红细胞计数范文
时间：2023-04-03 15:18:43
导语：如何才能写好一篇红细胞计数，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
【关键词】 细胞
【关键词】 流式细胞术；网织红细胞；显微镜
网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆尚存有嗜碱性的 RNA 物质。众所周知，网织红细胞目视计数误差较大，其原因为操作人员对网织红细胞的认识不同、血涂片的质量等。流式细胞仪具有对细胞分析和分选的功用，是近年来荧光细胞分析技术的创举，开创了生物细胞研究及临床检测应用的新领域。流式细胞术具有高速度、高灵敏度、高精度、高纯度、高细胞数量、高参数等特点。我们应用流式细胞术和传统的煌焦油兰法对血中网织红细胞进行了对比分析，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 对象 正常人静脉血 56 例，其血常规的各个参数均在正常范围内。
1.2 仪器及试剂 使用仪器为美国贝克曼公司生产 FC-500 流式细胞仪，试剂由贝克曼公司提供，为进口试剂。
1.3 方法 煌焦油兰法［1］：按全国临床检验操作规程操作。流式细胞术：取肝素抗凝血 50 μl，采用 0.01%的 Pyronin-Y 进行染色 20 min，严格按 FG-500 的操作规程操作。
2 结果
2.1 56例血样检测均获成功。流式计数法所得结果为1.60±1.12，涂片光镜下计数所得结果为0.92±0.24。两种方法的结果经统计学直线相关分析（r=0.6086，n=56，P＜0.01）呈高度正相关，有显著性差异。
2.2 对其中 6 例血中网织红细胞用两种方法进行了 4 次重复性测定，流式细胞术所得结果均值的变异系数（CV=4.8%）显著低于光镜计数法（CV=12.2%），说明流式细胞术比光镜计数法具有更好的重复性。
3 讨论
流式细胞术是从 RNA 定量角度去计数网织红细胞，不仅可自动化计数，还可根据 RNA 含量的不同去揭示网织红细胞发育过程中动力学的变化，根据网织红细胞 RNA 含量的分布直方图，可直观地了解血中各期网织红细胞的分布状态。流式细胞术比光镜计数网织红细胞的均值偏高，这可能是一些Ⅳ期的网织红细胞在光镜下辨认困难，而流式细胞术检测具有极高的灵敏度，对于发出较弱光的Ⅳ期网织红细胞也可以探测到荧光信号所致。流式细胞仪测定网织红细胞 RNA 与计数，具有速度快、信息量大、统计学精度高、重复性好等优点，且网织红细胞 RNA 含量的分析与网织红细胞计数相结合更能反映骨髓造血机能状态。因此，流式细胞术可作为评价骨髓造血功能的一种新方法，为临床贫血疾病的诊断和疗效的观察提供更加可靠的信息，具有更为重要的价值。
篇2
【关键词】网织红细胞 血细胞分析仪 煌焦油蓝手工法 对比分析
中图分类号：R446.11 文献标识码：B 文章编号：1005-0515（2011）3-314-02
网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞，在周围血液中的数值可反映骨髓造血功能，因而对各类贫血的诊断和治疗反应的观察均有其重要意义。[1]目前大多数实验室采用的是煌焦油蓝活体染色法计数网织红细胞，但是在临床应用中有诸多不便，费时而且操作比较烦琐，且受人为因素影响较多，重复性较差。现在COULTER LH750五分类血细胞分析仪计数网织红细胞与传统的煌焦油蓝手工法进行比较，发现仪器法操作方便，而且结果重复性好。
1 材料、试剂与方法
1.1 标本来源
本院随机病人（包括住院和门诊病人）
1.2 试剂
1.2.1 煌焦油蓝盐水溶液
取煌焦油蓝4克，溶于109mmol/l枸橼酸钠20ml中，最后用8.5g/l氯化钠溶液加至1000ml，混匀，过滤后贮存在棕色试剂瓶中备用。
1.2.2 全自动血液分析仪试剂
全自动血液分析仪试剂为仪器的配套产品，由相应厂家提供。
1.3 仪器法
用一次性采血器采集患者静脉血2 ml于EDTA-K2抗凝管中，混匀。使用COULTER HMX hematology五分类全自动血液分析仪多次检测同一标本，检测试剂与质控品为仪器配套产品，按照操作规程正确操作。
1.4 手工法
1.4.1 将煌焦油蓝盐水溶液2滴加入小试管中，取同一分标本末梢血2滴，混匀染色30分钟。
1.4.2 取出混合血液推成血片，然后在油镜下计数1 000个红细胞中网织红细胞数。
2 结果
取网织红细胞标本各10份，每份标本各做10次，结果发现仪器法测定的平均CV为3.37%、而手工法测定的CV为22.31%，结果显示仪器法所做结果的重复性和精确度较好，而手工法变异系数大，重复性和精确度都比较差，受人为影响因素较多。
3 讨论
网织红细胞是晚幼红细胞到成熟红细胞之间未完全成熟的红细胞，因其胞浆内尚存在多少不等的嗜碱性物质核糖核酸，在活体染色时，被煌焦油蓝染色后，嗜碱物质凝集成颗粒，其颗粒又可连缀成线，而构成网织状而得名[2]。用煌焦油蓝计数网织红细胞时，其重复性较差[3]，费时，准确性也容易受到计数细胞少，血涂片的厚薄、细胞是否均匀分布、核糖核酸染色效果好坏及染色温度、染色时间长短等因素[4]的影响。而DIFF仪器法测定网织红细胞时，用血量少，而且计数细胞多，所以结果准确性高，重复性好。仪器法操作简便快速，减少诸多人为误差因素影响，为临床提供更加可靠的结果。
虽然手工法测定网织红细胞可以直观细胞形态而且无需昂贵的仪器，但其重复性较差，有其使用的局限性；而仪器法操作方便，结果准确性高，重复性好，避免主观因素的干扰，方法易于标准化，适合临床大批量标本的快速检测。
参考文献
[1]熊立凡 刘成玉，临床检验基础[M].北京：人民卫生出版社，2010，34.
[2]丛玉隆.当代血液分析技术与临床[M].北京:人民卫生出版社,1997,184.
