细胞骨架范文

导语：如何才能写好一篇细胞骨架，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

1 材料与方法

1.1 实验材料及试剂

人骨骼肌细胞株（HSKMC）从中国科学院昆明细胞所购买。流式细胞仪购自BD公司，Fluo-3 AM钙离子荧光探针试剂盒购自invitrogen公司，Olympus荧光显微镜，细胞周期与凋亡检测试剂盒购自武汉碧云天公司。

1.2 方法

1.2.1 HSKMC细胞培养 HSKMC细胞复苏后，将细胞收入离心管中，1000 r/min离心10 min，弃上清，用高糖DMEM培养液（含20%胎牛血清，10 0000 U/L青霉素、100 mg/L链霉素）混匀细胞，转入25 mL玻璃培养瓶中，在37 ℃、5% CO2浓度及饱和湿度条件下培养，次日换液，以后根据细胞生长情况每48～72 h更换培养液一次，每周传代1～2次。 [选自《中华急诊医学杂志》2014年第8期,专业提供写作论文服务，欢迎光临.]

1.2.2 流式细胞仪钙离子内流检测热打击对HSKMC细胞膜通透性的影响 将Fluo-3AM钙离子荧光探针溶于1 mL DMSO中，制成1 μg/μL，取对数生长期细胞，按1×104个/皿密度铺入60 mm×15 mm细胞培养皿，培养至单层融合后，给予消化，然后将悬浮液按下述方法给予刺激：①对照组（即将细胞置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱中同其余各组等时间培养）；②43 ℃热打击组（将细胞置于43 ℃细胞培养箱中培养1 h）。打击后同一时间每瓶悬浮液按2 μL/100 μL加入Fluo-3AM钙离子荧光探针，置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱共同避光孵育1 h，予以上机检测。

1.2.3 考马斯亮蓝R-250染色法检测热打击对HSKMC细胞骨架影响 取对数生长期细胞，消化后按5×103个/片密度铺入6孔板培养玻片，培养至单层融合后，按下述方法给予刺激：①对照组（即将细胞置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱中同其余各组等时间培养）；②43 ℃热打击组（将细胞置于43 ℃细胞培养箱中培养1 h）。应用考马斯亮蓝R250染色：①配制M-缓冲液；②倾弃培养上清，加入1 mL PBS冲洗3次；③吸去PBS，用1.5%TritonX-100摇床震荡处理8 min，3次；④吸去TritonX-100，用M-缓冲液摇床震荡洗4次，每次3 min；⑤用3%戊二醛固定10 min，给予M-缓冲液洗3次，每次3 min；⑥用0.2%考马斯亮蓝R250震荡染色40 min；⑦蒸馏水洗3次，每次孵箱烘干；⑧然后将细胞玻片置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察；⑨如染色效果好，可用二甲苯处理样品，5 min，两次，最后一次不要等样品干；⑩加一滴中性树胶，加盖玻片封片，制成永久切片。普通光学显微镜高倍镜下照片。

1.2.4 流式细胞仪检测热打击对HSKMC细胞周期改变 取对数生长期细胞，按1×104个/皿密度铺入60 mm×15 mm细胞培养皿，培养至单层融合，按下述方法给予刺激：①对照组（即将细胞置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱中同其余各组等时间培养）；②43 ℃热打击组（将细胞置于43 ℃细胞培养箱中培养1 h）。将43 ℃热打击组继续置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱孵育，于0、6、18、24 h分别取出后消化，用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。具体操作按武汉碧云天公司细胞周期与凋亡检测试剂盒说明书进行。染色完成后在24 h内完成流式检测。用流式细胞仪在激发波长488 nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

2 结果

2.1 热打击对HSKMC细胞膜通透性的影响

流式细胞仪检测结果提示，给予培养人HSKMC细胞不同温度梯度热打击1 h后，如图1所示，43 ℃热打击组钙离子流式检测的中位数为91.63，37 ℃对照组中位数为22.98。

2.2 热打击对HSKMC细胞骨架影响

本实验中，同对照组相比，随着热打击程度加强，显微镜高倍镜下可见骨骼肌细胞骨架逐渐出现变粗、变短、出现明显的应力纤维，见图2。

2.3 热打击对HSKMC细胞细胞周期改变

同正常对照组相比，骨骼肌细胞在热打击情况下，DNA含量与细胞周期中各期百分构成比统计结果分别见图3及表1。3 讨论

胞浆Ca2+是细胞的第2信使。细胞内钙不仅作为一种重要的第2信使广泛参与细胞的运动、分泌、代谢和分化等多种细胞功能活动的调节，而且胞内钙离子浓度的变化与调控对于参与维持存在于细胞质膜或细胞器膜两侧的跨膜梯度差，以及介导细胞对外界刺激的应答反应具有重要的调节作用[13]。研究发现， 钙在细胞损伤过程中起重要作用，各种因素导致的细胞或细胞器内钙过度集聚可引起细胞结构和功能损害，线粒体和细胞内钙异常增加程度常作为细胞损伤指征之一[14]。

引起横纹肌溶解的一个重要的理论就是线粒体Ca2+超载导致线粒体功能障碍[15]。细胞内外的Ca2+水平变化是微小和迅速的，极难测定，目前定量这些变化在技术上仍存在一定困难[16]。通过测定荧光强度来反映细胞中的钙离子浓度是目前普遍采用的细胞内钙离子检测方法。本实验通过应用流式细胞仪及Fluo-3/AM检测不同温度热打击后细胞内钙离子变化。本实验结果显示，Fluo-3/AM负载的HSKMC细胞在37 ℃基础状态下就有少量钙离子内流，但随着热打击温度及时间延长，43 ℃热打击组钙离子流式检测的中位值为91.63，而37 ℃对照组中位值仅为22.98，提示细胞内钙离子浓度明显增加，说明在热打击的情况下造成细胞钙离子内流效应，导致细胞内钙超载，最终导致骨骼肌细胞损伤、坏死。

细胞骨架是细胞内不同蛋 白质纤维的聚合物和各种调控蛋白交错连接的网络结构，它参与细胞分裂及运动、细胞内物质运输等多种功能，在维持真核细胞的形态、承受外力、胞内运输、变形运动、信号转导等方面发挥着重要的作用，而且还参与许多重要的生命活动，包括染色体分离、细胞中各类小泡和细胞器的定向转运以及白细胞迁移、游动、神经细胞轴突伸展等[17-18]。一般而言，应力纤维是支撑细胞形态的主要结构，其表达的改变往往代表细胞的变形和增殖等变化[19]。本实验通过应用考马斯亮蓝R250染色法检测热打击对HSKMC细胞骨架影响，随着热打击时间及程度加强，同对照组相比，显微镜高倍镜下可见HSKMC细胞骨架逐渐出现变粗、变短，出现明显的应力纤维。提示热打击可改变HSKMC骨架结构，增加HSKMC通透性，同时使骨架失去正常的网状有序排列结构，引起细胞收缩，使HSKMC间隙增大，最终会导致HSKMC结构和功能出现改变。

多细胞有机体的发生与发育有赖于细胞增殖、分化和死亡的精密结合， 即细胞周期的正常运行。本研究通过流式细胞仪检测热打击后骨骼肌细胞细胞周期分布，发现骨骼肌细胞在热打击情况下，各组G0/G1期DNA相对含量在44.13～62.98之间，与正常对照组对比，当细胞离开热打击环境后培养18 h前G0/G1期DNA相对含量明显高于对照组，培养第18小时才恢复同对照组基本相同，说明热打击情况下，细胞周期出现阻滞，细胞被阻滞在G0/G1期，细胞内部活动减缓，处于“休眠”状态，不能进一步发展到S期和G2/M期，从而不能完成整个细胞的分裂过程，大约18 h左右才恢复至正常状态。

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篇2

[关键词]衰老； 血管老化； 细胞骨架；人参三七川芎提取物

[Abstract]To observe the effect of extracts of ginseng， notoginseng， and Chuanxiong Rhizome on the cytoskeleton protein F-actin and G-actin of the replicative senescence vascular smooth muscle cells， with human aortic smooth muscle cells （HASMC） as the research object， and the replicative senescence 9th generation cells as the senescence models， the experiment was divided into youth group （5th generation cells）， model group （9th generation cells）， Chinese medicine low dose group （100 mg・L-1）， middle dose group （200 mg・L-1）， and high dose group （400 mg・L-1） and resveratrol group （10 μmol・L-1）. The intervention time was 48 h. β-Galactosidase specific staining method was used to calculate the ratio of blue dyeing cells. CCK-8 method was used to detect the cells proliferation. The flow cytometry was used to analyze the cell cycle. Immunofluorescent staining was used to observe morphological changes of F-actin and G-actin. The western blot assay was used to determine the expression of F-actin protein. Compared with the model group， the Chinese medicine groups and resveratrol group significantly reduced the number of blue dyeing cells， improved the ability of cells proliferation， reduced the number of cells in G0/G1 phase， increased the number of cells in S phase， and reduced the protein expression of F-actin and the formation of stress fibers， with obvious intervention effect and statistically significant difference. Therefore， the replicative senescence vascular smooth muscle cells can be used as the models for senescence research， with significant changes in morphology and protein expression of cytoskeleton protein F-actin and G-actin in the process of cells aging. The extracts of ginseng， notoginseng， and Chuanxiong Rhizome have obvious intervention effect on F-actin and G-actin， and it might be indirectly associated with delaying the aging of blood vessels.

