化学发光免疫分析仪范文
时间：2023-03-19 17:59:18
导语：如何才能写好一篇化学发光免疫分析仪，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
电化学发光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay，eclia）是电化学发光和免疫测定相结合的新一代标记免疫测定技术。因标志物为非放射性物质，而且实现自动化，具有快速、简便、灵敏、特异等特点，己广泛应用于各种激素、肿瘤标志物、药物及其他微量生物活性物质的测定[1]，但配套试剂均需进口，测定成本高，为独立包装、固定测试数、条码自动记录，使瓶中残余试剂不能再利用而造成浪费。为充分利用医学资源，在保证检验质量的前提下，笔者对罗氏e170电化学发光免疫分析本文由收集整理仪残余试剂混合再利用的可行性进行研究，现报道如下：
1 仪器与试药
1.1 仪器
瑞士罗氏公司e170全自动电化学发光免疫分析仪。
1.2 试药
定标物为罗氏原装配套，pct质控物为罗氏公司提供，批号为168843、168845；ca72-4质控物为美国伯乐公司提供，批号为54551、54553。新试剂为罗氏e170原装配套试剂；混合试剂为罗氏e170同一项目、同一批号的试剂，经仪器扫描条码为0测试，将瓶中残余试剂每3～4瓶混合为1瓶。所有试剂均在有效期内使用。
2 方法与结果
2.1 方法
2.1.1 手工输入条码信息 将罗氏三联装试剂白色瓶上的15位数字信息，输入到相应的试剂位空白栏。
2.1.2 定标与质控 按要求保养仪器，对e170分析仪所检验项目进行定标及常规质控，定标通过及室内质控在控方可进行以下实验。
2.1.3 混合试剂精密度试验 根据《体外诊断试剂分析性能评估指导原则》进行，取高、低2个浓度的质控物，每天做2批次的测试，每批次测试时，对同一样品作双份测定，共做20 d。得80个测试结果，计算批内及批间精密度。
2.1.4 混合试剂准确性测试 两种试剂分别检测pct、ca72-4高、低浓度质控物各20次，检查分析结果是否在允许范围内，并进行结果比较。
2.1.5 标本测定 用新试剂和混合试剂对80例血清样本进行pct、ca72-4测定，对结果进行比较及相关性分析。
2.1.6 回收试验 分别在1000 μl正常血清内加入pct、ca72-4低值、高值质控血清100 μl，制成2个待测标本进行回收试验，每样本用混合试剂重复检测3次，取平均值，计算回收率。回收率为90%～110%，结果为可接受[2]。
2.1.7 稳定性试验 每天用罗氏与伯乐低值、高值质控物作为监控品，对混合试剂进行3周监控。
2.2 统计学方法
本研究所有数据采用spss 12.0软件进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，进行t检验，以p < 0.05为差异有统计学意义。
2.3 结果
2.3.1 混合试剂精密度检测结果 混合试剂检测质控物pct、ca72-4批内、批间cv均 < 5%，符合卫生部临床检验中心的要求（< 10%）（表1）。
表1 原装与混合试剂检测质控血清pct、ca72-4批内、
批间cv的比较（%）
2.3.2 混合试剂准确性检测结果 混合试剂测得pct、ca72-4低、高浓度质控物各20次结果与靶值结果比较，pct、ca72-4其20次结果均在质控允许范围内，经单样本t检验，两项目各浓度测定值差异无统计学意义（p > 0.05）（表2）。
表2 混合试剂准确性检测结果（x±s）
2.3.3 原装试剂与混合试剂检测血清样本结果 原装新试剂与混合试剂检测80例血清样本的pct、ca72-4的结果相关系数（r）分别为0.998、0.997，两种试剂测定结果经配对样本t检验，差异无统计学意义（p均 > 0.05）（表3）。
表3 80例标本原装试剂与混合试剂检测血清pct、ca72-4结果
（x±s）
2.3.4 混合试剂回收试验结果 pct、ca72-4的低值回收率分别是96.3%、101.5%，pct、ca72-4的高值回收率分别是96.8%、105.9%。
2.3.5 混合试剂稳定检测结果 低、高值质控品21次检测结果有均在允许范围之内，未出现失控，经单样本t检验，两项目各浓度测定值差异无统计学意义（p > 0.05）（表4）。
3 讨论
罗氏e170电化学发光免疫分析仪克服了放射免疫分析试剂有效期短和辐射污染、酶联免疫吸附试验易受温度、酸碱度变化的影响，以及化学发光免疫分析技术中发光分子只能利用一次的缺点，分析过程可通过电场精确控制，因此具有特异性好、灵敏度高、线性测定范围宽、操作的自动化程度高等优点[3]，国内外均有文献对其综合性能进行了分析并给予较高评价[4-6]。
篇2
关键词：甲状腺疾病;化学发光免疫技术;应用;效果
甲状腺疾病为常见临床疾病，常通过检测患者甲状腺球蛋白进行诊断。传统检测方法为放射免疫技术、血凝法等，但检测效果不甚理想。化学发光免疫技术具有稳定性高、灵敏度高和操作方便等优点，标本用量较少，且标记物易得[1]。现搜集2013年7月―2014年7月我院接诊的甲状腺疾病45例、甲状腺肿瘤45例、甲亢45例患者，对其化学发光免疫技术的应用效果进行总结性分析，并将分析结果报告如下。
1 资料和方法
1.1 一般资料 将2013年7月―2014年7月我院接诊的甲状腺疾病45例患者作为甲组，平均年龄是（29.32±10.25）岁，男患者和女患者分别是23例、22例;将甲状腺肿瘤45例患者作为乙组，平均年龄是（29.39±10.25）岁，男患者和女患者分别是24例、21例;将甲亢45例患者作为丙组，平均年龄是（29.48±10.22）岁，男患者和女患者分别是25例、20例;将同期正常体检人群45例作为丁组，平均年龄是（30.07±1.12）岁，男性和女性分别是22例、23例。甲组、乙组、丙组和丁组的一般临床资料相比，无明显差异，无统计学意义（P>0.05）。
1.2 方法 在受检者空腹情况下采3ml血，抗凝剂选择肝素钠，通过放射免疫技术对血浆甲状腺球蛋白进行检测;后选择化学发光免疫全自动分析仪检测。比较甲组、乙组、丙组和丁组假阴性、假阳性和检测浓度。对比不同检测方法的符合率、特异性及灵敏度。
1.3 统计学分析 对本文所得实验数据均采用SPSS 13.0统计学软件进行检验，所得计量资料采用t检验，所得计数资料采用χ2检验，以P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 假阴性及假阳性结果 与放射免疫技术相比，四组经化学发光免疫技术检测假阴性及假阳性率较低，有明显差异，有统计学意义（P<0.05）。四组检测结果比较情况见表一。
表一 四组假阴性及假阳性结果对比
2.2 甲状腺球蛋白检测浓度 与放射免疫技术相比，经化学发光免疫技术检测的甲状腺球蛋白浓度较高，有明显差异，有统计学意义（P<0.05）。四组不同检测方法甲状腺球蛋白浓度比较情况见表二。
表二 四组不同检测方法甲状腺球蛋白浓度对比
2.3 符合率、特异性及灵敏度 与放射免疫技术相比，四组化学发光免疫技术检测符合率、特异性及灵敏度较高，有明显差异，有统计学意义（P<0.05）。四组不同检测方法符合率、特异性及灵敏度比较情况见表三。
表三 四组不同检测方法符合率、特异性及灵敏度对比
3 讨论
放射免疫技术假阴性率及假阳性率较大，试剂有效期较短，且具有一定放射性，限制临床应用。该技术又分为发光反应和免疫反应，在抗原或抗体上标记化学发光剂，将其与待测标本抗体或抗原经特异性反应相互结合，产生复合物，通过磁场对结合态、游离态进行分离，加入发光底物或氧化剂，促使物质氧化，产生激发态中间体，跃迁至基态，发射光子，经发光强度检测进行定性检测和定量检测[2]。该技术主要适用于肿瘤标志物分析、心脏疾病标记物测定、激素分析等。甲状腺疾病患者的甲状腺功能主要依靠检测甲状腺球蛋白判断，因此，必须加强对患者甲状腺球蛋白的定量检测[3]。在本文研究中，对甲组、乙组、丙组和丁组分别进行放射免疫技术及化学发光免疫技术检测，结果显示，甲组经放射免疫假阴性率为8.89%，经化学发光免疫假阴性率为2.22%;乙组分别为11.11%、2.22%;丙组分别为6.67%、0%;丁组假阳性率分别是4.44%、2.22%，表明化学发光免疫技术可有效检测甲状腺疾病，假阴性率及假阳性率较低。甲组、乙组、丙组和丁组经不同方法检测甲状腺球蛋白，化学发光免疫技术检测浓度均高于放射免疫技术，表明化学发光免疫技术对有效检测甲状腺球蛋白具有重要作用。化学发光免疫技术检测符合率、特异性及灵敏度均高于放射免疫检测，表明化学发光免疫技术具有较高的检测特异性及灵敏度，符合率较高。
综上认为，化学发光免疫技术在临床上应用价值较大，能为临床诊断甲状腺疾病提供有力依据，应予以推广。
参考文献：
[1] 李晓霞.化学发光免疫分析[J].延安大学学报（医学科学版）.2012，16（17）：50-51.