篇3
【关键词】 巨噬细胞；瘀血；泰山散瘀膏
急性软组织损伤是临床常见的外伤，外来暴力、扭伤等均产生不同程度的损伤，严重者可影响工作和生活。其处理方法较多，局部外用药可以帮助缓解症状，促进损伤恢复。泰山散瘀膏是山东省泰安市中医医院制剂，在临床应用20余年，疗效显著。笔者通过实验对泰山散瘀膏的活血祛瘀作用机制进行初步研究，现将研究结果总结报告如下。
1 材料与仪器
1.1 实验动物 成年SPF级小鼠，体重（25±5） g，雌雄不限，购自山东省泰邦生物制品有限公司。
1.2 实验仪器 MIUI-Q超纯水系统，购自法国MilliPore公司；JGL-16G型离心机，购自上海安亭科学仪器厂。
1.3 药物与试剂 泰山散瘀膏主要由大黄、木香、川牛膝、玄参、羌活、当归、赤芍、三棱、莪术、延胡、南星、紫草、桃仁、枳实、青皮、花椒、降香、松节、透骨草、伸筋草、荆芥、薄荷、紫花地丁、制川乌、苏木、水蛭、乌梢蛇、制草乌、海桐皮、木瓜、土鳖虫、地龙、三七、红花等药物组成，由泰安市中医医院制剂科制；凡士林、吉姆萨染剂等为国产分析纯，购自天津市永大化学试剂有限公司。
2 方 法
2.1 实验方法 将泰山散瘀膏均匀涂到透气薄膜上，剪成1 cm2大小的片状，4 ℃冰箱内保存备用。取32只小鼠，随机分为实验组和对照组，每组16只。取实验组小鼠，将小鼠腹部去毛并局部贴覆涂有泰山散瘀膏的透气薄膜1 cm2，四角缝在小鼠腹部，每天换药1次，连续3天。以透气薄膜在小鼠腹部停留2 h以上为用药时间合格，停留时间不足2 h者重新换药。末次给药后30 min，腹腔注射浓度1 %的抗凝鸡血0.3 ml，分别于注射鸡血后6 h、12 h各处死8只小鼠抽取腹腔液，作涂片，瑞氏-吉姆萨染色，镜下观察，计数红细胞、巨噬细胞及巨噬红细胞的巨噬细胞数量。对照组除透气膜上涂凡士林外，其余操作与实验组相同，所得数据统计学处理。
2.2 统计学方法 采用SPSS12.0统计分析软件处理数据。计量数据以表示，两组间比较用t检验。P
3 结 果
注射鸡血6 h后观察结果。油镜下观察腹腔液涂片，可见对照组与实验组片中均有大量红细胞及巨噬细胞，多数红细胞呈游离状态，部分巨噬细胞呈球形，胞质内未见吞噬的红细胞，亦可见大量吞噬红细胞的巨噬细胞，其中实验组吞噬红细胞的巨噬细胞数量明显多于对照组。用测微尺计数1 mm2内的游离红细胞、未吞噬红细胞的巨噬细胞及吞噬红细胞的巨噬细胞数，统计学处理数据，实验组吞噬红细胞的巨噬细胞明显多于对照组，差异有显著的统计学意义（P
注射鸡血12 h后观察结果油镜下观察腹腔液涂片，可见实验组与对照组中游离红细胞基本消失，被巨噬细胞吞噬的红细胞比例明显增多。计数1 mm2内的游离红细胞、未吞噬红细胞的巨噬细胞及吞噬红细胞的巨噬细胞数，实验组未吞噬红细胞的巨噬细胞及吞噬红细胞的巨噬细胞数明显多于对照组，差异有显著的统计学意义（P
4 讨 论
急性软组织损伤属于中医学“伤筋”范畴，是局部气血经络损伤后的病理反应。现代医学认为，急性软组织损伤的原因主要有两方面：一方面是外力直接造成局部组织细胞微观结构损伤和微小血管破裂、出血，以及组织细胞充血水肿和变性坏死致受损局部肿胀、疼痛；另一方面是损伤后局部组织细胞释放出炎性介质、代谢产物聚集造成内环境改变，引起损伤细胞代谢障碍，从而加重局部症状和体征以及病理变化[1]。
祖国传统医学认为急性“伤筋”后，脉络破损，血离经脉而成瘀，瘀血不散，气血流行不通，不通则痛，气滞血瘀，筋脉阻滞是筋伤的病机，活血化瘀为治疗该病的大法[2]。
现代科学实验也证实了活血化瘀、消肿止痛中药起两方面的作用：①对损伤早期出现肿胀疼痛，活血化瘀药可以控制和减缓炎症反应吸收由炎症反应所致的渗出、充血及水肿，修复由损伤所致的软组织及血管壁，降低致痛物质的浓度，减轻对游离神经末梢的刺激，同时提高痛阈值起到消肿止痛作用。②对于损伤中晚期出现肿胀疼痛，活血化瘀药可以使毛细血管扩张，减轻毛细血管静脉段的压力，使白细胞与其它有形成分的渗出减少，降低损伤部位坏死发生率[3]。
本膏药通过透皮吸收作用于创伤局部，从而维持局部相对稳定的血药浓度，起到散瘀、消肿和止痛的功效[4]。方中君药大黄、三七、红花、乳香、没药等活血化瘀，消肿止痛；臣药土鳖虫、三棱、莪术、泽兰破血逐瘀，当归补血活血、活血祛瘀、凉血消肿；佐药木香、玄参、乌蛸蛇、伸筋草、荆芥、紫花地丁、蒲公英等凉血泻火，活血祛瘀，使药冰片、薄荷、儿茶等引经通络止痛；以上诸药配伍使用，具有活血化瘀、消肿止痛、凉血止血的作用。药理学研究方中大黄可降低毛细血管通透性，减少渗出，同时能扩张毛细血管，改善微循环灌注，解除损伤后微循环的障碍[5]；乳香提取物以及木瓜提取液能明显降低小鼠腹腔巨噬细胞及中性白细胞的吞噬功能。土元能明显降低血脂及促进脂肪代谢[6]。乳香、蒲公英、没药、土元均能增加红细胞变形能力，降低血小板黏性和纤维蛋白原含量，从而降低血液黏度，改善微循环，促进瘀血的吸收及转运，为机体组织的修复创造有利条件[7，8]。
本实验通过小鼠腹腔注射抗凝鸡血构建淤血模型，观察并比较巨噬细胞及吞噬红细胞的巨噬细胞的数量。巨噬细胞广泛分布于机体各脏器和组织，是一类可塑性强、功能状态呈高异质性的细胞群体，在不同的免疫微环境影响下，表现出明显的功能的差别。在正常组织中的巨噬细胞处于静息或未活化状态，但是外界的免疫炎症刺激可诱导其活化。结果表明，泰山散瘀膏可通过增加巨噬细胞的数量和促进其活化，吞噬红细胞的巨噬细胞明显多于对照组，使巨噬细胞清除腹腔内红细胞的能力增强、速度加快，从而起到活血化瘀的作用。
4 参考文献
[1] 李卫星，谭大琦，李秋生，等.散瘀止痛膏对大鼠急性软组织损伤的治疗作用[J].中医正骨，2000，12（11）：11-12.
[2] 王志华，王慧生，高纪和.消肿止痛液的药理实验研究[J].中草药，1998，29（1）：31.
[3] 黄俊卿，薛继强.中药熏蒸疗法治疗软组织损伤疼痛的机理探讨[J].辽宁中医药大学学报，2006，8（5）：22-23.
[4] 程春生，张耘，李春游，等.中药熏洗法治疗急性软组织损伤的实验研究[J].中医正骨，2005，17（11）：12-13.
[5] 阴健.中药的现代药理研究[M].北京：人民卫生出版社，1993：9.
[6] 李淑娟，董晓华，武海霞，等.大黄及其有效成分药理作用研究进展[J].医学综述，2005，11（1）：76-78.
篇4
【关键词】 血尿；流式尿沉渣分析仪；定位诊断
血尿是一种常见的临床症状， 而对血尿中红细胞来源的鉴别， 又是临床诊断肾小球疾病与非肾小球疾病的关键环节之一。1979年Birch和Fairley[1]首先用相差显微镜观察尿红细胞形态的变化鉴别血尿来源以来，对尿中红细胞来源进行鉴别的方法报道也日益增多。1986年Shichiri等[2]报告用血液分析仪测量尿红细胞体积来鉴别血尿来源，认为较显微镜法准确。1995年Hyodo[3]使用全自动尿沉渣分析仪来鉴别血尿部位，认为此法具有简单、快速，且不受主观因素影响。国内外不少学者对识别尿液中各种有形成分进行了广泛研究，但对激光参数在鉴别血尿来源的研究较少。作者用UF-100尿沉渣分析仪测定尿红细胞平均前向散射光强度（RBC-MFsc）， 尿红细胞前向散射光分布宽度（RBC-Fsc-DW）， 尿70%红细胞前向散射光强度（RBC-P70Fsc）， 结合尿红细胞提示信息， 综合分析判断血尿来源， 现将结果报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 收集自2012年1月～2013年4月本院住院患者尿标本， 其中血尿标本191份，肾脏病理活检确诊肾小球性血尿133例， 非肾小球性血尿58例。
1. 2 仪器和试剂 UF-100尿沉渣分析仪（日本Sysmex公司）及配套试剂、质控品。光学显微镜（OLYMPUS CX-21）。
1. 3 实验方法 用一次性尿杯收集肾小球疾病患者和非肾小球疾病患者的清洁中段晨尿，充分混匀后倒于10 ml专用离心管中， 一管在UF-100上测定其红细胞参数（开机前先用质控品对仪器进行校准）。尿沉渣分析仪RBC-info分析按新版标准：RBC-P70Fsc >100ch且RBC-Fsc-DW
1. 4 统计学方法 采用SPSS11.5统计软件， 计量资料以（ x-±s）表示， 均数比较用t检验， 计数资料结果比较用χ2检验。
2 结果
2. 1 肾性血尿与非肾性血尿患者尿红细胞各项激光参数见表1。
2. 2 UF-100红细胞提示信息与普通显微镜检验比较见表2， 根据红细胞的提示信息， UF-100诊断肾性血尿的敏感性为83.5， 略低于普通光镜的87.2， 特异性为94.8， 高于普通光镜的92.1， 经统计学检验无明显差别（P0.05）。
3 讨论
血尿是泌尿系统疾病常见的临床症状。引起尿液红细胞形态改变的主要原因有红细胞通过肾小球滤膜时受到挤压损伤及红细胞在肾小管中不同的pH、渗透压、尿酶、尿素等化学因素的影响， 使受损的红细胞发生形态改变甚至破裂。明确血尿的出血部位和性质有助于疾病的诊断。
该仪器采用流式和电阻抗原理， 通过一定染液染色检测尿液标本单个细胞的荧光强度和前向散射光强度及电阻大小来确定细胞类型和形态。国内外已有大量关于UF-100识别尿中各种成分的研究报道。本文通过对UF-100测定红细胞参数的研究， 发现肾性血尿组的RBC-MFsc、RBC-P70MFsc均值分别为58.5和66.7， 明显低于非肾性血尿组的98.0和108.3， 与陈巧林报道[5]类似；RBC-Fsc-DW肾性血尿组为33.5， 略高于非肾性血尿组的32.6， 经统计学检验无明显差别， 与陈巧林报道不同， 这可能与所用的仪器、尿红细胞判定标准及病例不同有关。红细胞的提示信息是仪器根据红细胞的各项参数而判定的， 根据红细胞的提示信息， UF-100诊断肾性血尿的敏感性为83.5， 略低于普通光镜的87.2， 特异性为94.8， 高于普通光镜的92.1， 经统计学检验无明显差别， 表明UF-100尿沉渣分析仪可作为鉴别血尿来源的过筛试验， 另外， 由于UF-100尿沉渣分析仪标本不需离心， 检测准确性、重复性良好， 不受主观因素的影响， 在临床值得推广。
参考文献
[1] Birch DF， Fairley KF， Haematuria：Glomeruir or non-glomeruiar？ Lancet， 1979，314（8147）： 845-846.
