载脂蛋白范文
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导语：如何才能写好一篇载脂蛋白，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
【关键词】慢性肾衰；血清脂蛋白；载脂蛋白 文章编号：1004-7484（2013）-12-6906-02
近年来认识到脂质代谢紊乱不仅是慢性肾衰易并发动脉粥样硬化的重要原因，而且促使慢性肾衰进行性进展的重要原因之一。本文对137例慢性肾衰不同病期的血清脂质、脂蛋白及载脂蛋白进行了分析，报告如下。
1对象与方法
1.1临床资料137例中例男100例，女37例，平均年龄38.7（16-65）岁，病程平均1.7年（7月-15年）。其中肾功能不全失代偿期（CRI，SCr186-442μmol/L）44例，慢性肾功能衰竭期（CRF，SCr451-707μmol/L）38例，终末期肾衰（ESRD，SCr>707μmol/L）55例。均为原发性肾小球疾病，其中肾病综合症（NS）39例，非肾病综合症（noNS）98例。全部病例均未经过血透或腹透治疗。
健康对照组40例，男25例，女15例，平均年龄37.8（18-65）岁。均为健康检查者。
1.2实验方法采早晨空腹静脉血，分离血清，当日检测。Tch、TG、HDL-C、HDL2-C、HDL3-C采用酶法测定。LDL采用公式计算。ApoAI、ApoB100均不增高，证明慢性肾衰虽多有高脂蛋白血症，但不同病期的脂蛋白改变不同。
3讨论
肾小球血管平滑肌细胞及系膜细胞上均有LDL受体，因此脂质可以在肾小球内沉积。脂质在肾小球内沉积不仅可以引起肾小球硬化，还能诱导单核巨噬细胞侵润及血小板聚集，从而释放多种生物活性介质及水解酶，产生一系列细胞因子如白介素Ⅰ、肿瘤坏死因子、血小板源性生长因子、血小板活性因子等。脂质还能促进活性氧生成增加，干扰前列腺素的合成。因此，脂质在肾小球内沉积，必然导致系膜细胞增殖，局部凝血障碍及纤维素沉积，肾小球损伤进行性发展。动物实验亦证明，高质饮食可加重肾组织及肾功能的损害。因此，近年来认为，脂质本身即是一种“肾毒性”物质。慢性肾衰时的脂质代谢紊乱，不仅使动脉硬化等心血管疾病发病率增加，同时也是慢性肾衰进行性进展的重要原因之一，本组病例各期均有不同程度的高脂血症，与文献报告一致。但本组资料发现，慢性肾衰不同病期脂质紊乱的情况并不完全相同，在CRI期，Tch、TG及LDL显著增高，但高密度脂蛋白正常；而CRF期及ESRD期LDL虽亦增高，但比CRI期低（P
载脂戴白为脂蛋白的蛋白质部分，具有载运脂质的功能，且血清含量比脂质及脂蛋白稳定。Apo AI是高密度脂蛋白的主要载脂蛋白，它是卵磷脂胆酰酶的必需激活剂，能促使动脉内皮细胞及成纤维细胞中游离胆固醇的清除，具有防止周围组织中脂肪沉积和抗动脉粥样硬化作用。Apo B100是低密度脂蛋白的主要载脂蛋白，它在调节周围组织胆固醇的代谢中起着重要作用，有促进动脉粥样硬化和刺激平滑肌细胞增生作用。可见Apo AI/ Apo B100比例在周围组织脂质沉积和动脉粥样硬化的形成中起着重要的调节作用。本组各期慢性肾衰Apo AI均降低，Apo B100亦降低，与赵榕富等报告相符。有关Apo B100在慢性肾衰时的改变文献报告不一，有升高有降低，也有正常的。有报告认为，慢性肾衰时Apo B100虽不增高，但BL7抗原决定簇的表达增加，亦可反应Apo B100在促进动脉粥样硬化中的作用。本组Apo B100虽不增加，但Apo AI/ Apo B100比例均降低，说明慢性肾衰各期抗周围组织脂质沉积作用示降低的。
篇2
[关键词]冠心病；载脂蛋白B；载脂蛋白E；血管紧张素原；基因；多态性
[中图分类号] R541.4 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2011）19-04-03
The Research of Apolipoprtein B，E and Angiotensinogen Gene Polymorophisms in Predisposition to CHD
MA Juan ZHANG Hongqing WANG Wei TIAN Qing
Department of Cardiology，The First People’s Hospital of Kunming City，Kunmimg 650011，China
[Abstract] Objective To explore the relationship of apolipoprotein B，E（ApoB，ApoE）and angiotensinogen（AGT）gene polymorphism with coronary heart disease（CHD）. Methods Gene chip technology was performed to analyze ApoB XbaⅠ、ApoE 112/158 and angiotensinogen gene polymorphism. The allele frequency and gene type distribution were compared between groups. ResultsThere was a significant difference in the distributuion of Apo B，ApoE and AGT gene type between patients and controls（P＜0.05）. The frequency of X+X+ genetype and X+ allele of ApoB were significantly higher in patients with CHD than controls（P＜0.05）；the frequency ofε3/4、ε4/4 genetype andε4 allele of ApoE112/158 were higher in patients with CHD than controls（P＜0.05）. AGT-TT gene type was related with CHD significantly（P＝0.003）and T allele was more frequent significantly in CHD group than controlls（P＜0.05）. ConclusionThe Apo B，ApoE and AGT gene polymorphism may be the risk factors of CHD；X+ allele of ApoB Xba Ⅰ andε4 allele of ApoE gene and T allele of AGT gene might be the geneticmarkers of CHD.
[Key words] Coronary heart disease；Apolipoprotein B；Apolipoprotein E；Angiotensinogen；Gene；Polymorphism
冠心病（CHD）是严重危害人类健康的常见心血管疾病，病因是由遗传因素和环境条件共同决定的，在CHD的发生和发展中，遗传因素可能更为重要。近年来已相继研究发现了一些与之相关致病或易感基因，其中包括血管紧张素原（AGT）、亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因、一氧化氮合酶（NOS）基因以及脂质代谢相关基因位点等，这些基因结构和（或）表达异常可导致CHD，但各地报道不一，未见基因芯片联合分析ApoB、ApoE及AGT基因多态性与CHD相关性的报道，本研究应用基因芯片技术联合检测多个基因多态性及等位基因频率，分析它们与CHD的相关性。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2005～2006年昆明市第一人民医院心内科收住的CHD患者89例，符合缺血性心脏病（IHD）的命名和诊断标准，均为冠状动脉造影证实冠状动脉病变患者；其中男62例，女27例，平均年龄（60.01±12.40）岁。同期78名非CHD患者作为对照组，均行冠状动脉造影术无冠脉病变；其中男44例，女34例，平均年龄（64.27±11.28）岁。两组患者一般资料（平均总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、心脏超声心动图测平均左室舒张末径、平均左室收缩末径、左室射血分数）比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
1.2方法
采用基因芯片检测技术，结合PCR体外扩增方法，检测人类冠心病相关基因ApoB Xba I、ApoE112/158、AGT M235T的多态性情况。
1.2.1标本采集 用一次性无菌注射针头采集被检者静脉血0.5mL，收集于含50μL的2%EDTA溶液的1.5mL的无菌离心管中，盖上管盖，上下颠倒数次使混匀。
1.2.2 存放 上述血样在2～8°C保存，保存期不应超过3周；在-20°C保存期半年，-80°C可长期保存，但严禁反复冻融。
1.2.3扩增 采用适用0.2mL扩增管并有热盖的PCR扩增仪。
1.2.4 杂交 在芯片杂交过程中采用温控精度为±0.5°C的恒温设备（BaiO FLWS-526全自动杂交仪）进行杂交。
