时准去的依据保证和方法经验的提供。
二、高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定的具体效果演示说明
1.测量果冻中环己基氨基磺酸钠中对高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定的使用
环已基氨基磺酸钠俗称甜蜜素，是一种人工合成的无营养性食品甜味剂。因长期存在甜蜜素是否具致癌性的争议，英国、美国、欧盟、加拿大等国家和地区的食品中甜蜜素的添加均规定了允许的含量，日本则不允许使用。近年来，我国也将甜蜜素列入为限制使用的食品添加剂。它的基本性质效果是能够在水中微溶，但是在甲醇、乙醇、氯仿或二氯甲烷等强酸性物质中几乎不溶。适当的使用中环己基氨基磺酸钠可以达到对产品增味的效果，但是一旦使用过量，就可能会造成严重的急性过敏反应，或者是严重的腹泻，更甚者甚至会威胁人的生命安全，虽然现代医疗技术已经找到相应的方法能够及时处理这样的情况，但是如果一旦事情发生的太过于迅速或者用量过大，就很难能够避免意外情况的发生，因此，对环己基氨基磺酸钠应该在果冻中使用多少何其的具体效果和可能出现的情况进行测量就有了战略性的意义。
2.测定果冻中环己基氨基磺酸钠中使用的具体参数
检测中所需要的化学数据建立在基本的数学模型之上，而使用到的基本公式就是
CX = × ×100% （1）
式中：CX――供试品的含量；
AR――对照品的峰面积
AX――供试品的峰面积
WR――对照品浓度（g）
WX――供试品浓度（g）
这个基本的公式适用于计算产品中检测出的结果时的对具体的产品数据进行分析的时候使用，是在检测之后需要用到的工具。
检测之前需要用到的工具包括电子天平，特定的试管若干，同时还应该注意的是对室内温度的控制，一般在二十五摄氏度左右，同时控制液体在液箱中的流速大概为1.0ml/min ，在做好了基本的设施准备之后，应该注意的就是在实验过程中进行数据的准确计量。在实验中会用到的数据一般有：波长，样品和对照样品的量度，样品和对照样品的浓度，两种样品的平均峰面，对照样品的实际浓度和在掺水之后的产品变量的浓度，供应品的含量，其中对对照品纯度的控制要在：99.5%以内 ；对样品中含水量的控制要在：4.9%以内。在计算之后，除了基本的检查核算以确保测量的结果无误，还应该进行合成标准不确定度的计算，一般来说这样的计算主要是为了计算重度，举一个简单的例子，在各项条件符合标准的状况下，合成标准不确定度的计算结果应该是类似于下面的结果：
uc（Cx）=
= =0.021
uc（CX）=100.41%×0.021=2.1%
最后，在计算结果的基础上扩展不确定度计算，在进行完最后一步之后，按照标准流程提交报告。
参考文献：
[1]王冠杰，季士委，田利，曹守春，邹健，杨洋.高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定[J].化学分析计量，2013，05：69-71.
篇5
【关键词】高效液相色谱法；对乙酰氨基酚注射液；有关物质
文章编号：1009-5519（2008）17-2556-02 中图分类号：R9 文献标识码：A
对乙酰氨基酚注射液为一种常见的解热镇痛药，对氨基酚为对乙酰氨基酚注射液生产过程中的中间体和储存过程中的水解产物，虽也有解热镇痛作用，但其毒性较大，应予以控制。现行质量标准未对其有关物质进行控制，为此，我们采用HPLC法测定对乙酰氨基酚注射液中有关物质[1，2]，方法准确，简便，快速。
1 实验部分
1.1 仪器与试药：Waters 2695系列高效液相色谱仪，Waters 2996 DAD检测器；色谱柱为Alltima C18柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）。对氨基酚对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号100802-200501）；对乙酰氨基酚注射液（苏州-欣凯制药有限公司，051116，040914，050627）；甲醇为色谱纯；水为Millipore-Q超纯水系统制得超纯水；其余试剂均为分析纯。
1.2 方法与结果
1.2.1 色谱条件与系统适应性试验：色谱柱为Alltima C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为0.05 mol/L醋酸铵溶液-甲醇（85∶15），柱温：35 ℃，Waters 2996 DAD检测器，流速1.0 ml/min，取供试品溶液及对照品溶液各10 μl注入液相色谱仪。理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不低于2000，对乙酰氨基酚峰与对氨基酚峰的分离度应符合要求。
1.2.2 测定方法：取本品，加流动相制成每1 ml中含1.25 mg的溶液作为供试品溶液（临用新制）；精密量取1 ml，置100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另精密称取对氨基酚对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1 ml中含2.5 μg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相测定法(中国药典2005年版二部附录ⅤD)测定，用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.05 mol/L醋酸铵溶液-甲醇（85∶15）为流动相；检测波长为245 nm。理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不低于2000，对乙酰氨基酚峰与对氨基酚峰的分离度应符合要求。精密量取对照溶液10 μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成份色谱峰的峰高约为满量程的10%；再准确量取供试品溶液，对照溶液和对照品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，按外标法以峰面积计算（按对乙酰氨基酚标示量计算）。
1.2.3 测定波长的选择：本品经破坏实验的样品经二级管阵列检测器测定，通过等高图分析，在245 nm处已知杂质对氨基酚吸收值较大，其余杂质也检出较多，EP 5也采用245 nm测定，综上所述本方法选择245nm作为检测波长。
1.2.4 专属性考察：精密量取空白辅料溶液，空白溶剂，供试品溶液及对照溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。空白辅料溶液，空白溶剂均无干扰。
