细胞器范文

导语：如何才能写好一篇细胞器，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

“细胞器―系统内的分工合作”一节是人教版生物必修一第三章第二节的内容。本节课的知识目标为：说出线粒体、叶绿体的结构和功能;得出“结构与功能相适应”以及“细胞器之间既有分工又有合作”的观念。细胞器的内容对于高一学生是非常抽象和难以理解的，在之前的学习过程中学生很少使用显微镜，即使用了显微镜，学生能观察到细胞就已十分不易，要观察到细胞器，如叶绿体和液泡则更加困难。如何让学生在已有的背景知识下，学习并理解分离细胞器所采用的离心技术，如何引导学生形成细胞器之间是协同合作的关系是下面着重探讨的内容。

1 导入细胞器概念的类比

手机作为现代通讯工具给人们的生活带来了无数的便利。手机在最基本的通讯功能的基础上还衍生出了许多其他功能，如视频聊天、导航、浏览新闻、听音乐、看视频、拍照、摄像等。如今手机也已经成为学生群体中必不可少的沟通和交流的媒介。笔者就以学生非常熟悉的手机作为类比对象，导入细胞器一节。在课前，教师引导学生回顾手机的功能，并启发学生思考手机要实现这些功能所需要的零部件，从而顺利启发学生思考：“细胞作为生物体结构和功能的基本单位，细胞能够完成呼吸作用、分裂、分化、分泌蛋白质这些复杂的生命活动，植物细胞还能进行光合作用，那么细胞中是否也存在零部件呢？”这样引出细胞器的概念。手机和组成手机的零部件之间的关系与细胞和细胞器之间的关系非常类似。细胞器作为一个全新的概念，学生无法理解其与细胞之间究竟是何关系。在手机与手机零部件的类比下，学生便可以在第一时间熟悉细胞器原来就是细胞中的有一定结构和功能的基本单位。

2 探究细胞器思路的类比

如果想要研究手机中零部件的结构，只需将手机拆开，用肉眼观察相应的零部件便可以得知;而在细胞中，人们无法再用肉眼去一一观察细胞器，因为细胞太小，需要借助特殊的“眼睛”的帮助――显微镜，从而顺利地引出首先用显微镜看细胞器来观察细胞器结构的思路。随后，便向学生介绍显微镜的发展过程，介绍目前生物科学研究中常用的扫描电子显微镜。之后，继续启发学生思考：如果想要研究这些零部件都有哪些种类和具体的功能，要将不同的零部件区分开，挨个地进行研究，与研究细胞器功能的思路是通的。首先要将不同的细胞器区分开，究竟如何将这些细小的细胞器分开，笔者则用“粉笔盒”的案例做类比。假设细胞就是一个粉笔盒，粉笔盒中已知有物体，因为摇动粉笔盒会发出声响，但并不知道粉笔盒中具体有哪些物品，这些物品分别是怎样的结构，就像学生已知细胞中有细胞器（光学显微镜可以观察到有叶绿体、线粒体），但具体有哪些细胞器，对这些细胞器的结构特点、功能、名称都不知晓。如果想要研究细胞器的具体类别、结构和功能，就要将它们分离，想要研究粉笔盒中具体有什么物品也需要将粉笔盒中导致声响产生的物品进行分离，从而启发学生思考如何分离盒中的物品（提示学生盒子可以打开，但开的方式由学生决定）。学生自然而然就想到粉笔盒中的物品可能有不同的体积，可以利用过滤的想法，在盒子表面打许多等大的孔（由小到大的顺序），再将粉笔盒摇晃，就可以根据体积将粉笔盒中的物体分离开。

接着，继续启发学生若将打孔的方法应用到细胞上会不会有问题，能否顺利进行，学生自然会想到细胞过小，且无法知道最小的细胞器具体有多大，在细胞上打孔难度极大，也不知道孔该打多大。顺着学生的思路，教师继续启发学生可以从描述物体特性的另一个角度“质量”来思考。教师可通过借助“旋转飞椅”（人坐在由链条牵引的椅子上由慢到快被甩到空中旋转的游乐设施）的案例，帮助学生得出离心的技术方法。因为在相同转速下，体重轻的人被甩得更高更远，而体重相对较重的人会被甩得相对较低也离地面更近。教师利用手机、粉笔盒、旋转飞椅三个类比，可顺利地帮助学生理解科学家探究细胞器结构和功能时所采用的思路。

3 “细胞器之间的协调配合”的类比

篇2

关键词：细胞器知识 中学教学 教学延伸

高中生物人教版必修1《分子与细胞》第3章“细胞的基本结构”中，细胞器相关知识的教学活动是重点和难点。细胞器种类繁多，功能和结构各异，识别和记忆的内容很多。教材提到：线粒体是细胞的“动力车间”，叶绿体是植物细胞的“养料制造车间”和“能量转换站”。线粒体和叶绿体中含有少量DNA和RNA。至于其中的核酸（DNA、RNA）的功能就没有做详细介绍。但是习题中经常会出现要应用这些知识解决的一些问题。

下面我就列举几个在平时经常会涉及有关细胞器知识的判断题，给予归纳总结。

问题1：某细胞中，一条还未完成转录的mRNA已有核糖体与之结合，并翻译合成蛋白质，则该细胞一定不可能是真核细胞。

问题2：在根尖细胞中进行DNA转录的结构只有细胞核。

大部分学生认为这两个判断的答案是正确的。

问题1中的表述可以得知，该细胞可以边转录边翻译。而真核细胞转录在细胞核内进行，翻译在细胞质（核糖体）中进行的。很显然转录和翻译不是同步的。而原核细胞无细胞核只有拟核，在转录还未结束的同时就可以进行翻译了。

问题2中根尖细胞中核内含有DNA，可以进行DNA转录。

拘于高中生物教材中的知识回答似乎没有太大问题。因为高中教材虽然介绍了在线粒体、叶绿体中含有DNA和RNA，那么其中的基因是如何表达发挥作用的呢？

研究发现，线粒体和叶绿体中除有DNA外，还有RNA（mR―NA，tRNA，rRNAl、核糖体等，说明这两种细胞器都具有独立进行转录和转译的功能。就内共生学说看，线粒体和叶绿体都是被真核生物内吞的原核生物，所以线粒体和叶绿体与原核生物类似，其中的DNA不与蛋白质构成染色体，而是环状DNA，并且具有自己的核糖体。由此来看，它们的基因表达过程应该与原核生物的相同，在转录的同时，正在延长的mRNA～：就可以开始翻译了。

经过上面知识的补充、延伸，发现问题1的错误在于忽略了真核细胞内细胞器（线粒体、叶绿体）的转录翻译也是同步的。而问题2中根尖细胞内的转录还可以发生在细胞器（线粒体）内。

问题3：在真核细胞中，DNA的复制在细胞核中完成，而蛋白质的合成在细胞器中完成。

问题4：在一个正在分裂的大肠杆菌细胞中，既有DNA的复制又有转录与翻译过程：在一个人体的神经细胞中，只有转录与翻译过程，没有DNA的复制过程。

同样大部分学生认为这两个判断的答案是正确的。

真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，只有细胞分裂时细胞核内的才能进行DNA复制。而只要是活的细胞，均可以进行转录、翻译过程。人体的神经细胞是高度分化的细胞，失去了分裂能力，不进行DNA复制，只有转录与翻译过程，没有DNA的复制过程。

线粒体DNA、叶绿体DNA都呈双链环状，与细菌DNA相似。而且其中的DNA都可以自我复制，复制也是以半保留方式进行的。它们的复制都受细胞核的控制，复制所需的DNA聚合酶都是由核DNA编码，在细胞质核糖体上合成的。而且细胞器的复制与细胞分裂不是同步的。

经过分析，如果只考虑细胞细胞核中DNA，则问题3、4这两句话都是对的。但是如果考虑到人的神经细胞内的细胞器中DNA的复制，那么这两题的叙述显然是不够正确的。

问题5：细胞分裂过程中叶绿体、线粒体是如何增殖的？分裂后细胞器的数量会均等吗？

在高中生物教材必修1《细胞的增殖》一节中提到，正常动物细胞中的中心体由两个相互垂直的中心粒构成。在细胞分裂间期一个中心体复制，形成两个中心体，并在前期逐渐移向两极，发出星射线形成纺锤体。细胞分裂后每个子细胞中又各含一个中心体。

细胞分裂中不仅要进行染色体的复制并且平分到两个子细胞中，各种细胞器同样要增殖，随着细胞质的分裂进入子细胞中，不同细胞器其增殖方式亦有所不同。

线粒体的增殖是由原来的线粒体分裂或出芽而来的。线粒体的DNA进行复制，线粒体中部缢缩或中间产生隔膜而一分为二。有的线粒体以“出芽”方式进行繁殖，先在线粒体上出现球形小芽，然后与母体分离，不断长大而形成新的线粒体。

叶绿体由原生质分化而来，叶绿体靠分裂而增殖，这个分裂是靠中部缢缩而实现的。

细胞器经过复制增殖后，子细胞中的各种细胞器数量并不一定是均等分配的。因为细胞器并没有类似纺锤体的帮助精确平分的机构。不过细胞质近似液体，所以细胞器原本分布就较匀，所以细胞质一分为二后两个新细胞中细胞器数量近似。

问题：6：内质网是细胞内蛋白质合成和加工，以及脂质合成的“车间”。

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【摘要】 目的研究西黄丸抑瘤作用对肿瘤细胞周期的影响。方法采用体内体外两方面实验进行。体外实验：将西黄丸浸提液加入人原发性肝癌细胞株SMMC7721培养基中，72 h后流式细胞术测定SMMC7721细胞的细胞周期；体内实验：连续10 d给予移植性U14荷瘤小鼠模型西黄丸，10 d后流式细胞术测定U14细胞的细胞周期。结果在体外实验中，西黄丸（200 μl/ml）使SMMC7721中G0-G1期细胞比例显著低于肿瘤细胞对照组，G2-M期增多；在体内实验中，西黄丸高剂量组（0.96 g/kg）中也导致U14细胞G0-G1期细胞比例显著低于模型组，G2-M期细胞增多。结论 体内、体外研究结果显示西黄丸可特异性地将肿瘤细胞阻滞在G2-M期，提示西黄丸可以通过影响肿瘤细胞周期来发挥抑瘤效应。

【关键词】 西黄丸 抗肿瘤 细胞周期

AbstractObjectiveTo study the antitumous effect of Xihuang Pill on cell cycles of cancer cells. MethodsLeachate of Xihuang pill was used to treat human malignant tumor cell strains（SMMC7721）in vitro， after 48 hours the cycle of tumor cells was determined by flow cytometry. At the same time， Xihuang pill was used to treat tumor-bearing mice (U14) for 10 days in vivo， the cycle of U14 cells was determined by flow cytometry. ResultsExperiment in vitro showed that the proportion of G2-M of SMMC7721 treated by leachate of Xihuang pill was high (P

Key wordsXihuang pillt； Antitumous effect； Cell cycle

西黄丸为中药抗癌名方，功效活血化淤、清热解毒、消肿止痛。临床文献报道，西黄丸用于乳腺癌、肝癌、白血病等多种恶性肿瘤的治疗，取得了肯定的疗效。在既往的研究中发现，西黄丸可抑制肿瘤细胞的生长。为了进一步研究西黄丸抑瘤的特点，笔者采用体外、体内实验的方法，考察了它对肿瘤细胞周期的影响，具体实验如下。