1.2.5 识读 在芯片杂交信号检测时采用BaiO BE-2.0生物芯片识读仪识读。图像Array Docctor软件分析可自动输出检测结果，最后检测出ApoB Xba I、ApoE112/158及AGT M235T基因的多态性位点。
1.3 质量控制
在每次检测中都应设置阴性、阳性、对照品。产品检测过程中，若软件对“标志列、阴性、阳性对照”三者进行判断后，输出其中之一为“不合格”，则实验无效。
1.4 结果判断
由软件自动判断并输出结果。当软件判断标志列、阴性、阳性对照均合格时，会自动输出检测结果。见表1。
1.5 统计学处理
采用SPSS11.0软件包作统计学处理。ApoB Xba I、ApoE112/158及AGT M235T基因型和等位基因频率之间的比较用χ2检验，同时计算优势比（OR）及95%可信区间（95%CI）。
2结果
2.1 AGT M235T基因型及等位基因频率的分布情况
CHD组以AGT-TT基因型最常见，对照组AGT-MT基因型最常见；CHD组AGT M235T基因型分布与对照组相比有明显差异（P＜0.05），易感等位基因T频率高于对照组（P=0.01，CI=0.339～0.864；OR=0.541），显示AGT基因多态性与CHD发病存在关联。见表2。
2.2 ApoB Xba I基因型及等位基因频率分布
CHD组及对照组ApoB Xba Ⅰ基因型均以X+X+型最常见，CHD组X+X+基因型明显高于对照组，两组基因型分布相比均有显著差异（P＜0.05），CHD组等位基因X+频率明显高于对照组（P＜0.05，OR=3.46，CI=1.554～7.681）。显示ApoB基因多态性与CHD发病存在密切关联，等位基因X+与CHD发病正相关。见表3。
注：与对照组比较，*P＜0.05
2.3CHD组ApoE112/158 基因型及等位基因频率分布等位基因频率情况
CHD组ApoE112/158等位基因频率：ε3＞ε4＞ε2；对照组ε3＞ε2＞ε4；CHD组以ε3/3型最常见，ε3/4型次之；对照组以ε3/3型最常见，ε2/3型次之两组基因型分布相比均有显著差异（P＜0.05）；冠心病组ε3/4、ε4/4基因型频率明显高于对照组（P＜0.05），ε4等位基因频率明显高于对照组（P＜0.05，OR=2.301，CI=1.203～4.398），两组的ε3等位频率没有明显差异，显示ApoE基因多态性与CHD发病存在密切关联，ε4等位基因与CHD发病正相关。见表4。
2.4 AGT-TT, ApoE-ε4/4,ApoB- X+X+联合基因型分布情况
在CHD组未发现AGT-TT、ApoE-ε4/4、ApoB-X+X+基因型联合出现。
3 讨论
近年来由于研究手段的进步，人们对CHD的遗传背景给予了更多的关注，其中AGT M235T多态性与冠心病的关系倍受重视。AGT-TT基因型可能通过协同效应增加促血管紧张素Ⅱ的生成而增加了CHD的发病危险。1995年Katsuya等[1]进行AGT M235T多态性的调查，发现AGT基因的T/T型频率在CHD组为21.9%，显著高于对照组的14.5%，AGT T/T型是CHD的独立危险因素。梁茜等[2]研究发现AGT的基因多态性可能是中国老年人CHD的独立危险因素。本研究也观测到CHD组AGT M235T基因型分布与对照组相比有显著差异，AGT-TT型及T等位基因频率均明显高于对照组，提示AGT M 235T多态性与CHD发病有关。
脂质代谢紊乱是致动脉粥样硬化（AS）及CHD发生的最重要的危险因素。目前发现ApoB基因cDNA第7673位核苷酸C-T突变，产生了一个XbaⅠ切点，即X+等位基因，它与脂质代谢紊乱密切相关。Guzman等[3]研究发现在高血脂女性患者中ApoB XbaⅠ基因多态性与总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白（LDLC）水平增高显著相关。李莎等[4]研究发现具有冠心病家族背景的X+等位基因的个体显著高于对照，而且相应的TC、LDLC和ApoB100水平也明显高于对照组，它们是汉族人群中冠心病发病的重要遗传标记。资料表明[5]（浙南地区）正常人组Apo B基因的多态Xba Ⅰ酶切位点以X-占优势，而CHD组XbaⅠ酶切位点以X+频率为优势，和正常人组对比差别显著。本研究结果示CHD组ApoB XbaⅠ基因型分布与对照组相比有明显差异，CHD组X+X+基因型及等位基因X+频率明显高于对照组，与国内报道一致，提示ApoB XbaⅠ的基因多态性是CHD遗传危险因素，等位基因X+是CHD的重要遗传标记。
ApoE基因多态性是决定血脂水平进而影响动脉粥样硬化病变发生发展的遗传因素之一。不同的ApoE表型对CHD的易感性不同，研究表明有ε4等位基因CHD的发生频率最高，而ε2等位基因可能由于有两个游离的巯基，因此ε2者较少患CHD、颈动脉疾病或中风，对心血管具有保护作用。Kolovougd等[6]通过大批量标本研究发现基因多态性并没有性别的差异性。Banaresvg等[7]发现ApoEε4等位基因和冠心病有着很大的关联，并且呈现年龄依赖性，是一个非常重要的遗传因素。本文CHD组ε3/4、ε4/4基因型和ε4等位基因频率明显高于对照组，ε2等位基因频率明显低于对照组，显示ε4等位基因与CHD发病存在密切关联。两组的ε3等位频率没有明显差异。本研究结果和国内外相关报道一致，支持ApoE等位基因多态性与冠心病之间存在关联，提示ε4等位基因是动脉硬化发生的潜在因素，为冠心病的易患因子，而ε2等位基因对冠状动脉粥样硬化的发展可能有保护作用。
本研究应用基因芯片技术，将中国人的AGT、ApoB、ApoE基因型探针固定于同一张基因芯片表面，利用碱基互补配对原理进行杂交，通过检测探针分子杂交信号强度，在同组人群同时检测多种CHD易感基因的多态性位点，其特点是高效、快速、自动微型化、高通量、高度并行性及高度敏感性，有着广泛的应用前景。对于多基因病包括，使用基因芯片技术进行基因多态性联合分析比单一基因更有价值，将来可根据不同基因型进行个体化预防、治疗和病情随访。
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篇3
[关键词]载脂蛋白E基因; 敲除小鼠; 动脉粥样硬化
[中图分类号] R543.1+2[文献标识码]A [文章编号] 1005-0515(2010)-10-022-02
Effect of APOE-gene Knockout Mice and Research of Atherosclerosis
Nie saiZhao shui-ping(auditing)
(Cardiology of 2nd Xiangya Hospital of Central South University,Hunan-changsha, 410011)
[Abstract]APOE is an important component of plasma a lipoproteins, and plays significant roles in lipoprotein metabolism. The absence or mutation of APOE may induce abnormal lmetabolism in vivo and dysfunction of organs, and then lead to a series of diseases and complications. APOE-knockout mice is one of the best models for research on mechanism of atherosclerosis, which became a popular model used in studies on vulnerable plaques. This article explore pathologic characteristics of atherosclerotic plaques, high fat diet, aerobic movement and application in pharmacological research about APOE gene knockout mice.
[Keywords] Apolipoprotein E; Gene knockout; Atherosclerosis; Mice
载脂蛋白E(ApoE)于1973年发现,与已知氨基酸序列的载脂蛋白相比,其精氨酸含量较高,故曾称为富含精氨酸的载脂蛋白(ARP)。1975年,Utermann建议根据字母顺序将其命名为ApoE。1992年美国洛克菲勒大学生化遗传和代谢实验室和北卡罗来纳大学病理遗传实验室应用胚胎干细胞基因敲除技术,成功培育出载脂蛋白E基因敲除小鼠[1]。载脂蛋白E作为配体,有助于乳糜微粒和极低密度脂蛋白的清除。因此,缺乏ApoE则会导致血液循环中脂蛋白代谢障碍,易于沉积动脉壁内,引起动脉粥样硬化(AS)斑块。ApoE基因敲除小鼠易形成严重高脂血症及AS病灶,所以广泛应用于AS的研究。
1ApoE基因敲除小鼠AS病灶的病理特点
对正常饮食下的ApoE基因敲除小鼠进行观察[2],发现血浆总胆固醇(TC)含量比同期正常小鼠高4-5倍,随着时间延长,可出现不同的病变特征。5-6周时动脉内皮上有单核细胞黏附,并向内皮下移动;10周时脂质条纹形成;15周时可见斑块形成,其内可见泡沫细胞和平滑肌细胞;20周时则有胶原和弹性纤维包饶的平滑肌细胞组成的纤维帽覆盖在坏死核心表面,形成成熟的斑块。随着时间延长,可出现钙化、增生的纤维帽,8个月左右冠脉动脉口处由于粥样硬化斑块的发展形成严重闭塞。这种小鼠虽然病变严重,但仍能在一般条件下存活。