取本品1 ml，置100 ml量瓶加流动相稀释至刻度，摇匀，置强光（照射度为4500±500LX）下照射72小时，作为光解样品；取本品1 ml，加入5 mol/L的盐酸溶液5ml，电炉上缓缓加热置沸多次，冷却后用5 mol/L氢氧化钠溶液中和后，转移至100 ml量瓶，加流动相稀释至刻度，作为酸解样品；取本品1 ml，加入5 mol/L的氢氧化钠溶液5 ml，电炉上缓缓加热置沸多次，冷却后用5 mol/L盐酸溶液中和后，转移至100 ml量瓶，加流动相稀释至刻度，作为碱解样品；取本品1 ml，加入过氧化氢溶液20 ml，在室温放置8小时，转移至100 ml量瓶，加流动相稀释至刻度，作为氧化降解样品；取本品1 ml，100 ℃水浴加热8小时，冷却后转移至100 ml量瓶，加流动相稀释至刻度，作为热解样品。
按“1.2.2”项制备供试品溶液并测定。该法能有效检测出各破坏性试验产生的降解物，且降解产物峰均能与主成分峰达到基线分离，专属性较好。
1.2.5 对氨基酚的线性范围及检测限：精密称取对氨基酚对照品11.99 mg 置50 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，精密量取上述溶液1 ml置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，精密量取1 μl，2 μl，5 μl，10 μl，20 μl，40 μl，80 μl进样，记录色谱图并进行线形回归处理。结果线性方程为y＝1112.5862x-1087.5862，相关系数r＝0.9999。结果表明对氨基酚在2.398～191.84 ng范围内呈良好的线性关系，最低检测限1 ng（S/N=3）。
1.2.6 回收率试验：精密称取对氨基酚12.54 mg置50 ml量瓶中，加流动相定容，精密量取样品1 ml，置100 ml量瓶中，再分别加入上述对照品溶液0.8 ml，1.0 ml，1.2 ml加流动相定容，分别进样10 μl，每个浓度各3次。平均回收率为99.8%，RSD=0.91%。
1.2.7 重复性试验：按“1.2.2”项方法平行制备对氨基酚对照品溶液及供试品溶液6份，分别进样10 μl，以对氨基酚峰面积进行精密度考察，结果对氨基酚对照品溶液的RSD=0.48%，供试品溶液中对氨基酚峰的RSD=0.52%。
1.2.8 精密度考察：取供试品溶液连续进样6次，分别记录对氨基酚峰面积，结果RSD=0.39%，表明仪器精密度良好。
1.2.9 样品的测定：按“1.2.2”项方法，对3批样品进行有关物质的检查，对氨基酚的量分别为0.10％，0.11％，0.18％；面积归一化法计算其他杂质总量分别为0.02％，0.02％，0.03％。
2 讨论
对氨基酚为对乙酰氨基酚的降解产物，有一定不良反应，在制剂的影响因素试验，稳定性考察及质量研究中，应将其作为特殊杂质进行检查。实验对对乙酰氨基酚注射液中有关物质检查的条件进行了选择和方法学验证。结果表明文中方法专属性强，稳定性好，操作简便，能有效检出对乙酰氨基酚注射液中的相关杂质，为对乙酰氨基酚注射液的质量控制提供了实验依据。
参考文献：
[1] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典2005年版二部[S].北京：化学工业出版社，2005.172.
篇6
关键词：栀子根；齐墩果酸3-乙酸酯；含量测定；高效液相色谱法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.11.020
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）11-0051-03
栀子根为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥根及根茎，主产于湖南、浙江、四川、江西、重庆、湖北等省。栀子根具有清热解毒、凉血之功效[1]。民间主要用于黄疸性肝炎、肾炎水肿、感冒高热、出血吐血等病症的治疗，在《福建民间草药》中称作为栀子花根[2]。栀子根是治疗丙型肝炎的中药新药――松栀丸方中的君药，主含齐墩果酸3-乙酸酯。因齐墩果酸3-乙酸酯无对照品，不能直接测定其含量，为控制栀子根的内在质量，本试验建立将栀子根中齐墩果酸3-乙酸酯水解为齐墩果酸后，再用高效液相色谱仪测定齐墩果酸
基金项目：国家重大科技专项（2005AA2Z3E40）；长沙市科技计划重点项目（K0803003-31）
通讯作者：李红，Tel：13973193967，E-mail：
含量的方法，为寻求栀子根最佳药材资源奠定基础，为确保松栀丸质量提供试验数据。
1 仪器与试药
LC-10AT型高效液相色谱仪（包括岛津LC-10AT vp泵， SPD-10A vp紫外检测器，LC-工作站），DK-98-Ⅱ型电热恒温水浴锅（天津泰斯特仪器有限公司），WGLL-125BE型电热鼓风干燥箱（天津泰斯特仪器有限公司），TU1810型紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），AB135-S型电子天平（0.01 mg，METTLER TOLEDO），KL-UP-Ⅲ-20型艾柯超纯水机（成都唐氏康宁科技发展有限公司）。
齐墩果酸对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号110709-200505）；甲醇（色谱纯，湖南汇虹试剂有限公司，批号20100727），其他试剂均为分析纯，水为自制超纯水。
栀子根来自湖南醴陵，经湖南中医药大学药用植物资源教研室周日宝教授鉴定为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥根。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
固定相为WondaSilTM C18键合硅胶柱（4.6 mm×250 mm，
5 ?m），流动相为甲醇-0.4%冰乙酸（81∶19），流速为1 mL/min，柱温为30 ℃，检测波长为210 nm。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取齐墩果酸对照品12.62 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液，浓度为0.504 8 mg/mL。
2.3 供试品溶液制备方法的优选
2.3.1 不同提取溶媒的比较 取本品粉末（过三号筛）约1 g 4份（每2份作为一个平行样），精密称定，分别置具塞锥形瓶中，一份精密加入乙醇50 mL，另一份精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，分别用乙醇和甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液25 mL，加盐酸2 mL，分别加热回流水解1 h，水解液加水20 mL，置80 ℃水浴挥去乙醇（甲醇），至约20 mL，用二氯甲烷提取3次，每次20 mL，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，分别转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得。