[2] Shichiri M，Owada A，Nishio Y， et al. use of autoanayzer to examine urinary-red-cell morphology in the diagnosis of glomerular haematuria.Lancet， 1986，328（8510）： 781-782.
[3] Toru Hyodo，Kazuo Kumano，MakotoHaga，et al.Detection of glomerular and non-glomerular red blood cells by automated urinary sediment analyzer.Nihon Jinzo Gakkai shi， 1995， 37（1）： 35-43.
篇5
关键词：冠心病；稳定型心绞痛；急性冠脉综合症；红细胞胆固醇；基质金属蛋白酶一9
急性冠脉综合症（ acute coronary syndrome，ACS）是冠心病的急性过程，大多没有先兆，难以预料。寻找预测ACS的简便指标意义重大。ACS患者红细胞膜总胆固醇含量（total cholesterol content of erythrocyte membrances，CEM）高于SAP患者和健康对照人群，即不同的冠心病临床状态其CEM明显不同。红细胞内游离胆固醇在脂核增大导致斑块进展方面已有研究，但CEM水平与代表粥样斑块易损性的炎症指标MMP-9之间的关系国内外报道较少。
1资料与方法
1.1一般资料 选择冠心病59例：其中稳定性心绞痛（SAP）28例，急性冠脉综合征（ACS）31例，在31例ACS中，不稳定性心绞痛（UAP） 13例，急性心肌梗塞（AMI）18例。30例健康体检者做对照组。除外入院前2月内服用他汀类药物，未控制的高血压，合并周围血管病，脑卒中，肝肾功能不全，甲状腺疾病，肿瘤，免疫性和感染性疾病，急诊介入治疗和AMI发病超过12h，血常规中红细胞计数异常者等。
1.2方法 E-ch：采用全血酶法测定。计算：全血TC（ mmol/L）=（Au-Ab）/（As-Ab）×5.46。E-ch（ mmol/L）=（全血TC-血浆TC）/压积+血浆TC。MMP-9：采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）原理定量测定。
1.3统计学处理 数据资料采用SPSS11.5统计软件进行分析。数据进行正态分布和方差齐性检验；非正态分布数据经对数转换后接近正态分布再行检验。计量资料采用均数士标准差（x±s）表示，两组间差异显著性检验采用Bonferroni法，计数资料采用χ2检验。相关性分析采用直线相关分析。P
2结果
2.1基本临床资料 三组患者年龄、性别、传统危险因素等基础资料和红细胞参数、血脂比较：各组间无统计学差异，具可比性。
2.2 E-ch和血清MMP-9水平比较 见表2。
3.1红细胞胆固醇与ACS的关系 2003年Kolodgie等在猝死于冠脉疾患者群中发现动脉斑块的坏死脂核中含有红细胞膜，且抗血型糖蛋白A免疫染色的程度与坏死脂核的大小密切相关；同时发现：大量红细胞膜胆同醇的聚集可以导致脂质核心的迅速增大，引起斑块进展和破裂。说明红细胞丰富的游离胆固醇是斑块脂质的来源，红细胞胆固醇参与了粥样斑块脂核的快速增大和进展。Tziakas等的前瞻性研究表明：ACS患者CEM显著高于慢性SAP和健康人群，并且在慢性SAP和健康人群间无差异，进一步支持CEM增加是冠心病活动的标志物，而不是存存冠状动脉硬化与否的标志。本研究指标E-ch在实验中显示出相似的统计学结果，揭示了E-ch与不稳定性冠心病相关，E-ch水平增高是粥样斑块易损性增加和斑块破裂的促进因素，提示E-ch可能是冠心病活动的生化标志。
3.2红细胞胆固醇促使斑块不稳定的可能机制 影响斑块迅速增大的因素是出血和炎症。Kolodgie及2004年Moreno等指出：斑块内出血在进展的动脉粥样斑块中很常见，新生血管和斑块内出血是导致斑块易损、不稳定的重要因素。2007年Kolodgie等又旨出，进入斑块内的红细胞主要来源于外膜血管中的滋养血管向内膜层发展的幼稚易漏的新生血管网。斑块内急性炎症是导致ACS发生的关键因素。 红细胞进入斑块可能触发及促进斑块内炎症反应，可能与红细胞膜有很多炎症趋化因子受体有关。还可能涉及红细胞膜胆固醇和红细胞降解物，如血红蛋白或血红素，铁和磷脂，尤其血红素，是强的前氧化物，可触发过氧化反应，导致炎症细胞浸润，尤其当胆固醇和氧化物同时大量聚集于斑块时，产生氧化LDL-c，后者是促进粥样硬化进展的一种关键物质，可致巨噬细胞浸润和炎症因子表达进一一步增高。炎性反应导致了斑块破裂和血栓形成：①巨噬细胞分泌的MMPs可以降解纤维帽中的胶原和细胞外基质，T淋巴细胞分泌的INF-Y抑制血管平滑肌细胞表达胶原蛋白，使纤维帽变薄，易破裂：②细胞因子如TNF、IL-1等可以促进巨噬细胞和平滑肌细胞凋亡，使脂核变大，纤维帽变薄；③细胞因子可以促进内皮细胞和巨噬细胞分泌内皮素，导致血管收缩，挤压斑块，促使其破裂：④斑块内巨噬细胞分泌组织因子，促进血栓形成。E-ch在冠心病临床过程中呈一过性或暂时性增高，与慢性病变迅速进入ACS急性过程相一致，从以上论述说明E-ch可能通过炎症和出血两个机制促使斑块快速进展为易损斑块。
篇6
【关键词】 网织红细胞参数；再生障碍性贫血；治疗过程；变化；临床意义
DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.03.021
再生障碍性贫血（aplastic anemia， AA）是目前临床上的一种较为常见的疾病， 同时发病过程中也会对患者造成极为严重的危害。因此一种及时有效的治疗手段极为重要， 但在临床对患者治疗的过程中， 对患者治疗效果进行分析的参数极为重要[1]。随着近年来荧光染色技术的发展以及全自动血细胞分析仪的使用， 在对患者的血细胞常规参数实施检验的过程中， 也能够对患者的网织红细胞参数进行检验[2]。本院使用网织红细胞参数作为治疗再生障碍性贫血患者过程中的指标， 取得了较好的效果， 现报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取100例本院2014年1～12月收治的再生障碍性贫血患者为研究对象。使用1987年全国再障学术会议中制定出的相关标准对患者的骨髓、血液进行检查， 均能确诊。其中经过治疗后有效的50例患者设为观察组， 男30例， 女20例， 年龄4～67岁， 中位年龄36岁。将经过治疗后无效的50例患者设为对照组， 男29例， 女21例， 年龄3～65岁， 中位年龄37岁。两组患者年龄及性别等一般资料比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。
1. 2 研究方法 本次研究中使用的仪器为西斯美康XN-2000血球仪， 试剂为血液分析仪中自带的试剂。在此过程中， 通过高、中、低3种不同浓度的全血质控物对患者进行相应的检验。在临床实施检验的过程中， 将两组患者的静脉血1～2 ml放置在EDTA-K2的抗凝管中进行混合均匀， 并在室温下存放。在4 h内按照全自动血液分析仪中的相关操作规程对患者的静脉血网织红细胞参数进行相应的测定， 并每天对患者进行质控处理。在对患者治疗的过程中， 将患者的自身血液抽出， 并在抽出后进行干细胞的培养， 在对干细胞培养完成后， 择期对患者实施干细胞输入的治疗。
1. 3 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P
2 结果
观察组患者治疗后的网织红细胞参数明显高于对照组， 差异均具有统计学意义（P
3 讨论