1 材料

1.1 药物西黄丸，九寨沟天然药物集团有限公司生产，批号030501。体外实验采用西黄丸低温浸提液，体内实验采用西黄丸混悬液进行。西黄丸低温浸提液制备方法：采用密闭容器，以预冷4℃的RPMI-1640培养液浸泡西黄丸24 h（比例为0.1 g/ml），超声振荡助溶2h，复以4℃下继续浸泡48 h后取上清液，用0.22 μm微孔滤器过滤后，得到西黄丸低温浸体液。实验时用RPMI-1640培养液稀释至所需浓度使用。

1.2 试剂

RPMI Medium 1640培养基Gibco公司，批号1165062；胰蛋白酶（Trypsin，1：250）Serva公司，批号27043C； RNA酶（RNase）Roche公司，批号90436528；新生小牛血清(Newborn Bovine Serum，NBS)三利生物制品厂，批号20040101；碘化丙啶（Propidium Iodide， PI）Sigma公司，广州展晨生物科技有限公司进口分装。

1.3 细胞株

人原发性肝癌细胞株SMMC7721，由成都中医药大学病理教研室提供。细胞株用含10%新生小牛血清的RPMI-1640培养基培养，细胞贴壁达80%时传代。

1.4 动物

昆明种小鼠，雌性，18～22 g，成都中医药大学实验动物中心提供，批号SCXK（川）2004-11。

1.5 仪器Beckman Coulter Epic XL 流式细胞分析仪；Heraeus BiofugeStratos低温离心机。

2 方法

2.1 体外实验

2.1.1 分组

体外实验分对照组（含人肿瘤细胞）、实验组(含人肿瘤细胞和西黄丸浸提液，设两个浓度100，200 μl/ml）。

2.1.2 方法

取对数生长期的SMMC7721，0.25%胰蛋白酶消化，计数细胞，用1640培养基稀释成5×105/ml浓度的单细胞悬液，然后取每孔1 000 μl，接种到6孔板上，置37 ℃，5 %CO2，饱和湿度的细胞培养箱中，培养6 h待细胞贴壁后，设对照组、实验组，均设4复孔。对照组用等体积1640培养液代替受试药物，实验组加入不同浓度的药物，每孔200 μl。6孔板置37 ℃，5 %CO2，饱和湿度的细胞培养箱中，培养72 h后。弃培养液，收集6孔板内的细胞，PBS洗涤离心后，70%乙醇固定12 h，去乙醇，经PBS洗涤2次，加PI染剂混匀，置4℃冰箱避光染色30 min后，上机检测细胞周期，每次测定10 000个细胞。

2.2 体内实验

2.2.1 小鼠移植性恶性肿瘤细胞株

小鼠宫颈癌U14由成都中医药大学病理教研室提供。

2.2.2 小鼠移植性肿瘤的接种与传代

根据文献方法［1，2］将液氮冻存昆明小鼠子宫颈癌瘤株进行复苏，经体外培养增殖，生长稳定后以5×106细胞量接种于昆明小鼠腹腔内，待其长出癌性腹水后传代培养至5代，取小鼠无血性的癌性腹水，供接种使用。实验时将第5代的肿瘤小鼠癌性腹水用无菌生理盐水调整细胞数至5×106，接种于昆明种小鼠右侧腋窝皮下（每只皮下注射0.1 ml），建立移植性U14荷瘤小鼠模型。

2.2.3 动物分组

实验时取昆明种小鼠30只，按体重分层随机分为3组，每组10只动物，分模型对照组、西黄丸高剂量组、西黄丸低剂量组。各组均使用移植性荷瘤小鼠。

2.2.4 给药及实验方法

模型对照组给予等体积蒸馏水灌胃；西黄丸低剂量组给予西黄丸混悬液0.48 g/kg灌胃给药（西黄丸每日人用量6 g，以50 kg为正常人体重计算，给药量相当于人用量9倍）、西黄丸高剂量组给予西黄丸混悬液0.96 g/kg灌胃给药（给药量相当于人每日用量18倍）1次/d，于动物接种后1 d开始给药。连续给药10 d，处死动物，剥离皮下瘤块，在PBS中用眼科剪将瘤块剪碎后，经300目筛过滤除去成团细胞，离心800 r/min，5 min，取上层液体，经1 500 r/min离心10 min，弃上清，离心后得的细胞，再次经PBS洗涤1次后， 70%的乙醇固定24 h。去乙醇，经PBS洗涤2次，加PI染剂混匀，置4℃冰箱避光染色30min后，上机检测细胞周期，每次测定10 000个细胞。

2.3 统计学方法

用《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包PEMS3.1进行。

3 结果

见表1～2。表1 西黄丸对SMMC7721细胞周期（72h）的影响（体外）(略)

表1可见，与肿瘤细胞对照组相比，西黄丸浸提液100，200 μl/ml使G0-G1期细胞明显减少(P＜0.01)；西黄丸浸提液200 μl/ml G2-M期细胞比例明显增高(P＜0.01)。

表2可见，与模型组相比，西黄丸高剂量组使G0-G1期细胞明显减少（P

4 讨论

西黄丸出自清代王洪绪所著的《外科全生集》，为治疗“乳岩”之家传秘方，由牛黄、麝香、乳香、没药4味中药组成，方中牛黄别名犀黄，牛黄产于西北者，又叫西黄，故西黄丸也称犀黄丸。其主要功效为活血化淤、清热解毒、消肿止痛。它组方简单，疗效确切，临床应用广泛，为中医抗癌名方。目前较多的临床研究报道：西黄丸用于肝癌、乳腺癌、白血病、肺癌等恶性肿瘤的治疗，取得了肯定的疗效。既往的研究发现，西黄丸对肿瘤细胞具有明显的抑制作用，但抑制作用发生的细胞周期环节是本次研究的焦点，故我们采用体内、体外两方面的实验，对此环节进行了研究。

细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束的一个周期称为细胞周期。增殖型细胞的细胞周期分为4期，即G1期(DNA合成前期)、S期(DNA合成期)、G2期 (DNA合成后期)、M期(有丝分裂期)。有时细胞长期处于静止的非增殖状态，常称为G0期［3，4］。流式细胞技术(Flow Cytometer， FCM)是细胞周期研究中常用手段，能够对细胞和细胞器及生物大分子进行高达每秒上万个染色体的分析。具有速度快、精确度高、准确性好的特点，是目前最先进的细胞定量分析技术。

在既往的文献中，有报道显示［5，6］，抗癌中药的作用是将肿瘤细胞阻止于G0-G1，使肿瘤细胞处于相对静止状态而发挥抑瘤作用。

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[关键词]血管内皮祖细胞；CD133(AC133)：免疫磁珠

[中图分类号]Q254　[文献标识码]A　[文章编号]1008―6455(2007)01―0015－04

一般认为内皮祖细胞(endothelial progenitor Cell，EPC)仅见于胚胎时期，但近年来，越来越多的证据表明在成年个体中也存在少量的EPC。1997年ASahara等报道在成人外周血中分离出EPC，体外培养呈梭形，具有形成管腔样结构的能力，且能够表达成熟内皮细胞的特异性抗原，在动物实验中可参与新生血管的形成，此后，又陆续观察到骨髓和脐带血中均存在EPC。EPC具有促进血管新生，加速缺血组织血管化的作用。本实验采用免疫磁珠法从人脐血中分离培养EPC，观察EPC在体内缺氧条件下分化成内皮细胞，并参与血管生成，为治疗性血管发生研究及组织器官移植提供种子细胞。

1　材料和方法

1．1主要试剂及标本来源：胃癌GC7901细胞株由第四军医大学实验动物研究中心细胞库提供)；ACD―B抗凝液(上海市血液中心)：1．077淋巴细胞分离液(天津TBD公司)；免疫磁珠试剂盒(挪威DYNAL公司)；Fibronectin(美国Sigma公司)：异硫氰酸荧光素(FITC)CDl33单抗(美国R&D公司)；抗人vWF单抗(英国Serotec公司)；F1RC－二抗及辣根过氧化物酶标记二抗、CD34单抗(丹麦DAKO公司)；EGM-2MV培养基(美国Cambrex公司)；细胞荧光染色试剂盒(PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Kit，Sigma，美国)；人纤维蛋白原(Fibronogen，Sigma，美国)：人凝血酶(Thrombin 500，IMMUNO AG，奥地利)：PGA真皮替代物(NEOVEIL，日本)。BALB／c，nu／lnu裸小鼠15只，雌雄不限，鼠龄4～6周，体重18～23g(第四军医大学实验动物研究中心)；人脐血标本来源于本院34例妇产科健康产妇(产妇均知情同意)。

1．2　EPC分离及诱导分化培养：ACD-B抗凝脐血，1：2加入磷酸盐缓冲液(PBS)稀释，取7ml缓慢加入3ml淋巴细胞分离液，621×g离心30min，取单个核细胞层，PBS洗涤3次去血小板。免疫磁珠与FITC-CDl33单抗室温孵育30min，PBS洗去多余单抗。将包被FITC-CD133的免疫磁珠加入单个核细胞中，室温孵育30min，置于磁场中1min，弃细胞悬液，参照免疫磁珠试剂盒说明书分离出CD133+细胞。加入EGM-2MV培养基(hEGF，Hydrocortisone，VEGF，FGF-B，R3－IGF－1)，接种于包被Fibronectin的25cm2培养瓶中，37℃，饱和湿度培养。24h换液除去未贴壁细胞，3天后半量换液，培养3～4周。检测指标：①原代EPC的生长曲线：细胞以5×103个／孔的密度接种于96孔板。1～19天，隔日随机抽取4个培养孔，噻唑蓝(MTT)法测定各孔吸光度值，绘制细胞生长曲线。设不加细胞只加培养液为空白对照。②CDl33＋细胞分化：培养5天、10天的细胞分别加入FITC-CDl33单抗、CD34单抗、vWF单抗，室温孵育30min，PBS洗去多余单抗。加入辣根过氧化物酶标记二抗，二氨基联苯胺(DAB)显色；取培养10天的细胞。③行透射电镜观察找Weibel-Palade小体。

1．3裸鼠成瘤实验：常规方法复苏、培养将胃癌GC7901细胞。取1×106个／1001×1原代培养EPC与1×106个／100μl胃癌GC7901细胞混合接种于裸鼠背部皮下。30天过量麻药腹腔注射处死裸鼠，取出肿瘤。40g／L多聚甲醛固定12h，常规石蜡切片vWF免疫组化染色。观察瘤体内EPC参与构成血管情况。

1．4裸鼠皮实验：取5×106EPC，90g(800rpm)，离心5min弃上清，加入稀释液(Diluent C)0．5ml，重悬取1μl PKH26荧光染液，迅速加入细胞悬液中室温孵育2～5min。加入1ml RPM11640／10％FBS培养基中止染色，调整细胞浓度为1×106／ml，荧光显微镜下观察。采用0．3％戊巴比妥钠腹腔麻醉。裸鼠腹腔注射0．5～0．7ml，3～5min麻醉生效后，根据设计于腹部肉膜层与深筋膜的浅面之间，将皮瓣仔细掀起，荧光标记EPC单细胞悬液100μl(1×105)，分成3点(远点、中点、蒂部)经皮软组织面均匀皮下注射于皮瓣。术后7天，过量麻药腹腔注射处死裸鼠，于皮中段切取组织，大小1．0cm×0．5cm。①细胞示踪：行冰冻切片，采用570nm波长，荧光显微镜观察。②常规石蜡切片vWF免疫组化染色，观察EPC参与构成血管情况。