精密吸取上述样品溶液20 ?L，注入高效液相色谱仪中，测定齐墩果酸峰面积，平行3次。结果，乙醇为溶媒时的平均含量为0.075 4%，甲醇为溶媒时的平均含量为0.150 6%。甲醇优于乙醇，故选用甲醇提取样品中齐墩果酸3-乙酸酯。
2.3.2 不同酸水解的比较 取本品粉末（过三号筛）约1 g 4份（每2份作为一个平行样），精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25 mL，一份滤液加盐酸2 mL，另一份加硫酸2.6 mL，分别加热回流水解1 h，水解液加水20 mL，置80 ℃水浴挥去甲醇至约20 mL，用二氯甲烷提取3次，每次20 mL，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，分别转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得。
精密吸取上述样品溶液20 ?L，注入高效液相色谱仪中，测定齐墩果酸峰面积，平行3次。结果，盐酸、硫酸水解所得齐墩果酸平均含量分别为0.144 5%、0.000 1%，硫酸水解在齐墩果酸相应位置几乎没有峰，盐酸水解的含量为0.144 5%。盐酸明显优于硫酸，故选用盐酸水解样品中齐墩果酸3-乙酸酯。
2.3.3 不同提取时间的比较 取本品粉末（过三号筛）约1 g 8份（每2份作为一个平行样），精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，分别加热回流2、4、6、8 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液25 mL，加盐酸2 mL，加热回流水解1 h，水解液加水20 mL，置80 ℃水浴挥去甲醇至约20 mL，用二氯甲烷提取3次，每次20 mL，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，分别转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得。
精密吸取上述样品溶液20 ?L，注入高效液相色谱仪中，测定齐墩果酸峰面积，平行3次。结果提取2、4、6、8 h的齐墩果酸平均含量分别为0.139 2%、0.181 2%、0.181 0%、0.165 7%。综合结果考虑提取时间为4 h最佳，随着时间的增加，含量没有明显升高，反而降低。
2.3.4 不同酸用量的比较 取本品粉末（过三号筛）约1 g 6份（每2份作为一个平行样），精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，加热回流2 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的量，摇匀，滤过，取续滤液25 mL，分别加盐酸1.0、2.0、3.0 mL，同上水解、萃取、定容、测定。结果齐墩果酸的平均含量分别为0.138 1%、0.138 4%、0.138 2%。酸用量对试验结果无显著影响，综合考虑，盐酸用量以2 mL为佳。
2.3.5 不同水解时间的比较 方法同“2.3.4”取本品粉末约1 g 6份（每2份作为一个平行样），分别水解2、3、4 h，再同上萃取、定容、测定。结果齐墩果酸的平均含量分别为0.153 2%、0.156 8%、0.156 6%。可见水解时间不是影响齐墩果酸含量的主要因素，水解时间延长，含量不会明显增加。故水解时间可选为2 h。
2.3.6 小结 从以上供试液制备方法的单因素考察中可以看出，提取溶媒、酸种类和提取时间是影响含量的主要因素，酸浓度和水解时间都不能明显的影响栀子根中检测到的齐墩果酸含量。为节省整个供试液的制备过程，考虑将提取和水解过程合并。制备过程如下：取本品粉末（过三号筛）约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入（4100）的盐酸甲醇溶液50 mL，称定重量，加热回流4 h，放冷，再称定质量，用（4100）的盐酸甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液25 mL，加水20 mL，置80 ℃水浴挥去甲醇至约20 mL，用二氯甲烷提取3次，每次20 mL，合并二氯甲烷液，置75 ℃水浴上蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系考察
精密吸取浓度为0.504 8 mg/mL的齐墩果酸对照品溶液1.0、2.5、5.0、7.5、10 mL，分别置10 mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液各20 ?L进样，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以齐墩果酸进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，并对其进行线性回归，得回归方程Y=10 262 465.24X-50 224.9， r=0.999 8，表明齐墩果酸在1.009 6～10.096 ?g （折算为齐墩果酸3-乙酸酯在1.102 5～11.025 ?g）范围内质量与峰面积呈良好线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取齐墩果酸对照品溶液20 ?L，注入高效液相色谱仪，连续进样6次，以齐墩果酸峰面积平均值与标准差计算RSD=1.15%，结果表明精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取样品供试液20 ?L，按上述方法于0、2、4、6、8、12、24 h测定，以齐墩果酸峰面积平均值与标准差计算RSD=0.77%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.7 重复性试验
精密吸取栀子根样品6份，按供试品溶液的制备方法制备样品供试液，精密吸取样品供试液20 ?L，按上述色谱条件测定，外标两点法计算含量，平均含量为0.071%，RSD=0.82%。
2.8 加样回收率试验
取已知含量（0.71 mg/g）栀子根约1.0 g，精密称定，加入浓度为0.68 mg/mL齐墩果酸溶液（相当于齐墩果酸3-乙酸酯0.743 mg/mL）1.0 mL，相当于栀子根中齐墩果酸含量（1∶1），平行共6份。按“2.3.6”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液20 ?L，按上述色谱条件测定，计算含量与回收率。结果见表1。
2.9 3批醴陵栀子根中齐墩果酸3-乙酸酯含量测定