将ApoE基因敲除小鼠分为低脂饮食组与高脂饮食组,分别在6、8、10、15、20、30、40周时,观察血管组织形态变化,发现AS各阶段的病理表现均存在于这种小鼠,与其他AS小鼠模型比较,ApoE基因敲除小鼠不仅能够在瓣膜基底,而且能够在所有胸腹动脉中形成广泛的粥样硬化病变,如:主动脉分支、颈动脉、肺动脉等。所以,ApoE基因敲除小鼠的AS病变发展同人类极其相似[3]。Cullen[4]研究认为,因为动物本身的特性及诱导斑块破裂和检查手段的限制及不确定性,使其不能够准确的反映或代表复杂的人类粥样硬化斑块,而ApoE基因敲除小鼠的自发破裂与人类的形似性更好。
42-60周龄的ApoE基因敲除小鼠,头臂段动脉存在富含胶原的纤维脂质斑,斑块内有坏死核和出血及被包埋的多层损伤,认为后者是由于反复斑块破裂后修复所致[5]。早期的钙化,对斑块破裂有促进作用,斑块在不同密度组织的交界面最易破裂;而当钙化融合后,这种交界面减少,破裂发生率也降低了[6]。因此,钙化对于斑块破裂是把“双刃剑”。
2膳食和遗传背景对APOE基因敲除小鼠AS病灶的影响
动脉粥样硬化小鼠模型中,经常用高脂饮食来诱导或加快AS的形成。已知不同剂量或不同类型的脂肪酸、加用或不加用胆固醇等,对于模型小鼠的血脂水平,或动脉粥样硬化的形成都具有重要的影响。
一般认为,动物模型发生和形成典型的AS病变,血胆固醇水平至少持续保持在300mg/dL以上。应用最多的是Getz等[7]认为的西方膳食(Western-type diet),包含有21%脂肪和0.15%胆固醇的膳食,可以使ApoE基因敲除小鼠胆固醇水平短时间内达到并持续保持1500mg/dL(38.79mmol/L)以上甚至更高。且研究发现,西方膳食与18%脂肪和0.25%胆固醇的膳食相比,在增高血脂水平及在主动脉弓部或无名动脉形成动脉粥样硬化损害的作用相似,同时0.15%和0.5%胆固醇的膳食,在诱导动脉粥样硬化损害形成上没有差别。
有研究表明,尽管ApoE基因敲除会导致高脂血症,但不同基因表型或不同遗传背景决定ApoE基因敲除小鼠的形成的AS严重程度。给予相同的高脂饮食,杂合子ApoE基因敲除小鼠(apoE+/-)血脂水平与野生型小鼠比较无显著差别,但AS损害面积是野生型小鼠的10倍左右,而对于纯合子ApoE基因敲除小鼠(apoE-/-),血浆胆固醇水平会更高(>2000mg/dL),大动脉的AS损害面积是杂合子apoE+/-的50倍。比较C57BL/6和FVB/NJ来源的ApoE基因敲除小鼠,发现给与相同膳食,FVB/NJ背景的小鼠血胆固醇浓度相对较高,C57BL/6背景的小鼠主动脉AS损害面积是FVB/NJ背景的8倍[8]。
3ApoE基因敲除小鼠斑块产生机理
ApoE基因敲除小鼠的血浆中总胆固醇浓度明显增高,三酰甘油水平亦比正常小鼠高68%,并不受年龄和性别的影响;但其高密度脂蛋白(HDL)却只有正常小鼠的45%。正常小鼠的胆固醇主要存在于HDL中,而ApoE主要存在于乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中;但是敲除ApoE基因后,胆固醇就不再主要存在于HDL中,而是在VLDL[9]。此时VLDL中大量的胆固醇就不能从小鼠体内降解,而在体内蓄积,导致动脉粥样硬化。
利用ApoE基因敲除小鼠研究极低密度脂蛋白(VLDL)和中间密度脂蛋白(IDL)的致动脉粥硬化作用,并从形态学方面证实,该模型易发生动脉粥样硬化,主要是VLDL和IDL从体内清除的延缓。并有研究显示,VLDL和IDL作为导致小鼠动脉粥样硬化的脂蛋白,以不依赖ApoE的方式直接作用于巨噬细胞,使之在动脉壁损伤处转化为泡沫细胞。
4ApoE基因敲除小鼠与AS的干预研究
利用此动物模型,可观察各种抗AS治疗措施的疗效。已发表了许多相关研究结果,大致可分两大类干预方法:降脂和非降脂措施。
4.1 他汀类药物的作用
利用此动物模型,Johnson等[10]观察到,普伐他汀(40mg/kg.d)可减少早期(9周)斑块的破裂,而且在不稳定斑块形成后依然有效,但与降低血浆胆固醇浓度无关。Taral等[11]研究显示, 辛伐他汀具有抗炎、抑制钙化及稳定斑块的作用。他汀类药物的调脂作用仍然具有争议,不同的研究结果皆然不同,有解释认为与给药方式不同有关。但高、低剂量辛伐他汀的调脂效果差异不明显,这可能与应用时间较短有关[12]。晏沐阳等[13]研究显示,辛伐他汀的应用可以小鼠的动脉粥样硬化斑块面积减小,降低血清中LDL-C和TC的水平,同时还有他汀类药物降低炎性反应,抑制金属蛋白酶活性等独立于调脂以外的作用。
4.2 非他汀调脂药物的作用
Zhang等[14]给予ApoE基因敲除小鼠口服普罗布考(0.5%,wt/wt),发现该药在降低血浆TC的同时,使高密度脂蛋白(HDL)和ApoAI明显降低。然而,主动脉AS斑块发展的速度比非用药组明显加快,面积约非组的2-4倍。组织学分析,普罗布考组小鼠病变以纤维组织增生为主,而非泡沫细胞,通常认为这种现象与局灶性炎症反应和动脉瘤扩张有关,而且给予高脂饮食的正常小鼠,普罗布考亦可加快粥样病变的发展。提示通过普罗布考降低血浆TC并非抗AS的有效措施。
4.3 非调脂药物的作用
Bourassa等[15]研究内源性和外源性雌激素对ApoE基因敲除小鼠对AS的影响。发现内源性雌激素较外源性雌激素能明显减轻AS病变,这种现象可能与内源性雌激素影响血浆脂蛋白的水平有关。治疗糖尿病药物罗格列酮可以减少巨噬细胞的浸润,同时减少新生内膜的形成,具有直接抗动脉粥样硬化的作用[16]。钙离子通道拮抗剂-拉西地平可以通过抗氧化作用和血管活性作用来抑制动脉粥样硬化的发生发展[17]。非洛地平及厄贝沙坦可能是通过阻断氧化应激反应抑制动脉粥样硬化发生发展[18,19]。而单独运用哌唑嗪(7.5mg/kg.d)既未能明显减缓小鼠AS的发展,也不能有效降低血压;氯沙坦(20或30mg/kg.d)除轻微降低血压外,对AS基本无影响。然而,两种药物同时使用时小鼠的AS斑块和血压都有了显著的降低,但以上方法在用药过程中对血浆TC都无明显影响[20]。
4.4 有氧运动的作用
Napoli等[21]研究了中度有氧运动(游泳)联合代谢治疗(含1.0%Vitamin E普通饮食、含0.05% Vitamin C和6%L-精氨酸饮水),对6周龄ApoE基因敲除小鼠长期的作用,发现,任何一种治疗都可以缓慢AS的形成,并联合治疗与单独任意一种干预方式相比,更能明显的减少AS损害和自发斑块破裂率,以及提高生存率,认为早期干预是必要的,有益的。在跑台上进行中等强度有氧运动的ApoE基因敲除小鼠的TC、TG和LDL-C和ApoB水平显著降低,AS斑块面积明显减少,有氧运动和低脂饮食两种结合的作用大于单独有氧运动和低脂饮食的作用,两者可以起协同加强的作用[22]。
ApoE在脂质代谢、心血管疾病、神经系统病变和糖尿病及其并发症等方面的研究已经广泛开展,但是ApoE在这些病理生理过程中发挥的作用及其机制并不十分清楚,尚需要进一步研究。然而,ApoE基因敲除小鼠所致的AS模型缘于遗传因素损伤,其病变更接近人类AS,相对于进食高脂饲料而发生AS的动物具有自然发生、渐进发展、病理形态典型等特点,为研究AS发病机理和干预措施提供了良好的实验平台,开拓了广阔的研究前景。
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篇4
Relationship between polymorphisms of the apolipoprotein B gene and cholesterol gallstone disease
【Abstract】 ObjectiveTo investigate the relationship between the apolipoprotein (Apo)B gene polymorphic sites Xbal， EcoRI and cholesterol gallstone disease.Methods Two polymorphic sites Xbal， EcoRI of ApoB gene were selected. Using polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism technique 101 patients with cholesterol gallstone and 50 controls were investigated.Results The frequency of rare allele X+ was significantly higher in the patients with cholesterol gallstone than in the controls. Patients with X+ allele had higher tC， LDL-c and ApoB levels， significantly different from those without X+ allele. there were no difference between the patient group and the control one in EcoRI allele.Conclusion X+ allele might&nbs p;be the susceptible gene for cholesterol gallstone disease.