篇3
1.武汉市普爱医院检验科，湖北武汉 430033；2.武汉大学基础医学院，湖北武汉 430071
[摘要] 目的 分析化学发光法和酶联免疫法在丙肝病毒抗体检测中的应用价值。方法 同时应用化学发光法和酶联免疫吸附法检测60例丙肝确诊感染者和100例健康体检者的抗丙型肝炎病毒抗体，计算其阴性符合率、阳性符合率以及总符合率，用Kappa检验计算待评价诊断一致性。选取化学发光法初检验结果为阳性的标本100例，按照S/CO.值分为低值组（1<S/CO.<8）和高值组（S/CO.≥8），经抗HCV经重组免疫印迹试验（RIBA）对化学发光法试剂的检测界限值进行评估。 结果 ELISA法与化学发光法检测HCV抗体结果阳性符合率：87.7%，阴性符合率：91.3%，总符合率：90.0%，Kappa 系数为0.760，两者具有高度的一致性，两种方法在常规临床检测中并无明显差异。阳性低值组中12份标本经RIBA试剂确证为阳性，而高值组中44份标本确证为阳性。结论 ELISA是目前HCV抗体筛查中较为常用的方法，其试剂盒多为第三代试剂，特异性较好，化学发光法近期在HCV抗体筛查中逐渐得到重视，其试剂的灵敏度较高， 两种试剂均可用于丙型肝炎抗体检测。化学发光法的阳性判定标准应进行评估，以提高特异性。
关键词 丙型肝炎；抗体；化学发光；ELISA
[中图分类号] R446.6 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）07（b）－0193-02
[作者简介] 万大朋（1982.4-），男，湖北武汉人，学士，技师，研究方向：检验的临床研究。
[通讯作者] 刘胜武。
丙型肝炎(简称丙肝)是严重威胁人类健康的传染病之一，主要通过血液传染，我国平均感染率为3.2%，由此估算感染人数约3 700万。输血是丙型肝炎病毒（HCV）的主要传播途径，目前研究发现，除丙型肝炎病毒（HCV）急、慢性期患者外，输血后许多无症状的受血者中也可发现HCV抗体[1]。当前抗-HCV抗体检测多采用酶联免疫吸附法（ELISA），结果受抗原、抗体的变异影响较大，且国内各类抗-HCV检测试剂的检测性能存在较大差异。近期采用化学发光免疫分析(CLIA)检测抗-HCV抗体的试剂已进入我国市场，为分析化学发光法和酶联免疫法在丙肝病毒抗体检测中的应用价值。现分析2012年1月—2013年12月间该院收治的同时应用化学发光法和酶联免疫吸附法检测60例丙肝确诊感染者的临床资料，报道如下。
1 资料与方法
1．1 一般资料
60例HCV确诊感染者血清标本来自该院的门诊和住院患者，其诊断符合2004年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、中华医学会肝病学分会联合修订的《丙型肝炎防治指南》的有关标准[1]，其中男性33例，女性27例，年龄18~82岁，平均年龄（39.8±4.3）岁，病程3个月~21年，平均病程（6.5±2.1）年。所有患者均知情同意，签署知情同意书。100例正常血清标本来自该院自愿参与研究的健康体检者，其中男性36例，女性24例，年龄18~81岁，平均年龄（39.4±3.9）岁。
1．2 仪器与试剂
ELISA法仪器为瑞士FAME全自动酶标分析系统，采用厦门新创科技有限公司生产的抗-HCV试剂盒；CLIA法仪器为美国强生Vitros 3600化学发光免疫分析仪，试剂盒为相配套试剂。确认试剂（重组免疫印迹法）使用Chiton RIBA－3.0 SIA，Cop Emeryville，CA。
1．3 检测结果判断
ELISA法:以（0.1×阳性对照平均A 值+阴性对照平均A值）确定Cut-off值，以检测值≥Cut-off值为阳性。CLIA法: S/CO.值≥1为阳性。确认试验：出现2条以上HCV蛋白条带为阳性。
1．4 方法
同时用ELISA法和CLIA法对160份样本进行抗HCV抗体检测，按说明书进行操作。另选取100份化学发光法初检结果阳性的标本，分为两组：低值组（1＜S/CO.＜8）和高值组（S/CO.≥8）。对两者结果不符的样本用免疫印记法试剂（HCV RIBA）再次进行确认，以再确认结果为正确。
1．5 统计方法
用四格表统计临床数据，并计算阴性、阳性以及总符合率，所得数据采用统计学软件spss17.0处理，样本率以χ2检验。用Kappa检验计算发光法试剂与ELISA试剂的诊断一致性，按照Kappa系数大小以极差、微弱、弱、中度、高度和极强对诊断一致性强度进行判断，极差：Kappa系数＜0；微弱：Kappa系数0～0.2；弱：Kappa系数0.21～0.4；中度：Kappa系数0.41～0.6；高度：Kappa系数0.61～0.8；极强：Kappa系数0.81～1.0[2]。
2 结果
2．1 ELISA和CLIA方法检测丙型肝炎病毒抗体结果的符合性
结果显示使用传统ELISA试剂与化学发光方法试剂检测抗HCV抗体的诊断一致性较高，临床检测中差异有统计学意义(P＜0.05）。见表1。
2．2 化学发光法抗-HCV初检阳性标本的RIBA确认试验结果见表2。
3 讨论
目前广泛使用的第三代HCV抗体ELISA试剂增加了HCV Ns5区表达的蛋白作为抗原，大增加了灵敏度和特异性。但临床使用该类试剂筛检HCV感染者，仍存在一定数量的假阳性和假阴性结果[3]，特别是在HCV低流行率人群中，如无偿献血者，假阳性问题一直比较突出。此外，国内常用的HCV抗体酶免试剂皆没有灰区的设定，试剂盒cutoff值计算方法各厂家也都不一致，导致国产试剂盒之间的检测性能存在较大的异质性，亦是假阳性比较多的原因 [4-5]。
在临床实验室中检验中，需先对使用的方法和程程序进行评估，确定其符合要求后才可正式使用。Kappa检验是用于分析计数资料和等级分组资料一致性检验中的一种方法，在肝炎病毒血清标志物等二分变量（阴性、阳性）检测中，一般选择使用使用检验法，以判断不同方法学是否存在一致性及相关程度。该文结果显示化学发光法与酶联免疫法在丙型肝炎病毒抗体检测中的Kappa系数达到0.76，具有高度一致性，与同类研究报道结果基本一致[4]，结果表明两种试剂均可用于血源筛查、临床术前初筛。ELISA试剂的特异性较好，发光试剂的灵敏度较高，两种试剂均存在漏检现象，实际工作中如能联合应用可提高检出率[6]。
另外该研究参照美国CDC丙型肝炎实验导则[7]，使用S/CO.≥8可判断为阳性作为分组依据，对发光法初筛阳性的标本再进行RIBA确认试验，发现低值组的阳性率为24%，而高值组的阳性率为88%，提示中国人群的抗HCV阳性预测值与美国有一定的差异，目前的抗-HCV 诊断试剂盒均采用基因工程或合成多肽抗原，而由于HCV基因易发生变异，其基因呈现高度异质性，编码氨基酸序列明显改变，可引起抗原性的改变，现阶段试剂的检测抗原多为2型抗原，而以往的研究发现，我国HCV患者多为1型，因此当前的试剂并不适用于中国所有地区[4]。提示实验室应对抗HCV试剂的S/CO.比值设定进行评估，使用在所有人群中经过验证的能够预测确认试验≥95%阳性率的S/CO.比值作为是否进行确认试验的依据，并设立一定范围内的灰区，以达到灵敏度和特异性的最佳平衡[8]，该研究还提示对初检呈弱反应者有必要进行确认试验，跟踪观察。
参考文献
[1] 中华医学会肝病学分会，中华医学会传染病与寄生虫病学分学.丙型肝炎防治指南[Z]，2004.