[Key words]senescence； vascular aging； cytoskeleton； extracts of ginseng， notoginseng， and Chuanxiong Rhizoma

目前我国已进入老龄化社会，且形势十分严峻，预计到2050年，老龄化将达到峰值，65岁及以上人口将超过3亿，占总人口的20%以上[1]。衰老是疾病发生重要的决定性因素[2]，能够加速心血管疾病的其他危险因子。血管老化是人体衰老发生的关键因素，不仅导致动脉粥样硬化的发生，促进机体衰老的进程，而且可以诱发多种疾病[3]。血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）作为血管壁中膜的主要细胞成分，其表型转化及伴随出现的生物学行为改变是血管老化的重要病理学基础[4]。目前有研究表明，细胞骨架的动态改变是促使平滑肌细胞迁移、增殖及表型变化的重要细胞内信号[5]。肌动蛋白（actin）是细胞骨架微丝的主要成分，通常以单体（G-actin）或聚合体（F-actin）形式存在于细胞内，是研究 VSMCs中细胞骨架改变的重要检测指标，且其表达变化受细胞内相关信号因子的调控，如热休克蛋白27（heat shock protein 27，HSP27）、整合素蛋白和凝溶胶蛋白等[6]，其中HSP27调控作用最为肯定。

本课题组一直致力于益气活血中药延缓血管老化的研究，对增龄导致的生理性血管老化和高血压病导致的病理性血管老化进行了较系统的研究，同时，明确了益气活血中药延缓血管老化的一些关键作用机制，比如抗氧化应激、抗AngⅡ干预等，并明确了益气活血中药对血管老化的干预疗效。本研究以人主动脉平滑肌细胞骨架的微丝蛋白F-actin和G-actin为对象，观察益气活血中药人参三七川芎提取物对骨架蛋白F-actin和G-actin的干预作用，为进一步研究细胞骨架与血管老化的关系提供实验依据。

1材料

人主动脉平滑肌细胞HASMC（美国Sciencell公司，Cat No：6110，Lot No：7463）。

SMCM基础培养基（美国Sciencell公司）；胎牛血清（FBS，美国Sciencell公司）；生长因子（SMCGS，美国Sciencell公司）；双抗P/S Solution（美国Sciencell公司）；DPBS溶液（美国Sciencell公司）；细胞冻存液CFM（美国Sciencell公司）；胰酶/EDTA消化酶（美国Sciencell公司）；细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒（杰美基因医药上海科技有限公司）；细胞DNA含量检测试剂盒（细胞周期）（南京凯基生物科技发展有限公司）；CCK-8增殖试剂盒（上海东仁公司）；4%多聚甲醛（北京索莱宝公司）；Triton X-100穿透液（北京索莱宝公司）；罗丹明鬼笔环肽（美国Molecular Probes）；Alexa Flour 488（美国Molecular Probes）；二甲基亚砜（DMSO，北京索莱宝公司）；噻唑蓝MTT（北京索莱宝公司）；小鼠F-actin单克隆抗体（英国Abcam公司）；辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（上海碧云天生物技术公司）；BCA蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物技术公司）；超敏ECL化学发光试剂盒（上海碧云天生物技术公司）；高效RIPA组织/细胞裂解液（北京索莱宝公司）。

人参、三七、川芎合剂冻干粉由北京因科瑞斯医药科技公司制备提供。药物均为道地药材，单味药成分检测符合药典的规定和标准，按3∶2∶4破碎成最粗粉，经乙醇回收提取，滤过，药渣弃去，醇提液回收乙醇至无醇味浓缩液，继续浓缩至稠膏，真空减压，干燥至干膏，粉碎装袋，每1 g冻干粉含生药4.286 g。中药冻干粉用PBS配制成贮存液，以0.22 μm滤器过滤并分装，质量浓度25 g・L-1，-20 ℃保存。白藜芦醇（中国食品药品检定研究院，批号111535-200502）用DMSO溶解并配制成贮存液，质量浓度50 g・L-1 ，4 ℃保存。

倒置相差显微镜及成像系统（德国Leica，型号4000B）；流式细胞仪（美国Beckmam，型号Cytomics FC500）；全自动酶标仪（美国Thermo，型号Multiskan MK3）；激光共聚焦显微镜（日本Olympus，型号FV1000）；发光凝胶成像系统（SYNGENE，型号GeneGnome XRQ）。

2方法

2.1细胞培养及传代细胞培养一般隔天换液，待培养瓶细胞密度在90%以上时进行传代，弃去原培养基，用DPBS洗2次；加入1 mL DPBS与胰酶/EDTA混合液（比例为1∶4）；室温放置1.5 min，待细胞变圆时，轻敲瓶底，后加入2 mL完全培养基停止消化，用吸管进行吹打，收集细胞，1 000 r・min-1离心5 min，弃上清加入培养基2～3 mL吹悬，按照1∶2或1∶3传代培养。

2.2分组及药物浓度 实验分为6组，分别为青年组（5代细胞）、模型组（9代细胞）、中药低剂量组（100 mg・L-1）、中药中剂量组（200 mg・L-1）、中药高剂量组（400 mg・L-1）及白藜芦醇组（10 μmol・L-1），药物干预时间为48 h。

2.3β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色鉴定衰老的程度 β-半乳糖苷酶染色法是鉴定细胞衰老的重要指标[7]。将细胞以8×103个/孔接种于24孔板，次日细胞贴壁后，实验组给予药物干预，作用时间为48 h。实验前将GENMED染色液与GENMED稀释液以1∶20配制成工作液，混匀，置入37 ℃水浴箱预热。吸去原细胞培养基，加入500 μL/孔的GENMED清理液，并轻微摇晃24孔板；吸去清理液，加入500 μL/孔的GENMED固定液，室温孵育5 min；吸去固定液，加入500 μL/孔的GENMED酸性液，清洗细胞表面，并重复此操作一次；加入400 μL/孔预热的工作液，37 ℃孵育过夜，次日在光学显微镜下观察并计数，随机选取3个视野，计算蓝色细胞的数量占总视野细胞数量的比值。

2.4CCK-8检测细胞增殖能力将细胞以6×103个/孔接种于96孔板，每组设5个复孔，次日细胞贴壁后，实验组给予药物干预，作用时间为48 h。每孔加入10 μL CCK-8溶液，放入37 ℃培养箱中孵育2 h，上机检测，记录酶标仪所测定450 nm波长的吸光度（A）。

2.5流式细胞仪分析细胞周期常规进行细胞培养，实验组药物干预48 h，消化后离心并用DPBS洗涤2次，去除上清，每组加入70%冰乙醇1 mL吹悬固定，4 ℃保存过夜。次日离心后去除固定液，DPBS洗涤1次，离心去上清，每组加入100 μL RNase A 37 ℃水浴30 min，再加入400 μL PI混匀染色，4 ℃冰箱避光放置30 min，后上机检测。

2.6激光共聚焦显微镜观察细胞F-actin和G-actin结构的改变将细胞以6×103个/孔接种于黑色96孔板，贴壁后，实验组药物干预48 h。吸去原培养基，用DPBS清洗细胞2次，加入4%多聚甲醛100 μL/孔，室温下固定15 min，再用DPBS清洗细胞5 min×3遍；加入0.1% Triton X-100 100 μL/孔，室温下穿透5 min，再用DPBS清洗5 min×3遍；最后加入罗丹明鬼笔环肽2.5 μL（0.5 U）/孔和Alexafluor488 DNase I 2 μL/孔共染色，避光室温放置30 min，再用DPBS清洗5 min×3遍，上机观察F-actin和G-actin的形态学改变。

2.7Western blot 检测F-actin蛋白的表达细胞样品中加入100 μL含蛋白酶抑制剂、PMSF的RIPA 裂解液，超声波破碎仪破碎10 s，4 ℃16 000×g离心10 min，按BCA蛋白浓度检测试剂盒说明书对样品蛋白总浓度进行测定，加入样品1/4体积的5×Loading buffer，100 ℃加热10 min。进行电泳及转膜后，5%脱脂奶粉室温封闭1 h，完成后用TBST洗膜3次，一抗稀释比例1∶250，4 ℃水平摇床孵育过夜。二抗用5%脱脂奶粉封闭液稀释，稀释比例1∶3 000，室温孵育60 min，TBST洗涤3×10 min。将膜平铺在干净的保鲜膜上，滴加配置好的ECL反应液反应2 min，曝光及扫描。