【Key words】 Apolipoprotein B； Gene； Cholelithiasis； Polymorphism
我们选取载脂蛋白(Apo)B基因XbaⅠ、EcoRⅠ多态位点应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术研究其等位基因频率在正常人和胆固醇结石病人中的差异及其对血脂代谢的影响，从基因水平探讨胆固醇结石病的发病原因，现将结果报道如下。
材料和方法
1.对象：本院外科1996年4～8月行选择性胆囊切除术的胆囊结石患者110例。酶法测定结石胆固醇含量，胆固醇含量≥50%的101例为胆固醇结石病例组，其中男42例，女59例，平均(51.3±1.4)岁；以同期非胆石病住院的50例(B超证实无胆结石)为对照组，其中男21例，女29例，平均(49.2±2.9)岁。研究对象均无肝肾疾病、糖尿病和冠心病。
2.方法：(1)基因组DNA抽提：抽取10 ml空腹静脉血，用酚-氯仿法抽提DNA。采用美国Gibco-Brl公司基因组DNA抽提试剂盒提供的方法进行操作。(2)基因多态性分析：①按Boerwinnkle的报道合成引物［1］：XbaⅠ-5′=GGAGACTATTCAGAA
gCTAA；XbaⅠ-3′=GAAGAGCCTGAAGACTGAC
t；EcoR I-5′=CTGAGAGAAGTGTCTTCGAAG；EcoR I-3′=CTCGAAAGGAAGTGTAATCAC。②PCR扩增反应：反应管中依次加入10×PCR缓冲液5μl，25 mmol/L MgCl2 5 μl，2 mmol/L dNTP 5 μl，20 pmol/L引物各1μl，模板DNA 0.4 μg，Taq聚合酶2 U，加灭菌去离子水至总反应体积50μl。反应条件：95 ℃预变性5 min。继之95 ℃变性1 min，58 ℃退火1 min，72 ℃延伸1.5 min，为1个循环。共30个循环，最后1个循环再延伸7 min。用2%琼脂糖凝胶(含0.5 g/L溴乙锭)电泳，鉴定上述产物。③限制性内切酶酶切反应：在XbaⅠ和EcoRⅠ多态位点的PCR扩增产物中分别加入对应的限制性内切酶20 u(Promega公司生产)，37 ℃消化4 h。然后以2%的琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物。(3)血脂分析：酶法测定血清总胆固醇(TC)，血清总甘油三脂(TG)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)；ELISA法检测血清脂蛋白(a)［Lp(a)］，载脂蛋白A(ApoA)和ApoB。以上指标均用临床生化自动分析仪测定。 转贴于
3.统计学方法：计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验。
结果
1.酶切产物电泳结果：存在XbaⅠ酶切位点者酶切后显示433 bp和277 bp 2条片段，缺乏该酶切位点者仅有1条710 bp片段。相应有3种基因型：X+X+、X+X-、X-X-；存在EcoRI酶切位点者酶切后显示253 bp和227 bp 2条片段，缺乏酶切位点者仅显示1条长480 bp的片段。相应有3种基因型：E+E+、E+E-、E-E-。
2.少见等位基因频率：X+等位基因频率结石组显著高于对照组(P＜0.05)。E-等位基因频率结石组与对照组差异无显著性(P＞0.05)。
3.血脂水平比较：结石组TC、TG、HDL-c和ApoB水平显著高于对照组。结石组X+X-基因型者血浆TC、LDL- c、ApoB水平显著高于X-X-基因型者，对照组中X+X-与X-X-基因型者血脂水平差异虽无显著性，但却表现为X+X-基因型者TC、LDL-c、ApoB水平增高趋势。而EcoRI各基因型间血脂水平差异无显著性(P＞0.05)。
讨论
EcoRI位点的多态性主要是由ApoB基因4154位上的密码子突变(LysGlu)形成的，从我们实验结果可以看出这一突变与胆固醇结石的形成无关。XbaI位点的多态性是由ApoB基因2488位上的密码子突变(ACCACT)形成的。从我们实验结果可见，结石组少见等位基因X+显著高于对照组，结石组携带X+等位基因者其血浆TC、LDL-c和ApoB水平显著性增高。由于XbaI密码子的突变并没导致其所决定的氨基酸基团的替换，因此可认为X+等位基因不是造成ApoB促结石形成的直接原因，这一改变可能影响到另一个与其呈不平衡连锁相关基因，而该基因对胆固醇结石的形成有促进作用。我们认为X+等位基因可能通过增加ApoB分子数量而导致结石的形成。ApoB分子数量的增加，作为LDL的载脂蛋白其所携带的LDL-c增加，血浆中TC、LDL-c和ApoB亦升高；由于ApoB分子数量增加其通过肝细胞表面LDL受体向肝内转运胆固醇增加，使分泌入胆汁的胆固醇增多。肝细胞内外源性胆固醇增加，能抑制内源性胆固醇的合成。由于内源性胆固醇是胆汁酸合成的底物，胆固醇合成的抑制会导致胆汁酸合成的减少。肝细胞的胆固醇增多，还可直接抑制胆固醇7α-羟化酶活性，减少胆汁酸的合成。由于胆固醇增加或胆汁酸减少都使胆汁胆固醇饱和度增加，从而增加了胆汁致石性。通过本研究，我们认为ApoB基因XbaI位点基因多态性与胆固醇结石形成有关，少见等位基因X+可能是胆固醇结石的易感基因。
篇5
【关键词】 轻度认知障碍；多态性；载脂蛋白E；基因型
【Abstract】 Objective To analyse the association of apolipoprotein E(apoE) genotypes with mild cognitive impairment(MCI).Methods RFLP-PCR technology is applied to analyse the apoE allele frequency of 56 MCI patients and 89 controls.Results Among the 56 cases of MCI，the frequency of apoEε2，ε3，ε4 are 7.14%，71.38%，21.48% respectively，while in the 89 controls they are 7.30%，84.83%，7.87% respectively.The frequencies of the two groups have significant difference(P
【Key words】 mild cognitive impairment;polymorphism;apolipoprotein E;genotypes
轻度认知障碍（mild cognitive impairment，MCI）特指有轻度记忆或认知损害、但无痴呆的老年人，其病因不能由已知的医学或神经精神病状况解释。目前普遍认为MCI是介于年龄相关性记忆损害（age-associated memory impairment，AAMI）和老年性痴呆（Alzheimers disease，AD）之间的一种综合征。许多资料表明：MCI患者进展为AD（主要指散发性AD）的年转化率是同龄认知功能正常老年人的10倍，识别MCI患者将有助于早期干预和治疗，所以MCI相关研究成为近年来国内外的热门话题。
近年来，越来越多的研究发现多个基因，如淀粉样蛋白前体（APP）基因、早老素-1（PS-1）基因、早老素-2（PS-2）基因、载脂蛋白E（apoE）等位基因和低密度脂蛋白受体相关蛋白基因等遗传因子在调控AD病理和生化异常代谢中起着重要作用。其中，位于19号染色体的apoE基因是资料与目前唯一广泛得以认同的与散发性AD和迟发性家族性AD相关的基因。本研究旨在探讨apoE基因多态性与MCI之间的关系，为MCI易进展为AD寻找遗传学依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 研究对象源自武汉市中心医院2002年7月~2003年6月神经内科和干部四科门诊和病房，所有对象的文化程度均在中学及以上，分为MCI组和对照组。MCI组56例，男23例，女33例；年龄61～89岁，平均（70.12±7.24）岁。依据1997年Peterson等确立的诊断依据确定MCI组入选标准如下：（1）有记忆力减退的主诉；（2）检查时证明有轻度记忆损害；（3）没有或很少有其他认知损害；（4）日常生活活动正常（BI指数≥95分）；（5）满足CDR=0.5的标准；（6）MMSE评分≥24分，但≤27分；（7）不够NINDS-ADRDA或DSMⅢ-R对痴呆的标准。排除标准：（1）昏迷；（2）失语和（或）精神异常（如抑郁、谵妄）而不能配合量表检查者。
对照组89例，男46例，女43例；年龄60～88岁，平均（69.47±8.02）岁。均符合下述入选标准：（1）无记忆力减退的主诉；（2）检查时排除认知缺损、CDR=0；（3）日常生活活动正常；（4）MMSE评分＞27分；（5）年龄、性别、受教育程度、既往高血压、糖尿病、心脏病及卒中史均与MCI组匹配。对照组和MCI组在年龄上差异无显著性（P>0.05）。
1.2 研究方法
1.2.1 基因学检查 用PCR-RFLP方法测定apoE基因型。实验步骤如下：（1）空腹12h后，取肘静脉血5ml，EDTANa2抗凝，用酚：氯仿抽提白细胞中的DNA，使纯度达到A280/A260>1.8；（2）PCR扩增目的基因片段：参照文献［1］，引物设计如下：上游引物为5’-TAA GCT TGG CAC GGC TGT CCA AGG A-3’和5’-ACA GAA TTC GCC CCG GCC TGG TAC AC-3’。扩增体系为50μl。PCR的条件为95℃变性5min，之后35次循环（94℃变性1min，62℃退火1min，72℃延伸1min），72℃继续延伸10min后降至4℃，用1.6%琼脂糖凝胶电泳待测扩增产物；（3）限制性片段长度多态性（RFLP）分析：取10μl PCR产物，加10u HhaI内切酶消化，37℃酶切4h，非变性聚丙烯酰胺浓度为0.1g/L，交联度为49∶1，取5μl酶切产物，加等体积的甲酰胺变性液，在电压100～200V，温度20℃条件下，电泳5h左右；（4）银染：电泳结束后，用乙酸固定，纯水洗，银染液染色（1.4g/L，AgNO3和甲醛），纯水洗，加显色液（30g/L，Na2CO3，甲醇400μg/L，Na2S2O3）显色，乙酸终止反应，根据电泳带型确定apoE基因型。拍片。