取3批栀子根，按“2.3.6”项下方法制备供试品溶液，将供试品溶液和对照品溶液用0.45 ?m微孔滤膜滤过后，精密吸取20 ?L，分别注入高效液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件，分别测定齐墩果酸峰面积，色谱图见图1。按外标法计算齐墩果酸的百分含量（按干燥品计），再乘以系数1.092 027 8，结果表明，醴陵栀子根中齐墩果酸3-乙酸酯平均含量为0.106%， RSD=3.72%。见表2。
注：A.对照品；B.供试品
3 讨论
因栀子根中含有的齐墩果酸与熊果酸为同分异构体，二者极性相近，分离难度较大。笔者曾经试验过用甲醇-乙腈-0.4%冰乙酸溶液（72∶13∶15）[1]、甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（90∶10∶0.03∶0.06）[3]、甲醇-水（90∶10）[4]、甲醇-水-冰乙酸（89∶11∶0.2）[5]、乙腈-甲醇-0.3%磷酸（60∶30∶10）[6]等流动相，结果其分离效果均不佳。而选择甲醇-0.4%冰乙酸（81∶19）为流动相时，齐墩果酸与熊果酸能够分离完全，可以满足测定要求。
笔者对萃取溶剂曾比较过二氯甲烷和三氯甲烷，发现二者的含量没有明显差异。从经济性和溶剂毒性等方面综合考虑，最后选定用二氯甲烷作为萃取溶剂。
栀子根依法提取、不水解，测定，色谱图中未见齐墩果酸峰，而加齐墩果酸对照品后的样品，在43.307 min可见齐墩果酸峰，因此，栀子根在该取样量、定容量、进样量及仪器灵敏度的条件下，未检测出齐墩果酸。齐墩果酸3-乙酸酯又称齐墩果酸醋酸酯[7] ，但称齐墩果酸醋酸酯（与C3羟基形成的酯）易与齐墩果酸乙酯（与C17羧基形成的酯）名称混淆，所以，本文叫更确切的名字――齐墩果酸3-乙酸酯。
在该色谱条件下，齐墩果酸的出峰时间大约在40 min，所有峰都检出需要大约65 min，时间过长，为节约分析时间，更优的色谱条件还有待摸索。
参考文献：
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篇7
脱氢乙酸(dha，dehydroacetic)，别名 二乙酰基乙酰乙酸，固态呈白色或淡黄色结晶粉末，无嗅、无味、熔点108～110℃，沸点270℃，是一种低毒高效防腐、防霉剂。在酸、碱条件下均有一定的抗菌作用，尤其对霉菌的抑制作用最强。我国自20世纪70年代中期开始用于食品防腐剂至今，曾用于果汁、酱菜、腐乳、人造奶油、乳酸菌饮料、果酱等食品的防腐剂[1]。虽然它的抗菌作用是有效的，但是它的毒性较大的缺点却限制了脱氢乙酸的广泛应用。脱氢乙酸能迅速被人体所吸收，进人人体后即分散于血浆和许多器官中，有抑制体内多种氧化酶的作用。目前，脱氢乙酸的安全性受到质疑，国际上已明确禁止使用，我国在一定范围内允许其使用，但最大允许使用量为0.3g/kg[2]。目前检测脱氢乙酸的国标方法为气相色谱法[3]，前期样品处理过程涉及到有机溶剂萃取、浓缩等步骤，操作起来比较麻烦，而且脱氢乙酸还容易造成色谱峰出现拖尾现象，使得难以获得准确的定性和定量的结果[4]。应用高效液相色谱测定食品中脱氢乙酸的方法已见报道，比如采用超声萃取、氢氧化钠溶液浸泡等方法萃取月饼中的脱氢乙酸后再注射到色谱柱进行分离测定[5]。这些研究为应用高效液相色谱法测定果汁、罐头、瓶装腐乳等液态食品中的脱氢乙酸做了探索性的工作。本研究在国标gb/t 5009.1212003的基础上，通过对目前市场上广泛销售的多种液态食品中的脱氢乙酸以高效液相色谱的方法进行分析，取得了比较满意的结果，克服了气相色谱法前处理复杂以及污染性大的缺点。
1 材料与方法
1.1 实验样品、主要仪器与试剂
参加测定的样品主要包括目前市场上销售的果汁、腐乳、罐头以及酸奶。hp1100型高效液相色谱仪、紫外分光光度计(上海光谱仪器公司);快速混匀器。甲醇(hplc级，dikma公司);甲醇(分析纯，国药);碳酸氢钠(优级纯，国药);脱氢乙酸(国家标物中心);脱氢乙酸标准溶液：精密称取脱氢乙酸标准品100 mg，用甲醇定溶至100ml。再用甲醇稀释成1、5、10、15、20、30 mg/l的标准系列溶液，经0.45μm滤膜过滤。测定用水为二次蒸馏水。
1.2 样品处理
果汁和酸奶混匀后直接称取，腐乳和罐头样品需要先将固体物粉碎后再混匀。预先混匀的样品称取大约5.0g，加入到25.0ml容量瓶中，再加入10ml 2%的碳酸氢钠溶液，用双蒸水稀释至刻度，摇匀。静置10min后将上清液过0.45μm滤膜，以10μl进样器加入到液相色谱仪测定。
1.3 色谱条件
色谱柱c18(5um,250×4.60mm);柱温25℃;流动相选用甲醇0.02mol/l乙酸铵(5:95);流速1.0ml/min;进样量10ul;检测波长310nm;按照这种条件进行分析，以保留时间定性，以峰面积定量，测定样品中脱氢乙酸的浓度。
1.4 结果计算
待测样品中脱氢乙酸的含量(g/kg)=c×v×10-3/m
式中，c:样品中脱氢乙酸的浓度(mg/l);v: 样品体积(ml);m:样品质量(g)
2 结果与讨论
2.1 检测波长的确定
用紫外分光光度计对脱氢乙酸进行全波长扫描检测到两个吸收峰，在310nm处有最大吸收，在230nm处有次强吸收。在310nm处的干扰比在230nm处要小，背景吸收少，因此选择310nm作为检测波长。标准品及待检样品中的脱氢乙酸的检出峰色谱图见图1，脱氢乙酸的保留时间在8.5min左右。
2.2 流动相的选择
液相色谱柱c18分析中常用的流动相有甲醇磷酸盐缓冲溶液系统、甲醇硫酸溶液系统以及甲醇乙酸盐溶液系统。参考以前的研究结果，从流动相的本底吸收、灵敏度的影响和色谱柱的寿命等方面来考虑，本研究选择了甲醇-0.02mol/l乙酸铵(5:95)。在流动相中加入甲醇，可以提高出峰的对称性，随着甲醇量的增加，出峰时间明显加快，为了避开样品中其它成分的干扰，将甲醇的比例调整到5%时，脱氢乙酸的出峰时间较为理想，且不受杂质的干扰。
2.3 测量精密度和回收率
取同一罐头样品10份，每5份添加同一个浓度的脱氢乙酸标样，分别进行hplc分析。从表1的结果可以看出这种方法有较好的重复性和较高的回收率，可以用来进行定量分析。
2.4 线性实验和灵敏度分析
取同一果汁样品10份，每份约5.0g，置于25ml容量瓶中，分别加入脱氢乙酸标准液(5mg/l)1ml、2ml、3ml、4ml和5ml，样品按照标准步骤处理后取10ul进入色谱柱测定，以出峰面积对脱氢乙酸浓度进行回归分析，结果表明脱氢乙酸浓度与色谱峰面积有良好的线性关系，线性相关系数为0.9993。以信噪比(s/n)为3测得各成分的最低检出限为0.25mg/kg。
2.5 样品的测定
取目前国内销售的液态食品4种，每种选取3种不同的品牌按照前面介绍的方法进行hplc分析，结果见表2。可以看出，一般酸奶中并没有添加脱氢乙酸，因为酸奶的保质期通常只有半个月到1个月。果汁中也基本不含脱氢乙酸，而在选取的腐乳和罐头中则添加了少量的脱氢乙酸，但是都远低于最大添加量。总之，该法简便快速，可以在相应类型的食品检验中推广使用。表2 常见的4种液态食品中脱氢乙酸的含量测定结果
【参考文献】
1 骆萌. 脱氢乙酸及相关化合物生产技术. 化工中间体，2004，1(7)：31～33.