2.8统计学分析应用SPSS 18.0软件进行统计分析，其中计量数据以±s表示，多组样本采用单因素方差分析，用Levene法检验方差齐性，若方差齐，采用LSD法进行两两比较；若方差不齐，则采用Tamhane法。以P

3结果

3.1对SA-β-gal衰老染色的影响通过对各组染色结果的观察和计数，与青年组相比，模型组细胞蓝染数比例增多，具有显著性差异；与模型组相比，中药低、中、高剂量组及白藜芦醇组细胞蓝染数比例均明显降低，均有显著性差异（图1，表1）。

3.2对细胞增殖能力的影响各组CCK-8细胞增殖能力的检测表明，与青年组相比，模型组A明显减少，具有显著性差异；与模型组相比，中药中剂量组A明显增加，具有显著性差异，中药低剂量组A增加，具有差异性，而中药高剂量组及白藜芦醇组A增加，但无统计学意义（表1）。

3.3对细胞周期的影响通过对各组流式细胞周期的检测表明，与青年组相比，模型组G0/G1期细胞明显增多，S期细胞减少，均有显著性差异；与模型组相比，中药中、高剂量组及白藜芦醇组G0/G1期细胞明显减少，S期细胞增多，具有显著性差异，中药低剂量组则无统计学意义；G2/M期细胞数目变化均无统计学意义（表2）。

A.青年组；B.模型组；C.中药低剂量组（100 mg・L-1）；D.中药中剂量组（200 mg・L-1）；E. 中药高剂量组（400 mg・L-1）；F.白藜芦醇组（10 μmol・L-1）（图2，3同）。

3.4对细胞F-actin和G-actin形态学的影响激光共聚焦显微镜显示，青年组细胞排列紧密，F-actin（红染）主要在细胞表面及外周分布，线条完整连续；G-actin（绿染）主要在细胞的中央区域分布，呈致密的椭圆形，染色清晰、饱满、圆润。模型组细胞体积变大，形态不规则，F-actin边缘毛糙不规整，出现锯齿样断裂，部分呈纵向平行排列，形成大量应力纤维；G-actin向细胞周边区域伸展，部分出现边缘变模糊呈絮状，细胞中央区域染色变弱。模型组与青年组相比，F-actin/G-actin荧光强度比值增大，具有显著统计学差异。各给药组F-actin边缘较模型组清晰光滑，且较少断裂；G-actin则主要集中于细胞中间，染色略欠饱满，尚清晰圆润。与模型组相比，中药低、中剂量组及白藜芦醇组F-actin/G-actin荧光强度比值降低，具有统计学意义，中药高剂量组则无统计学意义（图2，表3）。

3.5对F-actin和HSP27蛋白表达的影响与青年组相比，模型组的F-actin蛋白表达明显增多，具有显著差异性；与模型组相比，中药中、高剂量组及白藜芦醇组F-actin蛋白表达减少，具有显著差异性；与青年组相比，模型组HSP27蛋白表达明显减少，具有显著差异性；与模型组相比，中药低、中、高剂量组及白藜芦醇组HSP27蛋白表达明显增多，具有显著差异性（图3，表3）。

4讨论

衰老是不可抗拒的自然规律，而血管衰老是人体衰老的关键始发因素[8]。 在血管老化的过程中，中膜平滑肌细胞高增殖、高移行、分泌性改变是内膜增厚、血管重构的关键因素。VSMC发生表型转化的过程中伴随着细胞骨架的重构，同时骨架重构又是VSMC由收缩型向合成型转化过程中细胞收缩能力下降、发生迁移和黏附等改变的病理生理基础[4]。肌动蛋白是构成细胞骨架微丝的基本成分，以单体G-actin或聚合体F-actin形式存在，肌动蛋白具有收缩、保持细胞的形状、运动、细胞间黏附等多种功能，同时参与细胞增殖过程[9]。有研究表明，调节机体衰老的多条通路均与F-actin的改变密切相关，如哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路、胰岛素/胰岛素样生长因子（IGF-1）通路和去乙酰化酶（SIRTS）通路等[10-12]。

气血是构成机体的基本物质，二者关系密切，随着衰老的进行，气虚血不行，血虚气不化，气虚血少，气血运行不畅，最终导致气虚血瘀之证，从而加速了机体衰老的进程。中药人参、三七、川芎合方属于益气活血治法的范畴，在心脑血管疾病中被广泛应用，三药合剂具有延缓血管衰老、保护血管内皮细胞及调节血管活性物质等作用[13-14]。白藜芦醇具有激活SIRT1通路、抗氧化、调节自噬及保持端粒酶活性等作用，是目前比较公认的延缓衰老的对照药物。

本研究以复制性衰老的血管平滑肌细胞为对象，以β-半乳糖苷酶染色、CCK-8细胞增殖活性和细胞周期作为判断细胞衰老程度的指标，并观察人参三七川芎提取物延缓细胞衰老的作用。实验结果表明衰老的细胞多停滞在细胞周期的G1期，S期细胞数量则减少，且体外增殖能力相对减弱，同时形态学表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的特征，并且在酸性环境下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，表现为细胞蓝染数目增多。药物干预后，停滞在G1期的细胞数量减少，同时S期细胞数量增加，且β-半乳糖苷酶染色细胞蓝染数目减少，表明人参三七川芎提取物具有延缓血管平滑肌细胞衰老的作用。细胞骨架方面，青年组细胞微丝结构以单体G-actin为主，主要在细胞的中央区域分布，呈致密的椭圆形，染色清晰、饱满、圆润；聚合体F-actin主要在细胞表面及外周分布，线条完整连续。模型组G-actin向细胞周边区域伸展，部分出现边缘变模糊呈絮状，细胞中央区域染色变弱；F-actin边缘毛糙不规整，出现锯齿样断裂，部分呈纵向平行排列，且蛋白表达量增加，形成大量应力纤维。药物干预后，F-actin边缘较模型组清晰光滑，且较少断裂，蛋白表达量减少；G-actin则主要集中于细胞中间，染色略欠饱满，尚清晰圆润。而HSP27作为细胞骨架蛋白的主要调控因子，反向调节着F-actin的表达。

综上所述，复制性衰老的血管平滑肌细胞可以作为衰老研究的模型；细胞骨架微丝蛋白G-actin和 F-actin形态及蛋白表达在细胞衰老过程中改变明显，其可能直接参与平滑肌细胞由收缩型向合成型转化等衰老的进程；人参三七川芎提取物可以一定程度上延缓血管老化，且对于细胞G-actin和 F-actin有明显干预作用，其可能间接通过此作用延缓了血管老化的进程。

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篇3

资料与方法

本组107例，男84 例,女23 例。年龄＜17~60岁;左侧48 例,右侧59 例;横形骨折39 例,粉碎性68例; 直接暴力72例，间接暴力25例；均为闭合性骨折。

复位方法：患肢取伸直位，或微屈呈15°～30°中立位，术者站于患侧，一手拇指及示中指捏挤骨折远端向上推，并固定之；另一拇指及示中指捏挤近端上缘向外侧角向下推挤，使骨折断端接近。经上述手法，骨折远近端对位良好，即可暂时固定，然后采用摸法检查，若残余的前后移位，手指触摸不平时，以一手拇食指固定下陷的一端，另手拇指挤压向前突出的另一端，使之对齐、平整。最后将骨折远端挤紧，用制备好的抱膝圈固定，如骨折对位较差可隔1～2日再推挤1次，用抱膝圈固定。

固定方法：①夹板的制备：取五层椴木胶合板1块，长度自患肢大腿中上1/3至踝上2cm，宽度基本与患肢相应横径等宽，用脱脂棉及绷带塑制吻合肢体生理弧度的夹板，用绷带塑制大小适度的抱膝圈备用。②骨折复位满意后，先放置超膝后侧夹板，然后将抱膝圈套于髌骨周围，固定带分别扎在超膝后侧夹板上。然后用三列绷带将患肢与后侧夹板缠绕固定，固定后要注意观察患肢足背动脉搏动情况，以防固定过紧。抬高患肢，做患肢股四头肌收缩锻炼及患踝屈伸运动，以加速患肢血液循环，促进消肿。3～5天调整固定1次，随着肿胀的消退，逐渐缩小抱膝圈，使抱膝圈能起到良好的固定效果。

药物治疗：遵循骨折三期辨证论治的原则,早期活血祛瘀、消肿止痛,内服三七活血胶囊消肿止痛;中期和营生新、接骨续损,内服接骨丹；后期培补肝肾、强壮筋骨,内服壮筋续骨丹，解除外固定后,用我院下肢洗药煎汁熏洗患肢。