1.2.2 统计学分析 使用SPSS 10.0处理数据，计算各等位基因和基因型频率的分布，基因频率采用Hardy-Weinberg遗传平衡式计算。两组的apoE基因型或等位基因频率比较采用卡方检验。
2 结果
2.1 PCR扩增产物和HhaI酶切PCR扩增产物电泳结果 ApoE基因的PCR扩增片段大小为244bp，经HhaI酶切后，ε2型酶切产物的主要片段为91bp/83bp；ε3型酶切产物的主要段为91bp/48bp/35bp；ε4型酶切产物的主要段为72bp/48bp/35bp。即可根据apoE PCR产物酶切后的片段长度来判断其等位基因情况（见图1）。
2.2 apoE基因型和等位基因频率分析 MCI组和对照组的基因型和等位基因频率结果，见表1。结果显示MCI组和对照组的纯合子基因型均以ε3/ε3型最多（分别为55.36%和71.91%），ε4/ε4型最少（分别为3.67%和1.12%），未检出ε2/ε2型；MCI组的杂合子基因型以ε3/ε4型最多（26.69%），ε2/ε4型次之（8.92%），ε2/ε3型最少（5.36%）；对照组的杂合子基因型以ε2/ε3型最多（13.48%），ε3/ε4型次之（12.37%），ε2/ε4型最少（1.12%）。等位基因中ε3频率最高（MCI组和对照组分别为71.38%和84.83%），ε4次之（分别为21.48%和7.87%），ε2最少（分别为7.14%和7.30%）。组间比较显示：两组apoE基因型分布总体比较其差异在统计学上差异有非常显著性（χ2=10.52，P
注：*表示任一非ε4的等位基因（如ε2、ε3）
分别对apoE 3种等位基因频率进行组间卡方检验，见表3，结果显示：MCI组的ε4频率较对照组显著升高（P
转贴于
3 讨论
人类的apoE由19q11.2所编码，其基因常见有3种表
表3 apoE各等位基因与MCI相关性的卡方检验
注：OR：比值比；CI：可信区间
型，即ε2、ε3和ε4等位基因所编码的3种载脂蛋白E2、E3和E4，构成6种不同的基因型，包括3种纯合子（ε2/ε2、ε3/ε3、ε4/ε4）和3种杂合子（ε2/ε3、ε3/ε4、ε2/ε4）。研究显示：最常见的等位基因是ε3，而ε4作为AD的高危因子和易患基因由Strittimatten等［2］于1993年首先报道。针对MCI患者的多个研究表明ε4携带者进展为AD的危险性增加。其中Peterson［3］认为apoE基因型是MCI转化为AD的最佳预言因子，而Tierney等［4］则认为该预言模式必须结合记忆检测才可靠。
3.1 MCI患者的apoE基因多态性 apoEε4基因型是目前明确的与散发性AD相关的第一个遗传易感因子。鉴于MCI向AD的高转化率，apoE基因多态性成为MCI相关研究的热点之一。在本研究中，与对照组比较，MCI组ε3/ε4型增多，ε3/ε3型减少，在统计学上其差异有非常显著性（χ2=10.52，P
3.2 apoE在MCI中的作用及其可能机制
3.2.1 apoE与β类淀粉样蛋白（Aβ）沉积 Aβ是老年斑（SP）的核心成分，其毒性作用导致神经轴突变性。目前认为Aβ的积聚反应有两个过程：首先是匀速的核反应过程，该过程主要与Aβ42有关；其后是Aβ40和Aβ42共同参与的快速延长反应。利用识别Aβ40、Aβ42的两种抗体进行免疫组化染色研究发现：Aβ40染色在apoEε2、ε3、ε4顺次增强，Aβ42染色则不随之改变，提示apoEε4与Aβ40有密切关联，可促进作为淀粉样蛋白伸长分子的Aβ40在脑内的积聚，也说明了apoEε4只对AD晚期发病有影响，可加快发病的速度［8］。
3.2.2 apoE与神经元纤维缠结（NFT） apoEε3可与tau蛋白结合，apoEε4则不能。对apoE基因敲除小鼠的研究表明：apoEε3或ε2借助自身的半胱氨酸残基与tau结合，防止后者被过度磷酸化而形成双螺旋体（PHF）样结构；而apoEε4的半胱氨酸含量明显低于ε3和ε2，从而使tau易被磷酸化，形成PHF，不能维持正常的微管结构和功能［9］。因此，亦有学者认为：促进NFT形成的因素是apoEε3或ε2的缺失，而不是apoEε4的存在。
3.2.3 apoE与神经突触损伤的修复 中枢神经突触受到损伤后代偿性地出现局部星型胶质细胞合成apoE增加。这时，apoE表达的增加及LDL受体结合力的增高是同步的，损伤区的游离胆固醇通过胆固醇-apoE-LDL受体复合物的形式完成转运和再利用。但因为apoE4与LDL受体结合力强，阻碍了其转运胆固醇的作用。此外，apoE还直接影响神经突起的生长，但不同apoE亚型作用差别很大：apoE3促进神经突起延伸，同时分支减少；apoE4则使突起延伸和分支均减少。apoE的这种作用类似于神经营养因子。而apoE基因敲除小鼠的中枢神经元随鼠龄的增加显现明显的树突内细胞骨架崩解和突触丧失。
3.2.4 apoE与慢性脑缺血 新近研究表明：慢性脑缺血与伴发于包括血管性痴呆、AD等在内的多种以认知功能障碍为早期主要表现的疾病病理过程中，并认为慢性脑缺血是多种类型痴呆的重要危险因子。颈内动脉粥样硬化则是慢性脑缺血的主要原因。apoEε4通过影响脂代谢起着致动脉粥样硬化的作用。与E2相比，E4与LDL受体的结合能力较强，使CM和VLDL残粒代谢加速，IDL向LDL转化增多，致使血浆中CM残粒、VLDL和IDL水平下降，而LDL水平升高；此外，ε4基因还有升高apoB和降低HDL-C的作用。所以ε4基因可通过调节这些脂蛋白和载脂蛋白的水平发挥致动脉粥样硬化的作用［10］。
3.3 ε4基因测定对MCI患者的意义 虽然有众多的资料显示MCI患者具有向AD的高转化率，但并非所有的MCI患者均会转化为AD，这促使人们寻找导致MCI异质性的可能因素，即进展型MCI的最佳预言因子，ε4基因测定可能有助于早期识别进展型MCI患者，并积极治疗干预。当然，apoE基因多态性对认知功能的影响尚不十分清楚，并且PS1、PS2、APP基因、apoE受体蛋白基因以及LDL-R相关蛋白对这一过程亦具有复杂的调节作用，所以过分强调apoEε4的作用并不恰当。
本文结果显示apoEε4等位基因与MCI的发病密切相关。虽然它尚不能作为MCI诊断的特异性生物学指标，但是apoE基因型分析可作为临床医师估计MCI向AD转化的预测因子。当然，为了得到更明确的资料，需要今后进行大样本、多中心的对照研究。
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篇6
冠心病的发生与血脂及载脂蛋白密切相关，高脂血症为冠心病的主要危险因素。人们早已注意到甘油三酯（TG）及胆固醇（TC）的潜在致动脉粥样硬化（AS）作用；高密度脂蛋白胆固醇（HDL）的低水平及低密度脂蛋白胆固醇（LDL）的浓度升高，更促使AS的发生。近年报道TG/HDL、LDL/HDL的比值与冠心病的发生发展有关。本文对60例老年冠心病和60例健康人血脂及载脂蛋白（APO）进行了检测，现报告如下。
1 临床资料
1.1一般资料 冠心病组60例，男54例，女6例；年龄60～81（68.3±7.6）岁。均有临床症状、心电图缺血性改变。正常对照组60例，选择老干部健康体检者，经各项检查确认无心血管疾病。
1.2 方法
1.2.1标本采集 受检者空腹12h以上，清晨常规静脉采血后4h内分离血清后测定。
1.2.2仪器 日立7600-020全自动生化分析仪测定。
1.2.3血清TG、TC采用酶法测定，HDL、LDL采用沉淀法测定，试剂药盒由日本协和提供。ApoA1和ApoB检测应用免疫透射比浊法，由上海申峰生物试剂有限公司提供。
1.3统计学处理 两组数据以均数±标准差（x-±s）表示，两组数据之间显著性检验采用t检验和方差分析。
2 结果
2.1两组血脂和Apo测值比较 冠心病组TG、LDL、ApoB升高与对照组比较差异有统计学意义（P
2.2两组血脂比值比较 冠心病组LDL/HDL、ApoA1/ApoB、LDL/ ApoB、HDL/ ApoA1比值水平与对照组比较，差异有统计学意义（P
3 讨论
早年许多研究表明TC为AS的主要危险因素，是预测诊断冠心病的较好指标。近年来通过基础研究和临床观察发现，TC与冠心病发病并不密切。本组资料证明两组TC差异不明显，这与有关文献报道一致。近年来研究支持高TG和低HDL是AS的危险因素之一。大量证据表明HDL是抗AS的脂蛋白，在高TG、HDL冠心病组和对照组之间比较差异显著（P
Apo是维持脂蛋白结构和功能的主要成分，ApoA1及ApoB分别是HDL与LDL的主要蛋白质。ApoA1可促进主动脉细胞和成纤维细胞中游离胆固醇的消除，并能抗AS的形成。本文冠心病HDL、ApoA1、HDL/ApoA1均有下降，差异有统计学意义。ApoB必须与脂质结合成脂蛋白才能进入血液。LDL的载脂蛋白主要为ApoB，LDL增高是AS发生的主要危险因素，而LDL的动脉内膜下的沉积与ApoB同内膜下细胞受体的结合有关，故ApoB升高提示AS的危险性升高。本文结果表明冠心病患者ApoB升高及LDL/ApoB比值下降与对照组比较有显著差异。LDL/ApoB比值降低显著，提示抗AS形成能力下降，而致AS形成上升，在所有检测指标中LDL水平能更为准确地预测冠心病的危险性。
综上所述，HDL、LDL、ApoA1、ApoB水平异常都可能导致AS的形成。ApoA1、ApoB较血脂常规项目更为敏感，对老年冠心病危险性的预测具有很好的价值。
参 考 文 献
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篇7
作者单位：132013吉林医药学院附属医院内分泌科(刘艳杰 贺颖 姚秀宇 赫双令金凤华 侯吉军 苏丽红 白茹雪);吉林市中心医院肾内科(姚秀松)