2 明立艳，张忠义. 高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸含量.食品研究与开发，2009，3(30):106～108.
3 卫生部食品卫生监督检验所. gb/t 1494194 食品中脱氢乙酸的含量测定. 北京：中国标准出版社，1994.
4 张辉珍，马爱国，梁惠，等. 高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸的方法研究. 卫生研究，2007，6(36):748～750.
篇8
摘要：目的：建立补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量测定方法。方法：采用高效液相法，选用Zorbax SB－C18分析柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇－0.01%磷酸(40∶60)；检测波长246 nm；柱温40℃。结果：补骨脂素在0.046 9～0.233 1 μg范围内线性良好，r＝0.999 9；异补骨脂素均在0.046 6～0.232 8 μg范围内有较好的线性关系，r＝0.999 9；补骨脂素加样回收率平均为98.44%，RSD为1.19%(n＝5)；异补骨脂素平均回收率为99.70%，RSD为1.99%。结论：该法简便，快速，可用于补肾酒的质量控制。
关键词：补骨脂素； 异补骨脂素； 补肾酒； 高效液相色谱法
Determination of Psoralen and Isopsoralen in Bushen Wine by High Performance Liquid Chromatography
Abstract:Objective:To establish a method for the determination of psoralen and isopsoralen in Bushen Wine by high performance liquid chromatography (HPLC). Methods:The Zorbax SB－C18 was used as the stationary phase. The mobile phase consisted of methanol－0.01% phosphatic acid (40∶60) and detective wave was 246 nm.Results:The calibration curves of psoralen and isopsoralen were linear respectively at the range of 0.046 6～0.232 8 μg(r＝0.999 9)， 0.046 6～0.232 8 μg(r＝0.999 9).Conclusion:This method is reliable and accurate， the method can be applied to separate and determine the Bushen Wine.
Key words:Psoralen； Isopsoralen; Bushen Wine; HPLC
补肾酒为新研制的内服纯中药制剂，由补骨脂，黄芪等二十几味中药组成，主要用于肾虚气亏引起的性功能障碍。补骨脂是处方中君药，其有效组分补骨脂素，异补骨脂素为主要有效组分，在质量标准的研究制订中，采用高效液相色谱法测定补肾酒中补骨脂的有效成分补骨脂素和异补骨脂素的含量，结果表明实验的重现性好，准确度高，为补肾酒的质量控制提供了可靠的方法。
1 仪器与试剂
仪器 HP1050高效液相色谱仪。
试剂 甲醇色谱纯；磷酸 优级纯；对照品:补骨脂素；批号0739－9907，异补骨脂素；批号0738－9907；供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供。
2 方法与结果
2.1 色谱分析条件色谱柱：Zorbax SBC18(250 mm×4.60 mm，5 μm)；流动相甲醇0.01%磷酸(40∶60)；柱温为40℃；检测波长246 nm；流速1.0 ml/min。
2.2 供试品溶液的制备精密量取装量项下的本品10 ml，浓缩至约4 ml，加水10 ml，混匀，用乙醚振摇提取4次(20，15，15，15 ml)，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇适量使溶解，并定量转移至10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，通过已处理好的中性氧化铝柱(100～200目，2 g，内径1.0 cm)上，收集药液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备精密称取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇溶解，制成每毫升中含补骨脂素、异补骨脂素各10 μg的溶液，即得。
2.4 空白实验按处方中药味的比例，自配不含补骨脂的群药，按其工艺制成空白制剂，再按供试品溶液制备方法制备并测定，结果空白溶液与补骨脂素与异补骨脂素对照相同保留时间处未显色谱峰，认为无干扰(见图1)。
2.5 线性关系考察分别精密量取补骨脂素对照品的甲醇溶液(0.117 1 mg/ml)、异补骨脂素对照品的甲醇溶液(0.116 4 mg/ml)各1，2，3，4，5 ml，分别置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以补骨脂素、异补骨脂素对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明补骨脂素在0.046 9～0.233 1 μg范围内线性良好，其回归方程为Y＝74 768.04X100.40，r＝0.999 9，异补骨脂素在0.046 6～0.232 8 μg范围内线性良好，其回归方程为Y＝74 939.86X＋243.40，r＝0.999 9。
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2.6 样品溶液的稳定性实验精密量取同一供试品溶液(批号040106)，进样10 μl，分别于配制后0，2，4，8，17，26 h，依法测定，结果表明，在26 h内基本稳定，补骨脂素RSD为1.16%，异补骨脂素RSD为1.70%。
a对照品 b样品 c色谱图
1.补骨脂素 2.异补骨脂素
图1 色谱图（略）
2.7 精密度实验精密量取同一供试品溶液(批号040106)，进样10 μl，重复进样5次，求得相对标准偏差RSD为0.42%，异补骨脂素相对标准偏差RSD为0.39%。
2.8 重复性实验按正文方法，对同一批号(批号为040106)样品5份进行测定，求得补骨脂素平均含量0.013 6 mg/ml，相对标准偏差RSD为1.98%；异补骨脂素平均含量0.014 1 mg/ml，相对标准偏差RSD为1.63%。
2.9 回收率实验采用加样回收法，精密量取已知含量的同一批号样品(批号040106，含量补骨脂素为0.013 6 mg/ml，异补骨脂素为0.014 1 mg/ml)5 ml，精密加入补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，按正文供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定，结果见表1～3。
表1 补骨脂素回收率（略）
表2 补骨脂素回收率（略）
2.10 样品测定按正文方法，测定十批样品，结果见下表。
表3 样品中补骨脂素与异补骨脂素含量测定结果（略）
3 讨论
3.1 流动相的确定曾采用甲醇水(80∶20)，(70∶30)，(60∶40)，补骨脂素与异补骨脂素峰为一个峰，无法分离，采用甲醇－水(40∶60)，可将二峰分离，但有拖尾现象，加入少量磷酸，以甲醇0.01%磷酸(40∶60)为流动相，分离效果好，且无拖尾现象。
3.2 本实验采用HPLC法测定补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量，其提取方法简单，分析快速，精密度高，重现性好，且空白无干扰。
参考文献
［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：411411.