1．5取对数生长期EPC及成纤维细胞与纤维蛋白原溶液(5g/L)按1：2：3混合，加入PGA材料(预先加入20u／40μl凝血酶)，37℃放置10min，混悬液便形成凝胶状固定于网孔中，加入EGM-2MV培养基培养。培养48h后，移植于裸鼠背部皮下。于裸鼠移植后21天取材，4％多聚甲醛固定。常规石蜡切片，vWF免疫酶组织化学染色，镜检。

2　结果

2．1 EPC传代培养后，细胞形态及密度均匀，前3天为相对抑制期，此后呈指数形式快速增殖，10天后达到80％～90％融合。EPC生长曲线(图1)显示：人脐血EPC接种后5天内细胞数量无明显增加，从第7天开始细胞数量明显增加，在第16天达到最高峰，以后增殖趋于平缓。

2．2原代EPC贴壁缓慢，24h后悬浮细胞重新接种

培养仍有细胞贴壁生长。EPC在Fibronectin包被的培养皿中培养24h后，可见到部分圆形大单核细胞粘附于培养瓶底，3天后细胞贴壁完全，少量细胞开始伸展，随着诱导培养时间的延长，圆形细胞逐渐减少，梭形细胞数量逐渐增多。7天左右出现由十数个细胞形成的细胞集落，可见20～30或更多数目细胞排列成内皮细胞特异性条索状结构或网格状结构。10天后形成明显克隆，并有梭形贴壁细胞从其边缘不断生成，2～3周，细胞长满培养瓶底，单层细胞呈多角形融合成片状(图2)。

2．3原代培养第10天细胞透射电镜显示：人脐血EPC平均直径15μm，核／浆比例大。细胞膜伸出许多伪足丝，基底膜呈多层。胞浆内可见一种短棒状小体，含平行管状的内部结构，即Weibel-Palade小体(图3)，是内皮细胞最具特征性的细胞器。

2．4　5只裸鼠接种细胞7天后均见肿瘤快速生长，抗人vWF免疫荧光组织化学染色显示大量EPC参与肿瘤血管构建(图4)。

2．5　EPC参与皮血管重建的观察：通过实验室体外培养，证实染色后细胞增殖活性无明显变化，在荧光显微镜下可以清楚地辨别细胞的轮廓，染料在细胞膜上分布均匀一致。通过移植后7天皮瓣中段真皮下层荧光显微镜观察，发现皮真皮下层存在能激发出红色荧光的细胞，多呈散在分布，或呈条索状分布(图5)，偶可见管状结构。并通过抗人vWF免疫酶组织化学染色，进一步证实EPC确实参与皮血管重建(图6)。

2．6 EPC、成纤维细胞与纤维蛋白原混悬液与凝血酶混合后，数秒钟后即形成胶冻状，数小时后可见细胞均匀分布于真皮支架的各个层面，并逐渐伸展为梭形或多极状，贴附于PGA支架纤维材料上(图7)，随培养时间的延长，细胞呈簇状聚集生长。移植21天，真皮替代物支架中的孔隙已完全被细胞和细胞外间质填充，支架部分降解，被大量平行排列的新生胶原纤维所替代，可见大量新生小血管形成，vWF免疫酶组织化学染色阳性(图8)，表明种植的EPC具有生物学活性，参与血管化过程。

3　讨论

内皮祖细胞(endothelial progenitor cell，EPC)是一类能循环、增殖并能直接分化为血管内皮细胞(endothelial cells，EC)，但尚未表达成熟血管内皮细胞表型的前体细胞。以前认为EPC仅仅出现于胚胎血管发育阶段，在人出生后，并不存在EPC。但最近研究发现在脐带血、成人外周血、骨髓中的CD34＋细胞或flk 1+细胞或CD133+3细胞离体培养两周后均能分化为内皮细胞，从而证实成年个体中存在EPCI3-41。并且经异体骨髓移植模型证实，成年个体外周血中的EPC来源于骨髓，在受到血管内皮生长因子(VEGF)、粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子(G／M-CSF)等细胞因子以及缺氧刺激后可加速动员入外周血。在动物后肢缺血模型及大鼠急性心肌梗死模型中，人外周血、脐带血和骨髓来源的EPC移植均取得了很好的疗效。为临床缺血性疾病的血运重建提供了一种新的治疗策略。

目前对EPC发育分化的机制尚不十分清楚。EPC从原血干细胞而来，定向分化为内皮细胞，在此分化发育过程中，flk1是最先表达的内皮标志，其次是PECAM和Tie2的表达。成人外周血中的CD34+／ACl33+／flkl+EPC体外培养分化为成熟内皮细胞过程中，干细胞标志ACl33+逐渐下降，2周后完全消失，表明EPC是从原血干细胞到内皮细胞过程中的一个过渡的转瞬即逝的细胞表型阶段，随着系列定向和分化成熟，在某些基因的调控下，细胞表型逐渐改变。目前尚未发现EPC的特异性表面标记物，CD133是新近发现的干细胞标记，其表达在造血干／祖细胞分化过程中迅速下调，而不表达于CD34-群体。更重要的是CD34+／VEGFR-2+的细胞均表达CD133，这就使CD133成为富集EPC的理想细胞标记。

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第一天去见了主管的经理，据说口才是很棒的，初次见面，感觉她很干练。保险公司的氛围与其他地方相比是很不同的，这里有一种很活跃的气氛，在这里真的感受到了一些以前没有感受过的东西。由于我没有什么经验，不能跑业务，所以就呆在办公室和经理、组训一起。

在保险公司，每天早上都会有晨会，晨会早上8点准时开始，迟到会扣钱的，但只是形式上的，一般会扣一块钱的样子，主要还是调动大家的积极性。晨会由主持人主持，一般就是组训或负责的经理，但为了锻炼各个业务员，也经常的会让业务员上去主持。晨会首先会让全体同仁起立做晨操，很有激情，在音乐的节拍下做各种滂湃的动作，会舒缓紧张的心情，还会让沉睡中的身体舒展开。记得第一天去公司，要让我上台作自我介绍，本来刚刚到的时候还有些紧张，但跟着做完晨操后紧张感就没了，很从容的上台作了自我介绍。在晨会中，还会公布昨天各个业务室的业绩，给予鼓励。从早会中，让我看到了朝气，想必开完早会后一天的工作将会充满激情。

这次实习中，公司召开了两次产说会，一次是岁岁登高，一次是鸿福年年。通过这两次产说会，让我对险种有了新的认识，而且懂得了什么叫有压力才会有动力。产说会是有关产品的说明会，各个业务员会带着自己邀请到的客户来参加产说会，由主讲师讲解关于这个产品的情况，让客户了解到该险种的价值，有何优惠，自己能得到什么利润，以便客户选择适合自己的险种投保。通过讲师生动的讲解，加上现场回馈奖品，很多客户都会现场签单，所以说，产说会被保险公司看作一个和客户沟通得很好的桥梁。还记得那次岁岁登高的产说会，当时现场签单的客户并不多，有5,6份吧。当时一位省公司的讲师说，还是因为票价的问题，因为我们的票价太便宜，有时甚至不需要用票，所以业务员就没有一种压力，只是随便邀请一个客户来听便完事了，随便邀请到的客户又有几个想真心来签单的呢。在接下来的一场票价为110元省公司的产说会中，现场签的都是2万元以上的单子，开始时，只有几个业务主管买了票。但是，在那个口才很好的经理的说明下，有越来越多的业务员购买了票，就像那个经理所说的，只要买了票就一定能带来客户。果然那天所有买票的业务员都带来了客户，而且有了不错的成绩。

还有就是创说会，公司有像是雷霆行动等扩员活动，增员的任务是很重的。业务员会带领自己邀请的新进人员来听创业说明会，之后有意者将会留下面试。从事保险行业，首先必须通过从业资格考试，拿到资格证书，于是，新进人员会进行考试培训。考试内容是关于保险的一些基本知识和其他的与保险相关的法律法规，像是《民法通则》《保险法》《消费者权益保护法》等等。为了了解更多的知识，我和这些新进人员一起进行了学习，在此期间，尤其学到了很多关于保险法的知识，收获颇丰。

“让客户满意”不是一句空洞的口号。在实际工作中，公司里有许许多多的客户服务团队和员工在为此努力。他们在各自平凡的岗位上，勤勤恳恳，认真负责，用微笑耐心的态度和专业的服务水平，让客户满意，用真诚的服务体现自身价值，也在为客户创造价值。他们也是公司在第一线和客户打交道的“形象代言人”。

还记得有一次晨会中，经理请来了两名其他地区的先进工作者和大家交流，至今令我印象深刻。第一位上台交流的，声音很响亮，很有自我表现能力，一上台就唱起了歌以吸引大家注意。这是一位56岁的女士，但是她的语气，气色，情绪，都无法让人猜出她的实际年龄，感觉充满活力。从她的身上，我看到了激情与真诚的魅力，无论任何人与她想出一段时间后，都会感到她身上所散发的激情，并被此所感染，变得拥有生机活力。在激情的背后，她又不缺真诚，所以很多客户只对她所推荐的险种感兴趣，于是她的业务越来越好。只要对自己工作充满激情，我想任何工作都会变得有意义。“精诚所至，金石为开”，只有自己真诚地对待别人，别人才有可能接纳你，才会信任你，那样工作也会变得顺利。另一位上台的女士，与前一位是十分不同的，她很文静，感觉很踏实，也很真诚。这是两种不同的风格，但她同样的优秀，据说很快会升为副经理。她不会充满激情的与你交流，但是，她却发展了很多的下线，因为她待人真诚，有耐心，很多人都信任她，都愿意跟着她干，于是她的业务室人员越来越多，而且，她关心每个同事。从她身上，我同样看到了真诚，我想在以后的生活中，无论从事什么工作，都要有对工作的热情和待人的真诚。

每个营销员要做得更多，要努力提升自己，要诚信热情，要学会自我管理，要真正为客户考虑问题……每一个非保险人也应该对营销员多一些宽容、多一些理解，对保险多点认识，不要厌恶，不要恐惧——它只不过是一份契约而已。

篇6

受访嘉宾二：北京市脐带血造血干细胞库业务负责人 邓钺

（注：本刊记者分别采访两位嘉宾）

保存脐带血早已经不是什么新鲜事了。准妈妈一般会在产前的孕妇学校了解到保存脐带血的信息，但是，因为缺乏对脐带血全面和科学的认识，是否保存脐带血仍然是让很多准妈妈左右为难的事情。为难的原因大致分两类，一是相对于近2万元的自存费用和低概率的重大疾病发生率，保存脐血到底值不值得；二是保存后，看不见摸不着，长期不管不问，脐血库是否能保证其保存和管理的质量。

脐血的利用，不只白血病

大众健康：对于公众来说，了解脐带血的机会不是很多，有人认为脐血只能治疗白血病。

刘开彦：保存脐带血是为了保存脐血中的造血干细胞。而造血干细胞所治疗的疾病不仅仅是白血病。目前，国际上利用脐带血治疗过的疾病已经有80多种，我国目前利用脐血参与治疗的疾病也已经有30种以上。1996年，北京大学人民医院、北京大学血液病研究所建立了中国首家脐带血造血干细胞库。2000年，北京脐血库向北京大学人民医院提供了第一份脐带血用于临床移植，成功救治了一名非霍奇金淋巴瘤患者。时至今日，仅北京脐血公共库就已经利用脐血治疗了500例之多。全国北京市、天津市、上海市、山东省、广东省、浙江省、四川省共7个脐血公共库，目前已累计提供了2000份脐血用于疾病的治疗。截至2013年底，全球脐血移植超过38000例，绝大多数为非血缘造血干细胞移植。随着医学的发展，应用脐带血造血干细胞治疗的疾病种类会越来越多，技术也会越来越成熟。