结 果

本组106例均获得6个月以上随访,49例完全无痛、股四头肌肌力5级、膝关节主动伸直正常，屈曲受限在20°以内、无晚期创伤性关节炎症状出现；48例偶有疼痛但不影响日常生活及工作，股四头肌肌力5级，屈曲受限在20°以内，无晚期创伤性关节炎症状出现。10例膝关节疼痛，屈曲受限在30°以内，轻度晚期创伤性关节炎症状出现。

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（一）全年蔬菜价格高位运行，走势与2009年趋同

2010年，全区蔬菜价格（15个蔬菜监测品种平均价格）普遍高于2009年，价格走势与2009年基本趋同，上半年全区蔬菜平均价格达到2.77元/500克，高于全年平均价格。其中，一季度价格偏高，进入二季度以来，价格开始有所回落，7月份价格达到谷底，之后开始回升，三季度保持小幅上扬趋势；进入四季度以来，蔬菜价格上涨幅度较大，价格明显走高，涨幅明显高于去年同期。从全年价格走势来看，与去年价格变动趋势基本趋同，但价格波动较大。

（二）蔬菜价格同比增长明显，增幅波动剧烈

2010年以来，蔬菜价格涨幅较大，截至11月上旬，较上年平均涨幅超过22%，而进入四季度以来，涨幅一路走高，11月上旬达到41.22%，价格远高于上年同期。从全年涨幅走势来看，一季度保持高位，二季度增幅有所减缓，三季度以来增速波动较大。

（三）“大众菜”价格走势平缓，“细菜”价格波动剧烈

从各月蔬菜价格情况来看，土豆、萝卜、白菜等大众菜价格走势较为平缓，而黄瓜、西红柿、豆角、青椒、茄子等“细菜”波动剧烈。黄瓜最高价由年初3.91元/500克到最低7月1.14元/500克，11月上旬达2.5元/500克，并开始逐步走高。青椒最高与最低价相差2.86元/500克，豆角最高与最低价相差3.77元/500克；而土豆、萝卜、白菜等大众菜价格最高相差不超过1.25元/500克，且全年价格基本在固定区间平缓波动(详见图3-5)。

（四）各地蔬菜涨价明显，价格过快增长

从自治区价格监测中心监测地区显示数据来看，11月上旬，除乌海市蔬菜价格低于上年同期外，其它监测地区均高于去年同期，其中，牙克石市涨幅达到71.17%，包头市、呼伦贝尔市、赤峰市、科尔沁区、集宁区、东胜区、临河区涨幅超过50%，其它涨幅均超过24%，价格显著增高。满洲里市蔬菜平均价格高达3.10元/500克，蔬菜价格最低的赤峰市也达到1.82元/500克。

二、蔬菜价格走势原因分析

（一）受季节性因素影响，蔬菜价格全年波动较大

受2009年雨雪、冰冻灾害影响，全国蔬菜生产受损严重，产量大幅减少，加之北方地区连降大雪，运输受阻，部分地区蔬菜供应紧张。同时，2009年12月下旬国内成品油价格连续上调，使得购进蔬菜的运输成本增加。随着春节临近，蔬菜市场需求量增加，一季度，我区蔬菜价格涨幅明显，呈高位运行；进入二季度，由于气温回升，我区地产蔬菜尤其应季蔬菜大量上市，蔬菜市场供应量大幅增加，蔬菜价格降幅明显，但土豆、胡萝卜、萝卜由于不是大量上市的季节，市场供应依然较为紧张，价格呈现上涨的走势；三季度，随着本地菜供应量进一步加大，蔬菜价格基本达到全年最低，呈小幅波动；10月以来，蔬菜价格明显上扬，在15个蔬菜监测品种中，除白菜、土豆、萝卜3个当地产蔬菜品种涨幅趋缓外，其它蔬菜价格上涨较快。随着天气转冷，输入型蔬菜比例增大，进入冬季，运输用柴油由0号变为－10号、－20号柴油，运输成本增加。当前全国油气短缺进一步加剧蔬菜运输成本，蔬菜价格仍会继续走高。

（二）冬季输入菜居多，蔬菜价格受产地影响较大

由于本地果绿蔬菜通过温室培育成本价远高于外地菜，而5、6月份收储菜冬季销售则需放到恒温菜室，蔬菜损耗率高，贮存成本大。因此，我区冬季蔬菜供应大多依赖外地调运，仅有部分白菜、大圆菜等冬储菜能本地供给，外运蔬菜主要来自山东寿光、淄博、河北唐山，云南昆明、广东、四川、海南等地区。近年来，宁夏、甘肃等地冬季叶绿菜供应量逐步增大。以呼和浩特市为例，进入冬季以来，外地菜供应量占总供应量高达80%-90%。本地蔬菜供给少，对整个市场的影响微乎其微，使得冬季蔬菜价格、供给量主要受制于蔬菜产地。2010年以来，我国气候表现反常，持续不断的干旱、雨雪冰冻、高温暴雨等恶劣天气，严重影响到各季蔬菜的生长，在不少地区鲜菜产量大幅萎缩，使得菜价阶段性、季节性价格走高。

（三）农资价格上涨，是蔬菜价格持续走高的趋势性原因

随着工业化、城镇化进程加速，农产品生产三大“基础成本”――生产资料、劳动力和土地价格刚性上涨渐成常态，农产品进入趋势性的上涨通道。国家统计局数据显示，2010年7月以来，我国价格总水平逐月攀升，以农副产品为主的生活必需品价格上涨较快，10月份CPI达到4.4%，创下25个月来新高，而在新涨价因素中，食品类价格上涨10.1％，为CPI涨幅“贡献”了74％。随着城市地价快速上涨，拉动了城郊地价，并进一步传导至农业地价。此外，一些农业龙头加工企业和种植大户大规模租地经营，也在一定程度上提高了农村地价，从而抬高农产品生产成本，推升农产品价格。同时，随着大量青壮年劳动力流入城镇，“用工荒”现象也在一些地方的农业领域出现，导致农村劳动力价格迅速上升，农产品尤其是蔬菜等劳动密集型产品价格必然会更加高昂。

（四）“城市化”进程加快使得城郊菜地大量被占，直接导致蔬菜价格上涨

近年来，随着城市化进程不断推进，城市建设速度加快，城市近郊的土地大量被征为建设用地。2009年，全区城市建成区面积较“十一五”期初增长了17.5%，土地征用面积达到“十一五”期初征用面积的2倍，许多地方的菜地都成了城区的马路和商品房，而新的菜地建设并没有及时跟上，造成菜地大幅度减少。同时，城市化向前推进，使得城市人口不断膨胀，2009年，全区市镇人口达到1293.5万人，较“十一五”期初增加了129.9万人，市区人口密度较“十一五”期初增长了59%，使城市蔬菜消费量大量增加，蔬菜需求缺口加大。呼和浩特市近年来由于城市建设速度加快，近郊的菜地基本有50%被征用成为建设用地，使得蔬菜种植面积因此大幅度减少，本市的蔬菜种植基地只留下8万亩，保护地温室大棚不足1万亩，地产蔬菜供应能力锐减，大量蔬菜依靠外地供应。按照呼和浩特市总人口每人每年最少150公斤的需菜量计算，需要蔬菜量100多万吨，而目前呼和浩特市全年的蔬菜产量是60万吨左右，缺口高达40多万吨。巴彦淖尔市临河区随着市区扩展，本地产蔬菜仅能满足市场需求量的30%， 70%的蔬菜需求要靠外运。与此同时，随着人口增加及人们生活水平提高，健康观念改变，对蔬菜特别是“细菜”的需求量不断增加，加之许多原来自给自足、有富余还出售蔬菜的农民，现在已经变成到菜市场买菜的消费者，也使得蔬菜消费量大量增加。本地蔬菜供应远远满足不了市场需求，直接导致蔬菜价格上涨。

三、对稳定我区蔬菜价格的几点建议

（一）加大蔬菜生产的扶持力度，保证蔬菜供给

在大力推动工业化和城市化的进程中，重视和关注人们日常生活所必需的蔬菜副食品的生产和建设。各地要切实做好规划，并在规划基础上分步实施好各蔬菜基地的建设，对适宜发展蔬菜生产的地区，建立和发展蔬菜生产基地，保证蔬菜种植面积，特别是要加大对城市周边蔬菜生产的扶持力度，对城市扩张征用的菜地收取蔬菜基地补偿金，并真正用于发展新的蔬菜生产基地，扶持菜农，通过专项的政策性补贴来促动蔬菜的生产和扩大供给，保持蔬菜产业的稳定发展。

（二）加快蔬菜等鲜活农产品 “绿色通道”建设，降低蔬菜运输成本

运输成本主要是油价和过路过桥费两方面，而运输成本又都增加到菜价里面，增加了市民支出，减少了市民购买量。要进一步完善蔬菜等鲜活农产品运输“绿色通道”政策，对整车合法装载运输鲜活农产品的车辆免收车辆通行费。对蔬菜运销企业，有关部门应该给予帮助，发放绿色通行证，建立绿色通道，缩短蔬菜运输时间。同时，蔬菜运销企业要加强自律，搞好交通法规培训，杜绝“超重”、“超速”现象发生，保障蔬菜运输安全。