篇9
[关键词] 依达拉奉；HPLC；含量测定；有关物质
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）07（c）-0061-04
依达拉奉（edaravone，3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮）为强效自由基清除剂，于2001年在日本上市，临床上主要用于治疗急性缺血性脑卒中[1]。作为第1个新型氧自由基清除剂，具有清除自由基、抑制脂质过氧化及减轻缺血脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化和再灌注损伤的作用，并可阻止脑水肿和脑梗死进展，改善因急性脑梗死所致的神经症状、日常生活活动能力和功能障碍[2]。近年来，有关依达拉奉治疗肌萎缩侧索硬化症、帕金森病等的临床研究正在进行中，抗癫痫和抗类风湿性关节炎在临床实践中被发现，其对人类多种疾病的有效性说明此药具有广阔的开发前景[3]。本研究根据依达拉奉的结构特点和化学性质，参考相关文献[4-7]，建立了高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）测定依达拉奉注射液中依达拉奉及有关物质的含量，本方法能将供试品中主峰与有关物质峰完全分离，且能有效检出依达拉奉注射液中所含杂质，具有专属性强、灵敏度高、选择性好、简便、准确等特点，可有效地应用于依达拉奉注射液的质量控制。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津LC-15C高效液相色谱仪，SPD-15C紫外-可见光检测器（日本岛津公司），CTO-15C色谱柱柱温箱（日本岛津公司），Lcsolution 15C 工作站（日本岛津公司），SIL-10AF自动进样器（日本岛津公司）；UV-2450紫外分光光度计（日本岛津公司）、AUW120D 岛津分析天平。
1.2 试药
甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。依达拉奉对照品（批号：100620-200401；含量100%，中国药品生物制品检定所）；依达拉奉注射液（福寿堂制药有限公司；规格：20 ml∶30 mg；批号：110911、110913、110915）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件和系统适用性试验
色谱柱：Cromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢铵溶液（50∶50）[用20%磷酸调节pH值至（3.5±0.1）]；流速1.0 ml/min；检测波长：239 nm；柱温：30℃；进样量：20 μl[8-9]。
2.1.1 对照品溶液的制备
取依达拉奉对照品适量，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每毫升中约含30 μg的溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备
精密量取依达拉奉注射液（批号：110911）2.0 ml，置100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。
2.1.3 空白辅料溶液的制备
按处方制备不含依达拉奉的溶液。取空白辅料溶液2.0 ml，置100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。
2.1.4 系统适用性试验
在上述色谱条件下，分别精密吸取空白辅料溶液、依达拉奉对照品溶液及依达拉奉供试品溶液各20 μl进样。理论板数以依达拉奉峰计算应不低于1000。结果提示，理论板数以依达拉奉峰计为2500，空白辅料对测定无干扰（图1）。
2.2 破坏性试验
在杂质或降解产物不能获得的情况下，对本品进行酸、碱、热、光、氧强制降解试验。
2.2.1 样品的制备
2.2.1.1 破坏前样品的制备 精密量取110911批次的依达拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶内，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
2.2.1.2 酸破坏样品的制备 精密量取依达拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶内，加入0.1 mol/L的盐酸溶液2 ml，室温下静置4 h后，加0.1 mol/L的氢氧化钠溶液适量中和，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
2.2.1.3 碱破坏样品的制备 精密量取110911批次的依达拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶内，加入0.1 mol/L的氢氧化钠溶液2 ml，室温下静置4 h后，加适量0.1 mol/L的盐酸溶液中和，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
2.2.1.4 热高温破坏样品的制备 精密量取110911批次的依达拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶内，150℃高温加热1 h后取出，放至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
2.2.1.5 光照破坏样品的制备 精密量取110911批次的依达拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶内，用流动相稀释至刻度，在强光（4500±500） Lx下放置4 h后，摇匀，滤过，即得。
2.2.1.6 氧化破坏样品的制备 精密量取110911批次的依达拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶内，加入10%的过氧化氢2 ml，室温放置2 h，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
精密量取上述样品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.2.2 破坏性试验的结果
本品在酸、碱、热条件下较稳定，但是在氧化和光条件下有明显的降解产物生成。本品溶液在酸、碱、氧化、光照及高温条件下进行破坏所产生杂质在本色谱条件下均能与依达拉奉良好分离，因此可以采用上述色谱条件测定本品的有关物质（图2）。
2.3 线性关系考察
取依达拉奉对照品，精密称定，置容量瓶中，加流动相溶解使成约0.3 mg/ml溶液，作为贮备溶液。分别精密量取上述贮备溶液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 ml置入50 ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度。精密量取上述溶液各20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积。以溶液浓度（X）为横坐标，以相应峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，回归方程Y = 151 629X+839 53（r = 0.9997）。结果提示，依达拉奉溶液在6.024～54.216 μg/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。
2.4 检出限
取依达拉奉对照品溶液（0.3 mg/ml），用流动相进行逐级稀释，按“2.1”项下色谱条件进样20 μl，以信噪比为3∶1的进样浓度为最低检出限，依达拉奉溶液的最低检出限为12.1 ng/ml。
2.5 精密度试验