[2] 杨凡，万海英，单咏梅，等.应用Kappa检验对乙型肝炎病毒血清标志物和丙型肝炎病毒抗体检测方法的评估[J].中华实验和临床感染病杂志：电子版，2010，4(1):52-55.
[3] 李新建.酶联免疫法检测血清丙肝抗体的测量不确定度的评估[J].中国输血杂志，2013，26(7):630-632.
[4] 张旋，裴元元，宋世军，等.4种国产丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂的检测结果分析[J].检验医学与临床，2012(22):2869-2870.
[5] 吴军，蒋理，谢而付，等.三种国产抗-HCV酶联免疫诊断试剂检测结果与电化学发光法比较[J].中华临床医师杂志：电子版，2013(20):9056-9058.
[6] 王燕，尹秋霞，窦恒利，等.化学发光法和酶联免疫法作为筛选试验测定丙肝抗体的评价[J].标记免疫分析与临床，2013，20(4):246-250.
[7] Alter MJ，Kuhnert WL，Finelli L. Guidelines for laboratory testingand result reporting of antibody to hepatitis C virus．NNWR Reomm Rep[J].2003，52 (1)：13-16.
篇4
关键词：化学发光免疫法；免疫放射法；促甲状腺激素
促甲状腺激素（thyrotropin，thyroid stimulating hormone，TSH）是腺垂体分泌的促进甲状腺的生长和机能的激素。TSH多以游离的形式存在于血液中，其含量很低，是性质稳定的糖蛋白激素。TSH受下丘脑一脑垂体一甲状腺轴线控制，当人体的甲状腺功能发生变化时，血清TSH的水平出现波动。甲状腺机能低下即甲减者的表现，多为血清中的TSH水平增高，甲状腺功能亢进即甲亢者，多为血清中TSH的降低。临床上，因此，TSH是判断甲状腺功能和下丘脑垂体甲状腺轴功能是否正常的一线指标[1-2]。作者采用化学发光免疫法（CLIA）与免疫放射法（IRMA）两种方法同时测定正常人及患者血清TSH，对其结果比较分析，从不同角度探讨两种检查方法在甲状腺功能疾病中的临床诊断价值，现将结果报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料 所有人员均为来我单位健康查体或就诊的人员，见表1。
1.2仪器与试剂 CLIA采用美国雅培公司Axsym免疫化学发光仪，IRMA采用西安262厂F5-20089γ-放射免疫计数器。免疫化学发光测定试剂盒，由美国雅培公司提供，IRMA采用中国原子能科学研究院提供的试剂盒。
1.3方法
1.3.1样品采集 于每天上午采集研究对象空腹血清3 ml，然后分离血清，立即进行检测或-20℃冷冻保存，1 w内检测。
1.3.2 TSH的检测
1.3.2.1批内变异 分高、中、低三份质控样本，所有质控样本分别用CLIA和IRMA测定血清TSH含量，重复测定10次，计算批内变异系数。
1.3.2.2批间变异 将高、中、低三份血清样品，分别置于20只试管中，密封后置-20℃冰冻保存，于20个测定日复融后检测其含量，计算其变异系数。
1.3.2.3结果比较 将三组试验人员共213份血清样品同时采用CLIA和IRMA测定其TSH含量，对得出的结果进行比较。
1.4统计学处理 数据采用（x±s）的形式表示，对两种方法测得的结果行相关性分析，甲亢、甲减组和正常组比较采用T检验。
2结果
2.1批内变异和批间变异，见表2。
结果表明，CLIA的重复性和精密度优于IRMA。
2.2三组受试人员TSH测定结果比较，见表3。
2.3三组受试者诊断符合率比较，见表4。
TSH对甲亢组患者与甲减组患者的诊断符合率均较高，尤其是对于甲减的诊断，CLIA法检测TSH几乎是最为灵敏的考察指标。
2.4相关性比较 用CLIA和IRMA法分别对受检血清标本进行定量分析，结果表明，两法测定结果相关系数为0.995，提示两法相关性良好。
3讨论
TSH 是腺垂体分泌的一种糖蛋白激素，主要功能是调节甲状腺激素分泌，临床上是反映甲状腺功能非常敏感的指标[3]。目前，常用的测定血清TSH 的方法有免疫放射分析法（IRMA）和化学发光法（CLIA）。化学发光法（CLIA）测定是根据化学反应产生的辐射光的强度来检测物质含量的一种有效的痕量和微量分析方法[4]。
本报告数据显示，CLIA和IRMA法检测血清TSH相关性好。但比较两种检查方法，化学发光法具有以下优点：①无污染：CLIA 法检测以化学发光剂作为标记物，试剂稳定且无放射性，对周围环境无污染，工作人员也不会损害；IRMA通常以125 I标记，125 I半衰期仅为1个月左右，放射性碘对环境有污染，对工作人员也有伤害。②线性范围宽：有报道显示，低浓度时化学发光免疫分析法区线性范围较宽，在低浓度范围测定较免疫放射分析法更为准确[5]。③自动化程度高：化学发光免疫分析法自动化操作，这就排除了人为的误差，使操作更加简便，明显优于放射免疫法。④本组结果显示， CLIA的重复性和精密度优于IRMA。
综上，CLIA在检测血清TSH方面有着IRMA无法比拟优势，建议有条件的实验室采用。
参考文献：
[1]尹东光，贺佑丰，刘一兵，等.促甲状腺激素化学发光免疫分析的研究[J].分析化学研究报告，2004，7（32）：893-896.
[2]王华新，张立东，秦晓光.促甲状腺激素检验研究进展[J].标记免疫分析与临床，2008，15（5）：328-331.
[3]范仙萍 赵爱萍.血清甲状腺激素高灵敏度测定的临床应用探讨[J].实用医技杂志，2000，6 （7）：426 .
篇5
【关键词】学发光免疫法；临床检验；一致性
【中图分类号】R51 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）11-0530-02
就当前化学发光免疫分析（CLIA）方法的使用情况来看，绝大多数医院常规所运用的一般均包括2种或以上，这就导致了院内检验的结果其一致性可能存在一定缺陷。为具体了解不同化学发光免疫法的临床检验一致性水平，就必须将其检验结果进行对比。基于此，笔者特选择性激素为本研究所检测的项目，共对3种CLIA系统的检测结果一致性实施了对比研究，现报道如下。
1 材料与方法
1.1样本来源 在征得同意的情况下选择笔者所在医院门诊的50例普通患者，分别采集其静脉血并分离血清以备检测所用。
1.2仪器与试剂 Beckman Coulter Access系统、Tosoh AIA 360系统、Snibe Maglumi 2000系统及其各自对应的配套校准品；另外，还有Bio-Rad的定值质控品，关于此品，由于目前各免疫试剂厂家在制造时所选用的免疫血清有所区别，故国际上尚未制定有统一的可溯源标准，而Bio-Rad也正是在此种情况下仍获得国际公认的第三方质控品，其相关系统的定值取自世界数百家大型实验室的均值，因此几乎不会受到某些离群数值的干扰，故本研究将其作为检测系统的标准验证品。
1.3检测方法 参照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）的EP9-A2文件，每天进行10个标本的检测，并对10个标本进行标号，先按①⑩的顺序检测1次，之后再按⑩①的顺序再进行1次复检，求其平均值，所有样本共连续检测5d完成。
1.4性激素浓度参考范围 本研究分别对6种性激素进行检测，经Access系统分析后，该6中性激素的名称与浓度范围分别如下：促滤泡素（FSH）为1.2～145mIU/ml；促黄体素（LH）为3.4～218.7mIU/ml；促乳素（PRL）为1.6～154ng/ml；雌二醇（E2）为2.3～2145pg/ml；黄体酮（PROG）为0.7～38.4ng/ml；睾酮（TESTO）为0.03～15.2ng/ml。
1.5统计学与一致性判断方法 对检测所得数值进行线性回归以分析其相关性，将数据输入Excel表后，以XY绘图并作趋势线分析，得出每次检验方法的线性回归方程与相关系数r2值，以两种检测方法的相关系数r2作为判断此两种检测方法结果一致性的依据，具体如下：在EP-9A2文件中规定r2≥0.95，则可判定其检测结果一致；而我国食品药品监督管理局医疗器械审评中心又于2011年4月制定并了《体外诊断试剂分析性能评估（准确度-方法学比对）指导原则》，该指导原则规定r2≥0.90即可判定两检测方法结果为一致。基于此，本研究即参考以上两个标准一起来进行3个CLIA系统检测结果一致性的判断。
2 结果
2.1 3种检测系统对6种性激素检测的偏倚
参考我国卫生部临床检验中心的相关规定，其靶值在±25%的范围均是能被接受的，将偏倚不超出允许误差的1/2作为校准验证的标准范围。分别选择用3个批号（分别为40231、40232、40233）的Bio-Rad定值质控品实施校准验证，均进行3次检测以取平均值并计算相对偏倚，计算公式为：相对偏倚=（靶值-测定均值）/靶值×100%。具体结果详见表1。
2.2 3种检测系统对6种性激素检测结果的一致性比较
首先参照EP-9A2文件标准进行6项性激素检测结果一致性的判断，具体结果详见表2。
3 讨论
本研究结果显示，采用不同的CLIA系统对性激素进行检测的结果是存在一定不一致性的。医院相关检验实验室如果常规采用多种CLIA系统进行检验，那么就必须要求需在对各系统的检测结果加以对比分析后才能给出最终的检验报告。而对可实现一致性检测的项目，则应始终贯彻以一种检测系统为主而以其他检测系统实施一致性处理的指导方针，对检测结果不能实现一致性的项目则建议仅采用单一的检测系统实施检测，以最大程度确保临床检验结果的一致性。
参考文献：
[1] EP9-A2.The National Committee for Clinical Laboratory Standards.Method comparison and bias estimation using patient samples[S].Approved Guideline-Second Edition，NCCLS，1995.