再生障碍性贫血是一种在临床上较为常见的贫血性疾病， 主要是以造血干细胞损伤以及外周全血细胞减少为特征的一种贫血类疾病[3]。在再生障碍性贫血的发病原因方面， 实际上并不明确， 患者在临床治疗的过程中， 病情往往较为严重， 同时治疗效果往往不佳， 预后也较差， 患者极有可能出现较为严重的出血症状[4]。在临床对再生障碍性贫血治疗的过程中， 通过对患者实施药物治疗， 可以对患者起到一定的治疗效果， 但在此过程中， 通过一种指标观察药物治疗过程中的治疗效果， 对患者的正确治疗以及指导在治疗过程中的药物使用有着重要的意义[5]。再生障碍性贫血是一种物理、化学、生物或不明因素作用使骨髓造血干细胞和骨髓微环境严重受损， 造成骨髓造血功能减低或衰竭的疾病， 以全血细胞减少为主要表现的一组综合征。据国内21省（市）自治区的调查， 年发病率为0.74/10万人口， 明显低于白血病的发病率；慢性再障发病率为0.60/10万人口， 急性再障为0.14/10万人口；各年龄组均可发病， 但以青壮年多见；男性发病率略高于女性。再生不良性贫血也叫再生障碍性贫血， 是指骨髓未能生产足够或新的细胞来补充血液细胞的情况。
有研究显示， 再生障碍性贫血在临床上是一种由于骨髓造血障碍而引起的一种获得性的疾病。本次研究结果显示， 再生障碍性贫血患者在临床治疗前的参数和患者在经过治疗后的网织红细胞参数之间会出现显著性的差异。这说明在临床对再生障碍性贫血患者进行治疗的过程中， 网织红细胞参数的升高是患者的骨髓造血功能得到恢复的一种重要指标。同时目前也有研究显示， 患者在造血功能受到了刺激后， 幼稚RET会从患者的骨髓中释放外周血， 在此过程中， 患者体内的HFR以及中荧光强度网织红细胞百分比（MFR）会显著的提升， 这说明对于再生障碍性贫血患者而言， 在临床上的网织红细胞参数是一种重要的衡量患者病情以及治疗效果的参数[6]。注意药物和其他化学物质的影响， 尤其是对于治疗无效的再生障碍性贫血患者而言， 在临床实施治疗的过程中， 患者在治疗前后的网织红细胞参数并无明显的改变。这种结果进一步的说明， 在临床对再生障碍性贫血患者治疗的过程中， 通过使用网织红细胞参数的方式能够在临床对患者的治疗效果进行较为完善的显示， 因此能够更好的指导患者进行治疗， 对于患者而言也有着重要意义。
综上所述， 在临床对再生障碍性贫血患者进行治疗的过程中， 通过检验患者的网织红细胞参数能够更好的表明患者的治疗效果， 并指导患者的治疗， 对于患者而言有着极为重要的意义， 在临床上值得推广应用。
参考文献
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篇7
1 育苗时间和苗龄
彩虹瓜之宝在河南地区春季采用大棚3膜1苫覆盖栽培，育苗时间在1月中下旬，2月下旬或3月初定植；大棚单层膜覆盖栽培育苗在2月上中旬，3月中下旬定植。春季育苗适宜苗龄在35 d左右，或幼苗具有2~3片真叶时定植。
2 壮苗培育
2.1 种子处理
播前种子用0.1%~0.2% 高锰酸钾溶液浸泡30 min（分）消毒，用清水洗净后放入55 ℃ 温水中，快速搅拌至室温后再浸6~8 h（小时）；也可用50% 多菌灵可湿性粉剂500倍液浸种1 h，清水洗净后再用30 ℃ 温水浸种6~8 h，置于28~30 ℃ 条件下催芽，70% 的种子露白后即可播种。
2.2 育苗方式
建议购买育苗基质和50孔标准穴盘进行无土育苗，也可直接向大的育苗场或信誉好的育苗公司预订商品苗，降低早春因天气反常或育苗管理不善造成的风险。如果大棚重茬2年以上，最好采用嫁接苗，嫁接苗抗重茬能力强，病害轻。
2.3 播种及苗期管理
一般1―2月初播种，育苗期需35~40 d。先将基质装入穴盘，再用其他穴盘压出1~1.5 cm深的穴，将已催芽的种子播于穴内，每穴1粒。注意种子平放、芽尖朝下，再盖1层基质，稍镇压后，置于育苗床架上，适量浇水，盖1层塑料薄膜保温保湿。
播种至出苗期要求较高温度，在温室内可加盖小拱棚，白天温度控制在25~32 ℃、夜间15~18 ℃，夜间或阴雪天加盖草苫保暖。50%~70% 的苗子出土后，白天温度保持 25~32 ℃、夜间15~18 ℃。苗子长出心叶后，白天温度保持在20~30 ℃、夜间12~15 ℃ 为宜。无土育苗水分散失较快，应根据天气、基质及幼苗长势，见干见湿浇水，浇水应均匀细致。定植前7 d开始低温炼苗，白天保持 20~25 ℃、夜间10~15 ℃。定植前2 d喷施1次600倍代森锰锌或多菌灵药液和500倍液磷酸二氢钾或健植宝，带肥带药定植，以促进缓苗并防病。
3 大棚准备及定植
3.1 提早覆膜
一般情况下上一茬作物收获后，大多数种植户会拆除棚膜，利用冬季低温杀死有害生物。但为了在定植前有效提高棚内地温，可在定植前15~20 d 覆盖大棚膜。
3.2 施基肥
根据棚内土壤肥力 667 m2施腐熟猪粪 4 000~6 000 kg或鸡粪2 000~3 000 kg，氮、磷、钾三元复合肥50 kg，硫酸钾15~20 kg，过磷酸钙40 kg，其中一半结合耕翻撒施，另一半在挖瓜沟后沟施。重茬地多施有机肥和磷钾肥可减少枯萎病危害。
3.3 深翻土地
为了给定植后的西瓜创造良好的根系生长环境，在施基肥的同时应尽量将土地深翻。对于前茬枯萎病严重的地块，可结合深翻667 m2施重茬灵（有效成分蜡质芽孢杆菌）400 g或瓜枯宁（有效成分为40% 五硝多菌灵），以减轻枯萎病的危害。
3.4 土壤消毒
为了减少重茬病害，可采用嫁接苗或进行土壤消毒办法，减轻土传病害对西瓜生长发育的影响。土壤消毒可用75% 百菌清可湿性粉剂或70%甲基硫菌灵可湿性粉剂，配成1 ∶ 50的药土在翻地时均匀施入龟背畦土壤中，667 m2用药量 0.5~1 kg。
3.5 开沟、做畦
瓜沟最好南北走向，为便于管理，吊蔓栽培最好采用宽窄行方式种植，沟心距1.2~1.4 m，沟宽60~80 cm、深20~30 cm，龟背畦宽度50~60 cm。普通栽培可起垄单行种植，垄宽30~40 cm，行距1.8 m，畦宽50~60 cm，双行种植可节约大棚内的小棚膜。
3.6 覆膜
沟、畦最好采用全覆膜方式，以有效降低空气湿度，从而减轻病害发生。有条件的最好采用膜下滴灌方式灌溉，以降低棚内湿度。
3.7 定植
春季当大棚内夜间气温稳定在15 ℃ 以上时，选晴天上午定植。定植时瓜苗具有2~3片真叶。为了有效利用空间，提高光照利用率，吊蔓种植采用三角形定植，株距50~60 cm，667 m2定植1 800~2 000株。普通栽培采用宽窄行定植，蔓爬向两边，宽行距1.8 m，窄行距40 cm左右，株距35~40 cm，667 m2定植1 000株左右。在瓜苗移栽和田间管理过程中要尽量避免踩踏畦面，以免影响根系周围土壤疏松度和透气性。定植后覆盖地膜，再扣小拱棚，并覆盖草苫，定植后浇1次缓苗水。注意定植嫁接苗时，嫁接口一定要留在地面以上，以防接穗发生不定根，失去防病效果。
4 定植后的田间管理
4.1 温度管理
西瓜定植后应根据天气情况采取相应措施满足其不同生长发育时期对温度的需求。定植后5~7 d尽量不放风或少放风，白天气温保持 28~32 ℃，夜间不低于15 ℃，土壤温度保持12 ℃ 以上，以利于缓苗。缓苗后白天温度应控制在23~28 ℃，夜间 15~18 ℃。开花坐果期白天温度 25~30 ℃，夜间 15~20 ℃。果实膨大期白天温度 25~32 ℃，夜间 15~20 ℃。
4.2 湿度管理
根据品种特性，春季大棚内空气湿度白天控制在55%~60%，夜间75%~80%，最有利于西瓜生长发育。湿度过高加上夜间低温，极易引发真菌性和细菌性病害，降低棚内空气湿度措施除地膜覆盖外，还应在前期控制灌水，中期加强通风排湿，采用无滴膜等。
4.3 整枝、吊蔓
吊蔓种植采用单蔓整枝或 1蔓半整枝方式，待主蔓长30 cm左右时，撤掉小拱棚，并将主蔓吊起，坐瓜前去除主蔓上的侧蔓及分杈，以减少养分消耗，选留主蔓第2朵雌花授粉留瓜，促进坐瓜。选择晴天下午整枝，以免折断和损伤茎蔓及叶片，并有利于伤口愈合，减少病害感染。