精密量取110911批次的依达拉奉注射液2.0 ml，置100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取上述样品溶液各20 μl，连续测定6次，记录各次测定的主成分峰面积，按峰面积计算，RSD值为0.64%，表明本方法进样精密度良好。
2.6 稳定性试验
取“2.5”项下供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、8、12 h内进样测定，记录色谱图及峰面积，结果提示，供试品的峰面积稳定性良好，按峰面积计算，RSD值为0.81%，表明本品溶液在室温下放置12 h内稳定。
2.7 重复性试验
取110911批次的依达拉奉注射液，按“2.1”项下供试品及对照品溶液制备方法，配制6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，按外标法计算供试品的含量，结果提示，6份样品溶液的平均标示含量为100.2%，RSD值为0.90%，表明本方法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
精密量取9份已知含量的依达拉奉注射液（批号：110911；依达拉奉含量为1.503 mg/ml），每份为1.0 ml，置入100 ml量瓶中，分别精密加入依达拉奉对照品溶液（1.01 mg/ml）1.0、1.5、2.0 ml，按供试品溶液制备方法制备成高、中、低3个浓度的溶液，各3份，按“2.1”项下方法进样测定，计算回收率。结果提示，平均回收率为100.34%（n = 9），RSD值为0.55%，表明本方法准确度良好（表1）。
表1 加样回收率试验（n = 9）
2.9 供试品含量及有关物质的测定
2.9.1 供试品含量的测定
取3批依达拉奉注射液（批号：110911、110913、110915），按“2.1.1”及“2.1.2”项下方法制备对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，按外标法以峰面积计算样品中依达拉奉的含量。结果提示，3批依达拉奉注射液所含依达拉奉的含量分别为1.503 mg/ml（占标示量的100.2%）、1.505 mg/ml（占标示量的100.3%）、1.500 mg/ml（占标示量的100.0%）。
2.9.2 有关物质的测定
取3批依达拉奉注射液（批号：110911、110913、110915），分别精密量取样品2.0 ml（约相当于依达拉奉3 mg），置10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1.0 ml，置100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。按“2.1”项下条件，取对照溶液20 μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%～30%；再精密量取对照品溶液及供试品溶液各20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间的3倍，按不加校正因子主成分自身对照法计算供试品溶液中有关物质的含量。结果提示，3批依达拉奉注射液的有关物质含量分别为0.17%、0.18%、0.18%。
3 讨论
3.1 检测波长的选择
取依达拉奉对照品溶液（约30 μg/ml）及空白辅料溶液（按处方比例配制），在200～500 nm波长范围内依法进行紫外扫描，结果表明依达拉奉在239 nm的波长处有最大吸收，而辅料在239 nm处无吸收，因而选择239 nm作为依达拉奉的检测波长。
3.2 流动相的选择
本研究考察了甲醇-乙酸铵、甲醇-磷酸二氢铵两种流动相系统，结果提示，依达拉奉在两种流动相系统下峰形均良好，但是后者效果更佳，且出峰时间适宜。进一步考察甲醇和磷酸二氢铵溶液的比例，研究表明，采用甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢铵溶液（50∶50）[用20%磷酸调节pH值至（3.5±0.1）]为流动相，能够有效地检测出依达拉奉注射液中所含的有关物质。
3.3 流动相pH的选择
流动相的pH值对依达拉奉峰的出峰时间和峰形影响不大，但是影响依达拉奉与其降解杂质的分离效果，本研究将流动相的pH值调节至（3.5±0.1），依达拉奉与其降解杂质能够较好地分离。
本研究在相关文献[4-7]和制剂工艺研究的基础上，对依达拉奉注射液中依达拉奉和有关物质的含量进行了质量研究工作，采用HPLC进行了空白辅料干扰试验、破坏性试验、精密度试验、回收率试验等方法学验证工作，证明本研究建立的有关物质检查和含量测定的方法适用于依达拉奉注射液的质量监控。
[参考文献]
[1] Watanabe T，Tahara M，Todo S.The novel antioxidant edaravone：from bench to bedside[J].Cardiovasc Ther，2008，26（2）：101-114.
[2] 邓震，向云洁.依达拉奉注射液的药理作用与临床应用进展评价[J].中国医院用药评价与分析，2010，10（11）：968-970.
[3] 马利萍，孙建国，彭英，等.依达拉奉清除自由基机制及临床应用[J].中国临床药理学与治疗学，2011，16（3）：345-346.
[4] 董继胜，黄利朋，马歆茹.依达拉奉注射液质量研究[J].黑龙江医药，2010，23（3）：340-342.
[5] 汤海燕，朱正怡，叶肖栗. HPLC测定依达拉奉注射液的含量及其有关物质[J].海峡药学，2010，22（5）：77-78.
[6] 段陈平.RP-HPLC法测定注射用依达拉奉的含量[J].山西医科大学学报，2009，40（11）：1004-1006.
[7] 赵珍珍，党晓伟，赵云丽，等.RP-HPLC法测定依达拉奉的含量及有关物质[J].沈阳药科大学学报，2012，29（5）：359-363.
[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010：附录.
篇10
[关键词] α-细辛醚；β-细辛醚；高效液相色谱法；含量测定
[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）07（c）-0004-04
[Abstract] Objective To establish a method for the determination of α-asarone and β-asarone in Tongsaiyinao Oral liquid， and protect the production of quality. Methods The determination was performed by HPLC method， the chromatographic colum was Lichrospher-C18 column （250 mm×4.6 mm，5 μm）， the mobile phase was methanol-0.05% H3PO4 （54∶46）， the flow rate was 1.0 mL/min and the temperature of column was 30℃ with the detection wavelength of 257 nm. Results The linear correlation of α-asarone was 1.248-6.240 μg/mL， Y = 85 526X-1.0581， r = 0.9999， and the average recovery was 99.07%， RSD was 2.15% （n = 6）. The linear correlation of β-asarone was 2.632-13.159 μg/mL， Y = 41 727X-0.0433， r = 0.9999， and the average recovery was 101.94%， RSD was 2.83% （n = 6）. Conclusion The HPLC method is accurate and feasible. It can be used very convenient in quality control.