所以，保存脐血实际上是保存了一种希望，这种希望会随着医学科技的发展而越来越丰富。保存脐带血造血干细胞不仅对个体是储备或保险，对于血缘相关的亲属或用于公共库捐赠都有很好的应用前景和价值。

邓钺：保存脐血与买保险有相似的地方。有车一族年年都会为爱车购置保险，但不见得年年都会用到车险。脐血也是一样。不是为了将来一定会用到而保存，而是为了以后需要的时候有可用。要知道，虽然白血病的发病率为每10万人约3人，但是对于那些不幸罹患疾病的家庭来说，几率就是100%。所以是否保存脐血还是取决于公众的认识。

大众健康：对于脐血的认识，很多准妈妈没有得到准确信息的途径，而网上的信息很多都是片面的，以致于很多准妈妈存有各种疑虑。比如，我在一个人气颇高的母婴论坛上，就曾看到有人很肯定的发帖称，自体移植脐带血尚无成功先例。利用异体脐带血移植是已经得到临床验证的医疗手段，但自体移植获得成功的，全世界尚无一例报道。

刘开彦：1998年国际上就有自体脐血移植的报道，目前，全世界已有上千自体脐血治疗的病例。2009年，我国成功进行了第一例自体脐带血移植，治疗的疾病为神经母细胞瘤，也是亚洲的首例。这也是北京脐带血造血干细胞库首例储存的脐带血成功用于临床。我记得是2009年4月，一名2岁的儿童在北京儿童医院接受了移植手术。

邓钺：我们北京市脐血库已经成功进行了9例自体脐带血的移植。去年，我们成功进行了第9例、同时也是我国年龄最小的自体脐带血移植。一名出生仅3个月的小婴儿被确诊患上了急性未分化型粒细胞白血病。因为孩子年龄太小，所以一度被怀疑为先天性白血病。但幸运的是，通过提取脐带血样本，最终确定孩子所患的并非先天性白血病。2013年7月，孩子在首都儿科研究所接受了移植。我还记得，孩子的妈妈在看到我们的工作人员送去救命血时，写下了“多亏当时留了脐带血”的字条，她透过厚厚的玻璃窗，含着眼泪一直在点头。

大众健康：这个案例真感人！看来，各位准妈妈真的不能随意轻信网络信息。刚才碰巧二位所提到的脐带血移植都是婴幼儿，我也听过一些信息，说脐带血移植只适用于10岁以下儿童，因为脐带血的数量有限，每一个产妇的脐带血大概也就是50～80ml，根本不足以用于成人的治疗。 这个信息是否也不甚准确？

刘开彦：是的。10年之前，北京大学人民医院首份脐带血成功用于临床的同年，也就是2000年，北京市脐血库向北京大学人民医院提供了双份脐带血，我们成功救治了一名体重95公斤的白血病患者。这也是我国首例成功移植双份脐带血造血干细胞的病例。目前成人的脐血移植，无论国内还是国外，均以单份脐血为主。

大众健康：95公斤！那不但是成人，而且将近200斤体重的成人，是个质量偏大的成人呀！那是不是成人的治疗都需要双份脐血呢？

邓钺：也不尽然。有的成人只要一份也可以成功，也有孩子需要双份的。这要具体看所患的疾病和治疗手段。

大众健康：刚才刘主任也提到，储存脐血不仅仅是对将来个体应用，对于血缘相关的亲戚也很有应用的可能。这个怎样理解呢？

刘开彦：就是指脐带血配型时HLA A 、B、DRB1 6个点位的相合度。对于孩子来说，脐带血与其100%相合，与孩子的父母为半相合，与孩子的兄弟姐妹25%半相合，25%几率全相合。对于异体脐带血移植来说，只有相合度达到一定程度后，才能够进行手术移植。

大众健康：我们有没有为亲属提供脐带血的成功案例？

邓钺：2008年，一位四川的李女士在怀孕37周时被检查出患有白血病。家人对她隐瞒了病情，曾劝她放弃怀孕接受治疗。医生得知此情况后，建议患者家属将孩子的脐带血储存到北京市脐血库，以便为日后进行移植治疗时使用。当年12月，李女士顺利进行了剖宫产手术，并采集了70毫升的脐带血。生产后，医生开始为她寻找合适的骨髓，但最终也没找到配型完全相合的骨髓。于是医生建议用患者父亲配型半相合的骨髓进行移植。为了降低父亲半相合骨髓移植的风险，需要使用孩子留下的脐带血进行辅助治疗，来降低排异反应。2009年1月。李女士成功接收了手术。移植1个月后，李女士病情逐渐好转。原本AB型血的她竟然变成了跟父亲一样的B型血，说明她的造血系统已经重建。

除了自存，您还可以捐献

大众健康：很多准妈妈也是考虑到自存费用所以有所犹豫。目前我们的费用是多少？

邓钺：目前，在我们北京脐血库的自存费用为19800元。

大众健康：这也不算个小数字了，那这19800都包括哪些费用呢？

邓钺：我们采集、制备和检验的费用是6800元，其余都是年度保管费，每年980元，一共18年。当然，也可以采取按年的方式来缴纳保管费用，跟分期付款似的。

大众健康：除了自存，也可以进行捐献。那捐献和自存在采集程序和储存上有什么不同吗？

邓钺：没有什么不同，都是一样的。在孕妇学校的宣传也是一样的，都是想让大家能够充分认识脐带血的价值。产妇签署了知情同意书之后，会拿到一套采集的器皿，然后进产房之后直接交给大夫就可以了。我们的储存条件也都是一样的，没有自存和捐献之分，都保存在同样的条件和环境下，完全一模一样。虽然捐献的脐带血存在公共库，自存的脐血存在自存库，但这都只是名称上的不同，在档案记录中有所区分，而实际的存储都是同样的。

大众健康：捐献脐带血的捐者可以获得怎样的利益？

邓钺：捐者会得到一份自愿捐献脐带血的证书，今后在其本人和亲属需要时，都可以得到脐带血的优先配型权。

大众健康：那在捐者需要时，是否也可以使用自己捐出的那一份脐带血呢？如果可以，这样跟花钱自存有什么区别？

邓钺：捐献就不是自己的了。就是说，如果是捐献，脐带血的所有权在血库，捐献者仅仅是有脐带血的优先配型权，不一定能够使用到自捐的脐带血，而且还需要支付相应的配型、使用费用。但如果是自存的，那么脐带血的所有权属于自己，无论何时、如何使用、给谁使用都可以由自己支配，而且无需额外支付配型和使用费。

刘开彦：的确有很多家庭是怀着这种侥幸的心理来进行捐献的。捐献出来的脐带血有可能由以下几种途径消耗掉。一是临床。我们2007年加入了中华骨髓库，将公共库所有数据纳入中华骨髓库数据配型业务，共用检索查询平台，共同为患者和医院提供检索查询服务。数据都是公开的，所捐献的脐带血有可能被需要的患者配走。二是我们每年都要向科研单位提供脐带血来进行科学研究之用。这部分脐血也出自公共库。三是每年我们会随机抽取脐血进行质检，以确认我们的储存质量。所捐出的脐血也有可能被抽到。

当然，如果很幸运，捐献者需要帮助时，所捐出的脐血刚好没有消耗掉，还在我们脐血库，那捐献者当然可以首选这份脐血。

但目前的情况来看，捐献脐血的过程并不顺畅，存在很多问题。

大众健康：主要都有哪些问题呢？

邓钺：最主要的问题就是捐献者的盲目性。不花钱，对自己也没什么影响，那捐就捐吧。存在这样想法的人不在少数，其实他们并不明确捐献的意义在哪里。所以导致了很多在随访中找不到联络人或者采集后忽然拒捐，不愿意配合随访的情况。比如搬家了，手机换号了，不愿意把宝宝的健康情况告知我们的随访人员等等。

大众健康：这会导致什么后果？

邓钺：我们随访的内容会关系到这份脐血的有效保存和利用。如果我们不能联络到捐献者，那么这份采集到的脐血就只能作废了。我们曾经发生过患者配型终于配上了，却找不到捐献者的情况。我们的工作人员打了无数的电话，甚至找到当时生产的医院都未果。最后只能放弃这份脐血。这样的案例不只一例。

大众健康：真是太可惜了！您认为捐献的意义在哪里？

邓钺：储存脐带血，真的是一生只有一次的机会。这不像献血，血液会再生，可以重复捐献。脐带血只有在怀孕生产时才能采集得到，也不见得所有采集到的脐血都能通过我们的检测、制备，最终成为一份合格的脐带血造血干细胞而被保存下来。这份合格的脐带血，有可能挽救一个人的生命，有可能给予一个家庭莫大的希望，有可能推动我们治愈重大疾病前进的步伐。这是多么美好的事情！在我看来，成功进行捐献的妈妈本身就已经是崇高和伟大的了。捐献对母婴没有任何影响，如果不捐献不自存，那这份随着生命而来的希望之血也就只能消逝在这个世界上了。所以，如果大家没有条件和意愿进行自存，希望可以捐献出来。

大众健康：我记得央视曾公布过一些数据，说自存脐带血库的配型利用率很低，我印象中不到2%。而公用库的配型利用率是自存库的4～5倍，好像是8%以上。也就是说，公用库的配型利用率远远高于自存库。

刘开彦：这种情况很正常。因为公共库是面向公众开放的，谁都有权力合理的使用它。而自存库只能是自己或家人使用自己的。再加上公共库的存储量少于自存库，从每年的采集来看，70%是自存的，30%是捐献的，本身分母的基数不同，那肯定公共库的利用率要高于自存库。这是很正常的。

大众健康：刘主任您建议自存还是捐献呢？

刘开彦：鼓励捐献，自存一定要充分，知情、自愿。公众应根据自己实际情况和需要选择是否储存，是自存还是捐献。

脐血采集后的“生命”历程

大众健康： 我们的自存脐带血会存18年，18年能保证存放的质量吗？18年后，这份脐血中的造血干细胞还能保有多少活力？

刘开彦：国外已有报道，冻存23年的脐带血细胞依然保持良好的活性和植入能力。2013年，北京市脐血库将一份冻存长达14年的脐带血成功应用于临床，细胞复苏后的活性达到了96.14%。我们的技术是没有问题的，甚至说已经达到国际领先水平。2005年，我们通过了ISO9001国际质量管理体系认证。2013年，北京市脐血库获得了美国血库协会（American Association of Blood Banks ，简称AABB）认证，成为中国首家通过该认证的脐带血库。AABB颁布的脐带血库相关标准是世界上公认的主要标准，受到全球同行的广泛认可。全世界除美国脐血库遵循此标准外，欧洲、美洲、非洲、亚洲等众多国家和地区的脐血库均严格遵守该标准。北京市脐血库获得AABB认证，标志着中国脐血库已经与国际接轨，并获得了国际行业标杆的认同。这不但保障了脐带血临床应用的安全性，也对进一步规范与提高我国的行业标准起到积极作用。

邓钺：合格的脐带血造血干细胞会被存放在零下196摄氏度的液氮中。这个温度在医学上认为是生命静止的温度，可以长久地保持造血干细胞的活性。我们的每个液氮罐都有一根真空管路通往室外的大型液氮储备装置，可以随时补充罐中的液氮量，保持液氮液面高度。每个液氮罐都由电脑控制，数据会在监控部门的集中监控下，一旦条件改变，随时都会报警。我们的这套装备是从美国进口的，是目前国际上最先进的。通过了AABB的认证，意味着我们存储的每一份脐带血都拥有了“国际身份证”，无论在世界上哪一个国家都可以被认可。