普通种植采用双蔓整枝，留1条主蔓和1条健壮侧蔓。坐瓜前去除主蔓上的侧蔓及分杈，以减少养分消耗，促进坐瓜，选留第2朵雌花授粉留瓜，坐瓜后可不再打杈。
4.4 人工授粉、留瓜、吊瓜
主蔓第2朵雌花开放后授粉留瓜，雌花开放当日待花粉散开后于10：00左右进行人工授粉，授粉时温度在18~22 ℃。授粉前先取下雄花，去掉花瓣在手上轻微涂抹，检查花粉是否散开，如呈粉状即可授粉；若呈粒状，则先扒开风口放小风排湿约30 min，待花粉散开后再授粉。授粉时去掉雄花花瓣，用雄蕊侧面轻轻涂抹雌花 3个柱头，要均匀一致。授粉当日温度不得超过28 ℃，并做好授粉标记，以利于判断西瓜成熟度。如果花粉不足，也可用吡效隆处理，以提高坐果率，但应严格根据产品说明书使用。另外，如瓜苗长势不整齐，可对长势较旺的瓜秧捏尖，促进其开花坐果。具体方法是轻捏瓜秧近生长点处，听见响声即可。
吊蔓种植，当幼果0.3~0.5 kg时开始吊瓜，可用网袋套住幼瓜，再将网袋吊起，或者用尼龙绳系住果柄吊在上方铁丝或横杆上。
4.5 肥水管理
水分管理应根据西瓜不同发育阶段需水情况和长势强弱进行。总的原则是幼苗期要少，以利于根系下扎；伸蔓期和开花期要适当，以保证植株正常生长和开花、授粉所需水分；果实膨大期水分要足，此期充足的水分供应是保证果实充分膨大的关键因素之一；成熟期浇水要少，西瓜定个后，控制水分供应，采收前7 d 停止浇水，此期适当控制水分，有利于提高西瓜含糖量和品质。
应根据基肥施入量和植株生长状况合理追肥。一般在植株不同生长发育期适当追肥，伸蔓期667 m2施磷酸二铵或氮、磷、钾三元复合肥10~15 kg，追肥应距瓜根10~15 cm，穴施或者结合浇水冲施。果实膨大期 667 m2可用高氮高钾复合肥20~25 kg，结合浇水冲施。
4.6 病虫害防治
篇8
【摘要】
目的: 研究系统性红斑狼疮（SLE）模型小鼠的脾脏细胞凋亡及其相关调控机制。方法: 采用ConA活化的同系脾脏细胞诱导BALB/c小鼠SLE， 通过检测其外周血自身抗体、 肾组织病理学改变确定SLE小鼠模型诱导成功。脾脏细胞凋亡的检测采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法，免疫细胞化学法检测脾脏细胞Bcl2和NFκB的表达。结果: ConA活化的同系脾脏细胞成功诱导BALB/c小鼠发生SLE， 与盐水对照组和未活化脾脏细胞组比较， SLE模型小鼠脾脏细胞凋亡率明显降低， Bcl2和NFκB的表达均增加（P
【关键词】 系统性红斑狼疮 细胞凋亡 Bcl 2 NF κB
系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus， SLE）患者体内产生多种自身抗体， 核小体是主要的抗原， 核小体通常存在细胞核内， 体内完整的核小体抗原是由细胞凋亡DNA断裂产生的。研究表明， SLE患者存在细胞凋亡紊乱， 细胞凋亡过度[1]或凋亡过低[2]都可导致SLE的发生。机体免疫细胞的凋亡紊乱可能是细胞内凋亡相关基因异常表达的结果， 如Bcl2和NFκB。因此， 本研究采用ConA活化的同系脾脏细胞免疫BALB/c小鼠诱导SLE的发生， 同时检测其脾脏细胞凋亡及Bcl2和NFκB表达的改变以明确细胞凋亡紊乱是否是这一SLE模型小鼠发病的始动因素， 检测凋亡调控因子的改变以揭示SLE发病机制， 为临床治疗SLE提供理论和实验依据。
1 材料和方法
1.1 材料 BALB/c近交系小鼠(雌性， 7～8周龄， 体质量18～22 g， 清洁级)， 购自哈尔滨医科大学附属二院实验动物中心。动物合格证号: SCXK（黑）20020002。刀豆蛋白A(ConA)为Sigma 公司产品。RPMI1640培养基为Gibco公司产品。FITC标记的山羊抗小鼠 IgG 为Santa Cruz公司产品。抗核抗体（antinuclear antibody， ANA）和抗组蛋白抗体（antihistone antibody， AHA）（H2AH2B）ELISA试剂盒为美国BPB 生物医学有限公司产品。末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling， TUNEL）试剂盒购自美国Promega公司。兔抗Bcl2和小鼠抗NFκB一抗为Santa Cruz公司产品。兔二步法和小鼠二步法检测试剂盒为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。
1.2 方法
1.2.1 ConA活化的脾脏细胞的制备 无菌取脾脏制备脾脏细胞悬液， 用含100 mL/L胎牛血清的RPMI1640调整脾脏细胞密度为2×109/L， 加入ConA， 使其终浓度为0.005 g/L。然后置37℃、 50 mL/LCO2培养箱内孵育3 d， 收集脾脏细胞悬液，
并用生理盐水调整脾脏细胞密度为2×1011/L备用。同时制备未添加ConA的脾脏细胞作对照[3]。
1.2.2 动物分组及BALB/c小鼠SLE模型的诱导 (1)SLE模型诱导组（MI组）: 取活化的脾脏细胞5×107/只（大约0.2～0.3 mL）分皮下几点注射。每周1次， 连续3次， 第4 周开始进行相应检测。(2)脾脏细胞对照组（CC组）: 给正常小鼠在相同时间、 相同部位注射同等剂量的未经活化的同系脾脏细胞悬液。(3)生理盐水对照（NC组）: 给正常小鼠在相同时间、 相同部位注射相同体积的生理盐水[3]。
1.2.3 SLE模型鼠的鉴定 (1)样本收集: 于实验第4周摘除眼球采血析出血清待测，留取肾脏标本进行病理学检测。(2)SLE模型鼠外周血中ANA、 AHA水平的测定: 采用ELISA法检测， 具体步骤按试剂盒说明进行。(3)肾脏病理学检测: 进行光学显微镜、 荧光显微镜和电子显微镜检查。①光学显微镜观察: 常规石蜡切片， HE染色， 用中性树脂封固， 光学显微镜下观察肾脏炎性改变。②荧光显微镜观察: 采用直接免疫荧光法， 简述如下: 取出冻存于-70℃冰箱中的小鼠肾脏， OCT包埋， 5 μm切片， 滴加FITC标记的羊抗小鼠IgG抗体（1∶100稀释）于组织切片上， 置37℃孵育30 min， PBS液冲洗， 缓冲甘油封片， 在荧光显微镜下观察肾小球内有无IgG沉积及分布部位。③电子显微镜观察: 肾脏经30 g/L戊二醛前固定、 锇酸后固定、 环氧树脂812包埋、 超薄切片、 电子染色后， 透射电镜观察肾小球基底膜、 足突的变化及有无电子致密物沉积。
1.2.4 SLE模型鼠脾脏细胞凋亡的检测 于实验第4、 6、 8、 10 周， 无菌取小鼠脾脏， 制备脾脏细胞悬液， 涂片。采用TUNEL试剂盒检测脾脏细胞凋亡， 具体操作步骤按照试剂盒说明书进行。荧光显微镜下观察并拍照， 采用NISElements BR2.30图像分析系统计数阳性细胞百分率。
1.2.5 SLE模型鼠脾脏细胞Bcl2和NFκB的检测 于实验第4、 6、 8、 10 周， 收集脾脏细胞， 涂片固定， 30 mL/L H2O2去除内源性过氧化物酶， 分别滴加1∶200稀释的一抗（兔抗小鼠Bcl2和小鼠抗小鼠NFκB） 50 μL， 4℃过夜， PBS洗涤， 再分别滴加相应的酶标二抗（抗兔和抗小鼠） 1滴， 30℃ 25 min， 洗涤后， DAB显色5～10 min， 苏木素复染， 脱水透明， 中性树胶封片， 显微镜下观察并拍照， 采用图像分析系统计数阳性细胞百分率。
1.2.6 统计学处理 应用SPSS11.0统计学分析软件， 单因素方差分析比较各组均值的差异明显。P
2 结果
2.1 SLE模型鼠的成功建立