（三）加大市场设施建设力度，促进蔬菜商品的流通顺畅

选择一批条件较好的大型蔬菜批发市场，通过企业自筹、多元化投资、政府扶持等方式，加强产地蔬菜预冷设施、批发市场冷藏设施、蔬菜低温配送中心建设，推广节能环保的冷链运输车辆，配套清选、分级、包装等净菜处理及相关设备，改善市场场地、道路、交易厅（棚）、水电、信息服务、质量检测、电子结算等基础设施，实现采后快速预冷、商品化加工处理和上市旺季入库冷藏保鲜。加快城区蔬菜市场和零售网点建设，在场地环境、设施设备、质量安全检测、垃圾处理、规范管理等方面进行标准化建设，建立便捷、安全、规范、高效的蔬菜零售平台。

（四）加强市场监管，维护正常市场价格秩序

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关键词：事故车 现场查勘 典型案例 酒驾调包

The substitution case analysis of the drunk driving in accident site survey Sichuan Vocational and Technical College of Communications

Feng Bo

Abstract： The site survey is an important means of evidence collection， it is the important basis of insurance claims and case litigation. The substitution case of the drunk driving is a kind of common cases in the process of site survey. In this paper， it analyses a real case to illustrates the general recognition method for such cases.

Keywords： accident car， site survey， typical case， substitution in drunk driving

引言

现场查勘是指运用科学的方法和现代技术手段，对事故现场进行实地勘察和检验，通过分析存留的物证和询问认证等渠道获得事故产生的原因，并采用拍照、绘图等方式将事故结果方便而准确记录下来的工作过程。它是保险赔付、案件诉讼的重要依据。

酒驾调包是在现场查勘中常常会遇到一类案件。虽然《道路交通安全法》中对酒后驾车行为有明确的处罚规定，同时在保险公司合同条款中，也规定酒后驾驶属于免赔范围，但部分驾驶员仍难改酒后驾驶的习惯。在车辆出险后，由于驾驶员担心受到处罚并且被保险公司拒赔，于是找来他人顶包。在现场查勘过程中，如何对这类案件进行准确识别以避免保险公司损失，是查勘员必备的能力。下面就通过对一个真实酒驾顶包案件的分析来说明针对这类案件的识别方法。

一、出险情况

2012年9月11日凌晨4时左右，罗某称其驾驶一辆车牌号为粤A××的汽车由梅林关往清湖方向的××大道行驶，为避让车辆右打方向盘不慎撞上路基，后报保险公司。

二、现场情况

查勘员到达现场时，现场有两辆黑色轿车停在不远处，五六个人围在一起。这些人见查勘员到来，立即驾驶车辆离开。标的车停靠在距路基前方20m的公路边，一路上留下标的车轮轧过的痕迹，标的车前杠断裂，内部件于表，方向机断开，机油撒了一地，车内驾驶员方向盘处安全气囊爆裂。报案人罗某称自己是为了避让旁边准备超车的车辆，才猛打方向盘，撞上路基的。查勘员到达时除了罗某在现场外，还有车主黄某在现场。黄某一身酒气，并称自己也是刚到现场。

三、疑点分析

1.案发时间是当夜凌晨4点多，路上车辆已经很稀少，并且案发道路单向有四根车道。根据经验，在车少路宽的情况下一般车辆不会乱变道。

2.在询问过程中，报案人罗某称车是从车主黄某处借来的，但何时何地借车，驾车从哪里到哪里等细节都说不上来。而一身酒气的车主黄某却主动上来向查勘员讲解事发经过。

3.整个询问过程中，罗某神情紧张，常用眼角余光看黄某。

综上疑点分析，此案很有可能是车主黄某酒后驾车，出险后找来罗某顶包。

四、处理方法

为了印证疑点，查勘员分别让罗某与黄某分别到标的车试坐一下。黄某一上车就手握方向盘，脚踩踏板，动作自然。而罗某上车后呆滞地坐于座位上，连手都不知道该放哪里好。

接下来，查勘员让当事人黄某与罗某分别拿出手机，查看他们的通话记录。通话记录显示：在4时以后，黄某与罗某分别与一个叫黄文的人频繁通电话。车主黄某是4时08分与黄文通电话，而罗某是4时11分与黄文通电话。为何黄某先知道事故发生呢？并且罗某4时12分报的保险公司，此后罗某又频频与黄文通话。

图1 车主黄某坐在驾驶员座位上 图2报案人罗某坐在驾驶员座位上

图3罗某电话记录 图4 黄某电话记录

鉴于以上情况，查勘员进一步怀疑驾驶员是黄某而非罗某。

查勘员随即告知当事人，由于案子较大，必须报交警，然后现场做了笔录。交警到达现场后，查勘员对交警说明了事故情况，并告知客户，由于事故较大，且有不明朗的地方，现场无法开单，需要转保险公司调查。随后标的车被拖到了交警中队。

五、处理结果

凌晨八点多，报案人罗某打电话给查勘员称放弃索赔，希望销案处理。由此可见，此案为典型的酒驾掉包案件。本案最终以报案人签字同意销案告终。

六、案例总结

总结以上案例，可以看出对于识别这类酒驾调包案件的几个要点。

1.查勘员到达现场后要仔细观察现场情况，包括道路情况、标的车情况、报案人、车主及周围环境情况等，看有无不合常规情理现象。此外，若有表1中所列现象，则应引起注意。

2.进行询问时注意对相关细节进行提问。具体询问要点可参照表1。若报案人对于多个要点都答不上来，则要引起注意。

3.询问时注意观察被询问人的语速、表情、神态等。若被询问人说话支支吾吾、神情紧张、东张西望等，可初步判断其说谎。

4.对疑点进行印证时，可要求报案人及嫌疑人都坐到驾驶员座位上，以观察标的车座位与人体的吻合情况。

5.可要求查看报案人手机的通话记录，注意通话时间及通话对象，从中找出与案件相关的蛛丝马迹。

6.若现场有监控摄像头，可与监控方协商调取案发时间前后的监控录像，作为确定案发经过最直接的证据。

参考文献

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[5]《汽车保险实务》，但淑英，清华大学出版社，2003.9

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我的毕业设计作的是混凝土框架结构，因此对于混凝土机构的了解要更有针对性。混凝土质量的好坏，既对结构物的安全，也对结构物的造价有很大影响，因此在施工中我们必须对混凝土的施工质量有足够的重视。混凝土质量的主要指标之一是抗压强度，从混凝土强度表达式不难看出，混凝土抗压强度与混凝土用水水泥的强度成正比，按公式计算，当水灰比相等时，高标号水泥比低标号水泥配制出的混凝土抗压强度高许多。所以混凝土施工时切勿用错了水泥标号。另外，水灰比也与混凝土强度成正比，水灰比大，混凝土强度高3水灰比小，混凝土强度低，因此，当水灰比不变时，企图用增加水泥用量来提高温凝土强度是错误的，此时只能增大混凝土和易性，增大混凝土的收缩和变形。 综上所述，影响混凝土抗压强度的主要因素是水泥强度和水灰比，要控制好混凝土质量，最重要的是控制好水泥和混凝土的水灰比两个主要环节。此外，影响混凝土强度还有其它不可忽视的因素。粗骨料对混凝土强度也有一定影响，当石质强度相等时，碎石表面比卵石表面粗糙，它与水泥砂浆的粘结性比卵石强，当水灰比相等或配合比相同时，两种材料配制的混凝土，碎石的混凝土强度比卵石强。因此我们一般对混凝土的粗骨料控制在3.2cm左右，细骨料品种对混凝土强度影响程度比粗骨料小，所以混凝土公式内没有反映砂种柔效，但砂的质量对混凝土质量也有一定的影响。因此，砂石质量必须符合混凝土各标号用砂石质量标准的要求。由于施工现场砂石质量变化相对较大，因此现场施工人员必须保证砂石的质量要求，并根据现场砂含水率及时调整水灰比，以保证混凝土配合比，不能把实验配比与施工配比混为一谈。混凝土强度只有在温度、湿度条件下才能保证正常发展，应按施工规范的规定予在养护、气温高低对混凝土强度发展有一定的影响。冬季要保温防冻害，夏季要防暴晒脱水。现冬季施工一般采取综合蓄热法及蒸养法。如果是设计造成的缺陷，一般有设计承载力或设计工作条件与实际不符造成裂缝、变形、侵蚀等破坏;如果是使用造成的缺陷，一般有超载、侵蚀、火灾、冻融、风化破坏等。