大众健康：我想很多准妈妈都很好奇，自己的脐带血在采集完成后会被带到哪里？都要进行哪些步骤？最终会“住”在哪里？您能为我们的准妈妈们描述一下，以便有一个感性的认识吗？

邓钺：采集后的脐带血会在24小时内由专人取送至脐血库，工作人员会首先对脐血外观和相关资料的完整性进行检查，并对脐血体积进行评估。符合初筛条件的脐血会生成伴随其一生的条码编号，然后进入制备流程。制备的目的是去除脐带血中的红细胞和血浆，保留富含造血干细胞的有核细胞成分。整个制备过程在符合GMP要求的洁净实验室内完成，采用的是国际上最先进的全密闭的自动化处理系统，保证制备效果安全可靠。制备完毕的脐带血会进行程控降温，使之严格按照每分钟1℃的降温速率缓慢冷冻至零下90℃，然后再放入液氮储存。在脐带血冻存的同时，针对每一份脐血的一系列检测也随之展开。一方面是安全性的检测：为了最大限度的减少经血传播疾病的发生，我们除了对乙肝、丙肝、艾滋、巨细胞病毒、梅毒的抗原或抗体进行检测，同时采用灵敏度更高的全自动仪器对乙肝、丙肝和艾滋病毒的核酸进行检测；还有脐带血的细菌/霉菌检测，使用的也是血站专用的进口培养系统。另一方面是有效性检测：采用全自动血液分析仪检测脐带血有核细胞数量和分类，使用流式细胞仪检测脐带血中的造血干细胞数量和活性，通过14天的集落培养评估造血干细胞的增殖和分化能力；这些检测可保证每份脐带血中含有足量有效的细胞。还有HLA分型检测，可用于临床使用时的配型查询和脐带血的身份确认。

篇7

大学的最后一个暑假，我有幸到广东电信罗定分公司实习，在将近一个月的实习期里，我初步接触大电信公司的一些运作，积累了一定的社会经验. 我被安排在ADSL社区实习，负责指导我的是一名姓董的班长，而实习内容主要是ADSL的安装与维护.经过班长的悉心教导，很快我就熟悉了ADSL的各项原理，实际操作能力也有所提高，以下就是我的一些实习体会. 第一:真诚待人.我刚来报到时，遇到很多新的面孔，由于和他们未熟悉，所以不敢和他们说太多的话，而且对工作未曾了解，开始觉得不太适应.后来我慢慢发现，只要真诚待人，虚心请教同事，他们也很乐意和我交往.还教会我一些技术，由此我深感真诚的重要性，在公司里不但要学会如何做事，而且要学会如何做人.正确处理同事之间的关系是非常重要的，它会关系到你能否开展工作.孤芳自赏并不能说明你有个性，过于清高是很难融入大集体的. 第二:不要偷懒.我曾问班长:"什么样的员工在企业里会受?"他的回答是不偷懒的员工.我觉得很有道理，试问有哪个老板会喜欢懒惰的下属的?于是我时刻提醒自己要多干活，尽力把本份工作做好.还记得我曾在超市做兼职时，主管很讨厌在工作时几个人围在一起聊天的事，所以在工作的时候，就算是生意很淡的时候也不要聊天.由于我时刻牢记这一点，最终努力没有白废，我以良好的表现完成了实习. 第三:勤学好问.刚来到单位时，我对很多方面都未熟悉，这就需要我勤学好问.因为经验是很重要的，我发现引起线路故障的原因有很多，如果没经验就很难处理问题.例如有一次，班长接到某音像店的报障后，赶赴现场发现户主的网络下行速率不正常，他先后把电话线，调制解制器，甚至电缆也换过仍未解决问题，最后他把端口也换了才排除了故障.遇上如此复杂的问题是比较少见的，可能连经验丰富的员工也感头疼.经验不足的我更需多请教他们.但必须注意的是:在问人之前要分清哪些问题可以问，哪些问题不该问.还要注意在什么时候问会好一点.比如新来的员工就尽量避开报酬这个话题，不要对薪水太在乎，对于新人来说，能学到东西才是最重要的. 第四:讲究条理.年轻人刚到工作单位时往往会表现急躁，这是正常的，但最好不要急功近利，急于表现自己可能会使自己处于不利地位.我们要抱着踏实的态度来做事，虚心点往往能得到别人的认同.其实我发觉前辈做事有一点很值得学习的，就是他们做事很讲究条理，他们遇到问题会一步步去解决，而不是惊慌失策.例如他们在接到故障时，首先会根据用户的反映来分析情况，然后问清楚对方的地址和联系方式，当怀疑是用户的电脑故障时还要带上手提电脑去监测，最后才派出人手去收复，这种做事方式就很有条理，不会做一些无用功，工作效率也得到提高.受他们的影响我也慢慢变得做事不那么急躁了，这真是很难得的工作经验啊! 今次的暑期实习带给我不仅仅是一种社会经验，更是我人生的一笔财富.更可喜的是我在实习期间还结识了一些好朋友，他们给予我不少的帮助.俗语说:纸上得来终觉浅.没有把理论用于实践是学得不深刻的.当今大学教育是以理论为主，能有机会走进电信公司去实习，对我来说是受益不浅的.我就快毕业走向社会了，相信这次实习对我日后参加工作有帮助.感谢在这期间所有帮助过我的人!

写于广东邮电

为（通信）企业管理032学生

篇8

苏宁增资日本Laox

日前，苏宁电器(002024.sz)公告称，将以35日元／股的价格认购旗下日本Laox株式会社定向发行的1.79亿股股份，总投资约5.03亿元人民币。发行完成，苏宁将通过境外全资子公司持有Laox 51％股权，成为控股股东。日本Laox株式会社创立于1930年，是日本历史最悠久的家电连锁企业，与苏宁，国美不同，Laox业务除了传统3C家电外，还涉及动漫产品，乐器，手表等日用品零售。苏宁副董事长孙为民表示，公司将把Laox引入中国，实施双品牌战略，同时还将扩大Laox在日本的布局，为国际化进一步奠定基础。苏宁电器打算在中国设立Laox中国总部，并公布了未来五年发展规划：到2016年，Laox中国将在北京，上海，广州等25个城市开设150家门店，建立集休闲，购物于一体的乐购仕生活广场(LAOX LIFE)，单店面积在1万至2万平方米之间。目前Laox在北京，上海，深圳等核心城市已经开始进行选址规划，今年年底将开出2到3家门店。孙为民说，Laox可独立采购，共享苏宁电器后台设施，并互相补充各自经营管理模式。

网上商品性能描述将有统一标准

受全球数字贸易产业联盟的委托，重科院将与中国电子商务协会，广东商学院联合共建“数字贸易标准技术联合实验室”。这个实验室的其中一项功能就是：建立一套统一的商品性能，质量描述标准，并从生产，供应环节，就将这个统一的商品描述转化为数字资料，放入到网络数据库。有了这样一个数据库，可以避免现在网店销售时，对同一件商品存在多种不同的性能，质量描述。消费者在网购时，也可以从这个数据库中调取标准描述，减少因夸大或不实描述而掉进消费陷阱。

“数字贸易”是由全球数字贸易产业联盟发起并提出的一种B2C、B2B的电子商务创新模式，其目标是向消费者提供一个从网上到网下的互动生活辅助平台，并最终改变网络生活方式，现实消费习惯。

沃尔玛电子商务中国区总部落户上海

日前，上海市商委与沃尔玛签署了《在沪发展电子商务合作框架备忘录》，据双方签署的备忘录，沃尔玛将在上海设立沃尔玛电子商务中国区总部，全面负责沃尔玛全球电子商务在中国市场的运营。沃尔玛表示，将把传统零售业和电子商务领域积累的先进经营管理经验引入上海，并引进拥有国际化背景和丰富行业经验的电子商务高端人才。

海尔电器全面收编日日顺

海尔电器公告称，于6月24日以2.4亿元的价格向控股股东海尔集团收购青岛日日顺电器服务公司全部股权，青岛日日顺电器服务公司主要业务是为在国内分销的家电产品提供售后服务及增值客户服务。而海尔集团还为青岛日日顺电器服务公司提供了盈利保证，从2011年1月30日起至2012年12月21日期间，净利润将不少于6000万元。

海尔电器董事会主席杨绵绵表示，三四级市场渠道综合服务业务已成为公司业务新的增长动力，收购青岛日日顺电器服务公司可以让公司现有的渠道网络向“非海尔”品牌产品提供售后服务。“未来公司将成为在中国家电分销领域举足轻重的渠道综合服务提供商。”杨绵绵说。事实上，基于这一目标和海尔集团内部整合的需要，海尔电器全面收编日日顺渠道平台的步伐正在加快。

2010年8月底，海尔电器斥资7.63亿元收购了青岛海尔物流有限公司。12月底，以1880万元收购烟台日日顺51％控股权，同时与山东合资伙伴出资2000万设立山东日日顺电器有限公司。2011年4月底起，分别收购了合肥日日顺，苏州日日顺和湖南日日顺各51％的控股权。一系列收购让海尔电器基本完成销售网，物流网和服务网在资本层面的整合。

海尔电器2010年财报显示，综合渠道业务收入占其总收入比重已从2009年的13.33％，迅速上升至79％；在县级市场的零售终端店面数量已近7000家，在乡镇级市场也有2.8万个销售点。海尔电器有关人士表示，除新疆，青海等一些偏远的县镇没有布点外，全国其他省份的三，四级市场都已布局完毕。其中，山东，河南，四川，安徽等省份布点相对密集。

海尔电器在三四级市场渠道综合服务的商业模式是，通过网页，电话，电邮等虚拟网络，借助公司的物流和配送体系，向三四级市场广大分销伙伴提供订单规划，存货管理，物流，售后等增值服务，推行“零库存下的即需即供”运营模式，并利用此渠道综合服务模式吸引“非海尔”品牌。

卓越亚马逊推出“我要开店”和“卓越亚马逊物流”服务

7月6日，卓越亚马逊对外宣布开放第三方卖家平台，推出“我要开店”和“卓越亚马逊物流”服务。旨在为消费者带来更多的选品和更有竞争力的价格，并以全方位的服务帮助广大卖家进一步开拓自身业务。“我要开店”平台面向所有卖家实行先期“零投入”的政策，即无加入费，无年费，无平台使用费。目前，真正制约中小型电子商务企业发展的是仓储和物流。“卓越亚马逊物流”正好为卖家提供仓储物流服务，覆盖范围广阔的货到付款服务及多种付款方式，并由24小时不间断服务的客服中心帮助卖家完成退，换货等售后服务。

至此，卓越亚马逊给卖家提供了一个360。全方位平台。通过运用与亚马逊全球同步的强大技术功能，卖家可以简单便捷地在卓越亚马逊上陈列商品。此外，第三方卖家除可以在该平台上开店销售产品，还可享受到“卓越亚马逊物流”服务，即由卓越亚马逊按照自身物流服务的高标准提供的仓储，发货，配送和售后服务。

作为全球性电子商务网站，亚马逊在中国，美国，法国，日席等都有运营的网站，加入卓越亚马逊的第三方卖家未来也可以有机会在亚马逊其他国家的网站上销售产品，这可以帮助中国卖家建立面向全球的业务。未来，借助卓越亚马逊全球平台，中国的卖家可以有机会走向国际，这是“我要开店”平台与其他中国电子商务第三方平台的最大的不同之处。“我要开店”和“亚马逊物流”已在亚马逊全球成功运营多年，一直是推进亚马逊业务增长的强大动力。目前，来自全球第三方卖家的商品在亚马逊公司所销售商品总量中的占比已超过30％。