篇6
[关键词] 化学发光免疫测定；生化检验；应用效果；放射免疫分析法；评价
[中图分类号] R446.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2016）05-0113-03
化学发光免疫测定法又被称为化学发光标记免疫测定法，国际上通称为chemiluminescent immunoassay，即CLIA。该方法通过磁场将抗原、抗体沉淀部分与游离部分进行分离，从而达到定量或定性检测的目的，广泛应用于临床病毒、肿瘤标志物、免疫系统疾病以及心脏疾病的诊治过程。本次研究以甲状腺肿瘤为主要研究方向，选取本院580例甲状腺肿瘤患者，就化学发光标记免疫测定法与放射免疫分析法在生化检验中的应用效果展开研究，并结合文献调研与临床经验，对化学发光免疫测定在其他疾病临检确诊过程中的应用进行了简要阐述，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2013年5月～2015年5月580例甲状腺肿瘤患者，按抛硬币法将其分为检测组和放射组各290例，其中检测组男142例，女148例，年龄7～85岁，平均（46.2±7.5）岁，病程1～6年，平均（3.2±1.3）年；放射组男151例，女139例，年龄9～83岁，平均（47.3±4.2）岁，病程1.5～8年，平均（4.3±1.7）年。本次研究在取得我院医学伦理委员会认证通过的前提下进行，所有患者均与我院签署《调查研究知情同意书》，符合《甲状腺病理诊断》（人民军医出版社，2011版）中的临床标准，排除心脑血管疾病、特殊情况过敏、肾功能严重障碍以及有精神病史或家族精神病史的患者。检测组患者性别、年龄、病程等一般资料与放射组比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法
将各组人员进行编号并分别抽取3 mL静脉血，将患者血液中加入适量肝素（Glaxo Wellcome Production，国药准字J20090006）抗凝，离心分离，3500 r/min，取血浆冻存，检测患者甲状腺球蛋白，检测时间控制在4 h以内。
放射组患者采取放射免疫法进行检测，使用FJ-20003/50P型γ全自动双探头放射免疫计数仪（西安国营二六二厂提供）对患者甲状腺球蛋白进行检测。
检测组患者采取化学发光免疫法进行检测。MAGLUMI-4000型分析仪与配套化学发光试剂盒（深圳新产生业生物医学工程股份有限公司）进行甲状腺球蛋白检验，采用雅培i2000仪器与配套试剂（美国雅培公司）进行第三方验证。
1.3 观察指标
通过对各组甲状腺球蛋白检测结果进行分析，以假阳性和假阴性检出率为依据，对两种检测方法特异性和灵敏性进行比较。放射免疫法检测甲状腺球蛋白正常水平为11.45～20.25 ng/mL，化学发光免疫法检测甲状腺球蛋白正常水平为0.73～84 ng/mL。灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100.0%，特异性=真阴性/（真阴性+假阳性）×100.0%，符合率=（真阳性+真阴性）/总例数×100.0%。
1.4 统计学处理
文中涉及数据均在SPSS13.0中输入，计数资料采取率（%）表示，行χ2检验，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，行t检验，P
2 结果
2.1 两组检测结果比较
检测组实际阳性143例，阴性147例，检测出真阳性142例，真阴性142例。放射组实际阳性146例，阴性144例，检测出真阳性125例，真阴性118例。采用化学发光免疫法的检测组检测甲状腺球蛋白灵敏度、符合率、特异性等数据明显高于采用放射免疫检测法的放射组，差异有统计学意义（P
2.2 两组甲状腺球蛋白水平比较
检测组甲状腺球蛋白水平为（690.8±89.1）ng/mL，放射组为（631.2±51.3）ng/mL，两组比较差异有统计学意义（t=9.872，P
3 讨论
化学发光免疫测定技术最早应用于20世纪70年代，当时只作为示踪信号，且灵敏度与发光时间明显不足，局限了应用领域。随着医学仪器技术发展，到80年代中期，出现辣根过氧化物酶标记技术，大大提高了信号强度，延长了发光时间，解决了测定技术难题。化学发光通常被分为3大类型：第一种为发光酶免疫测定，即LEIA；第二种为发光物免疫测定，即LIA；第三种为发光辅助因子免疫测定，即LEIA。化学发光类型虽然各异，但其内在原理却能通用，化学发光均为通过化学发光物质通过化学反应从而产生光辐射[1]。本次研究所讨论的化学发光免疫测定方法与放射免疫测定方法具有一定相似之处，二者都可以用Ag-L+CRlight进行标示（Ag-L代表发光物；CR代表协同反应物）[2]。化学发光免疫测定用途十分广范，在医学领域中，化学发光免疫测定法常见于肿瘤测定过程之中，凭借其特有的光辐射，能对CA153、CA242、CEA、NES、AFP、PSA等十多种肿瘤进行测定。
本次研究结果表明，使用化学发光免疫测定对甲状腺球蛋白浓度进行检测，检测灵敏度、符合率、特异性均明显高于放射免疫检测，差异有统计学意义（P
此外，化学发光免疫检测还广泛应用于临床生化检验中，包括病毒检测、心脏疾病检测等。具体内容如：（1）梅毒螺旋体检测。临床常用方法为对患者体内非密螺旋体特异性抗体进行检测，之后再进行确证检测，根据结果才能确诊，常用的人工检测方法效率低且耗时长，操作复杂，无法满足临床要求，在何惠[3]等的研究中，采用化学发光免疫检测则可利用全自动分析仪，通过两步法进行定性检测，能有效降低假阳性率，提高临床检出准确率。（2）乙肝病毒标志物检测。在乙型病毒性肝炎传统检测过程中多采用ELISA法进行定性检测，无法满足临床定量的需求，由于目前多以HBsAg作为病毒感染的判断标志物，因此可采用化学发光免疫测定法对乙肝HBsAg抗原进行测定，达到定量与定性的双重标准，灵敏度可达100%，符合率和特异性分别可达97.61%，98.74%，且各检测指标均符合临床诊疗需求，在较大范围内线性良好。（3）肿瘤标志物检测。肿瘤标志物存在与细胞和组织当中，包括蛋白质、酶、激素等，国内外大部分学者通过化学发光免疫测定法检测肿瘤标志物，对肿瘤患者早期诊断和术后检测提供了有参考价值的指标，例如张国军等[4]人以化学发光免疫测定发对血清中鳞状细胞癌抗原以及cy-fra21-1浓度进行测定，从而实现了对食管癌的有效诊断和病情观察，效果良好。（4）心脏疾病检测。陈丽珠等[5]对心脏病患者心肌损伤标志物和肌红蛋白间的关系进行了数据分析，结果显示三者间有密切相关性，因此在心脏疾病临检过程中可利用化学发光免疫测定对临床标本进行检测，能实现对心脏疾病患者及时、准确、有效的诊断和临床症状监护。
在临床生化检验过程中，能有效满足疾病标记的抗原毕竟占少数，因此还需对检测方法进行充分优化，具体表现为：（1）有效提升分析结果的准确性和灵敏度，提高分析结果放大倍数，延长检验下限，扩大化学发光免疫检测的应用范围，使其发挥更大的临床价值[6-9]；（2）提高分析仪器的准确性，以促进仪器小型化、智能化转变为发展方向[10-12]；（3）化学发光免疫测定对发光物的生成和催化剂效果依赖较大，为有效扩大应用范围，提升检测灵敏度，还需研发出新型发光物和催化剂，同时还需修饰和增强化学发光反应效果，进一步探讨新型分析方法， 提升检验准确性[13-18]。
综上，化学发光免疫检测具有较高灵敏度与准确性，在临床诊断与治疗中应用效果显著，对准确诊断出患者病情意义重大，有一定的临床推广价值。
[参考文献]
[1] 蔡勇进. 化学发光免疫测定在生化检验中的应用效果评价[J]. 海峡药学，2015，27（9）：82-83.