近年来预应力混凝土应用范围逐渐推广到更多的结构领域，如大跨超长、超厚及超静定框架结构，其混凝土强度等级必须提高至c50。在采用泵送条件下，其收缩与水化热大大增加，约束应力裂缝很难避免，张拉前开裂，张拉后又不闭合，裂缝控制的难度更加困难。预应力结构裂缝允许宽度是严格的，预应力筋腐蚀属“应力腐蚀”并有可能脆性断裂，预兆性较小，裂缝扩展速度快。裂缝深度h与结构厚度h的关系如下：h≤0.1h表面裂缝;0.1h

应当尽量避免贯穿性及纵深裂缝，如出现该种裂缝应采取化学灌浆处理来保证强度，即贯缝抗拉强度必须超过混凝土抗拉强度。

在修补裂缝前应全面考虑与之相关的各种影响因素，仔细研究产生裂缝的原因，裂缝是否已经稳定，若仍处于发展过程，要估计该裂缝发展的最终状态。在日本混凝土协会“混凝土裂缝的调查和修补指南”中，对调查的原则、普查、详查方法均作了详细规定，主要有：

裂缝的现状调查(裂缝类型和宽度);有无病害(漏水、钢筋锈蚀);产生裂缝的经过(发生时间和过程);设计书的检查;施工记录的检查;根据混凝土钻芯检查构件的强度、厚度;荷载调查;中性化试验;钢筋调查(钢筋位置、细筋数量及有无锈蚀);地基调查;混凝土分析;荷载试验;振动试验。

裂缝的处理

1.表面处理法：包括表面涂抹和表面贴补法

表面涂抹适用范围是浆材难以灌入的细而浅的裂缝，深度未达到钢筋表面的发丝裂缝，不漏水的缝，不伸缩的裂缝以及不再活动的裂缝。表面贴补(土工膜或其它防水片)法适用于大面积漏水(蜂窝麻面等或不易确定具体漏水位置、变形缝)的防渗堵漏

填充法用修补材料直接填充裂缝，一般用来修补较宽的裂缝()0.3mm)，作业简单，费用低。宽度小于0.3mm，深度较浅的裂缝、或是裂缝中有充填物，用灌浆法很难达到效果的裂缝、以及小规模裂缝的简易处理可采取开v型槽，然后作填充处理。2.

灌浆法

此法应用范围广，从细微裂缝到大裂缝均可适用，处理效果好。

2.结构补强法

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【关键词】加油站；火灾爆炸；分析与预防

加油站是危险化学品经营企业，所经营的油品汽柴油都是易燃易爆液体。因此分析加油站火灾爆炸的原因对其采取有针对性的预防措施，是加油站安全管理的关键。下面我们通过对加油站发生的火灾爆炸事故案例分类进行分析，并提出相应的预防措施和建议。

一、卸油引起的火灾爆炸事故

（1）沙特阿拉伯首都利雅得闹市区巴塔的一家加油站着

火，时间是2000年8月11日傍晚，烧毁20辆汽车、烧伤3人，大火引起的原因是由于卸油员违规操作导致大火出现。此外，由于利雅得的夏季非常炎热，到了傍晚时室外温度还很高，这段时间严禁卸油。（2）河北省黄骅市加油站在油罐车向储油罐内输油时突发爆炸，时间是2000年9月10日0时30分，事故造成1人重伤、2人死亡，重伤患者98%的Ⅲ度烧伤有严重的生命危险。（3）湖北公安县加油站发生爆燃事故，时间是2002年

01月07日，事故造成2人受伤，1人死亡。该加油站的地理位置是宏泰客运公司院内，西接一集贸市场，东临车站，地下埋藏储油罐4个，装有18吨汽、柴油。事故的主要责任是由于司机彭正秋严重违规操作，没有采用密封式输油法进行输油，而是将输油管直接插入储油罐所致。员工吴本军在关闭阀门的时候，由于穿的衣服出现静电，导致燃爆发生。（4）2011年1月12日

16时45分许，河北省廊坊市和平路一中石化加油站发生起火爆炸事故。廊坊市官方称，事故未造成人员伤亡，起火原因为油罐车卸油后，静电火花引发起火爆炸。以上4起事故除一起是由于汽油从量油孔外溢，流入下水道，油蒸汽与空气形成爆炸性混合气体，遇火源引起的爆燃，其余2起都是静电引起的火灾爆炸事故。汽油的闪点是-50℃，与空气的比重为0.67～0.71，爆炸极限约为1.3～6%，它有一个很重要的物理特性就是非常容易气化，挥发性非常强，有时我们用肉眼也能看到汽油液面有一层蒸腾着的雾气，1升汽油能挥发成100～400升蒸气，扩散到很大的空间。有时火源离开汽油似乎很远，但与汽油蒸气接触仍会引起燃烧，如果汽油蒸汽的浓度达到爆炸极限，就会引起爆炸。卸油时充装过快，无防静电设施或防静电设施未起作用和未穿戴防静电劳动保护护具等，会引起大量的静电电荷积累（当带电体因电荷积累达到一定的静电电位时一般大于

300v）引起放电，引燃引爆油蒸汽而发生的事故。火灾爆炸的三个条件为：火源、可燃物、空气。加油站最需要控制的火源（除明火以外）是静电放电。静电放电导致火灾爆炸需要具备以下四个条件：一是静电的来源有的产生；二是使静电能够积聚，并且要有足够大的电场强度和达到起火点放电的静电电压；三是静电放电所得到的能量能够达到爆炸性混合物的最小燃点；四是静电放电火花的周围环境有爆炸性混合物存在，其浓度达到爆炸极限。我们在卸油操作时一定要防止油气外泄，并防止有明火，同时防止静电的积聚，卸油作业时要做好以下几点：一是操作人员必须穿戴好防静电护具。油罐车卸油前要按装好防静电夹钳。二是通过液位或人工计量检测确认所卸油品的空容量；防止跑、冒油事故发生。三是采用密封卸油，按工艺要求连接接卸油管；同时暂停加油作业。四是司机缓慢开启罐车卸油阀，卸油员集中精力监视卸油全过程，随时处理突发的问题；卸车司机不得远离现场。五是卸油完毕，卸油员登上罐车检查确认油品卸净，关好油罐阀门，使油罐处于密闭状态。罐车司机应关好罐车所有阀们及帽口，使罐车出于密封状态。六是引导油灌车离站。七是罐内油品静止10分钟后，方可通知加油员开机加油。

二、加油区的火灾爆炸事故

（1）位于郑州市商城路闹市区的郑州标准石化有限公司商城路加油站发生爆炸，事故时间2001年7月23日下午3时，事故导致1人重伤，10人轻伤和轻微伤，4人死亡，爆炸直接造成近20万元的财产损失，有关责任人被判3年有期徒刑。爆炸原因主要是一台加油机漏油渗入地下室，由于地下室汽油蒸汽挥发遇电打火导致的。（2）一辆摩托车驾驶员到加油站给车加油的时候，把摩托车停在计量机旁，关闭发动机之后用发动机钥匙打开油箱盖等着加油。加油员看到客人就迎了上来，将合成树脂材料的油箱盖放在旁边的水泥防护台上，没有带防护手套，直接用手握住加油柄，把加油枪口接近摩托油箱口开始加油。等油加到1.5升时，突然从摩托车加油口处冒出火苗。（3）成都市高新区某加油站内一台加油机突然发生爆炸，事故发生时间是2001年12月24日上午10：54。对这几起事故，我们分别作分析：第一起是加油机漏油，加上电气打火，引起的爆炸事故；第二起是摩托车加油没有按照规程操作，静电放电引起的火灾事故。员工没有穿防静电纯棉制服、鞋，加油机接地线损断，而且在给这台车加油前已加出了221升，加油之前，没有按照规定的要求把加油枪应先搭在油箱口，把静电导走后从新启动加油泵，由于静电聚集，在油箱口处引起放电，引燃油箱口汽油蒸气；第三起是加油机泄露并加油机有爆炸空间，线路漏电引起的爆炸事故。通过分析我们知道要避免以上事故的发生，就要做到以下几点：一是加油站的设备、设施要定期检查、检修、检测并形成制度。发现问题、隐患要及解决、整改。二是加油站工作人员上班要穿着防静电工作服具。三是要严格执行加油规程，加油站十不准等有关规定。