家电下乡政策或将退出

按照国务院原定的实施方案，山东，河南，四川，青岛三省一市首批试点地区的家电下乡政策将在今年11月到期，其他地区也将于2012年11月到期，随着截止日期越来越近，国家相关主管部委并无政策将延续的明确表态。而此前家电节能惠民政策也是如此这般彻底退出。家电下乡政策自2008年初出台以来，对国民经济拉动的作用十分明显，随着政策的不断推进，销售金额连连攀高，但今年4、5月却连续两月出现大幅下滑。

统计数据显示，今年一季度家电下乡销售数据冲高；尤其是3月份数据创历史新

高，商务部4月11日数据，3月份全国家电下乡产品共销售1471.5万台，同比增长135.36％；实现销售额344.8亿元，同比增长178.06％。但4月，四部委发文加强对家电下乡进行政策监管后，下乡销售数据急转直下。商务部公布4月份全国共销售家电下乡产品328.8万台，同比下降31％；实现销售额87.2亿元，同比下降12％，销售量和销售额均出现大幅度下滑，数据再次跳跃性波动。5月数据显示，2011年5月全国家电下乡产品共销售578万台，同比仅增长0.90％，家电下乡政策的对市场的刺激作用呈现出递减拐点迹象。

下乡政策实施以来，三四级农村市场获得高速增长，但随着政策的减弱乃至退出，三四级市场增速将随之放缓，如何去保证这些投入大，数量多的新网店的单店效率并提升其收益和价值，也将考验企业的经营智慧。

洗碗机6A检测　掀起厨房新革命

日前由中国家用电器研究院主办，中国家用电器研究院产业经济与技术经济研究所，国家家用电器质量监督检验中心承办的“厨房新势力　悦享净生活”，2011年洗碗机6A检测结果会，在北京贵都大酒店召开。

继洗衣机6A、洗干一体机6A检测标准相继公布后，中国家用电器研究院于今年3月底，再次了清洁器具又一“6A检测标准”，即JDYB007-2011《家用和类似用途洗碗机性能分等分级》技术规范(以下简称“洗碗机6A”标准)。

标准后，国家家用电器质量监督检验中心便积极地展开了洗碗机6A检测工作，格兰仕、松下、西门子，美的等国内主流洗碗机生产企业相继送来样机检测。此次活动现场，多位行业专家都站在各自领域的角度，全面剖析了洗碗机行业的发展前景。作为此次洗碗机6A检测工作的总负责人，国家家用电器质量监督检验中心综合检验部主任鲁建国表示，长期以来，阻碍着国内洗碗机市场发展的主要因素之―便是国内消费者的观念以及对洗碗机的误解，而此次6A标识贴上产品后，更为消费者合理选购洗碗机提供了科学依据。随着70后，80后逐渐成为社会主流消费群体，新兴的消费理念和消费模式正在逐步成为主流模式。另外，国内外主流企业的市场策略也直接影响着洗碗机在国内的推广步伐。国家信息中心市场信息处处长蔡莹指出，洗碗机发展目前正呈现出越来越快的增长趋势。去年全年，国内重点城市洗碗机销售量约为12万台，同期增长了21.1％。去年，国内重点城市洗碗机销售额约为6.05亿元，与09年相比，销售额同比增长30.2％，高于销售量增幅，中高端产品作用相对突出。从历史数据看，国内重点城市洗碗机销售量年度比增长保持了逐年上升的趋势。在洗碗机的区域分布方面，地区之间消费能力差异巨大，华东，华北占整体销售量比例达到81.38％，呈现初级消费特征。目前，连锁专卖渠道成为重点品牌倚赖的重要销售渠道，三四级城市市场拓展工作尚未有效开展。北京国美总经理宋林林也从市场的角度，表达了对洗碗机未来在国内发展前景的信心目前，在北京国美销售的洗碗机产品包括海尔，西门子，美的等多个品牌的十几个型号的产品。这些产品的价格从3000多元至8000多元不等，可以满足不同消费者多种层次的需求。

(记者　冯国忠)

编读往来

河北苏立：我们是一个小家电品牌的区域商。前段时间，因为给某个淘宝店供货，我们公司受到了厂家10万元的罚款，停止供货3个月的处罚。受各方面影响，今年的市场非常低迷，不但平常的节假日商场没人，就连五一这样的重大节日，卖场的销售也都非常惨淡。我们认为，这与小家电产品在网络上销售的火爆有一定的关系。所以，传统渠道商面临的是多重压力，一方面卖场销售业绩下滑，各种费用却在大幅度地上涨；另一方面，厂家对我们的业绩却每年都在持续增长，还要面对网店的冲击。令我们不解的是，现在即使我们这样的传统渠道商想去做电子商务，厂家都不允许。所以我们很困惑，传统渠道商如何获得长足的发展。

编者：接到苏立电话的当时，我还真的非常同情他，毕竟罚款10万元，是真金白银的要腰包。而且停止供货3个月的损失，肯定对其年度的业绩有较大的影响。但是静下来想，其实，客观地说，厂家这样做是正确的。传统渠道商一直都在纠结网店对于他们的冲击，但是背地里却又给没有授权的网店违规供货。尽管这是为了业绩“不得已而为之”，但从厂家管理的角度，规范市场也需要“挥泪斩马谡”。如果不重罚违规窜货的商家，网络销售更是会乱的一塌糊涂。

苏立说的另一个问题，即厂家不让传统渠道商经营网店的问题，我认为，这正是规范网络销售的重要手段之一。毕竟传统渠道商与专业的网商在做网络经营的水平上还是有很大差距的。从厂家的角度看，为了获得快速的增长，厂家也会授权专业的网商运作线上的销售工作。因为，线上的竞争同样激烈，容不得半点喘息。

无论是传统渠道商还是网络经销商，都是厂家渠道的组成部分，短时间内谁也不能取代谁。所以，我希望，为了品牌的长远发展，商有责任和义务协助厂家规范线上线下的渠道管理工作。

上海质检抽查电饭锅产品质量稳定

2011年，上海市质量技术监督局对上海市生产和销售的电饭锅产品质量进行了专项监督抽查。电饭锅是列入国家强制性认证产品(CCC)目录的产品。截止3月底，上海市有效获证生产企业共6家，本次抽查上海市生产企业6家，实际抽到产品的有5家，另有1家企业由于停产等原因未抽到样品。

本次抽查了33批次产品，经检验，不合格的为0批次。在这33批次产品中，上海市生产的产品7批次，其他省市生产的产品26批次。

篇9

首日里来到我实习所在的渝北区人民法院，毕竟xx年完工的建筑，这样也颇觉新鲜的。它的地理方位离空港不远，每日不经意便可见飞机起降。既为新区,虽少了几分城区生活之便利,然多了份绿意清新,兼有早午自费院餐之营养供应，于是每日工作状态也自然显得精神饱满。这样除却早晚挤车上班之烦扰，余者也还算惬意了，故而每日工作心情也相应愉悦许多。我被安排在了五楼的行政庭，欧式风格的建筑里面的办公室也是一式的现代气息，惟新楼未及联宽带网稍显美中不足。

许多事在第一次的感觉往往是最深刻而令你最难忘的。第一天及第一周上班的感受于我也大抵如此。对于自己的评价是一个字“拙”，而对于所从事的工作印象是两个字“新鲜”。尽管实务与原来对法院工作的印象出入不大,但每当具体操作一些书记员所做的日常琐屑工作时,还是颇觉有几分新奇的，同时暴露了我在实际动手能力方面的严重欠缺。这些事务如打印、复印、盖章、登记新案、整理案卷及填写送达回证等，乍看来如和尚撞钟般的轻松且不入眼，而初来新手的生疏体验于我印象还是深刻的，如第一次接触自动钉书机，那份新鲜快意还是如孩童般的。而生活不能只有坦途，经历亦非皆属快意的，其中令人尴尬的不堪回顾的亦不属少数，如第一次打印判决书那次。先此之前打印文稿多采单面，所以以为这份判决书的打印亦属之。于是就同样采用了单面印刷，彼时的情形是打印1份复印15份而每份是7张纸，所幸那里的打印员中途发现及时，才不致更大的损失，但这样浪费的纸张，业已使崇尚环保的我当虑及其纸张所耗之林木时，颇感罪孽深重的。汲取教训，总结经验后的我在后来的工作愈加地觉得轻车熟路起来，或许不破不立的道理就在此间吧。

不知觉却入了这实习过半的日子，渝地的秋有几分“余夏”的味道，天气依旧闷闷的，让人透不过气来，不经意间，知了此时也却不知趣地伴着聒耳起来，甚或有些心慌。所幸的是，原来的对于前阵子的热可能要撑到10月的种种顾虑，连同这热的本身，却不期被新近的雨时断时续地冲散开去了。无疑，彼时的天是灰灰的，间或地时时淋些雨下来。于寻常人所感则似应痛楚伤感呵。而于热闷中挣扎的我而言，却是如海水湛蓝般的清新感受。既然天遂人意，实习工作若不加倍用心，精心着意于它，似乎就有仵这好韶光了。持着这样的念头，做起工作来自然也利落了许多。论及工作，新近的亦无甚新奇，除了先前业已述及的例行诸项文案工作，余下新增的项目便是填了些附上送达回证的挂号信及做了移送上诉函登记。

临到终了时候，忆着实习两个月间的日子，倍觉充实许多，收获颇丰。

二、实习所得

实习中所得有可分为两方面：一为法内的，一为法外的。

法内的所得，即法的实践中所习得的生活中的法律适用。总体上本人在实习中所做的工作性质是书记员的辅助工作。具体而言，有登记立案、填庭前准备的送达回证(内含给原告的合议庭通知书、传票(2份)、举证通知书，给被告的应诉通知书(2份)、举证通知书、权利义务告知书、传票(2份)、法定代表身份证明、起诉状副本，给第三人的参加诉讼通知书(2份)、举证通知书权利义务告知书、传票(2份)、法定代表人证明、起诉状副本)、到二楼接待中心或到一楼送达处给当事人送达回证(含开庭前准备和宣判后两类)、粘判决书并给之加盖骑缝章和与原件核对无异章、给判决书或裁定书到七楼盖院章、装订案卷存档及编卷宗目录、登记所结案件在册、到研究室送交上诉或移送管辖案件、复印打印各类文书等事项。以上事务中内括需2份的，皆意为其中一份需要备案。

篇10

关于保证期间，目前一种定义为：保证人与债权人约定的或法律规定的，当债务人不履行债务时，保证人对债务人之债务承担保证责任的期间。本人认为此种定义不妥1） 依该定义保证人都是在保证期间承担保证责任的，但其无法对实践中保证人基于法院的判决而最终承担保证责任的时间都是在保证期间之后的这样一个事实作出解释，也无法将这样一种事实包含于其定义之中。2） 此定义没有说明保证人在保证期间内是怎样承担其保证责任的，是在债务人不履行债务的情况下保证人主动去向债权人履行保证责任呢还是在债权人要求下才承担保证责任呢，依此定义不管是主动履行也好还是被债权人要求履行保证责任也好，似乎保证人都必须在此期间将其保证责任履行完毕，但实践中保证人会以种种事由拒绝承担保证责任，直至债权人起诉至法院判决其最终承担保证责任为止。这样的话，有没有该定义下的保证期间，都不能杜绝保证人对保证责任的拒绝承担，那么此定义下的保证期间又有何作用呢？这都是对保证期间概念及性质的误解所带来的困扰。因此这样一种定义仅仅是保证期间的字面含义，不能准确说明保证期间的特定含义特征及作用。