2.1.1 SLE模型鼠外周血中ANA和AHA水平的变化 MI组BALB/c小鼠自接种活化脾脏细胞后第4 周外周血中出现ANA和AHA， 并随时间浓度逐渐增加， 到第8周达到最高峰， 第10 周有所降低(图1)。
图1 SLE模型鼠外周血中ANA、 AHA水平的变化（略）
2.1.2 SLE模型鼠肾脏病理的改变 光学显微镜观察MI组小鼠第4周即出现肾小球肾炎， 表现为肾小球体积增大， 系膜细胞增生，肾间质有炎细胞浸润。而CC组和NC组小鼠肾小球结构清晰， 无异常病理改变（图2）。荧光显微镜检查发现MI组小鼠肾脏冰冻切片中大多数肾小球内都有绿色的斑块状沉积物， 可见肾小球毛细血管襻免疫复合物沉积， 呈连续性荧光分布（图3）。而CC组和NC组小鼠肾脏未见IgG类免疫复合物的沉积，直接荧光染色微弱、 无特异性，肾小球轮廓不清（图3）。透射电镜下可见MI组小鼠基底膜区有电子致密物沉积。 CC组和NC组基底膜厚度均匀， 滤过屏障结构完好， 未见电子致密物沉积（图4）。
图2 SLE模型鼠肾脏病理形态改变 (HE， ×400)（略）
A: NC; B: CC; C: MI.
图3 SLE模型小鼠IgG类IC沉积的变化(免疫荧光法， ×400)（略）
A: CC; B: NC; C: MI.
图4 SLE模型鼠肾脏超微结构的改变（略）
A: NC(肾小球足细胞结构完好， 滤过屏障清晰， ×18000); B: CC(基底膜厚度均匀， 滤过屏障结构完好， ×12000); C: MI(免疫复合物沉积在基膜， ×15000).
2.2 SLE模型鼠的脾脏细胞凋亡的变化 采用TUNEL试剂盒检测发现正常细胞呈均匀荧光染色， 而凋亡细胞呈致密浓染的颗粒状或块状荧光（图5）。与NC组和CC组（第4、 6、 8和10周分别为1.46±0.24、 1.37±0.34、 1.40±0.23、 1.28±0.19和1.39±0.23、 1.43±0.18、 1.38±0.32、 1.35±0.26）相比较， MI组（第4、 6、 8和10周分别为0.89±0.16、 0.79±0.32、 0.94±0.19、 1.02±0.27）小鼠脾脏细胞凋亡百分率明显降低（P
图5 SLE模型鼠脾脏细胞凋亡的变化（TUNEL， ×400）（略）
A: NC; B: CC; C: MI.
2.3 SLE模型鼠脾脏细胞Bcl2的表达 免疫细胞化学检测发现Bcl2阳性染色为细胞质中出现棕黄色或棕褐色颗粒， 与NC组和CC组（第4、 6、 8、 10周分别为46.92±10.31、 47.87±6.34、 44.32±9.23、 40.94±5.76和41.67±8.43、 45.78±5.64、 40.82±5.86、 44.36±4.87）相比较， MI组小鼠脾脏细胞Bcl2表达细胞的百分率(第4、 6、 8、 10 周分别为89.78±7.62、 92.45±2.89、 80.67±4.87、 75.63±7.83)明显增加（P
2.4 SLE模型鼠脾脏细胞NFκB的表达 免疫细胞化学检测发现NFκB P65阳性染色为细胞质和细胞核中均出现棕黄色或棕褐色颗粒， 与NC组和CC组（第4、 6、 8、 10周分别为31.92±7.53、 28.45±7.42、 34.54±6.43、 31.34±6.85和33.54±6.75、 34.47±5.86、 33.25±7.32、 29.65±4.68）相比较， MI组小鼠脾脏细胞NFκB表达细胞的百分率（第4、 6、 8、 10周分别为52.12±8.87、 59.32±4.76、 50.54±6.78、 47.25±2.87）明显增加（P
3 讨论
SLE的主要特点是外周血中出现多种自身抗体以及病变累及肾脏[4]。因此本研究通过检测外周血中自身抗体以及肾脏病理学改变以确定SLE小鼠模型的成功诱导。结果显示， MI组小鼠第4周外周血中出现ANA和AHA， 肾脏出现炎性改变， 肾小球毛细血管襻免疫复合物沉积， 肾脏超微结构改变， 证明MI组小鼠发生了SLE。而两对照组动物外周血中未检出自身抗体， 肾脏也未出现病理改变。
越来越多的证据表明， SLE患者淋巴细胞及其亚群的凋亡异常与SLE的发生、 发展密切相关。绝大多数的研究表明SLE患者多种血细胞[5]存在凋亡加速的现象。体内细胞凋亡加速导致核小体释放增加， 致敏自身反应性T细胞并活化B细胞，触发SLE的发生。但凋亡障碍也会导致SLE的发生， 这在SLE动物模型中已经得到证实， 如MRL/lpr[6]和MRL/gld[7]小鼠分别存在Fas、 FasL的单基因突变， 通过这一机制大幅度降低凋亡信号， 从而使自身反应性淋巴细胞逃脱凋亡的命运， 最终导致SLE的发生。在人类也发现1例FasL蛋白减少28个氨基酸， 导致淋巴组织明显增生， 临床上有SLE表现[8]。因此任何形式的凋亡紊乱（凋亡的增加或降低）都可能导致SLE的发生。
Bcl2和NFκB是两个重要的凋亡调控因子。Bcl2基因是人们在研究B细胞淋巴瘤中发现的一种异常表达的原癌基因， 其高表达能阻抑多种凋亡诱导因素所引发的细胞凋亡。NFκB是近年发现的转录因子家族中的新成员， 是细胞内最重要的核转录因子， 是细胞激活的标志， 控制众多包括免疫炎症反应、 细胞周期进展、 凋亡抑制和细胞黏附等基因。近年的研究表明NFκB与细胞凋亡的关系密切， 参与多种凋亡相关基因的转录调控。有研究表明NFκB的激活是SLE发生所必须的[9]， 而且发现NFκB抑制物明显减轻MRL/Fas(lpr)小鼠的皮肤病。bcl2启动子上存在NFκB的特异性结合位点， NFκB可通过转录途径直接上调bcl2表达[10]。另外， Bcl2是NFκB所控靶基因表达的激活剂， 它的作用就是能与P50/P56同源二聚体结合， 从而将其从κB结合位点移开， 让异源二聚体有机会结合启动子位点并发挥活性。因此， NFκB作为一种抑制凋亡的转录因子， 通过对Bcl2一类下游抗凋亡基因的调控， 对免疫细胞的正常程序化死亡产生抑制作用， 从而间接促进SLE的发生和发展。
总之， 我们在研究中发现免疫同系活化脾脏细胞的小鼠的自身脾脏细胞自发凋亡率明显降低， 这可能是由于体内异常核小体大量增加致敏自身反应性淋巴细胞， 通过NFκB调节凋亡抑制基因Bcl2表达， 抑制淋巴细胞的凋亡。淋巴细胞凋亡过低可能是ConA活化的同系脾脏细胞诱导BALB/c小鼠发生SLE的原因之一。
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篇9
关键词水情监测；洪水预警预报系统；辽宁省
中图分类号TV697.2文献标识码A文章编号 1007-5739（2013）12-0331-02
StudyonFloodHydrologicalMonitoringandFloodWarningSystemTechnologyinLiaoningProvince
FENG Lin
（Hydrology and Water Resources Survey Bureau of Liaoning Province，Shenyang Liaoning 110003）
AbstractFlood hydrological monitoring and flood warning system technology of Liaoning Province is a practical and innovative scientific research achievement，which is researched by Hydrology and Water Resources Survey Bureau of Liaoning after 10 years.The paper summarized and introduced its gains and running practices for years.