【Abstract】 Objective To study the relevanceof quantitative change of plasma apolipoprotein and diabetic nephropathy. Provide reliable monitoring method for diabetic nephropathy early prevention.Methods choose no diabetic nephropathy diabetes 300 cases, eliminate the influence of other factorsof kidney, one year later, 3divide into the nephrotic group and without nephrotic group according to urinary protein exclude rate， analysis changes between the two groups lipid index and plasma apolipoprotein A1, B, A1 / B. Results ApoA1 decrease and ApoB increase in diabetic nephropathy group before nephrosis.The data show statistical significance. The changes were more apparent when nephrosis happens. Conclusion There is relativity between diabetes human plasma apolipoprotein quantitative change and diabetic nephropathy，ApoB>1 g / L,ApoA1 / ApoB
糖尿病肾病是糖尿病的常见慢性并发症，是糖尿患者死亡的主要原因之一。预后的关键是早发现，早治疗，我们从2008年开始研究血浆载脂蛋白定量变化与糖尿病肾病相关性。现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
我们筛选确诊5年以内的糖尿患者，糖尿病诊断符合1999年WHO的糖尿病诊断标准，均无糖尿病急性并发症，除外影响肾功的其他因素、急慢性肾炎、泌尿系统结石、感染、心功能不全、肾毒性及影响血脂水平用药史，排除原发性高血压、吸烟、高胰岛素血症的影响。
按尿白蛋白排除率（UAER）
1.2 观察方法 入组之初测空腹血糖（FPG）、肾功能、餐后2 h血糖（2 hPG）、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿常规，24 h尿蛋白定量，血三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇（LDL C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL C）、载脂蛋白A1（ApoA1）、载脂蛋白B （ApoB），查眼底、心电图，测血压、体重指数。每半年对上述各指标复查。一年后按尿白蛋白排除率（UAER）分为无肾病组UAER20 μg/min（104例），有6例因血糖明显波动而排除，两组间年龄、性别、体重指数、血糖情况比较差异无显著性。回顾总结分析两组间血脂、血浆载脂蛋白A1、B及A1/B的差异。
1.3 仪器及检测方法 TG、TC、LDL C、HDL C用氧化酶法测定，ApoA1、ApoB采用免疫透射比浊法测定，仪器为荷兰威图SelectraXL全自动生化分析仪，试剂由3V生物工程集团有限公司提供，采用放射免疫法测定尿白蛋白总量，计算出尿白蛋白排出率。
1.4 统计学处理 SPSS13.0统计软件进行统计学分析，所有数据结果采用均数±标准差（x±s）表示，比较采用t检验，P
2 结果
表中可以显示，健康对照组、无肾病组、肾病组比较TG、TC、LDL C、ApoB渐增高，HDL C、ApoA1渐减低，肾病组在没有发生肾病时，其血脂即有明显变化，TG、TC较健康对照组及无肾病组增高，但无统计学意义（P>0.05），而ApoA1逐渐减低，ApoB升高，肾病组与无肾病组及健康组比较有统计学意义（P
表1
入组时两组间血脂水平比较
血脂TG（mmol/L）TC（mmol/L）HDL C（mmol/L）LDL C（mmol/L）ApoA1ApoB（g/L）ApoA1/B（g/L）
正常对照组1.25±0.614.38±1.401.53±0.312.52±0.651.61±0.520.66±0.471.5±0.2
无肾病组1.49±0.684.80±1.311.46±0.412.99±0.681.49±0.630.79±0.381.2±0.3
肾病组2.84±0.565.95±1.531.08±0.363.61±1.121.18±0.511.28±0.350.8±0.2
注：与对照组比较P
表2
入组时两组间血脂水平比较
血脂TG（mmol/L）TC（mmol/L）HDL C（mmol/L）LDL C（mmol/L）ApoA1ApoB（g/L）ApoA1/B（g/L）
正常对照组1.25±0.614.38±1.401.53±0.312.52±0.651.61±0.520.66±0.471.5±0.2
无肾病组2.29±0.604.96±1.251.31±0.393.12±0.621.40±0.590.81±0.361.0±0.2
肾病组3.95±0.516.01±1.231.02±0.313.69±1.011.09±0.511.32±0.210.8±0.2
注：与对照组比较P
一年后统计，肾病组与无肾病组比较， TC、LDL C增高，HDL C减低差异无统计学意义，ApoA1减低，TG、ApoB升高，有统计学意义（P
3 讨论
糖尿病肾病是糖尿病三大微血管并发症之一，早期表现为肾小球高滤过状态，继之出现微量蛋白尿，尿中白蛋白量逐渐增高，进入临床肾病期，最后发展为终末期肾病，DN的主要病理变化是肾脏的高灌注、高滤过、肾小球基底膜增厚和以肾小球系膜区为主的细胞外基质积累，导致弥漫性或结节性硬化，出现蛋白尿、高血压、肾功能衰竭等变化。影响DN发生的危险因素很多，主要与病程、高血糖、高血压等有关，脂代谢紊乱是糖尿病的独立危险因素，高血脂症可导致肾小球高滤过，加重糖尿病患者的肾损害［1］。血脂异常损伤肾脏的机制与以下因素有关：①肾内脂肪酸结构改变致肾内缩血管活性物质释放增加，致肾小球内压力增高；②高血脂症改变肾小球血液流变学，尤其是氧化的LDL和糖化LDL的作用极大；③血脂可改变肾小球基底膜的磷酸酯成分，或引起基底膜的葡萄糖胺糖化，增加肾小球基底膜通透性，④通过抗纤溶活性及影响前列腺素代谢，改变肾小球的超滤能力，使肾小球呈超滤过状态，尿蛋白排出增加［2］；⑤LDL C与肾小球内膜下基质结合，发生氧化修饰及被巨噬细胞吞噬，引起泡沫细胞形成，脂质沉积［3］。高脂血症对系膜组织的毒性，也主要是LDL的作用；⑥肾小球毛细血管腔内血栓形成，栓塞的主要成分为三酰甘油，使具超滤能力的肾小球毛细血管丧失，还可损伤肾小球滤过膜，从而导致肾小球滤过率下降与蛋白尿产生；⑦肾小球毛细血管内高压和高脂血症的相互作用，加重肾损害；⑧肾动脉硬化;⑨有文献认为，2型糖尿病患者脂代谢紊乱可能通过影响血管内皮细胞功能促进糖尿病肾病的发生。［4］
本组资料显示，在糖尿病早期，无肾病时既有血脂异常，表现为TG、TC、LDL C升高，HDL C减低，但糖尿病肾病组及无肾病组与健康对照组比较均无显著性差异，而ApoA1降低、ApoB升高。糖尿病无肾病组与健康对照组比较无显著差异，而肾病组与无肾病组及健康对照组之间比较差异有统计学意义（P
血浆脂蛋白中的蛋白质部分为载脂蛋白，载脂蛋白是构成脂蛋白的蛋白质组分，是功能上极其活跃的一组血浆蛋白质。ApoA1主要由肝脏合成，小肠也可合成，它是高密度脂蛋白胆固醇（HDL CHOL）的主要构蛋白，占HDL CHOL总蛋白的60 70％，反映HDL合成和分解之间的平衡，它可以直接作用于动脉壁，防止低密度脂蛋白(LDL)氧化和聚集，促进胆固醇从动脉壁流出，防止动脉粥样硬化性心血管疾病。国际化标准以后ApoAl测定的精密度要优于HDL C。ApoB也由肝脏合成，是低密度脂蛋白胆固醇（LDL CHOL）的主要结构蛋白，约占LDL CHOL总蛋白含量的97％，ApoB测定可直接反应LDL CHOL水平，ApoA1、ApoB分别被认为是动脉粥样硬化的保护因素和危险因素。
在病理情况下，HDL及LDL所携带的胆固醇是可变的，且受饮食、药物影响，而ApoA1、ApoB含量稳定，更能反应HDL和LDL水平［5］。近年来许多研究显示ApoA1、ApoB在HDL和LDL代谢中起关键作用［6，7］。在一些有关2型糖尿病大血管病变危险度估价研究中，报道测定血浆ApoAI，ApoB比测定HDL C，IDL C更灵敏可靠。本文的结果也证实了这观点。糖尿病肾病组的血清ApoAl较对照组低，ApoB水平较对照组高，这与一些报道是一致的。而TC、TG，HDL C，LDL C在DM无肾病及肾病组与对照组间差异不明显，由此推测在2型DM ApoAl，ApoB的变化比HDL C.LDL C变化更易检出异常情况。TC，TG水平不是指示2型DM有血管病变及其受损程度的良好指标。血脂代谢异常是As的主要危险因素，DN不仅肾小球有显著微血管病变，而且也有明显的小动脉硬化，故其ApoAl，ApoB浓度的变化可能与合并动脉硬化有关。本文结果显示ApoB与UAE有高度相关性，与一些观察到的结果相同［8］。
本组试验对象选择上排除了高血压、高血糖、病程等方面对糖尿病肾病的影响，从试验结果看，血脂是糖尿病肾病进展的重要因素，在糖尿病肾病出现微白蛋白尿之前，即有变化，ApoA1减低，ApoB增高，其差异有显著性，而ApoA1/ApoB变化更为明显。我们认为，对于糖尿病患者其ApoB>1 g/L，ApoA1/ApoB
参考文献
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［6］ David C,Ralph B，Steven M， et al.Lipoprotein concentrations and carotidatherosclerosisby Diabetes slatus.Diabetes care,2002,7：1006 1011.