（一） 保证期间的概念

人们在给一个概念下定义的时候总是先入为主，按照自己的理解想当然地给其下定义，然后根据定义推出其特点，进而又给其定性，殊不知在其给概念下定义的时候已经将概念限定在其主观范围之内，当然不能全面而准确地给概念下定义。本人的做法是先从不同角度分析所要定义的概念的特点，然后综合这些特点进行抽象提炼最后得出该概念的定义，分析过程如下：

1）要理解保证期间的特点，离不开对保证的准确理解，《担保法》第6条规定：“本法所称保证，是指保证人和债权人约定，当债务人不履行债务时，保证人按照约定履行债务或者承担责任的行为。”该条中的“按照约定”，当然也包括按约定的保证期间。

由《担保法》第6条可以推出保证期间的两个特点：一个特点是保证期间是保证人与债权人约定的，而不是保证人与债务人约定的，明确此点的意义在于债权人对其能向保证人提出承担保证责任请求的时间范围是明知的，既然是明知，那么过了该期间而不提出请求的，唯一合理的推定就是弃权。当然，在对担保期间未约定或约定不明的情况下，也有《担保法》规定的法定保证期间。另一个特点是只有在债务人不履行债务的前提下，保证人才有在保证期间履行债务或者承担责任的可能。明确这点的意义在于：保证期间内，保证人承担保证责任并不具有必然性，保证期间内其承担保证责任的前提条件之一是债务人不履行债务，只有在这时保证人才有承担保证责任的可能。

按《担保法》第18条规定：连带责任保证的主债务人在主合同规定的债务履行期届满没有履行债务的，债权人可以要求债务人履行债务，也可以要求保证人在其保证范围内承担保证责任。由此规定可以看出，即使在债务人不履行债务的情况下，保证人在保证期间内也并不是必然承担保证责任，是否要求保证人承担保证责任债权人有选择权，这里的选择权并不是说择一的选择权，即并非选择了要求债务人履行债务就不能再要求保证人承担保证责任了，这里的选择权是说当债务人不履行债务时，债权人可能基于某种理由先要求债务人履行债务，而不是必然或立即向保证人主张权利，只有在明确知道债务人不能履行或拒不履行时再要求保证人承担保证责任，也就是说保证人在保证期间承担保证责任的可能性不仅取决于债务人是否履行了债务，而且还取决于保证期间内债权人是否向其提出了承担保证责任的请求。而在一般保证的情况下，基于保证人的先诉抗辩权的存在，保证人在保证期间承担保证责任的可能性取决于债务人不履行债务以及债权人是否在保证期间内向债务人提起诉讼或申请仲裁。

2）从《担保法》第25、第26条来看保证期间的特点。《担保法》第25条规定，在一般保证的情况下，在合同约定的保证期间和法律规定的保证期间，债权人未对债务人提起诉讼或者申请仲裁的，保证人免除保证责任。第26条规定，在合同约定的保证期间和法律规定的保证期间，债权人未要求保证人承担保证责任的，保证人免除保证责任。从这两条我们可以看出，保证期间内，债权人不作出一定的行为，即在一般保证情况下债权人不对债务人起诉或申请仲裁，在连带保证中债权人未要求保证人承担保证责任的，期间届满后将直接导致其丧失向保证人主张保证责任的权利。因此保证期间是这样一种期间，对债权人来说，是其必须在该期间内做出一定行为的期间，不作为的话，期间届满将导致其丧失请求保证人承担保证责任的权利；而对保证人来说，是其需等待债权人作出一定行为的期间，一旦债权人做出该行为，保证人不得借保证期间来主张免除责任。

3）从保证人约定保证期间的目的来看保证期间。保证属于人的担保，与抵押等物的担保不同，物的担保产生的担保权往往都具有物权的性质，当债务人不履行债务时，债权人都会直接对担保物行使担保物权，以担保物折价或拍卖变卖所得价款优先受偿，清偿完毕后，担保人一般都能很快从担保责任中解脱出来，可以说对物的担保约定担保期间意义及作用不大。而保证则不同，其是以保证人的信用为保证的，债务人不履行债务，债权人对保证人不能直接就其财产拍卖变卖所得价款受偿，仍得请求保证人去履行债务或承担责任，债权人对保证人的权利仍为债权属性。基于债权不如物权实现的便利，一般情况下，债务人不履行债务时，如果债务人资金实力雄厚或是债务人另外还提供了物的担保，债权人一般都会首先向债务人主张权利或对担保物行使其担保物权。这样一来，保证人对其是否会被要求承担保证责任以及何时（尤其是介入了债权人对债务人诉讼的因素）会被要求承担保证责任都是十分不明确的，这也必将导致保证人不能断定其何时能从其保证责任中解脱出来，保证人时刻都有被债权人要求承担保证责任的可能，这样对保证人是不公平的，因为保证人不能确定何时能从保证责任中脱离出来就不能对其自身的经济活动作出合理的安排，毕竟有项保证债务尚未确定。例如，债权人基于债务人实力雄厚以及长期合作关系而在债务人不履行债务时将主要精力放在与债务人的交涉上，经过长期交涉达不成债务履行协议的又开始进行诉讼，而诉讼又随着各种法定事由中止或中断，时间被无限期地延长，诉讼结束前，债权人发现有债务人财产状况恶化等情况，且可能威胁其债权的实现，这时便反过头来对保证人主张权利，而向保证人主张权利的时间可能离债务人不履行债务的时间已经相去甚远，保证人处于相当被动的状态，因为这段时间内保证人可能会有别的经济活动安排或是有财产上的增减变化等情况，对长期未确定而又突然而至的债权人主张，保证人实在是有苦难言，对保证人来说是十分不公平的。

为避免自己随时被要求承担保证责任，也为督促债权人尽快向自己主张权利以便尽快从保证责任中解脱出来从而方便对今后经济活动的安排，保证人通常会与债权人约定一个保证期间，在此期间内，债权人必须就是否要求保证人承担保证人作出明确提示，逾期不提示的，保证人不再承担保证责任。而对此保证期间，债权人也是明知的，既然是明知，为何不在此期间向保证人主张权利，唯一合理的推定就是其放弃了向保证人请求承担保证责任的权利。这也解释了为什么在对保证期间没有约定或约定不明时法律所规定的保证期间仅仅为6个月，期间太长对保证人不利。

综上所述，保证期间有如下几个特点：1）保证期间是由保证人与债权人约定的或是在没有约定或约定不明情况下由法律规定的；2）保证期间内保证人承担保证责任不具有必然性；3）保证人可能在保证期间承担保证责任基于两个条件的成就：一是债务人不履行保证债务；二是债权人在保证期间内向保证人请求其承担保证责任或是债权人对债务人提起诉讼或申请仲裁；4）保证期间的作用在于对债权人是否要求保证人承担保证责任或是债权人是否对债务人提起诉讼或申请仲裁之事实状态的确定，而并不必然导致保证人对其保证责任的最终承担，即债权人是否有要求保证人承担保证责任的行为或是否向债务人提起了诉讼或申请了仲裁是保证期间内所要确定的事实，而一旦确定，保证人以后就不能再以保证期间为由主张免除保证责任，而至于保证人是否会最终承担保证责任以及承担多大范围内的保证责任则是保证合同诉讼时效范围内所要解决的问题，与保证期间再也没有关系了。

现在便可以对保证期间的概念做个比较准确的定义：保证期间就是保证人与债权人约定的或法律规定的一段期间，当债务人不履行债务时，债权人必须于该期间届满前向保证人提出承担保证责任的请求（连带保证情况下）或是向债务人提起诉讼或仲裁（一般保证情况下），该期间届满债权人仍未请求保证人承担保证责任或对债务人提起诉讼或申请仲裁的，视为债权人放弃要求保证人承担保证责任的权利，保证人之保证责任自该期间届满后免除；如在该期间届满前债权人向保证人提出了承担保证责任的请求或是向债务人提起了诉讼或仲裁，那么保证人不能再以保证期间未由主张免除保证责任。

（二） 保证期间的性质

要弄清保证期间的性质，必须先澄清其与除斥期间、诉讼时效的关系

1）保证期间与除斥期间的联系与区别。联系：两者都表现在一定的权利经过一定期间而未行使即归消灭，二者都是不变期间。区别：1）保证期间既有约定的又有法定的，而除斥期间只有法定的。2）即使是法定保证期间，也与除斥期间有所不同：a.除斥期间一般适用于形成权，如追认权、撤消权等，其目的在于撤消已经成立的民事行为，或确认效力未定的民事行为。而保证期间适用的仍是请求权。B除斥期间届满而权利人未行使权利其后果是权利人实体权利的消灭，导致对已成立民事行为效力的认定而使权利人承担民事义务，如享有合同撤消权的权利人在一年内不行使撤消权则原合同仍继续有效并对其有约束力；或否定效力未定的民事行为，如相对人可以催告被人在一个月内对效力未定的合同予以追认，一个月内被人未追认的，被人不对人的行为承担责任。而保证期间届满债权人未行使请求权或未对债务人提起诉讼或申请仲裁的，其后果是债权人丧失请求保证人承担保证责任的权利，对保证人来说是保证责任的免除，而非对一定民事行为效力的肯定或否定。同样都是除权，但除权的内容与法律后果却是不同的，不能仅从实体权利的消灭的表面形式上去认定保证期间属于除斥期间。

2）保证期间与诉讼时效的联系与区别。联系：两者都表现为一定权利经过一定期间不行使即归消灭，都适用于请求权。区别：A保证期间既有法定的也有约定的，而诉讼时效只有法定的，不能约定；B保证期间的债权人享有的请求权是针对保证人的请求权，而非针对法院的请求权；而诉讼时效中的债权人享有的请求权是针对法院的，是请求法院保护其权利的请求权。C保证期间届满而债权人未要求保证人承担保证责任或未对债务人提起诉讼或申请仲裁的，债权人丧失请求保证人承担保证责任的权利。而诉讼时效届满债权人未向法院请求保护其债权的，债权人丧失请求法院保护其债权的权利。D保证期间内债权人向保证人主张了权利时，保证合同的诉讼时效从主张权利之才开始起算。如果保证期间已过债权人仍未向保证人主张权利，则意味着债权人对其享有的要求保证人承担保证责任的权利的放弃，也就不存在诉讼时效的问题。因此，保证期间对保证合同之诉讼时效具有直接的影响，二者是两个完全不同的概念。

3）有种观点认为，保证期间是这样一种期间，即该期间届满的法律效果是导致保证责任向将来消灭，保证人不再对此后产生的任何债务承担保证责任。也就是说保证期间届满解除了保证人的将来义务，保证人只需对已经确定发生的债务承担保证责任。该观点的核心意思有二：1）保证期间是保证人承诺只对该期间发生的债务承担保证责任的期间；2）保证期间是从时间维度限定保证范围。