三、检修、清罐时引起的火灾爆炸事故

（1）在阜新市振兴加油总站，阜新远弘能源科技有限公司租用振兴加油总站一个油罐和这个油罐所连接的一把加油枪。2011年9月24日上午9时左右，远弘能源部门经理胡龙飞雇来刘学云等3名清灌工人，现场签订清罐协议后，开始清罐作业，下午四时左右第一个油罐清洗结束，胡龙飞和刘学云结清费用后，李博（站长）提出再清洗一个油罐（汽油罐），向油罐里送风后，李博、李博的妻子、胡龙飞及王昌伟（远弘能源）陆续离开了油罐区，送风5、6分钟左右，油罐区域瞬时燃烧起来，清罐的三名工人浑身是火跑出油罐区域。120救护车紧急将三名伤者送往矿总院烧伤整容科急救。事故发生后，海州消防大队第一时间赶到现场，（当时现场明火已经被加油站的员工扑灭），事故现场保存完好。2011年2月26日，清罐工人刘学云经抢救无效死亡。此次事故造成1人死亡，两人重伤。（2）在江苏省宜兴市官村镇春江加油站员工在清洗埋地式柴油罐时发生爆燃事故，事故时间是2001年4月26日14时20分，事故导致1人死亡。（3）在江苏省兴化市唐刘加油站发生油罐爆炸事故，事故时间2002年3月11日下午1时15分左右，当场2人被炸死，另有2人受伤。事故发生的主要原因是由于加油站油罐改造施工，罐内残余气油遇到明火引起爆炸。第一起事故是清柴油罐残留的油蒸汽与当时风机排出的汽油蒸汽混合在一起，油罐区内油蒸汽与空气混合浓度达到了爆炸极限范围内（1.3%～

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关键词：公路路基；软土；设计

Abstract: With the development of modernization to speed up the pace, the increasingly high demand for road transport, as the main part of the project of the highway roadbed, its quality is good or bad, directly affect the service life of the road. So the design of highway subgrade is facing new challenges. The soft soil reinforcement of the two aspects of the common subgrade design and slope of sub grade protection of framework plant.

Key words: Highway Subgrade in soft soil; design;

中图分类号：TU2

一、概述

近年来，公路建设得到了快速发展，尤其在沿海地区。在沿江、沿湖、沿海等处广泛分布着软土，因此，在这些区域进行公路路基设计，软土地基的出现是不可避免的。为了使路基具有一定的稳定性和承载能力，确保道路发挥正常的功能，一定要对其进行处理。目前软土地基处理技术的发展迅速，出现多种多样的地基处理方法，完善了处理地基的理论和技术。

边坡防护又称坡面防护是保证路基边坡表面免受降水、日照、气温、风力等自然力的破坏，从而提高边坡的稳固性，还可美化路容，增加行车的舒适感。坡面防护工程，一般不考虑承受坡体的侧压力，故应设置在稳定的边坡上。路基边坡应根据当地气候环境、工程地质和材料及坡面等情况，选用合适的防护类型。常用的坡面防护类型有植物防护、灰浆防护和砌体防护等。随着公路等级和高等级公路服务标准的提高，公路坡面防护日渐引起公路部门的重视。由于公路线形标准高，路基高填深挖现象普遍，道路边坡安全显得至关重要。

二、软土地基路段的路基加固设计

1.固化剂法加固设计

在进行软土路基施工设计时，可以通过固化剂对原填料进行固化处理，当然它的前提是路基原填料在小的范围内受到了制约并且固化剂也有着品种和数量的约束，通过采取这种措施来避免软土高填方路段路基的出现沉陷。作为建筑材料中的一种特殊存在，它的物理与化学性质实现了不同的固化方法、特点和类别。使用的固化剂主要为固体和液体两类物理形态，而从化学特点上来看分别为主固化剂和助固化剂两类，液体主固化剂主要成分为水玻璃，而液体助固化剂则主要为碳酸镁和碳酸钙等无机盐。物理形态下的固化剂在一定程度上有所不同，它的固体主固化剂和助固化剂分别为石灰、石膏、水泥和聚丙烯酰氨和聚丙烯酸等高聚物。助固化剂是将液浆与土混合，实现深层次的土固结，主固化剂就不同了，它实现的是表面浅层的固化处理，它的措施是将固化剂与土混压。不过固化剂的多种多样需要按照实际情况来选择。

2.粉喷桩法加固设计

实际上对路基的沉陷防范措施并不是一两种，当出现局部的软土路基（小于10m），通常采用的是粉喷桩法，这种方法实现了一系列的物理化学反应，从而得到强度与刚度较大的桩体。它能够强化此时土的特性，进而实现复合地基。进行软土层调查是实现粉喷桩法的前提条件，它的设计要求分别对粉喷桩龄期、土样含水量、固化剂的添加量、桩身强度、桩径和桩距等这些方面实现，这种加固方法在做好质量的同时也要在工程施工时间上把握好，最好是昼夜施工。

3.注浆加固法加固设计

所谓注浆就是用压送设备将具有冲填和胶结性能的浆液材料注入地层中土颗粒的间隙、土层的界面或岩层的裂隙内,使其产生扩散、胶凝或固化,以增强地层强度、降低地层渗透性、并防止地层变形和进行托换技术的地基处理技术。注浆法适用于岩基、砂土、淤泥质黏土、淤泥、粉土和一般人工填土层等地质情况,适用范围广,加固效果显著,但其成本较高。按灌浆机理的不同,可分为以下几类:（1）渗入型注浆。浆液渗入到软土的孔隙或裂缝之中,与软土一起固结为一整体,但地基土层结构基本不受扰动和破坏。该方法适用于存在孔隙或裂缝的地基土层。（2）劈裂灌浆。在较高的灌浆压力作用下,浆液将克服地基中的初始应力和土体抗拉强度,使土体沿垂直于主应力的平面或在土体强度最弱的平面上发生劈裂现象,进而使渗入型注浆法不可灌入的土体可顺利实施,增大浆液扩散范围,以达到软基处理目的。（3）压密灌浆。在地基中灌入较浓的浆液,浆液会迫使注浆点附近土体压密而形成浆泡。随着浆泡的增大,灌浆压力也随之增大,从而产生较大的上抬力。压密灌浆是用浓浆液置换和挤密土体的过程。（4）电动化学灌浆。在地基中插入金属电极并通以直流电,借助电渗作用,将浆液注入土体中。或将浆液注入电渗区,通过电渗使浆液均匀扩散,以达到提高灌浆效果。

4.加筋法加固设计

加筋法是将抗拉能力很强的土工合成材料埋置于土层中,利用土颗粒位移与拉筋产生摩擦力,使土与加筋材料形成整体,以减少整体变形和增强整体稳定。因为土工织物受拉作用,调整了基底应力分布,地基侧向位移和沉降却相应减少,所以地基稳定性就大大提高。

5.换填法加固设计

换填法又称置换法,是用好土部分或全部替换软土的方法,以达到保证路堤稳定和降低沉降量的目的。施工方法分有人工挖掘置换和借填土自重或用爆炸法将软弱土强行挤出的强制置换。其施工都比较容易,多数情况下能在短时间内达到所要求的目的,从可靠性来说人工挖掘置换较优。置换材料应采用即使受到水浸也不致降低承载力的粗粒土,且必须进行充分压实。

三、路基边坡中的骨架植物防护设计

1.浆砌片石边坡骨架植物防护设计

风化岩石和较软土质的边坡在一定的程度下会遭到雨水破坏，而边坡骨架植物对这种破坏有着制衡作用，在此同时，它能够实现土层风化的支撑与土质的保护，因此，实现浆砌片石边坡骨架植物防护在一定的程度上是必须。这种保护模式将形成拱形骨架、方格菱形骨架和人字形骨架等。通过分化管理的模式来实现支撑，也就是说一小块突破实现部分骨架支撑。事实上之中分割而形成的植物与骨架造型美而独特，具有良好的欣赏价值。骨架支撑在一定的范围里可以对坡面上渐变和相互牵引进行消除。工程对骨架的宽度和间距的设计在一定程度上要按照实际情况来确定。根据有关与公路工程的众多经验与资料来看，实现骨架保护还是拱形骨架较为有效，这种骨架能够在部分下表土面坍塌的情况下对风化土层进行坚固的支撑。不过它的缺点在于施工难度较大，不能够应用于加剧的风化界面，否则容易造成骨架破坏和浅层滑坡等事故。如此一来，支挡建筑物的设计就必须运用到这种情况中来。

2.多边形预制混凝土空心块边坡植物防护设计

多边形预制混泥土空心块是又一种边坡植物的防护措施，它能够实现全风化路堑岩石、强风化岩石和较缓等边坡的防护。它的样式不是局限于一两种，与其它的样式相比，六边形空心块较为常见。与拱形骨架相似，它也是通过小的骨架来实现边坡的支撑，但同样的方式，它的骨架密度就大多了，每一个六边形之间相互联系镶嵌，实现它更为有效的稳定与抗侵蚀能力。并且这种多边形预制混泥土空心块具有施工便捷、造型美观和保护效果明显等一系列的优势，它成了路堑坡面保护设计中的香饽饽。