[2] 张然星，刘建彬，谭延国，等. 几种化学发光检测系统测定血清胰岛素和C-肽临床效果的评估[J]. 中国实验诊断学，2010，14（10）：1608-1611.
[3] 何惠，周迎春，刘基铎，等. 化学发光免疫测定在梅毒螺旋体抗体检测中的临床应用[J]. 国际检验医学杂志，2011，32（13）：1469-1470，1473.
[4] 张国军，谭延国，张然星，等. 化学发光法检测血清胰岛素的现状分析[J]. 首都医科大学学报，2013，34（4）：545-549.
[5] 陈丽珠，孙淑艳，郑玉云，等. 化学发光免疫测定男性CHD患者血清性激素水平及其意义[J]. 放射免疫学杂志，2011，24（2）：200-203.
[6] 王燕，尹秋霞，窦恒利，等. 化学发光法和酶联免疫法作为筛选试验测定丙肝抗体的评价[J]. 标记免疫分析与临床，2013，20（4）：246-250.
[7] 邵芳. HCV抗原、HCV抗体及HCV-RNA联合检测与ALT的相关性及其临床意义[J]. 中国中西医结合消化杂志，2014，22（2）：80-82.
[8] 孙宝琴. 影响生化检验质量因素的分析与探讨[J]. 河北医学，2014，21（9）：1580-1582.
[9] 刘亚普. 溶血标本对生化检验指标的影响分析[J]. 国际检验医学杂志，2011，32（16）：1874-1875.
[10] 汪晨，吴洁，宗晨，等. 化学发光免疫分析方法与应用进展[J]. 分析化学，2012，40（1）：3-10.
[11] 薛盼，章竹君，张晓明，等. 化学发光免疫分析检测人血清中的癌胚抗原[J]. 分析化学，2011，39（1）：95-98.
[12] 肖勤，林金明. 化学发光免疫分析方法的应用研究进展[J]. 分析化学，2015，43（6）：929-938.
[13] 陆云，李鼎，刘兴党，等. 甲状腺球蛋白抗体、甲状腺微粒体抗体CLIA法与RIA法的比较探讨[J]. 标记免疫分析与临床，2012，19（2）：115-117.
[14] Ruping Liu，Cheng Wang，Quan Jiang et al. Magnetic-particle-based，ultrasensitive chemiluminescence enzyme immunoassay for free prostate-specific antigen[J]. Analytica Chimica Acta，2013，751（801）：91-96.
[15] Songcheng Yu，Fei Yu，Hongquan Zhang，et al. Optimization of condition for conjugation of enrofloxacin to enzymes in chemiluminescence enzyme immunoassay[J]. Spectrochimica Acta，Part A. Molecular and Biomolecular Spectroscopy，2014，116（127A）：47-51.
[16] Yang JY，Zhang Y，Lei HT，et al. Development of an ultra-sensitive chemiluminescence enzyme immunoassay for the determination of diethylstilbestrol in seafood[J]. Analytical Letters，2013，46（13/15）：2189-2202.
[17] 张勇，刘爱胜，文艳. SF、LDH和γ-GT检测在乳腺癌诊断治疗中的临床应用价值[J]. 临床和实验医学杂志，2014，13（11）：887-889.
篇7
【关键词】自动检测；化学发光免疫分析法；甲状腺激素
文章编号：1009-5519（2007）11-1618-03 中图分类号：R446 文献标识码：A
化学发光免疫分析是80年代以来发展起来的一项新的标记免疫技术，可测定内分泌激素、肿瘤标志物、血药浓度、传染病、心血管疾病标志物、贫血及过敏原等项目[1]。CENTAUR是拜耳公司推出的最新全自动化学发光免疫分析仪，测定速度快，测定项目齐，近2年在国内逐渐推广，本文对其性能进行综合评价。
1 材料与方法
1.1 仪器：CENTAUR全自动化学发光免疫分析仪(BAYER公司)。
1.2 试剂：发光试剂是BAYER公司配套试剂、质控品、标准品。
1.3 对象：本院门诊和住院患者，其中甲状腺功能亢进（简称甲亢）10例，甲状腺功能减低（简称甲减）10例，甲状腺功能正常10例，平均年龄40岁。每例取3 ml血，离心3000 r/min，10分钟，取血清-70 ℃保存备用。甲亢和甲减诊断符合相应诊断标准[2]。
1.4 检测方法：利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法，其反应原理与放免和酶免中的双抗夹心法、竞争法相似[3]，严格按试剂盒操作说明书操作。
1.4.1 批内精密度：血清样本10份，分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量，一批每份重复测定10次，计算其变异系数（CV）。
1.4.2 批间精密度：血清样本10份，每天各测定1次，共测定10天，计算其CV。
1.4.3 不准确度：由BAYER公司提供原装3个浓度的标准品，分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量，每个浓度重复测定3次，计算不准确度。
1.4.4 可报告范围：收集甲亢患者血清标本，T3、T4、FT3、FT4浓度靠近厂家提供可报告范围上限作为高值浓度水平（H），厂家提供稀释液作为低值浓度水平（L），H和L按5H+0L、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、0H+5L的关系各自配制，形成系列检测标本。根据试验结果，采取平均斜率确定高值浓度水平应含有待测物的值，然后依照试验样品配制稀释关系，推算出不同样品中应具有的待测物的值。这些值成为可报告范围的预期值（X），所有检测标本各测2次，其均值为实测值（Y）。以X表示各样品的预期值及实测值，将所有结果作图。若所有点在坐标纸上呈明显直线趋势，则对数据进行回归统计，得到Y=bX+a。理想状态下，预期值与实测值间呈通过原点、斜率为1的回归线，即斜率b为1，截距a为0。实际统计结果b不会正好等于1，a不会为0。若b很接近1，a近于0，则可直接判断该测定方法可报告范围在实际已涉及范围。
1.4.5 TSH分析灵敏度：用Bayer公司提供的TSH专用稀释液作为空白样品，用空白样品对0.04 mIU/L血清按一定梯度进行稀释（见表1），空白样品做10次批内重复测定；对其它系列稀释样品做天间重复测定，做10天。
2 结果
2.1 批内精密度实验：血清样本10份，分别测定T3、T4、FT3、FT4、
TSH含量，重复测定10次，计算其变异系数（CV），见表1。
2.2 批间精密度：血清样本10份，每天各测定1次，共测定10天，计算其CV，见表2。
2.3 不确定度试验：由BARER公司提供原装3个浓度的标准品，分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量，每个浓度重复测定3次，计算均值，结果见表3。
2.4 可报告范围
2.4.1 T3所测结果得到回归方程：y=1.069x-0.2468,r2=0.9966，截距经t检验，ta=1.36，
2.4.2 T4所测结果得到回归方程：y=0.99x+0.79542,r2=0.995,＞0.95，截距经t检验，ta=0.36,＜t0.05(4)=2.776，截距与0无统计学差异。由此可确定厂家提供的线性范围有效，即T4的可报告范围为3.9～387.0 nmol/L，见表5。
2.4.3 FT3所测结果得到回归方程：y=1.098x-0.8466,r2=0.9966,截距经t检验，ta=1.90,＜t0.05(4)=2.776，截距与0无统计学差异。由此可确定厂家提供的线性范围有效，即FT3的可报告范围为0.3～30.8 pmol/L，见表6。
2.4.4 FT4所测结果得到回归方程：y=1.2508x-6.9132,r2=0.9799,截距经t检验，ta=1.66,＜t0.05(4)=2.776，截距与0无统计学差异。由此可确定厂家提供的线性范围有效，即FT4的可报告范围为1.3～155.0 pmol/L，见表7。
2.4.5 TSH所测结果得到回归方程：y=1.1709x-7.358,r2=0.9799,截距经t检验，ta=0.83,＜t0.05(4)=2.776，截距与0无统计学差异。由此可确定厂家提供的线性范围有效，即TSH的可报告范围为0.01～150.00 mIU/L，见表8。
2.5 分析灵敏度：以TSH为例。分析灵敏度是衡量检测系统分析性能的一个重要参数。由于ADVIA CENTAUR化学发光免疫分析仪试剂成本高，现选择TSH作为代表，分析TSH的分析灵敏度。
用Bayer公司提供的TSH专用稀释液作为空白样品，用空白样品对0.04 mIU/L血清按一定梯度进行稀释（见表1），空白样品做10次批内重复测定；对其它系列稀释样品做天间重复测定，做10天（由于标本准备不够，故检测次数不一样），记录结果见表9、表10。
2.5.1 LLD（检测低限）为样品单次检测可以达到的非空白检测响应量对应的分析物量，通常估计95%和99.7%两种可能性。当以空白检测管的均值为检测的起点0时，那么有99.7%的可能性，每次只做一个空白时，出现最高的空白浓度较该空白浓度均值（0.002 mIU/L）高3倍，即0.006 mIU/L。这些浓度相对于样品中具有的TSH量即为检测低限。
2.5.2 BLD（生物检测限）某样品单次检测可能具有的最小响应量刚大于空白检测低限响应量，该样品内含有的分析物浓度或其他量值为生物检测限。3S空白为0.006，C-3s之值（正数）最接近0.006的样品管所对应的浓度即为生物检测限。因此TSH的BLD为0.024 mIU/L。