[Key words] α-asarone； β-asarone； HPLC method； Content determination
通塞益脑口服液是南京总医院（以下简称“我院”）的院内制剂，能够活血通络，豁痰开窍，是由石菖蒲、地龙、川芎、延胡索、泽泻和鸡血藤共6味药材组成的复方制剂，用于治疗脑梗死所致的偏瘫无力、口眼歪斜、记忆力减退等[1]，经我院多年临床研究，显示其疗效突出。该方中川芎为君药，行气活血；臣药石菖蒲能够化湿和胃、开窍豁痰、醒神益智[2]，与川芎配伍，增强了其行气开郁的作用。石菖蒲中有效成分挥发油的地位颇为重要，通过对该药的挥发油进行GC-MS分析，鉴定出其中39个成分，约占挥发油总量的90%以上，主要包括α-细辛醚、β-细辛醚、甲基异丁香酚等[3-5]。现代药理学研究表明，α-细辛醚能显著改善模型大鼠的学习记忆能力，亦能改善大鼠缺血再灌注所致的脑水肿，提高小鼠血脑通透性和耐缺氧能力；α-细辛醚能抑制乙酰胆碱酯酶，提高乙酰胆碱神经递质的水平，提示其可能具有治疗老年痴呆和益智作用的机制[6-9]。本研究重点对α-细辛醚和β-细辛醚进行质量控制，以期达到良好的结果，现报道如下：
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent1100 型高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司），KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），AE240电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），FA1604S分析天平（上海精密科学仪器有限公司）。
1.2 试剂与试药
α-细辛醚对照品（100298-201203），β-细辛醚对照品（Dr. Ehrenstorfer GmbH，纯度70.9%，C10301000），通塞益脑口服液[规格：10 mL/瓶，医院制剂文号：南制字（2011）F01015]，石菖蒲（1 g/瓶，中国食品药品检定研究院，121098-201105），磷酸（分析纯，南京化学试剂有限公司），甲醇（色谱纯，美国TIEDA），水为自制纯化水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Lichrospher-C18（4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液（54∶46）；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL；检测波长：257 nm；柱温：30℃。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品储备液的制备
2.2.1.1 α-细辛醚对照品储备液的制备 称取α-细辛醚对照品12.48 mg，精密称定，置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成124.8 μg/mL的α-细辛醚对照品储备液。
2.2.1.2 β-细辛醚对照品储备液的制备 称取β-细辛醚对照品4.64 mg，精密称定，置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成65.795 μg/mL的β-细辛醚对照品储备液。
2.2.2 供试品溶液的制备
取通塞益脑口服液5支，置于烧杯中，混匀，精密吸取5 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2.2.3 阴性对照溶液
按处方量称取不含石菖蒲的其他药味，按生产工艺制备，得阴性样品，并依“2.2.2”项中供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μL注入色谱仪，记录色谱图。结果显示，α-细辛醚、β-细辛醚的保留时间分别约为30、39 min，阴性样品对测定无干扰。见图1。
2.3 标准曲线的制备
2.3.1 α-细辛醚线标准曲线
分别精密吸取α-细辛醚对照品储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得浓度分别为1.248、2.496、3.744、4.992、6.240 μg/mL的对照品溶液，进样测定其峰面积。以各对照品浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y = 85 526X-1.0581，r = 0.9999（n = 5）。表明α-细辛醚在1.248～6.240 μg/mL内与峰面积呈良好的线性关系。
2.3.2 β-细辛醚标准曲线
分别精密吸取β-细辛醚储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于25 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得浓度分别为2.632、5.264、7.896、10.528、13.159 μg/mL的对照品溶液，进样测定其峰面积。以各对照品浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y = 41 727X-0.0433，r = 0.9999（n = 5）。表明β-细辛醚的浓度在2.632～13.159 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验
取“2.3”项中的α-细辛醚和β-细辛醚对照品溶液各1份（3.744、7.896 μg/mL），重复进样5次，记录色谱峰面积，测得α-细辛醚RSD为0.26%，β-细辛醚峰面积的RSD为0.26%。结果表明该方法的精密度良好。
2.5 重复性试验
取同一批（批号：130726）样品5份，按“2.2.2”项中方法制备供试液，依法测定，结果α-细辛醚平均含量为3.28 μg/mL，β-细辛醚平均含量为15.82 μg/mL，α-细辛醚RSD为0.67%，β-细辛醚RSD为2.37%。表明该方法重复性良好。
2.6 稳定性试验
取同一批（批号：130726）供试品溶液，分别于0、1、2、4、8 h时进样20 μL，测得α-细辛醚、β-细辛醚峰面积的RSD分别为0.32%（n = 5）、0.31%（n = 5）。表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.7 加样回收率试验
2.7.1 α-细辛醚加样回收率试验结果
精密吸取已知含量（批号：130726，α-细辛醚含量为3.28 μg/mL）的样品6份，每份2.5 mL，置于10 mL量瓶中，分别精密加入α-细辛醚储备液0.1 mL，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定，计算回收率，结果平均回收率为99.07%，RSD 为2.15%。见表1。
2.7.2 β-细辛醚加样回收率试验结果
精密吸取已知含量（批号：130726，β-细辛醚含量为15.82 μg/mL）的样品6份，每份2.5 mL，置于10 mL量瓶中，分别精密加入β-细辛醚储备液0.5 mL，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定，计算回收率，结果平均回收率为101.94%，RSD为2.83%。见表2。
2.8 含量测定
取通塞益脑口服液3个批次，按“2.2”项中方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定并计算含量，具体结果见表3。综合3批样品测定结果，确定本品每瓶含挥发油以α-细辛醚和β-细辛醚总量计不得少于100 μg（10 mL/瓶）。
2.9 薄层色谱鉴别
2.9.1色谱条件
以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（12∶1）为展开剂；以5%磷钼酸乙醇溶液为显色剂；105℃加热约5 min至斑点显色清晰。
2.9.2 溶液的制备
取本品50 mL，用石油醚（60～90℃）振摇提取3次，每次20 mL，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材1 g，研碎，加石油醚（60～90℃）50 mL室温超声20 min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。按处方及制法，制成缺石菖蒲阴性对照样品，取相当于供试品的量，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2.9.3 阴性干扰试验
3个批次供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而石菖蒲阴性对照色谱相应位置无此斑点，证明阴性对照溶液对鉴别无干扰，结果见图2。
3 讨论
3.1 流动相的选择
据文献报道，尝试乙腈-0.05%磷酸溶液（40∶60）、乙腈-1%醋酸溶液（50∶50）等流动相分离细辛醚[10-12]，但因为中药复方制剂的成分复杂，个体差异大，故最终采用甲醇-0.05%磷酸溶液（54∶46），既保证了完好的分离度，又不至于分析时间太长。
3.2指标成分的选择
吴启端等[13]经研究35份石菖蒲挥发油样品，结果发现共有成分相对百分含量中β-细辛醚均值为64.425%，α-细辛醚均值为11.680%，二者占总量的81.777%，是石菖蒲挥发油发挥药效的重要指标成分。目前国内无α-细辛醚（β-细辛醚）标准品，为国外购进[14-15]，纯度较低，需低温保存避光，给操作带来一定难度。β-细辛醚对照品色谱图显示含β-细辛醚、α-细辛醚两种成分，因此文中两个对照品需分别进样以免干扰。
3.3稳定性考察
经过多批次的考察，本研究发现通塞益脑口服液中细辛醚的含量不一，可见石菖蒲药材质量差异较大[15]，故必须建立完整的半成品检验制度，对挥发油进行质量监测，使其保持在一个良好的水平。而初步的长期稳定性试验表明，由于挥发油的特殊性，其在制剂中的含量下降很快，分析可能是其易挥发或者多种成分互相转化等缘故。我们将进行进一步的试验，找出具体原因。
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