Key wordsflood hydrological monitoring；flood warning system technology；Liaoning Province
1项目背景及意义
辽宁省水旱灾害频发。1949―2010年期间，于1951、1953、1960、1962、1985、1995、2005、2010年发生洪水灾害，给国民经济和人民生命财产造成了重大损失。统计“1995.7”大洪水可知：全省受灾县（市、区）达44个，人口584万人，直接经济损失347亿元，占同期GDP（2 797亿元）的12.4%。因此，洪水灾害是影响全省经济和社会可持续发展的主要自然灾害之一，防洪减灾是水利部门的重要职责。在加强防洪工程体系建设的同时，还应大力加强防汛水情监测及洪水预警预报系统等非工程措施建设。在系统开展该项目研究前存在的突出问题有以下几点：①水文监测手段相对落后。水位以人工观测水尺、流量以测船、降水以雨量计等人工监测为主。②水情测报站点严重不足。雨量等自动报汛站有342处，不足现在的1/4。③水情信息迟滞严重。受水情信息编、转、译报等环节传输技术影响，仅有1/3报汛站能在规定时限内（30 min）将水情信息上报至省水文局。④水文分析、展示、会商等手段单一。可靠性、实时性、信息量等都难以保证。⑤水文预报方法模型单一，参数遴选等受GIS等技术限制，匹配难度大，预报精度低，尤其74座中型水库和285座小型水库信息空白、预报方案空白，一旦遇有险情，后果严重[1]。
2主要研究内容与技术路线
2.1研究内容
针对辽宁省的防汛形势和决策支持要求，项目主要开展以下研究：一是加强水文监测、通讯传输、数据处理、决策支持系统建设，增加现代科技含量，提高自动化水平。二是实施辽宁省现代实用洪水预报系统建设，将现代洪水预报理论、专家经验和智慧、人类活动影响的实际情况有机地结合，实现数字化洪水预报，提高洪水预报精度，增长洪水预见期。三是优化水库、河道联合洪水调度系统，发挥工程防洪最大效能。
2.2技术路线
该研究充分立足于现有防洪工程体系，着力加强非工程措施建设，在防汛水情数据采集方面，通过新技术和新仪器的试验和应用，改变原有人工观测的模式，实现全省2 000余站点水情信息的自动采集和传输，以提高水情信息采集的数量、质量和传输速度；在水情信息接收、分析处理和信息方面，通过研发信息交换技术等新技术手段，实现国家部委、省气象、国土等数据信息的直接全面共享，以扩大辽宁省防汛信息资源量；通过新技术开发和应用以最快捷、最全面、最清晰的方式在不同的平台上给各级防汛工作者和决策者予以查询和显示，以便随时掌握防汛水情信息；通过研究和应用最优化、最适合辽宁下垫面情况洪水预报模型和洪水预报方法，提高洪水预报精度，延长预见期，为防汛决策和抢险赢得宝贵时间[2]。
2.3开展的主要工作
该项目由辽宁省水文局、辽宁省防办于2003年开始相关研究和建设工作。2003年研究并编制辽河流域实用洪水预报方案；2004年编制辽宁省西部、东南部实用洪水预报方案；2005年开始开发辽宁省实用洪水预报系统，全省雨量、水位、流量观测等大量引进和应用新技术和新仪器；2006年引进中国洪水预报系统，开发辽宁省防汛抗旱水情信息网，进行水情自动测报系统的建设工作；2007年开发辽宁省防汛抗旱水情值班系统；2009年进行中小水库洪水预警预报系统的建设合水库洪水预报方案研制工作。2010年研发水情数据交换系统、水情易信通显示系统等，同时实现水情信息全面共享。其系统技术路线见图1。
3主要研究成果
该项目结合辽宁省水文防汛工作实际需求在水情信息监测、传输、分析、、洪水预报预警等方面取得了多项研究成果。
（1）在水情信息采集、洪水分析模拟计算、水文预报等功能模块的关键技术环节中，应用GPS、GIS、ADCP、超声波、固态存储、遥测、雷达先进技术；应用新安江模型、MIKE-11、NASH单位线、三维模拟、辽宁模型等先进实用模型，构建了适合辽宁省实际情况的水文情报预报系统集成，保证了用于防汛决策支持的准确性和科学性。
（2）在各类水情信息传输过程中，最新采用水情信息交换技术，摆脱了原有各个环节需编码、解码等大量繁冗数据处理工作，充分实现了水情分中心、省水情中心、松辽委、国家水情信息中心的水情信息全面、直接、开放式共享，水情信息的时效性由原来的1 h缩短到5 min，解决了信息传输方面的关键技术问题。系统特点：低成本、易安装、易维护；业务覆盖全面：集数据轮询、发送、接收、入库、实时监控、提示预警等功能于一身，同时能够应对网络故障、大数据量传输等特殊情况；画面较直观，操作较简单；运行稳定且可靠[3]。
篇10
[关键词] 丹红注射液；缺血再灌；心肌细胞；细胞凋亡
[中图分类号] R331.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）02（a）-0024-02
The effect of Danhong Injection pretreatment on cardiomyocytes cell of ischemic-reperfusion rats
ZHENG Yaping HAN Kun
Department of Physiology, Luohe Medical College, He′nan Province, Luohe 462002, China
[Abstract] Objective To investigate the effect of Danhong Injection pretreatment on cardiomyocytes cell of ischemic-reperfusion rats. Methods The rats cardiomyocytes were cultured and pretreated with Danhong Injection in four different concentrations: 2％, 4％, 8％, 16％ before create cardiomyocytes I/R model after 24 hours for pretreatment. The apoptotic rate of cardiomyocytes was determined by flow cytometry, the protein expressions of Bcl-2 and Bax were observed by imnmnohistochemistry. Results Compared with control group, the apoptotic rates were significantly increased in ischemia-reperfusion (I/R) group, and the protein expressions of Bax expressions was significantly up-regulated and Bcl-2 expressions was down-regulated. Pretreatment of cardiomyocytes with Danhong Injection increased the expression of Bcl-2, decreased the expression of Bax and the apoptotic rate in a dose-dependent fashion. Conclusion Danhong Injection alleviates I/R injury in a concentration-dependent manner. These effects may be partially that Danhong Injection can inhibit Bas gene protein expression and induce Bcl-2 gene protein expression.