2.5.3 FS（功能灵敏度）是以日间重复CV为20%时对应检测样品具有的平均浓度，作为检测系统或方法可定量报告分析物的最低浓度或其他量值的限值。在实际检测中，根据多个去除空白值后的CV，从中选择最接近于20%CV的对应浓度，即为FS。从表2中可得出TSH的FS为0.024 mIU/L。
3 讨论
血清中三碘甲状原腺氨酸（T3）、四碘甲状原腺氨酸（T4）、游离三碘甲状原腺氨酸（FT3）、游离四碘甲状原腺氨酸（FT4）、促甲状腺激素（TSH）的测定对甲状腺疾病的诊断具有重要价值。以往国内实验室多采用RIA、MIRA检测血清甲状腺激素水平，此法虽较准确，仪器与试剂也较为低廉，但对操作人员水平要求较高，对实验条件及环境有较多要求，且随着标记抗原的放射性衰减，而使计数不稳定及典线失真，导致结果偏离，结果重复性差，一般情况下（正常范围时）CLIA的批间CV小于4%，方法可行，但当样品浓度很低时(0.014～0.025 mU/L)，批间CV可达15%，而IRMA均较高（分别为7.08%、12.1%、33.89%），可能与方法学有一定关系[3]，且可产生放射性污染。
近年来，化学发光酶免疫分析法（CLIA）逐渐代替RIA、MIRA，这种方法的反应原理是用能产生化学发光的化合物代替放射性标记物[4]，此化合物在碱性条件下遇过氧化物便发生单光子发射，光子数量与结合在抗原抗体复合物上的发光化合物的量成正比，因此反映抗原抗体复合物的量。CENTAUR全自动化学发光免疫分析系统是利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法，其反应原理与放免和酶免中的双抗体夹心法、竞争法相似[5]。其优点是：（1）成熟的单克隆抗体技术或独特的磁性微粒子技术，保证了反应的高特异性；（2）检测范围广：T3可报告范围为0.15～12.3 nmol/L、T4的可报告范围为3.9～387.0 nmol/L、FT3的可报告范围为0.3～30.8 pmol/L、FT4的可报告范围为1.3～155.0 pmol/L，稳定性好，不需酶促反应，有效期可长达半年；（3）操作简便，采用全自动仪器分析；（4）试剂及标本均采用无吸附材料，故相互间的交叉污染率低，干扰因素少；（5）真正的随机连续检测，样本随到随测，具有急诊优先插入功能。（6）灵敏度高，可达 10～15 mol/L，重复性好，T3、T4、FT3、FT4、TSH的批内精密度分别为4.4、4.9、3.0、4.5、3.5，批间精密度分别为11.9、11.3、3.5、6.2、4.8。（7）分析过程采用全自动化，减少了人工操作，出现良好的精密度，批内、批间差异均较小，而且此法具有良好的稀释线性。
参考文献：
[1] 陶义训.免疫学和免疫学检验[M].第一版.北京:人民卫生出版社,1997.174.
[2] 叶任高,陆再英.内科学[M].第六版.北京:人民卫生出版社,2004.725.
[3] 罗 炜,王 慧,陈柏铭.化学发光免疫法与放射免疫法测定血清AFP的比较[J].上海医学检验杂志,2000,15(3):149.
[4] 李少林.核医学[M].北京:人民卫生出版社,2002.49.
篇8
[关键词] CK（肌酸激酶）；同工酶类；质量；活性
[中图分类号] R446 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）01（a）-0003-02
The Analysis of the Test Result of CK-MB Mass and Activity of 35 Cases of Specimens with High CK Activity
LIU Xin LIU Yuancheng
Clinical Laboratory， TCM Hospital Affiliated to Luzhou Medical College， Luzhou， Sichuan Province， 646000， China
[Abstract] Objective To provide accurate results for clinical practice by comparing the test result of CK-MB mass and activity of specimens with high CK activity. Methods The automated chemiluminescence analyzer and the automatic biochemical analyzer were used to detect the CK-MB mass and activity of 35 cases of specimens with high CK activity， respectively. Results The result of the detection of the activity of CK-MB is much higher than the actual activity； however， the detection of the mass of CK-MB can effectively reduce interference and ensure the reliability of test results. Conclusion Specimens with high CK activity will seriously affect the result of the detection of the activity of CK-MB， however， it has little effect on the detection of CK-MB mass.
[Key words] CK （Creatine kinase）； Isoenzymes； Mass； Activity
在日常工作中，时常会碰到肌酸磷酸激酶CK活性显著升高同时伴肌酸磷酸激酶同工酶CK-MB活性大大升高，同时发现有好大一部分肌酸磷酸激酶CK活性和CK-MB活性升高与临床病人症状不符的现象。为了探明CK-MB活性是否假性增高，该研究对2011年8月―2013年2月期间CK-MB质量及活性检测结果比较，现将比较结果分析如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取该院住院或门诊患者。35例样本中，男25例，女10例，年龄均在1～88岁，平均（56.4±1.2）岁，2例为婴儿患者。其中，29例为各种癌症患者，临床特征以及心电图监测均未见有心肌梗死症状，另外6例患者中，心肌梗死患者2例，糖尿病患者2例，动脉粥样硬化性心脏病1例，心绞痛患者1例。
1.2 试剂
CK-MB质量测定采用化学发光配套的CK-MB试剂；CK-MB活性测定采用国产CK-MB试剂。
1.3 仪器
CK-MB质量测定的仪器为全自动免疫化学发光分析仪.CK-MB活性测定的仪器为全自动生化分析仪。
1.4 方法
样品用全自动生化分析仪先测定CK、CK-MB活性.CK活性测定显示为异常的患者进一步行CK-MB质量测定。CK-MB质量主要使用免疫化学发光法测定，具体测定严格按照说明书上的相关步骤和要求进行，以测定值在5.81 ng/mL以上判定为升高。另外，CK-MB活性用选择性抑制方式进行测定，以测定值在24U/L以上判定为升高[1]。
1.5 统计方法
用SPSS 11.0软件进行数据统计处理。计量资料用均数±标准差（x±s）表示，CK-MB质量及其活性的样品均数与总体均数比较采用单组完全随机化设计采用t检验。计数资料采用χ2检验。检验水准取α=0.05。
2 结果
2.1 CK、CK-MB质量及其活性检测的部分结果
35例患者的检测结果显示，癌症患者有29例，另外6例为其他病症患者。实验结果发现：35列高活性CK标本CK-MB活性正常者不足5%，而CK-MB质量检测异常者不足5%。CK、CK―MB酶蛋白浓度及其活性检测的部分结果对照见表1。
2.2 CK-MB质量及其活性检测统计结果
35例CK-MB活性检测结果均显示为阳性，CK-MB质量检测结果显示，34例为阴性患者，仅有1例为阳性患者。将CK-MB质量与其活性检测情况分别与50例CK-MB质量与活性检测结果均显示为正常的非心血管疾病患者（对照组）检测情况进行随机对照，使用t检验，见表2。
表2 CK.MB质量及其活性检测统计结果（x±s）
3 讨论
临床研究报道，免疫抑制法在检测CK-MB活性时，因受多种因素的影响，并同时因检测方法自身存在一定的局限性，容易导致CK-MB检测结果出现假性升高[2-3]。CK-MB作为心肌梗死临床诊断中最为敏感的指标之一，对检测结果的准确度有很高的要求，因此，选取一种相对更少受其他因素干扰的检测方式有重要临床意义。免疫化学发光法有免疫反应所具有的高度专一性，能将多种相关的干扰因素排除掉[4]。CK-MB质量主要采用微粒子酶联免疫化学发光技术，也同样可有效避免测定中的各种干扰反应。敏感性以及特异性均比较高，可有效排除其他相关蛋白的干扰性[5-6]。因此，CK-MB活性检测中，如易受多种因素干扰时，应同时选择进行CK-MB质量的检测。
该文选取的35例患者采用免疫化学发光法测定，并同时进行CK-MB质量检测，所有测定均保证严格按照操作说明进行，之后对检测结果进行统计，结果显示，所有患者中，除1例检测为急性心肌梗死以外，其余34例患者的临床主要特征以及心电图检测均显示无心肌梗死。同时，CK-MB质量检测的样品均数相比于总体均数无明显统计学意义；检测结果显示，除1例患者出现升高外，另外34例患者均在正常范围内，与临床相关报道相吻合。同时，CK-MB活性检测的样品均数相比于总体均数存在显著统计学意义，表明CK-MB活性检测结果显示的异常升高结果是一种假性升高[7]。经进一步分析后显示，CK-MB活性在肿瘤患者和AMI后期的患者中均出现明显升高，表明CK-MB活性易受非典型肌酸激酶、巨CK、CK2及CK-BB等多种因素的干扰而出现不同程度的假性升高，与文献报道一致[8]。
总之，因受诸多因素干扰，CK―MB活性的测定结果与实际值相比远远要高；CK-MB质量检测可有效减少检测干扰，有效保证可靠的检测结果[9-10]。
[参考文献]
[1] 沈毅，王海峰，亓艳，等.免疫抑制法测定CK-MB活性假性升高40例分析[J].中国误诊学杂志，2010，1（10）：159-160.