3.锚杆混凝土框架边坡植草防护设计

作为新兴的边坡防护模式，锚杆混凝土框架对边坡植物的保护达到了一定的高度。这种通过锚杆挂网喷浆而发展起来的防护模式，在实现浆砌片石的造型优美、绿化程度高的特点之外，它还能够对破碎的风化岩石进行锚杆加固的作用，这种加固的方式在一定程度上避免了开挖卸荷和爆破松动。锚杆混凝土框架也不是单独存在的，它存在多种组合的形式，如：喷播植草、混凝土空心块、锚杆混凝土框架；喷播植草、土工格室网、锚杆混凝土框架；喷播植草、三维土工网、锚杆混凝土框架；喷播植草、锚杆混凝土框架四种组合方式。值得注意的是，锚杆混凝土框架边坡植草防护设计需要进行分层开挖与分层加固，这样，才能使边坡在施工中的稳定与安全性得到保障。边坡土体每挖一级，则需要固定一级，这样可以避免开挖时间过长而造成边坡土体强度的降低与应力的松弛，保障局部边坡的稳定。

四、结束语

随着公路的发展，我国公路建设和设计方面取得很大的进步，只有做好设计与施工这两个主要环节的技术把关，再加上施工管理人员的精心组织、合理施工，路基质量才能得到充分保障。上述是结合笔者多年工作经验的总结，仅供相关专业人士参考。

参考文献：

[1] 刘强.公路路基设计中常见问题分析[J].价值工程，2010（25）．

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[关键词] 甲状腺功能亢进；甲状腺激素；骨代谢相关细胞因子；骨代谢

[中图分类号] R581.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）08（c）-0052-03

Study on the changes of bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes of patients with hyperthyroidism

WU Ping

Department of Endocrinology, Qianjiang Central Hospital of Chongqing City, Chongqing 409000, China

[Abstract] Objective To study varying pattern of bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes of patients with hyperthyroidism. Methods 64 cases of patients with hyperthyroidism in our hospital from May 2010 to January 2011 were selected as the observation group, at the same time 64 healthy personnel were selected as the control group. The thyroid hormone, bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes between the two groups were detected and compared. Results Thyroid related hormones: FT4, FT3 and PTH of the observation group were all higher than those of the control group; TSH was lower than that of the control group (P < 0.05). Bone metabolism related cytokines: IL-6 of the observation group was higher than that of the control group; CT, TNF and IGF-Ⅱ were all significantly lower than those of the control group (P < 0.05). Bone metabolic indexes: Ca2+, AKP, BGP, I CTP and P I NP of the observation group were all higher than those of the control group; BMD was lower than that of the control group (P < 0.05). Conclusion Changes of bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes of patients with hyperthyroidism are obvious, and it should be paid enough attention during treatment.

[Key words] Hyperthyroidism; Thyroid hormone; Bone metabolism related cytokines; Bone metabolic

甲状腺功能亢进（甲亢）在临床上主要归属于自身免疫性疾病，患者表现为机体代谢紊乱，同时血清中存在的抗甲状腺激素可刺激甲状腺细胞分泌过量的甲状腺激素[1]。另外，甲亢患者机体除表现出甲状腺的症状体征及甲状腺激素的变化外，较多其他因子也可随之波动，对其进行研究可以进一步为甲亢的诊断治疗提供依据[1-2]。以往较多研究认为，甲状腺激素与骨成熟、发育有关[3-5]。本文笔者就甲亢患者骨代谢相关细胞因子及骨代谢指标的变化规律进行研究，现将研究结果报道如下：

1 资料与方法

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【关键词】压力容器；爆炸事故后果；分析；评价

作为特种设备的压力容器，它的用途十分广泛，是一种在石油化学工业、能源工业、科研和军工等国民经济的各个部门都起着重要作用的设备。压力容器由于密封、承压及介质等原因，容易发生爆炸、燃烧起火而危及人员、设备和财产的安全及污染环境的事故。对于任何一个国家来说，安全生产都是关系民生的大事，是需要常抓不懈的重大课题。目前，世界各国均将压力容器列为重要的监检产品，由国家指定的专门机构，按照国家规定的法规和标准实施监督检查和技术检验，但是安全生产的形势仍然十分严峻。

一、压力容器爆炸的特点及形式

爆炸按性质可分为物理爆炸和化学爆炸。发生化学爆炸时会释放出大量的化学能，爆炸影响范围较大，而物理爆炸仅释放出机械能，其影响范围较小。

1）物理爆炸的特点。在爆炸过程中，造成爆炸发生的介质的状态参数发生变化，而化学性质不变化。例如锅炉、压力容器和各种气体或液化气体钢瓶的超压爆炸。

2）化学爆炸的特点。爆炸发生过程中介质的化学性质发生了变化，形成爆炸的能源来自物质迅速发生化学变化时所释放的能量。它主要有以下几种类型：

蒸气云团的可燃混合气体遇火源突然燃烧，是在无限空间中的气体爆炸；受限空间内可燃混合气体的爆炸；化学反应失控或工艺异常造成的压力容器爆炸；不稳定的固体或液体爆炸。

二、压力容器爆炸事故的后果分析和评价

1）爆炸冲击波的破坏作用。爆炸冲击波是一种介质状态（压力、密度、温度等）突跃变化的强扰动传播，最常见的形式是空气冲击波，其传播速度大于声速。多数情况下，冲击波的破坏伤害作用是由超压引起的。超出周围压力的最大压力称为峰值超压p，一般情况下超压意味着侧向超压，即压力是在压力传感器与冲击波相垂直的条件下测量得到的。峰值超压p可以达到数个甚至数十个大气压。冲击波超压对建筑物的破坏作用和对人员的伤害作用如表1和表2所示。

2）爆炸冲击波的超压计算。在相同的爆炸条件下，距离爆炸中心越近，波阵面上的超压也就越大。实验表明，不同数量的同类炸药发生爆炸时，如果距离爆炸中心的距离R之比炸药量q次根之比相等，则所产生的冲击波超压相同，用公式表示即为：

上面的公式中：a=（q/q0）1/3，称为炸药爆炸实验的模拟比。同样，该式也可以写成：

P（R）=P0（R/a）

根据该公式，就可以从某些已知药量的实验中所测到的超压来确定任意药量爆炸时，在各种相应距离下的超压。

3）蒸气云爆炸的冲击波伤害一破坏半径。爆炸性气体以液态储存，如果瞬态泄漏后遇到延迟点火或气态储存时泄漏到空气中遇到火源，则可能发生蒸气云爆炸。导致蒸气云形成的力来自容器内含有的能量或可燃物含有的内能，或两者兼而有之。“能”主要形式是压缩能、化学能或热能。一般说来，只有压缩能和热能才能单独导致形成蒸气云。根据荷兰应用科研院（TNO（1979））建议，可按下式预测蒸气云爆炸的冲击波损害半径：R=Cs（NE）1/3，式中：R表示损害半径，m；E表示爆炸能量kJ，可取E=VHc；V表示参与反应的可燃气体的体积，m3；Hc表示可燃气体的高燃烧热值；N表示效率因子，其值与燃料浓度持续展开所造成损耗的比例和燃料燃烧所得机械能的数量有关，一般取N=10%；Cs表示经验常数，取决于损害等级，其取值情况如表3所示。

三、避免压力容器爆炸事故的具体措施

我国《锅炉压力容器安全监察暂行条例》把压力容器定义为“压力为一个表压以上的各种压力容器”，同时明确规定，设计、制造、安装、使用、检验、维修、改造等部门必须遵照执行。一旦发生爆炸事故，会导致压力容器碎片、爆炸冲击波、有毒介质、可燃介质的燃烧及二次空间爆炸等危害，对生产、经济及人员带来危险。

1）了解爆炸事故的原因。主要由以下情况造成的：容器结构不合理、设计计算有误、粗制滥造、错用材料、强度不足等，尤其是焊缝质量低劣，没有执行严格的质量管理制度，安装不符合技术要求安装附件规格不对、质量不好，以及在运行中超压、超负荷、超温，没有执行定期检验制度等，使压力容器发生失效导致事故发生。

2）预防爆炸事故的措施。在设计上，应采用合理的结构；制造，修理、安装、改造时，加强焊接管理，提高焊接质量并按规范要求进行热处理和探伤；加强材料管理，避免采用有缺陷的材料或用错钢材、焊接材料；加强使用管理，避免操作失误，超温、超压、超负荷运行、阜阳锅炉失检、失修、安全装置失灵等；采用科学合理的设计方案，引进先进的管理方法、技术和设备，加强对压力容器的检查和监控，教育职工严格执行操作规程和各项规章制度，这样才能保证压力容器的安全运行。

四、结束语

本文主要研究了压力容器在一般情况下的爆炸事故，介绍了针对爆炸事故的后果分析及评价方法，有利于管理者采取有效的预防和控制措施，把危险性降到最低，避免或减少爆炸事故给人民带来的伤害，对工业生产和防护有一定的指导作用。

参考文献

[1]郭吉红.压力容器爆炸事故分析和后果预测[J].工业安全与环保.2005，31（9）：52-53

[2]彭蔚华，熊大彬.压力容器安全工程学[M].北京：北京航空工业出版社，1993