本人认为此种观点不妥，理由如下：1）将保证期间理解为保证人承诺只对该期间内发生的债务承担保证责任的期间，似乎将保证期间理解为《担保法》第14条的规定“就一定时期内连续发生的借款合同或者某项商品交易保证人可以与债权人在最高债权额限度内进行协商订立保证合同”中的“一定时期”，然而《担保法》第14条虽然规定了保证人可约定就一定时期内（即该观点所认为的保证期间）债权人与债务人发生的债务承担保证责任，但要满足两条限制条件，一是有最高债权额的限度，二是保证的对象必须是连续发生的借款合同或连续的某项商品交易，如果不满足这两个条件，保证人还是要就单个主合同分别订立保证合同。而上述观点把保证期间理解为保证人承诺只对该期间内发生的债务承担保证责任的期间似乎是要超越《担保法》第14条的规定，其后果可能会加重保证人责任，因为一没有最高债权额的限制，保证人可能承担天文数字的保证责任，二是没有保证标的种类的限制，可能会导致保证人在一定时期内既承担借款合同又承担商品交易或是其他种类合同的保证责任。这都是混淆保证期间与保证范围所带来的不利后果 2）在没有《担保法》第14条的情况下，保证人与债权人一般只就单个合同约定保证责任并约定保证期间，按上述观点，即使保证期间已过，保证人仍要就此合同承担保证责任，那么订立保证期间的意义何在，约不约定都会导致保证人对保证责任的承担。该观点有意把保证期间过后的债务排除在保证人保证责任之外，实在是没有必要，因为保证期间是从属于保证范围的，是就保证范围内的事项在一定时间内承担保证责任，保证期间之后的债务势必超出原保证范围之外，当然不能要求保证人在保证期间内承担保证责任，除非得到保证人的同意或另订保证合同。3）此种观点旨在限制保证人的保证范围，但却造成了保证期间与保证范围的混乱，干涉了本不该由其干涉的保证范围的职能。照该观点，保证期间似乎有与保证范围相同的功能，约定了保证期间就不必在约定保证范围了，然而保证范围是就保证人承担的各种具体保证责任的明确，而保证期间是保证人就保证范围内的各具体保证责任将在多长时间内承担保证责任的明确，本质上还是依附于保证范围以保证范围为基础的，这就是为什么一旦有新债务，非有保证人同意或另订保证合同，保证人不对新生之债务承担保证责任，因为新债明显超出原保证范围，既然超出原保证范围，附属于原保证范围的保证期间又会起什么作用呢。从上可以看出，该观点在解释保证期间的性质时造成了与保证范围的混乱，因此是不可取的。

4）通过对上述关系的澄清，我们已明确保证期间的性质既非除斥期间也非诉讼时效，更不是一种用于限制保证范围的期间。其实在给保证期间下定义的过程中，我们就已经能够看出保证期间在连带保证情况下实为一种提示期间，即债权人必须在保证期间提示保证人去承担保证责任（在一般保证下，对债务人提起诉讼或申请仲裁视为向保证人提示），如果逾期不提示的，则视为对保证债权的放弃，保证人免责。提示的法律效果并不会直接导致保证人对保证责任的最终承担，而只是表明债权人未放弃其保证债权，对保证人来说其不得再以保证期间为由主张免除保证责任。这就是保证期间的性质。

在这里，有必要对上述“在一般保证下，对债务人提起诉讼或申请仲裁视为向保证人提示”进行解释。保证期间是保证人与债权人约定的，按理说只有债权人在保证期间内向保证人主张保证责任才产生保证期间的法律效果，即明确债权人非放弃对保证人主张权利以及保证人不得再以保证期间为由主张免责。但在一般保证情况下，保证人享有先诉抗辩权，债权人未对债务人提起诉讼或申请仲裁的，债权人请求保证人承担保证责任的，保证人可拒绝债权人的请求。为防对债务人的诉讼判决生效时间晚于保证期间而带来保证人借超过保证期间主张免责，《担保法》第25条第2款规定在合同约定的保证期间或法律规定的保证期间内，债权人未对债务人提起诉讼或者申请仲裁的，保证人免除保证责任，其反面意思是，如果债权人在保证期间内向债务人提起诉讼或申请仲裁的，保证人就不能再借口对债务人的诉讼判决生效时间晚于保证期间而拒绝承担保证责任，其效果与债权人向保证人主张权利是一样的，因此本人将向债务人提起诉讼或申请仲裁视为向保证人提示，而这仅仅是视为。关于这点在后面对《担保法》第25条之评析中会有详细论述。

（三）需要澄清的几个问题

1）保证期间应该是可变期间还是不变期间。依据《担保法》第25条规定：债权人已提起诉讼或者申请仲裁的，保证期间适用诉讼时效中断的规定。该法条看将保证期间当作可变期间。而依据《担保法解释》第31条规定：保证期间不因任何事由发生中断、中止、延长的法律后果。该解释已明确表明保证期间无论是一般保证还是连带保证，无论是法定保证期间还是约定保证期间，都不因任何事由而中断、中止、延长，对《担保法》第25条关于保证期间适用时效中断进行了彻底的否定。本人认为《担保法解释》较正确地理解了保证期间的性质。理由如下：1）保证期间是债权人必须向债务人要求承担保证责任或向债务人提起诉讼或申请仲裁的期间，大多数情况下由保证人与债权人约定，只有在少数没有约定或约定不明确的情况下才由法律规定保证期间的长短。保证期间在约定的情况下充分体现了当事人的订约自由，保证期间的长短完全是保证人与债权人双方自愿协商的结果，一旦约定，非经保证人与债权人协商变更，当事人以外的任何人都无权去中断、中止或延长约定的保证期间，法律也不应当去干涉当事人的这种订约自由，并应充分尊重当事人的在保证合同中对保证期间的约定，不得任意规定保证期间可因法定事由而去中止、中断或延长。2）即使是由法律所规定的保证期间也仅仅是在当事人对保证期间没有约定或约定不明的情况下才予以适用，实为一种补充救济方式，以避免在对保证期间无约定或约定不明的情况下保证人承担无限期或期限不明之保证责任。我们不能因为法律所规定的保证期间没有干涉当事人之间的定约自由就认为法律所规定的保证期间可以中断中止或延长，因为法律规定保证期间的宗旨就是为了保护保证人的利益，既然都是为了保护保证人利益，为何在规定一个较短的保证期间之后又规定该期间可因某种事由而中止、中断和延长进而加重保证人责任呢，这不是自相矛盾吗，因此即使是法律规定的保证期间也不能认为是可变期间。3）将保证期间视为不变期间也符合保证期间的性质，前已论述保证期间实为一种提示期间，而提示的法律效果如前所述只是确定债权人是否放弃对保证人主张权利这一事实以及保证人不得再以保证期间为由主张免责，而并不产生保证人对保证责任最终承担的法律效果，既然该期间只是为了确定一种事实状态以及去除一项免责事由，而非确定保证责任的最终承担，那么何以要去中止中断或延长该期间呢。综上所述，保证期间应为不变期间而非可变期间。

2）对《担保法》第25条之澄清。《担保法》第25条规定：“一般保证情况下债权人在合同约定的保证期间或法律规定的保证期间内对债务人提起诉讼或者申请仲裁的，保证期间适用诉讼时效中断的规定”。对该规定如何理解？a.这首先需要探求该条立法的本意。我们都知道在一般保证情况下，债权人在债务履行期届满后而未对债务人提起诉讼或申请仲裁便直接要求保证人承担责任的，保证人可以拒绝，保证人只对债务人被起诉后并被强制执行其财产后仍不能清偿的债权部分承担保证责任，即保证人享有先诉抗辩权。问题在于如果在约定或法定的保证期间内，尽管债权人已经起诉债务人但就债务人不能清偿的部分仍然不能在保证期间内确定的话，即判决生效时间发生在保证期间之后，则必然导致债权人在保证期间内不能要求保证人承担保证责任，其结果是保证期间届满保证人免责，这样对债权人的来说是十分不公平的，因为其毕竟已经在积极主张其债权了，只是因为诉讼的关系导致其不能在保证期间内确定债务人不能清偿的债权部分，并由此而不能要求保证人承担保证责任。可能是基于此种顾虑，《担保法》第25条第二款才规定在一般保证情况下，债权人已提起诉讼或申请仲裁的，保证期间适用诉讼时效中断的规定。b .但这又会带来新的问题。例如：一份合同的履行期限为10月1日，保证人的保证期间到10月15日，由于是一般保证，当履行期届满债务人不履行时，基于保证人先诉抗辩权的存在，债权人必然对债务人提起诉讼，且其是在10月15日前即保证期间内提起诉讼的，按《担保法》第25条第二款自提起诉讼时起，保证期间中断，重新起算，依据其规定的保证期间适用诉讼时效中断的规定，再结合《担保法解释》第34条规定：一般保证的债权人在保证期间届满前对债务人提起诉讼或者申请仲裁的，从判决或者仲裁裁决生效之日起，开始计算保证合同的诉讼时效，由此可以得出保证期间从对债务人的判决或者仲裁裁决生效之日起重新起算，比如判决是在11月1日生效的，那么保证期间应该从11月1日重新起算并延伸到11月15日，同时保证合同诉讼时效也从11月1日开始起算，这就导致保证期间与诉讼时效在11月1日至11月15日这段时间内重合。那么如果债权人于11月15日后才请求保证人承担保证责任的，由于保证期间已过，根据《担保法》第25条第二款，保证人免除保证责任，但此时仍在保证合同诉讼时效期间之内，似乎债权人仍可请求法院强制保证人承担保证责任，但基于保证期间已过，法院不会去支持债权人的此项请求，就是说即使在保证期间中断的情况下，债权人仍需在重新起算的保证期间内要求保证人承担保证责任或对保证人直接起诉，债权人再一次受到保证期间的约束。

其实，《担保法》第25条根本不必去规定保证期间去适用诉讼时效的中断。该条已经规定了在合同约定的保证期间和法律规定的保证期间，债权人未对债务人提起诉讼或者申请仲裁的，保证人免除保证责任。反过来推，债权人在保证期间内对债务人提起诉讼或申请仲裁的，保证人就不能以保证期间为由主张免除保证责任，保证人保证责任的承担从此不再与保证期间挂钩，既然保证期间内债权人已经以向债务人提起诉讼或仲裁的行为明确了保证人不能再借保证期间来主张免责，那么何苦要去中断保证期间，让保证期间在诉讼判决生效时又重新起算进而又给保证人一次借保证期间去主张免责的机会呢，这不是作茧自缚吗？因此在一般担保下，保证期间适用诉讼时效的中断是不合理的。

正是因为如此，《担保法解释》第31条规定：保证期间不因任何事由发生中断、中止、延长的规定。第34条又规定：一般保证的债权人在保证期间届满前对债务人提起诉讼或者申请仲裁的，从判决或者仲裁裁决生效之日起，开始计算保证合同的诉讼时效。到这，不仅保证期间为不变期间已成定论，而且还在保证期间与保证合同的诉讼时效之间划清了界限。依据《担保法解释》第34条规定，在一般保证情况下，只要债权人在保证期间届满之前对债务人提起诉讼或申请仲裁的，那么保证期间的使命即已完成，即使对债务人的判决生效之日已超过保证期间，仍不影响债权人于判决生效之日起请求保证人承担保证责任，保证人不能借保证期间已过而主张免责，保证人是否最终承担保证责任以及承担多大范围内的保证责任，将在对债务人的判决或者仲裁裁决之日后通过保证人主动履行或对保证人进行诉讼的方式确定。另外，依此规定，也验证了本人在论及保证期间性质时的“将债权人向债务人提起诉讼或申请仲裁视为向保证人提示承担保证责任”的观点，因为该条已规定了只要债权人在保证期间内向债务人提起了诉讼或申请了仲裁，保证人就不能再借口保证期间已过来免除保证责任，这与连带保证下债权人在保证期间只要向保证人请求承担保证责任的，保证人就不得以保证期间已过而主张免除其保证责任的效果是一样的。