篇8
【摘要】 目的探讨冠心病病人载脂蛋白(Apo)A5基因变异与冠心病及其脂代谢异常的相关性，并分析其在冠心病发病机制中的作用。方法随机选择非亲属山东汉族冠心病及其脂代谢异常病人275例(冠心病组)，以年龄和性别相匹配的正常人289例作为对照组，采用聚合酶链反应-限制性内切酶片断长度多态性分析，结合全自动测序技术，检测两组ApoA5 SNP3、SNP4 位点基因型，同时检测血脂水平。结果经Logistic回归分析校正，冠心病组SNP3位点TC基因型与对照组比较差异有显著性(χ2=4.08，P
【关键词】 冠状动脉疾病;血脂异常;载脂蛋白A类;基因型
[ABSTRACT]ObjectiveTo study the correlation of genovariation of apolipoprotein A5 (Apo) with coronary artery disease (CAD) and its abnormal lipid metabolism.MethodsThe present study consisted of 275 CAD patients with abnormal lipid metabolism， who were selected in random from non-relatives of Han people of Shandong province; and 289 healthy subjects matching with age and gender served as controls. The gene variation of apolipoprotein series including ApoA5 SNP3 and SNP4 were identified by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism and DNA sequence，and plasma lipid levels measured as well.
ResultsAfter Logistic regression analysis， the frequency of ApoA5 SNP3 TC in the patients was significantly higher than that of the control group (χ2=4.08，P
[KEY WORDS]coronary disease; dyslipidemias; apolipoproteins; genotype
脂蛋白代谢异常是动脉粥样硬化发生的最主要原因[1]。研究显示，载脂蛋白(Apo)基因变异可能与冠心病及其脂代谢异常相关[2]，ApoA5是新近发现的血脂代谢的主要调节基因，但有关ApoA5基因多态性变异与高脂血症和动脉硬化的关系，尤其在冠心病的发生、发展中意义尚无定论[3-4]。本研究通过病例对照研究，观察山东沿海汉族人群ApoA5基因多态性对冠心病以及脂代谢的影响。现将结果报告如下。
1对象与方法
1.1研究对象
冠心病组病人均为山东沿海非亲属关系汉族人群，经冠状动脉造影证实为冠心病病人，共275例，男155例，女120例;年龄48～71岁，平均(59.2±9.8)岁;其中稳定型心绞痛126例，不稳定型心绞痛87例，陈旧性心肌梗死62例;并高血压68例，高脂血症92例。以连续3年体检血脂、肝肾功能等各项检测指标正常，无既往冠心病史的289例健康人作为对照组，男163例，女126例;年龄50～69岁，平均(61.6±10.7)岁。所有研究对象均排除其他系统疾病。两组性别和年龄比较差异无显著性。
1.2方法
1.2.1血标本采集两组(冠心病组于停服降脂药物1周后)取空腹静脉血3 mL，EDTA抗凝备用。
1.2.2基因型检测参照文献[4]设计合成引物，ApoA5 SNP3上游引物序列5′-GATTGATTCAA-GATGCATTTAGGAC-3′，下游引物序列5′-CCCC-AGGAACTGGAGCGAAATT-3′;SNP4上游引物序列5′-GTGCCTGTCACCACCGTTTGG-3′，下游引物序列5′-ATGCATTAGCCTCTGCTGTTG-3′，引物均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成;采用美国Promaga公司全血提取基因组DNA试剂盒提取基因组DNA，经定量后稀释至20 μg/L备用。在美国STRATAGENE系列定量PCR仪上进行PCR反应，反应体积为20 μL，含DNA 40 ng，上下游引物均为0.2 μmol/L， 200 μmol/L的各种dNTP，0.5 U的Taq DNA聚合酶和PCR缓冲液。反应条件为：首先96 ℃预变性2 min;然后94 ℃变性15 s、退火40 s，72 ℃延伸20 s，共进行30个循环;最后72 ℃延伸10 min。RFLP分析以及测序由上海生工生物工程技术服务有限公司完成，测序仪为ABI 377，测序方法为末端终止法。取PCR产物16 μL，内切酶1 U，无菌去离子水补充至20 μL，37 ℃过夜消化，终产物经20 g/L的琼脂糖电泳分析确定基因型。
1.2.3血脂和脂蛋白的测定采用酶法测定三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)，高密度脂蛋白(HDL-C)的含量，采用免疫比浊法测定低密度脂蛋白(LDL-C)的含量，在OLYMPUS全自动生化仪上完成上述检测。
2结果
2.1两组血脂水平比较
冠心病组TC、TG和LDL-C水平均明显高于对照组，差异有显著意义(t=2.21～11.62，P均0.05)。见表1。
2.2两组ApoA5基因型分布比较
两组检测对象ApoA5基因型和等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡规律，具有群体代表性。两组人群中ApoA5 SNP3位点基因型均以TC型多见，其次为TT型，而后为CC型;ApoA5 SNP4位点基因型均以TC型多见，其次为CC型，而后为TT型。两组SNP3位点TC基因型比较差异有显著性(χ2=4.08，P
2.3两组各基因型间血脂水平比较
冠心病组ApoA5 SNP3位点的TT和CC基因型病人的TG水平较TC基因型病人显著降低(F=7.56，q=4.69、4.32，P
2.4单倍体型和连锁不平衡分析
ApoA5最常见的单倍体型用7个SNP变异确定，本研究以ApoA5 SNP3和S19W(C56C>G)位点大致确定单倍体型，计算单倍体型频率和连锁不平衡系数(D)。 结果显示，冠心病组ApoA5 SNP3-ApoC3-482C/T基因间的连锁不平衡与对照组相比较，有一定差异。冠心病组ApoA5 SNP3-ApoC3-482C/T单倍体型明显高于对照组(χ2=3.42，P
3讨论
本研究结果显示，两组人群中ApoA5 SNP3位点基因型均以TC型多见，其次为TT型，而后为CC型;两组SNP3位点TC基因型比较差异有显著性(P0.05)。表明ApoA5 SNP3可作为独立的冠心病易感基因，而SNP4 位点是否为冠心病的遗传标记不能确定。
研究显示，绝大多数种族人群的ApoA5 SNP3位点多态性影响其血浆TG水平，而血浆TG水平是引起冠心病的独立危险因子，因而可以推测基因多态性可能是通过影响血浆TG和LDL-C 水平而间接影响冠心病的发生。PENACCHIO等[4]在对高加索人群ApoA5区域SNP位点检测之后认为，SNP1、SNP2和SNP3构成常见的单倍体ApoA5*1，且与TG水平相关，而SNP4与TG无关;MARTIN等[5]对SNP4位点分析认为，在白种人青年男性中SNP4不伴父辈心肌梗死遗传，对TG也无显著影响，但TC基因型与TC和 LDL-C水平密切相关;我国毕楠等[6]也得出了SNP3可能与冠心病的发生密切相关的结论，而且SNP3基因型显著影响TG的水平，而这些作用在ApoC3-482C>T位点的分析上则没有表现出来。这些研究均属于关联分析，对于发现疾病易患基因有较强的敏感性，其结果不一的可能原因是由于种族不同、样本量差异等因素的影响。此外遗传现象比较复杂，除了基因突变外，染色体减数分裂和同源染色体重组，以及其他机制如线粒体遗传、父母基因活性不同、甲基化等现象，使预期的Mendal遗传模式被扰乱。
本文的研究结果显示，冠心病组ApoA5 SNP3-ApoC3-482 C/T单倍体型高于对照组，差异有统计学意义，提示冠心病这种多基因遗传病需要多个基因同时出现变异。TALMUD等[7]通过体外实验方法使ApoA5某些SNP位点发生单个变异，检测是否影响ApoA5基因转录和表达，结果显示，ApoA5中的SNP3位点变异没有引起TG水平的改变，虽然没有同时做几个位点的协同作用研究，但研究者否认这些SNP位点的多态性对TG 的影响。推测临床ApoA5 SNP位点的多态性对TG改变的影响可能是由于与ApoC3的连锁不平衡所致，ApoA5-ApoC3基因簇可能存在连锁不平衡。
综上所述，SNP3与冠心病的遗传易感性相关，SNP4通过影响血脂代谢水平增加冠心病的易感性，单倍体优势可能是冠心病遗传易感性的重要因素之一。
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篇9