[2] 陈建芸，石玉玲，李林海，等.血清CK-MB质量及其活性检测结果对比分析[J].华南国防医学杂志，2010（6）：224.
[3] Jankowsky E， Gross CH， Shuman S， Pyle A M.Activedisruption of an RNA proteininteractionbya DExH DRNAhelicase[J].Science，2011，291：121-125.
[4] 陆群，殷继华，赵延荣.快速检测法与化学发光法检测心肌标志物的比较[J].放射免疫学杂志，2011（2）：217-218.
[5] 王全河.急性心肌梗死患者血清中hs-CRP、cTnI、Myo及CK-MB的表达及其临床意义[J].中国医药导报，2012（25）：111-112.
[6] 黄莉.急性心肌梗死临床治疗效果分析[J].中国保健营养，2013（3）：529-530.
[7] 庞丹凤，冯献光，林芝锋，等.CK-MB/CK比值倒置56例CK-MB质量检测结果分析[J].临床合理用药，2012（10）：59-60.
[8] Initiationoftranslationinprokaryotesandeukaryotes[J].Gene.2009，234：187-208.
[9] 孙召东，吴惠毅，孙炜，等.儿童血清CK-MB活性升高66例分析[J].中国误诊学杂志，2009，9（25）：6204.
篇9
目的: 研制人血清中促甲状腺素（tsh）的化学发光免疫检测试剂盒。方法: 采用辣根过氧化物酶标记的抗tshβ亚单位特异性单克隆抗体(mab), 与固相包被的抗tshα亚单位的另一mab配对, 以鲁米诺作为底物, 采用两步法建立了双位点夹心法人血清tsh的化学发光免疫定量分析法。结果: 该方法灵敏度为0.0788 miu/l, 批内cv平均为4.7%, 批间cv平均为8.4%, 平均回收率为93.05%。该检测与lh、 fsh和hcg无交叉反应。部分实验样品的测试结果显示该试剂与国外同类试剂（雅培architect i2000）的测定结果明显相关(r＝0.984)。结论: 该方法具有较高的灵敏度、 重复性和准确度, 与其他同类产品相比简便、 快捷、 成本低, 适于临床检测和科研应用。
【关键词】 促甲状腺激素（tsh） 化学发光免疫分析法 试剂盒
促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, thyrotropin, tsh)是一种由垂体前叶分泌的糖蛋白激素, 由α和β2个亚基组成, 相对分子质量(mr)为28000[1]。tsh本身受下丘脑分泌的tsh释放激素trh的调控, tsh的主要生理作用是调节甲状腺激素的合成与分泌, 血液中甲状腺激素水平与腺垂体分泌tsh的量之间有负反馈抑制关系[2]。甲状腺功能改变时, tsh的波动较甲状腺激素更迅速且明显, 是反映下丘脑垂体甲状腺轴功能的敏感指标, 因此采用灵敏度高的tsh免疫分析法具有重要的意义。化学发光免疫分析(chemiluminescent immunoassay, clia)是一种灵敏的免疫分析方法, 在免疫诊断试剂研制中已得到了广泛的应用[3]。本研究根据化学发光免疫分析法的原理研制了血清tsh的检测试剂盒, 与国内外同类产品相比具有简便、 快捷、 成本低等优点。
1 材料和方法
1.1 材料 tsh单克隆抗体(mab)、 tsh标准品抗原和辣根过氧化物酶（hrp）为sigma公司产品, 光免板为thermo electron公司产品, 化学发光底物为biorad公司产品。
1.2 方法
1.2.1 标准品的配制 将tsh抗原标定后溶于小牛血清中, 配制成含0.1, 1, 5, 20, 100 miu/l的标准溶液。
1.2.2 抗体包被板的制备 将100μl含tsh mab（0.5mg/l）的ph9.6碳酸盐缓冲液加至包被板中, 37℃包被2 h, 再用含10 mg/l bsa的0.01 mol/l ph7.4磷酸盐缓冲液于37℃封闭2 h后晾干备用。
1.2.3 酶标记物的制备 tsh的酶标记物采用过碘酸钠法制备, 然后经0.01 mol/l ph7.4磷酸盐缓冲液透析过夜后, 加入等量的甘油于-20℃保存备用。
1.2.4 检测方法 将50 μl待测样品或标准品加入包被tsh的光免板中, 37℃温育30 min, 弃反应液, 用洗涤液（含0.5 mg/l tween20的0.01 mol/l ph7.4磷酸盐缓冲液）洗5次, 加酶标记物50 μl, 37℃温育30 min后同样用洗涤液洗5次, 然后加入发光底物于5～10 min内测定各孔的发光值rlu。样本中的tsh浓度依据由标准品tsh浓度和对应的rlu建立的数学模型进行定量。
2 结果
2.1 动力学性质 在hrp鲁米诺h2o2发光体系中, 将不同量的免疫复合物加入发光液中, 发光强度（rlu）随反应时间而变化。10 min后rlu接近峰值, 在5～15 min内rlu较为稳定, 随后开始缓慢下降。
2.2 反应条件优化
2.2.1 加样量对rlu的影响 样本和酶标记物的加样量分别为50 μl和100 μl考查标准品（0、 0.1、 1、 5、 20、 100 miu/l）rlu, 发现加样量为100 μl与50 μl rlu相差不大, 说明50 μl的加样量反应能达到平衡(图1)。
图1 加样量对rlu的影响（略）
2.2.2 反应模式对rlu的影响 采用二步法。第一步: 加入标准品和待测样品后, 将反应体系在37℃分别温育15、 30、 45、 60 min; 第二步: 加入酶标记抗体后, 将反应体系在37℃分别温育15、 30、 45、 60 min。结果表明温育时间为30 min时反应皆能达到平衡(图2)。
图2 温育时间对rlu的影响（略）
a: 第一步温育时间对rlu的影响; b: 第二步温育时间对rlu的影响.