[Key words] Danhong Injection; Ischemia-reperfusion; Cardiomyocytes; Apoptosis
心肌缺血再灌注损伤（isehemia-reperfusioninjury，I/R）是心脏缺血性疾病及心外术后心肌损害的主要原因，其导致的心肌细胞凋亡被认为是再灌注损伤的重要环节。丹红注射液是由丹参与红花萃取制备而成，具有保护心血管的作用，已有动物实验提示丹红注射液对大鼠离体心脏缺血再灌有保护作用[1]，但其对缺血再灌心肌细胞的直接作用的报道较少。本研究采用心肌细胞缺血再灌注细胞模型，观察丹红注射液预处理对其的影响，初步研究其作用的可能机制。
1 仪器与试药
1.1 实验动物
出生2～3 d的SD大鼠。
1.2 试剂
丹红注射液（济南步长制药有限公司，批号：Z20026866），胰蛋白酶、DMEM培养基（均为Sigma公司）；胎牛血清（杭州四季青公司），鼠抗横纹肌肌动蛋白单克隆抗体、抗Bcl-2、抗Bas（均为博士德公司），其余试剂均为市售分析纯。
1.3 心肌细胞培养、鉴定
取2～3 d的SD大鼠，在无菌条件下取出心室，剪碎，0.1%胰酶消化，收集细胞，离心，重悬，置于二氧化碳培养箱中孵育。根据心肌细胞和成纤维细胞贴壁时间不同，采用差速贴壁1.5 h，获得心肌细胞。免疫组化染色观察α-横纹肌肌动蛋白反应。
1.4 缺血再灌注体外模型的建立
将培养的心肌细胞更换无血清培养基，缺氧培养箱（95%N2、5%CO2）中培养3 h后，置10%胎牛血清DMEM培养基，常规培养9 h。
1.5 实验分组
将心肌细胞按照2×105/mL均匀的接种于24孔板中，丹红组分别以2%、4%、8%、16%的给药浓度[1]，实验共分6组，每组5个孔，即：①正常对照组（用无胎牛血清的高糖DMEM培养液）；②缺血再灌注（I/R）组；③I/R+丹红注射液（2%）组；④I/R+丹红注射液（4%）组；⑤I/R+丹红注射液（8%）组；⑥I/R+丹红注射液（16%）组。
1.6 流式细胞仪检测凋亡率
0.25%胰蛋白酶消化各组心肌细胞，用4℃预冷的PBS洗涤2次，离心5 min，重悬细胞，于70%冷乙醇（4℃）过夜。检测时离心10 min（1 000 r/min），PBS洗去乙醇。细胞沉淀用碘化丙啶（PI）4℃避光染色30 min，上机检测。G期前的亚二倍体峰即代表凋亡峰，反映凋亡细胞的百分比。
1.7 Bas、Bcl-2基因蛋白表达
各组心肌细胞爬片，固定，在室温下用3% H2O2处理30 min以灭活过氧化物酶，后加入Bcl-2、Bax抗体4℃过夜，加入冲洗后依次加入1∶100生物素化山羊抗兔IgG和1∶100抗生物素-生物素-过氧化物酶复合物液，DAB染色，复染，脱水，透明后封片。细胞浆显示棕黄色颗粒细胞为阳性细胞，将玻片于光学显微镜下放大200倍，根据阳性细胞分布情况，每片选择10个视野，每视野计算Bcl-2、Bax蛋白阳性表达的细胞数，以平均计算阳性细胞数所占百分比作为Bcl-2、Bax蛋白蛋白阳性表达指数。
1.8 统计学方法
采用SPSS 11.5软件包进行统计分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，多组比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK检验。以P < 0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 光镜下心肌细胞鉴定结果
心肌细胞鉴定光镜下观察，心肌细胞接种72 h可见细胞形态不规则，呈梭形，三角形或多边形，单核，有多个伪足伸出，形成细胞簇；免疫组化染色显示，α-横纹肌肌动蛋白呈阳性反应，阳性率达90％以上。
2.2 流式细胞仪检测结果
结果显示，缺血再灌组细胞凋亡率表达明显高于对照组，差异均有高度统计学意义（P < 0.01）；与I/R组比较，用丹红注射液预处理后呈浓度依赖性地下调凋亡率（P < 0.05或P < 0.01）。见表1。
表1 丹红注射液对心肌细胞凋亡率的影响（x±s，％）
注：与正常对照组比较，*P < 0.05，**P < 0.01；与I/R组比较，#P < 0.05，##P < 0.01
2.3 Bas、Bcl-2蛋白的表达
结果显示，缺血再灌组细胞Bas表达明显高于对照组，Bcl-2表达则显著低于对照组，差异均有高度统计学意义（均P < 0.01）；而与I/R组相比，用丹红注射液预处理后呈浓度依赖性的下调凋亡率及Bas表达，上调Bcl-2表达（P < 0.05或P < 0.01）。见表2。
3 讨论
缺血心肌的早期再灌注治疗能减轻缺血损伤，使细胞凋亡下降，减小梗死面积，缺血较长时间后再灌注反而会引起再灌注损伤，造成细胞凋亡明显增加，因而心肌细胞凋亡被认为是再灌注损伤的重要环节[2]。丹红注射液目前已用于临床治疗冠心病，且对离体大鼠缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用，此作用可能与抑制心肌脂质过氧化、增强抗氧化能力及调控凋亡基因有关[3]。
Bcl-2、Bas基因家族是目前较为公认与凋亡密切相关的基因，Bcl-2基因可抑制许多因素引起的细胞凋亡，被称为细胞凋亡抑制基因，Bas单克隆抗体在体内与Bas结合后均能导致表达Bas的细胞发生凋亡，从而证明Bas是一种识别Bas配体，并将凋亡信息传递给细胞的细胞表面受体[4-5]。本实验结果显示，心肌缺血再灌能促进心肌细胞凋亡，且伴随着Bcl-2基因表达蛋白的明显降低和Bas基因表达蛋白的明显升高；而丹红注射液则能呈浓度依赖性地下调心肌细胞的凋亡率，并伴有Bcl-2基因表达蛋白的上调和Bas基因表达蛋白的下调。
大鼠心肌缺血再灌注过程中， Bcl-2蛋白表达减少而Bas蛋白表达增加，表明心肌细胞凋亡可能是一方面Bcl-2蛋白表达降低，抗凋亡能力减弱，而另一方面Bas蛋白表达增加，发挥了促凋亡能力的缘故[6]。丹红注射液则可通过上调Bcl-2蛋白表达的和下调Bas蛋白表达，发挥保护缺血再灌心肌细胞的作用，这也为临床上应用丹红治疗心肌缺血再灌注损伤提供分子调控依据。
[参考文献]
[1] 郄素会，郝哲，刘增娟，等.丹红注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].现代中西医结合杂志，2008，35（17）：5428-5430．
[2] Wang TD，Chen WJ，Su SS，et al． Increased cardiomyocyte apoptosis following ischemia and reperfusion in diet-induced hypercholesterolemia：relation to Bcl-2 and Bax proteins and Caspase-3 activity[J]． Lipids，2002，37（4）：385-394．
[3] 周晓枫．丹红注射液与硝酸甘油联用治疗不稳定心绞痛疗效观察[J]．中国医药导报，2007，4（14）：65．
[4] Wu XW，Teng ZY，Jiang LH，et al． Human thioredoxin exerts cardioprotective effect and attenuates reperfusion injury in rats partially via inhibiting apoptosis [J]． Chin Med J（Engl），2008，121（9）：819-826．
[5] 郑勇萍，王焱林，陈锋，等．大鼠心肌缺血预处理对细胞凋亡的影响[J]．中华中医学杂志，2002，26（5）：265-266．