[关键词] 脑白质变性;认知损害;血管性痴呆;事件相关电位;P300;脑电描记术;血浆载脂蛋白B
[中图分类号] R742.8+9
[文献标识码] A
[文章编号] 1674-4721(2009)08(a)-020-03
轻度认知损害(mild cognitive impairment,MCI)是指以记忆力下降为主要临床表现的一组疾病,其分类尚未确定,诊断标准也在不断完善中。我们对60例MCI患者行头颅CT检查,分为脑白质变性组及非脑白质变性组,均进行P300、EEG及血浆载脂蛋白B检查,并进行相关性分析,且与健康老年组32例做比较,现报道如下:
1资料与方法
1.1入选标准
所有对象的初测听力均正常。①MCI 患者的入组标准:符合国际疾病分类第10版(ICD-10)的轻度认知障碍的诊断标准,临床痴呆量表(CDR)=0.5分,简易智能量表(MMSE)25～27 分,日常生活能力量表(ADL)正常,排除痴呆、抑郁症和精神分裂症。②健康老年组的入组标准:CDR=0分,MMSE>27 分,既往无严重的躯体疾病,无精神疾病史。
1.2 一般资料
入组的60例MCI 患者,均来自2005 年6 月～2008 年11 月北京市第六医院神经内科门诊或住院患者。行头颅CT检查,根据CT结果分为脑白质变性组及非脑白质变性组。①脑白质变性组:32例患者,男16例,女16例,年龄59～80岁,平均(69±5)岁。②非脑白质变性组:28例患者,男13例,女15例,年龄60～80岁,平均(69±4)岁。③健康老年组:32 名均为对检查目的、可能带来的影响及资料用于发表等情况知情同意,并志愿参加者,其中男16例,女16例,年龄62～79 岁,平均(69±4)岁。经?字2检验,各组间性别的差异无统计学意义,P>0.05,经t检验,组间年龄差异无统计学意义,P>0.05。
1.3方法
本研究为病例-对照研究。
1.3.省略仪器测定,P300记录电极分别置于Cz、Pz 处,参考电极A1置于双侧耳垂,FPz 接键,由耳机双侧给予2种短音作为听觉刺激,刺激方式为STD/ODD(0.3～1.0 Hz),低频滤波0.2 Hz,高频滤波0.02 kHz,诱发P300 的成分。严格控制信噪比,眼电伪迹由仪器自动排除,资料由仪器自动记录。如果反应波资料引出困难、未记录到可供辨认的波形,则记为0。载脂蛋白B测定:采用国际标准方法进行测定。
1.3.2 统计学处理资料的处理采用SPSS 11.0统计软件。经检验,资料为非正态分布,故先将原始数据进行自然对数转换,转换后得到的数据符合方差分析要求(方差齐性,正态分布),将转换后得到的数据进行?字2分析,对总体有差异者进行最小显著差别法两两比较,P300统计潜伏期及波幅,对反应波未引出者不纳入统计。
2 结果
见表1～2。
原始数据为非正态分布,先进行自然对数转换,得到的数据符合方差分析要求(方差齐性,正态分布),然后进行方差分析,对总体有差异者采用最小显著差别法(Least Significant Difference法)进行两两比较。与健康老年组比较,*P
2.1脑白质变性组、非脑白质变性组及健康老年组P300的比较
脑白质变性组与健康老年组潜伏期的Cz、Pz 点的差异有统计学意义,P
2.2 脑白质变性组、非脑白质变性组及健康老年组EEG 的比较
脑白质变性组32例中8例未见异常,20例轻度异常者,中度异常4例,可见低幅θ活动增多。非脑白质变性组28 例中未见明显异常者18 例,轻度异常者10例,主要表现为额颞部慢波增多。健康老年组32例中未见异常5例,轻度异常27例,以α波为主,可见少量低幅β波。
2.3 脑白质变性组、非脑白质变性组及健康老年组血浆载脂蛋白B的比较
脑白质变性组、非脑白质变性组及健康老年组的血浆载脂蛋白B经统计学处理后,差异无统计学意义,P>0.05。
3 讨论
痴呆是意识清楚情况下,脑器质性病变所致的持久性智能减退,以致影响个体的社交行为、职业和经济等活动的一组综合征。血管性痴呆(VD)是脑血管病变引起脑组织血液供应障碍,致脑机能衰退,患病率为324/10万[1]。卒中后血管性痴呆的患病率是12.2%～31.8%[2],本病特点为突然发病、病程有起伏、情绪失控、高血压病史、卒中病史和动脉硬化,以及局限性神经症状和体征[3]。发生机制是由于高血压使动脉壁增厚,玻璃样变,管腔内血栓形成或脑动脉硬化的动脉管腔变细、脑组织缺氧,特别是与痴呆发生有密切关系的部位,如前联合、带状回、海马等部位病变所致。早发现、早干预是治疗最有效的途径,但目前还没有较好的早期诊断方法,MMSE检测有其局限性,而P300及EEG 常用于血管性痴呆的检查。事件相关电位P300是与人脑认识活动有关的脑电位变化,可评价信息加工过程中的脑功能状态[4-5]。本结果显示,脑白质变性组及非脑白质变性组的P300各波潜伏期比健康老年组均有延长;脑白质变性组与非脑白质变性组以及健康老年组的EEG 正常比例存在明显差异。本研究发现,部分患者智商正常、血管性痴呆的临床症状尚未表现出来,P300潜伏期及EEG已有异常改变,因此,P300及EEG可以早期的反映认知功能障碍,对血管性痴呆的早期诊断具有价值。二者结合对综合评估MIC进展、预防血管性痴呆更具有积极意义,且该两项检查的费用合理、无放射性,对于普查及动态追踪也值得推广。
关于血浆载脂蛋白B,因经统计学处理后各组间无明显差异,故在本次研究中对于早期血管性痴呆诊断无确切临床意义。考虑可能与本次研究样本量较少有关,该项指标与血管性痴呆的关系有待于设计新的研究方法进一步科学探讨。
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篇10
【关键词】 血清脂蛋白(a);心肌梗死;临床价值
Lp(a)是挪威遗传学家Berg［1］1963年研究β-脂蛋白变异时从血浆中分离出来的一种与低密度脂蛋白(LDL)相似的蛋白质，1988年国际Lp(a)专题学术会议公认Lp(a)为动脉粥样硬化的危险因素，由遗传决定，不受饮食、性别和年龄的影响，并与其他脂蛋白和载脂蛋白无关。近年来大量研究报道血清(a)Lp(a)浓度升高与冠心病密切有关,笔者通过检测血清Lp(a) 及其他血脂指标,研究Lp(a) 指标在冠心病，心肌梗死(MI)中的临床价值和意义。现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本组病例选自濮阳市人民医院2005年3月至2008年3月门诊及住院患者，急性心肌梗死患者50例，冠心病无梗死患者50例，无冠心病患者50例。病例采集150例，男101例,女49例；年龄43~72岁，平均 (51.6 ±7.1)岁。3 组在年龄、性别、吸烟史及冠心病其他危险因素等,差异无统计学意义，临床具有可比性。
1.2 入选标准 急性心肌梗死组：持续胸痛> 0.5 h 、心电图表现ST 段改变或出现病理性Q波、心肌酶学:CK、CK-MB和LDH1出现特征性改变。均未接受溶栓治疗。冠心病组：明确的危险因素，伴或不伴心前区不适、心悸、胸闷等症状，心电图明确的心肌缺血表现，未应用抗凝剂治疗。正常组：有高危因素，无临床症状及体征。
1.3 检测方法 Lp(a)测定用酶联免疫法（ELISA）测定上海广慈高科技公司药盒。总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)用酶法测定(上海生化制药厂药盒)。研究对象均于晨7~8时空腹抽取肘静脉血用空白和含有枸橼酸钠的一次性定量硅化玻璃试管采取2、4 ml静脉血,并将其含有抗凝剂的试管小心混匀。离心分离血清。用酶联免疫双抗体夹心(EL ISA) 法测定血清Lp(a)。以血清Lp(a)浓度≥0.3 g/ L为高Lp(a)水平,
1.4 统计学方法 使用SPSS 10.0统计软件包进行统计分析，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，采用t检验处理数据。计数资料采用百分比表示，采用χ2检验。以P
2 结果
检测结果及Lp(a) 水平比较，见表1。高Lp（a）水平各组比较，心肌梗死组32例（64.0%），冠心病组（22.0%），正常组3例（6.0%），组间比较，差异有统计学意义（P
3 讨论
Lp(a)是经修饰的低密度脂蛋白(LDL)，由载脂蛋白(a)的多肽分子以二硫键与apoB100共价结合，形成大分子复合物，含糖量很高，为高分子糖蛋白［3］。Lp(a) 特征性的蛋白成分是载脂蛋白(a)［APO (a)］, 占Lp(a) 的20%, 蛋白质及DNA 序列分析显示,APO (a) 与纤溶酶原具有高度的同源性,可与纤维蛋白结合,抑制纤维蛋白溶解［4］ 。Lp(a) 还可增强a2-抗纤溶酶对纤溶酶的抑制作用［5］ ,Lp(a) 的抗纤溶作用则有助于血栓的形成。Lp(a) 浓度升高是动脉粥样硬化的独立危险因素,其机制可能为由于Lp(a) 在血管壁的沉积,并促进胆固醇在富含巨噬细胞的泡沫细胞及脂质条纹中堆积,促进平滑肌细胞在斑块局部的增殖和迁移等［6］。
通过本组研究数据可以看出，Lp(a)3组间比较P< 0.05，有显著差异性。提示Lp(a) 水平浓度升高时,Lp(a) 致冠心病的危险性大大增加。高Lp(a) 水平心肌梗死组病例明显高于冠心病组及正常组。因此Lp(a) 水平成为动脉粥样硬化进展程度和急性冠状动脉事件发生的预测因子和预后指标。
参考文献
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