2.3 稳定性 将试剂盒放置于37℃ 6 d后, 比较与放置前参考标准品各点rlu值, 参考标准品各点rlu值未见明显降低, 且本底发光值无明显升高, 表明试剂盒标准曲线无明显漂移, 满足稳定性要求。
2.4 方法学评价
2.4.1 标准曲线与灵敏度 在设定的免疫反应和发光条件下, 以标准血清的浓度（0～100 miu/l）制作的标准曲线见图3。同时测定20个零标准, 用零标准均值加上2倍标准差, 计算出此方法的灵敏度为0.0788 miu/l。
图3 tsh标准曲线（略）
2.4.2 精密度 取低(4.44 miu/l)、 中(19.45 miu/l)和高(79.23 miu/l)3种tsh浓度各重复测定10次, 测定批内cv分别为6.2%、 3.3%和4.6%, 平均为4.7%。隔日分别进行5次独立试验, 测批间cv分别为8.3%、 7.6%和9.3%, 平均为8.4%。
2.4.3 准确性 在已知tsh浓度的血清中加入3种不同浓度的标准血清,测定加入回收率为93.05%。将tsh浓度为44.42 miu/l的血清用标准零血清分别按1/2、 1/4、 1/8、 1/16稀释, 测量各稀释浓度的tsh含量, 测定稀释回收率为99.86%。
2.4.4 特异性 在已知浓度的血清样品中加入不同浓度的lh、 fsh和hcg后, 对tsh的测定无干扰。
2.4.5 与进口试剂的比较 将研制的tsh clia定量检测试剂盒与abbott architect i2000全自动化学发光系统共同对30例正常人、 20例甲亢及80例甲低临床标本进行检测, 通过数据分析, 得出两个检测系统所得数值具有明显相关性(图4)。
图4 与abbott全自动化学发光系统相关性曲线（略）
3 讨论
血清促甲状腺素定量检测的方法主要有放射免疫法、 酶联免疫法、 时间分辨荧光免疫法和化学发光免疫法等几种[4]。考虑到目前化学发光和时间分辨荧光分析仪器几乎全部为国外厂商生产, 而绝大多数厂商采用仪器加试剂盒捆绑销售的垄断模式, 并在仪器中人为设置排它性检测程序, 从而抬高了配套试剂盒价格, 增加了检测成本, 所以本工作旨在开发国产低价、 稳定、 通用的人血tsh clia试剂盒。首先对读数时间进行了动力学研究, 发现其在5～15 min内rlu处于平台期,反应时间选择10 min。其次对反应条件进行了实验摸索, 在不同的温育时间和加样量的条件下, 各rlu值相差不大, 因此选择了50 μl的加样量与两步共1 h的反应时间。
我们研制的tsh化学发光免疫测定试剂盒通过方法学鉴定表明无论是灵敏度、 准确性、 特异性等技术指标均达到了临床诊断的要求[5]; 同时该方法具有操作方便, 反应时间短和成本低等优点, 具有较广阔的市场应用前景。
【参考文献】
[1] hay id, bayer mf, kaplan mm, et al. american thyroid association assessment of current free thyroid hormone and thyrotropin measurements and guidelines for future clinical assays[j]. clin chem, 1991, 37(11): 2002-2008.
[2] 尹东光, 贺佑丰, 刘一兵, 等. 促甲状腺激素化学发光免疫分析的研究[j]. 分析化学研究报告, 2004, 7（32）: 893-896.
[3] 叶成果. 促黄体生成素化学发光免疫定量检测试剂盒的研制[j]. 河南科技大学学报, 2004, 22（2）: 83-84.
篇10
[关键词] 血清铁蛋白；肿瘤标志物；肺癌；诊断作用
[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）03（b）-0105-02
及早发现、早期诊断、有效治疗是肺癌患者取得良好预后的重要因素[1]。过去对肺癌的诊断常采用肿瘤标志物检测，但仍有误诊、漏诊病例发生。近年来的研究表明，SF在肿瘤细胞中含量丰富，其含量增加可作为恶性肿瘤的一项辅助诊断指标[2]。本文采用罗氏e411电化学发光分析仪检测128例肺癌患者的SF及CEA、CYFRA21-1、NSE、CA125含量，旨在探讨各免疫指标对肺癌的诊断价值。现报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2010年2月～2012年10月本院确诊的肺癌患者128例（肺癌组），男75例，女53例；年龄37～82岁，平均（59.1±6.3）岁。均经病理或组织学检查确诊为肺癌。其中非小细胞肺癌（NSCLC）106例，小细胞肺癌（SCLC）22例。另选同期年龄、体质相匹配的健康体检正常成人120例（对照组），男72例，女48例；年龄35～86岁，平均（57.4±6.1）岁。两组在一般资料上差异具有可比性（P > 0.05）。
1.2 方法
1.2.1 仪器与设备 采用罗氏e411电化学发光分析仪及配套试剂、配套校准品和质控品。
1.2.2 采样及检测 所有受检者均于入院后抽取空腹静脉血3 mL，加入凝血酶促凝生化管，分离血清，按照罗氏e411电化学发光分析仪操作规程测定质控品（所有项目均在控）及受检者血样中的SF、CEA、CYFRA21-1、NSE、CA125的含量。
1.3 统计学分析
本组数据经卡方检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组SF、CEA、CYFRA21-1、NSE、CA125检测结果比较
肺癌组患者SF、CEA、CYFRA21-1、NSE、CA125含量明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）；详见表1。
2.2 SF、CEA、CYFRA21-1、NSE、CA125单一与联合检测的敏感度及特异度分析
SF与四种肿瘤标志物联合检测的敏感度均明显高于各项指标单独检测（P
3 讨论
SF是一种可溶性蛋白，其主要成分铁核心具有较强的结合铁与储存铁（Fe）的能力。因此多数学者认为[3-4]将SF作为检查机体Fe含量最灵敏的一项指标。有研究证明，当患者存有肿瘤时，其机体内合成SF的机会明显增加。
肿瘤标志物是癌变细胞所合成分泌的一种多肽类因子，主要存在于癌症患者机体与排泄物中，与正常组织和良性病变患者相比，具有存在水平明显增高的特点，故临床常通过对血清肿瘤标志物检测来提高肿瘤患者的早期诊断率和治疗效果评估。①CEA是具有人胚胎抗原特异决定簇的特异性酸性糖蛋白，是消化道肿瘤诊断与疗效评估的常用实验室指标之一，有研究表明[4-5]，CEA检测在肺癌诊断中有较高价值。②CYFRA21-1是肺癌组织中含量最丰富的一种肿瘤标志物，可能与肿瘤细胞分解或坏死后释放到外周血液内有关[6]，本次研究中，CYFRA21-1对NSCLC的诊断阳性率为61.32%，证实其对肺癌的临床诊断价值。③NSE是存在于神经源性与内分泌细胞肿瘤中的一种酸性蛋白酶[7]，对肺癌的早期诊断、鉴别及治疗、预后具有重要意义。本次研究中，SCLC患者NSE的阳性率（72.73%）明显高于NSCLC患者（36.79%），这可能与SCLC为神经源性肿瘤有关。④CA125作为一种卵巢抗原[8]，过去它的表达升高多见于卵巢肿瘤患者，但近来有发现[9]，肺癌患者中CA125水平表达较正常组织与良性病变患者明显升高。本次研究中，NSCLC患者CA125的阳性率显著高于其他检验指标，为88.68%，SCLC患者的阳性检测率也处于较高水平，为68.18%。上述提示血清SF、CEA、CYFRA21-1、NSE、CA125在肺癌患者早期诊断中具有较高的临床价值。但对于SF与肿瘤标志物联合检测的目前相关文献报道还比较少。
本次资料通过研究证明，肺癌患者机体内血清SF、CEA、CYFRA21-1、NSE、CA125的含量均明显高于正常对照组（P < 0.05或P < 0.01）；SF与CEA、CYFRA21-1、NSE、CA125联合检测的敏感度均明显高于各项指标单独检测（P < 0.05或P < 0.01），其特异度有所下降，但差异不显著（P > 0.05）。综上，血清SF联合CEA、CYFRA21-1、NSE、CA125检测可作为肺癌早期诊断的一个敏感指标。
[参考文献]
[1] 宋清玲，雷光文. SF、CEA、CA15-3、CA19-9、SCC及SF+CEA联检对肺癌的诊断价值[J]. 放射免疫学杂志，2011，24（1）：2442-2445.
[2] 李立青，董振南，田亚平. 血清铁蛋白及其他四种肿瘤标志物检测对肺癌的诊断价值[J]. 标记免疫分析与临床，2009，16（2）：576-579.
[3] 尹奇焕. 血清铁蛋白对早期肺癌的诊断价值[J]. 临床和实验医学杂志，2012，11（5）：95-97.
[4] 陆兴生. 肺癌早期诊断中血清CEA、SF、β2-MG联合检测的价值探讨[J]. 医药前沿，2011，1（20）：72-75.
[5] 雷长喜. 血清CEA、CA15-3和SF联合检测对肺癌的应用价值[J] .标记免疫分析与临床，2008，15（5）：369-371.
[6] 牛继国，呼永华，董峰，等. 四项肿瘤标记物在肺癌中的表达及其相关因素分析[J]. 国际检验医学杂志，2011，32（20）：1673-1676.
[7] 郭琳. CY21，NSE，CEA，血清铁蛋白，CA125联检在肺癌诊断中的价值[J]. 医学信息（下旬刊），2010，23（3）：349-352.
[8] 凤敏华. 多项肿瘤标志物对肺癌诊断的临床意义[J]. 实用肿瘤学杂志，2007， 21（1） ：77-80.
